Luliconazole , anti jamur baru terhadap spesies Candida yang diisolasi dari sumber yang berbeda

Ringkasan
Tujuan
Luliconazole adalah inhibitor untuk sterol 14-a-demethylase dalam sel jamur dengan aktivitas
antijamur berspektrum luas terhadap dermatofita, Candida albicans, Malassezia spesies,
hyphomycetes hialin dan dematiaceous. Selanjutnya, lulikonazol telah digunakan secara klinis untuk
pengobatan pitiriasis versicolor , dermatofitosis , onikomikosis, kandidiasis kulit dan mukokutan. Dalam
penelitian ini, kami bertujuan untuk mengevaluasi aktivitas antijamur in vitro dari luliconazole terhadap
beberapa strain Candida spesies yang diperoleh dari material klinis yang berbeda.
Bahan dan metode
Dalam penelitian ini, 104 strain spesies Candida diinklusikan, 34 isolat dari vaginitis, 23 isolat dari pasien
AIDS dengan kandidiasis vagina, 24 isolat dari pasien neutropenik dan 24 isolat dari selang trakeal,
diperiksa untuk uji kepekaan. Pengenceran lulikonazol secara serial (4-0,008 mg / mL) diuji terhadap strain
Candida spesies yang berbeda yang dipulihkan dari sumber yang berbeda.
Hasil
Kisaran konsentrasi inhibitorik minimum (MIC) adalah 1-0,063dan MIC90 dari isolat vagina (HIV) adalah 1
mg / mL. Selanjutnya , sebagian besar strain (50%) memiliki MIC 0,5 mg / mL. Kisaran MIC adalah serupa
(2-0.016 mg / mL) untuk pasien vagina (HIV +) dan pasien neutropenia , sedangkan, MIC90 untuk masing-
masing adalah 0,5 dan 1 mg / mL. Semua strain yang berasal dari selang trakeal diinhibisi pada kisaran 2-
0,008 mg / mL dengan MIC90 = 1 mg / mL. Secara total, MIC50 (MIC = 0,015 mg / mL), MIC90 (MIC = 1 mg /
mL) dan MICGM (MIC = 0,05 mg / mL) yang terendah berkorelasi dengan C. glabrata, spesies non albicans.
Kata Kunci
Luliconazole, Anti fungi, Candida albicans, candidiasis mucocutaneus

Pendahuluan
Lulikonazol , (-) - (E) - ((4R) -4- (2 , 4 -dichlorophe-nyl) -1,3- dithiolan-2-ylidene) (1H-imidazol-1-yl) aceto -
nitril ), adalah imidazole baru dengan struktur kimia yang unik (Gbr. 1) [1]. Obat ini adalah inhibitor untuk
sterol 14-a-demethylase (cytochrome P45014DM, CYP51) pada sel-sel jamur selama biosintesis ergosterol
[2]. Proses ini menyebabkan reduksi ergosterol dan akumulasi 14-a-metil sterol dalam sel-sel jamur dan
akhirnya menyebabkan kematian sel [1]. Obat ini memiliki aktivitas antijamur spektrum luas
terhadap dermatofita [3, 4], Malassezia spesies [5], hyphomycetes dematiaceous dan hialin [6] dan
Candida albicans [7]. Selain itu, banyak penelitian klinis mengindikasikan bahwa lulikonazol memiliki
efikasi yang sangat baik untuk pengobatan onikomikosis dermatophyta [1], tinea pedis [8], kandidiasis
kulit [9], kandidiasis mukokutan [10] dan pitiriasis versicolor [9]. Luliconazole diluncurkan pada tahun
2005 di Jepang dalam bentuk krim 1% dan larutan untuk terapi infeksi jamur [3]. Selanjutnya, obat ini
telah disetujui di India pada tahun 2010 sebagai antijamur topikal untuk pengobatan mikosis kulit [11].
Aktivitas fungistatik dan fungisida dari luliconazole terhadap dermatofita telah didokumentasikan dalam
beberapa literatur [1]. Lulikonazol sangat aktif terhadap C. albicans dan dermatofita in vitro masing-
masing pada kisaran 0,031—0,13 mg/mL [3] dan 0,001—0,625 mg/mL [12]. Candida spesies adalah
mycoflora tubuh manusia dan merupakan agen penyebab berbagai infeksi oportunistik
(kandidiasis). Selama beberapa dekade terakhir, peningkatan resistensi terhadap antijamur telah
ditemukan pada spesies non albicans serta spesies albicans [13,14]. Baru-baru
ini, Abastabar dkk. menguji lulikonazole terhadap strain Aspergillus fumigatus yang sensitif dan resisten
terhadap azole dan menemukan bahwa semua strain tersebut sensitif terhadap lulikonazol pada kisaran
0,001-0,016 mg/mL [15]. Selanjutnya, kami sebelumnya telah menunjukkan bahwa isolate A. terreus
sangat sensitif terhadap lulikonazol in vitro [16].
Meskipun ada banyak literatur terkait penggunaan lulikonazol untuk terapi dermatofitosis, beberapa
data menunjukkan efikasi obat ini terhadap strain Candida spesies. Akibatnya, dalam penelitian ini, kami
bertujuan untuk mengevaluasi aktivitas antijamur in vitro dari luliconazole terhadap beberapa strain
Candida spesies yang diperoleh dari material klinis yang berbeda.
Bahan dan metode
Organisme
Dalam penelitian ini, 104 strain Candida spesies diperiksa untuk uji kerentanan antijamur in vitro
terhadap lulikonazol . Semua strain sebelumnya diisolasi dari berbagai material klinis, meliputi: 34 isolat
Candida dari pasien dengan kandidiasis vulvovaginal, 23 isolat Candida dari pasien AIDS dengan
kandidiasis vagina, 24 isolat dari sekresi oral pasien dengan neutropenia dan 24 isolat Candida dari selang
trakeal pasien rawat inap di ICU (Tabel 1). Strain terutama diidentifikasi menggunakan beberapa metode
fenotipik, meliputi: germ tube test, pertumbuhan pada suhu 45 C, pembentukan chlamydoconidia di
Cornmeal agar - Tween 80 dan morfologi koloni berwarna pada medium CHROMagar Candida. Selain itu,
metode molekuler seperti PCR-RFLP dan metode sekuensing juga dilakukan. Semua strain C. albicans
diidentifikasi menggunakan metode klasik yang disebutkan di atas dan isolat Candida non- albicans
dideteksi menggunakan metode PCR dan PCR-RFLP. Dalam penelitian ini, C. parapsilosis (ATCC 22019),
C. albicans (NBRC 0917) digunakan sebagai kontrol untuk kepekaan antijamur.
Preparasi luliconazole
Sebuah larutan stok luliconazole (APIChem Technology, China) disiapkan pada konsentrasi 320 mg / mL
menggunakan dimethyl sulfoxide, DMSO (Merck, Jerman). Stok dipertahankan dalam botol gelap dan
disimpan pada suhu 20 C.
Suspensi Standard
Sebuah suspensi inokulum standar dari masing-masing strain Candida disiapkan dari kultur yeast semalam
sesuai dengan Clinical and laboratory Standard Institute (CLSI). Secara singkat, suspensi koloni kecil
disiapkan dalam air suling dan disesuaikan dengan standar McFarland 0,5 dengan spektrofotometer [17].
Uji kepekaan antijamur
Metode mikrodilusi (microplate 96 sumur) menggunakan teknik kolorimetrik yang digunakan untuk uji
kepekaan antijamur terhadap mikroorganisme [18-21]. Konsentrasi lulikonazol disiapkan dalam kisaran 4-
0,008 mg / mL menggunakan RPMI 1640 (Bio-Idea, Iran) dengan 0,01% resazurin (Sigma - Aldrich,
Jerman). Kemudian, 100 mL dari setiap pengenceran luliconazole secara serial ditambahkan ke dalam
sumur dan ditambahkan dengan 100 mL suspensi standar yang diencerkan (1:50). Satu sumur yang
mengandung suspensi inokulum dianggap sebagai kontrol positif dan kontrol negatif mengandung RPMI
1640 dengan resazurin. Semua microplate diinkubasi pada suhu 35 C selama 24-48 jam. Konsentrasi
terendah dari luliconazole yang mempertahankan indikator kolorimetri warna biru ditentukan sebagai
konsentrasi penghambatan minimum (MIC) untuk masing-masing strain.
Hasil
Isolat vagina (HIV-)
Tiga puluh empat strain Candida diinklusikan, C.albicans (30), C. glabrata (3) dan C. kefyr (1) dievaluasi
untuk kepekaan lulikonazol in vitro. Kisaran MIC lulikonazol untuk strain yang diuji adalah 4-0,063 mg
/ mL. Seperti ditunjukkan pada Tabel 2, setelah 24 jam, MIC dari sebagian besar strain (50%) adalah 0,5
mg / mL, diikuti dengan 38,2% dari isolate pada 1 mg / mL. Sisanya (11,8%) memiliki MIC = 0,063 mg / mL.
Isolat vagina (HIV+)
MIC dari lulikonazol terhadap 15 strain C. albicans , 4 strain C. glabrata , 3 strain C. dubliniensis dan 1
strain C. krusei, diperoleh dari lesi vaginal pasien HIV-positif, disajikan pada Tabel 2. Sebagian besar isolat
yang diuji (91,3%) diinhibisi pada konsentrasi lebih rendah dari 0,5 mg / mL.
Isolat ICU
Dua puluh empat strain, yang terdiri dari C. albicans (3), C. glabrata (5), C. tropicalis (9) dan C. krusei (7)
dievaluasi terhadap pengenceran lulikonazol secara serial (2 - 0,008 mg / mL) (Tabel 2). Semua isolat
diperoleh dari selang trakeal dari pasien rawat inap di ICU. MIC untuk 37,5% dari strain adalah 0,008 mg
/ mL. Sebagian besar Candida non albicans, kecuali C. glabrata, diinhibisi pada konsentrasi luliconazole 1
- 0,25 mg / mL.
Isolat Neutropenik
Dua puluh tiga strain spesies Candida yang berbeda dari pasien neutropenia diperiksa untuk pengujian
kepekaan terhadap lulikonazol in vitro. Keragaman rentang MIC untuk strain Candida dari
isolat neutropenik terbatas pada 2 - 0,016 mg / mL dan sebagian besar isolat (69,6%) diinhibisi pada
kisaran 1 - 0,5 mg / mL (Tabel 2).
Tabel 3 menunjukkan rentang MIC, MIC50, MIC90 dan MICGM untuk 104 strain yang diperiksa. Seperti
yang telah ditunjukkan, MIC50 (MIC = 0,015 mg / mL), MIC90 (MIC = 1 mg / mL) dan MICGM (MIC = 0,05
mg / mL) yang terendah berkorelasi dengan C. glabrata, spesies non albicans. Dalam penelitian ini, MIC
untuk C. albicans (NRBC 0917) dan C. parapsilosis (ATCC 22019) dilaporkan masing-masing 0,031 dan 2
mg / mL.
Diskusi
Luliconazole (antijamur imidazole) telah terbukti memiliki aktivitas kuat terhadap beberapa jamur
patogen (terutama dermatofita) secara in vitro [22, 23]. Beberapa ilmuwan, terutama peneliti Jepang,
menguji lulikonazol untuk pengobatan dermatofitosis di klinik dan studi in vitro. Uji klinis telah
menunjukkan bahwa Luliconazole memiliki efikasi yang tinggi untuk pengobatan dermatofitosis [24-
26], pitiriasis versicolor [27] dan onikomikosis [9]. Shimamura dkk. membandingkan efikasi
dari efinaconazole dan luliconazole melawan onikomikosis dan menemukan bahwa luliconazole lebih
baik untuk mengobati onikomikosis yang disebabkan oleh spesies Trichophyton [28]. Meskipun
lulikonazol telah disetujui oleh otoritas kesehatan Jepang dalam bentuk krim, larutan, dan salep 1%
untuk mikosis superfisial dan kutaneus pada tahun 2005, luliconazole saat ini sedang dikembangkan di
Amerika Serikat [1]. Di sisi lain, tidak ada lagi data dalam efikasi obat pada isolat Candida klinis atau dari
lingkungan.
Dalam penelitian ini, efikasi luliconazole diteliti terhadap strain spesies Candida yang berbeda dengan
beberapa sumber. Kisaran konsentrasi penghambatan minimum (MIC) untuk strain yang diuji sangat
rendah, yaitu 2 hingga 0,008 mg / mL. Niwano et al, [29] dan Koga et al, [3] adalah yang
pertama melaporkan MIC yang sangat rendah (kisaran MIC: 0,031-0,13 dan 0,031-0,25 mg / mL) terhadap
C. albicans. Di sisi lain, Niwano et al., membandingkan rejimen oral lulikonazol dan flukonazol dan
menemukan bahwa lulikonazol kurang efektif dibandingkan flukonazol dalam model murine kandidiasis
sistemik. [29]. Lulikonazol, (krim topikal 1%) telah terbukti mengatasi ruam popok pada bayi dalam satu
bulan tanpa kekambuhan setelah 6 bulan follow up [30]. Penelitian kami menunjukkan bahwa 91,3% isolat
vagina dari pasien HIV+ memiliki MIC 0,5 mg/mL, diikuti oleh isolate dari selang trakeal (75%), isolate
neutropenik (73,9%) dan isolate dari vagina pasien HIV- (61,8%). Sangat menarik bahwa persentase
spesies Candida yang memiliki MIC lebih rendah (0,5 mg / mL), terdapat dalam pasien HIV +. Sebaliknya,
hanya 61,8% dari strain yang diperoleh dari HIV- memiliki MIC yang sama. Hal ini menunjukkan bahwa
sumber-sumber isolat dapat mempengaruhi MIC. Tampaknya yeast dengan patogenisitas rendah dan
sensitivitas tinggi dengan antijamur merupakan agen penyebab yang lebih banyak pada host yang
immunocompromised (pasien HIV +, ICU dan neutropenia) dibandingkan pasien imunokompeten.
Karena kurangnya nilai ambang yang dapat diterima dari luliconazole untuk spesies Candida, kisaran
sensitivitas, dosis dependen atau resistensi antijamur masih belum jelas. Secara keseluruhan, MICGM yang
terendah adalah 0,05 untuk C. glabrata diikuti oleh 0,07 mg / mL untuk C. krusei, 0,35 mg / mL untuk
C. tropicalis dan 0,46 mg / mL untuk C. albicans (Tabel 3). Mengenai hasil ini, strain nonalbicans lebih
sensitif terhadap lulikonazole daripada strain C. albicans. Dengan demikian, dapat disimpulkan
bahwa, lulikonazol dapat menjadi agen anti-Candida alternatif. Meskipun, formulasi
sistemik luliconazole tidak tersedia, namun, penelitian in vivo harus mengkonfirmasi kegunaan obat
untuk penggunaan klinis.