International Food Research Journal 22 (4): 1615-1623 (2015)

Jurnal homepage: http://www.ifrj.upm.edu.my

Optimasi kondisi hidrolisis enzimatik Golden Apple siput

(Pomacea canaliculata) protein oleh Alcalase

Hamid, SA, Halim, NRA dan * Sarbon, NM

Sekolah Ilmu dan Teknologi Pangan, Universiti Malaysia Terengganu, 21030 Kuala
Terengganu, Terengganu, Malaysia

sejarah artikel Abstrak

Diterima: 27 Oktober 2014 yang Tujuan dari penelitian ini adalah untuk membangun kondisi yang memungkinkan hasil yang optimal dan
diterima dalam bentuk revisi: 12 aktivitas antioksidan untuk Golden Apple Snail (GAS) ( Pomacea canaliculata) protein hidrolisat dengan
Januari 2015
menggunakan metodologi respon permukaan (RSM). Sebuah tiga tingkat, berpusat muka, desain komposit
Diterima: 22 Januari 2015
pusat (CCD) diadaptasi untuk menilai efek dari suhu (45-65˚C); pH (8-10); rasio enzim substrat (2-4%); dan
waktu hidrolisis (60-180 menit). Aktivitas antioksidan dari hidrolisat diperoleh di bawah kondisi optimal
kemudian dievaluasi melalui metrik berikut: hidroksil radikal, mengurangi daya, dan efek pada ion besi
Kata kunci
chelating. kondisi yang optimal didirikan untuk hidrolisis protein enzimatik GAS adalah suhu 45C, pH 10,
Siput murbai konsentrasi enzim 2%, dan hidrolisis waktu 159 menit. hidrolisat GAS protein dioptimalkan menghasilkan
Hydrolysate hasil eksperimental 9,72% dan aktivitas antioksidan dari 73,54% -slightly kurang dari hasil prediksi 11.
Optimization RSM
Yield
78,88%. hidrolisat GAS protein dioptimalkan terbentuk menunjukkan kedua efek chelating yang lebih tinggi dan hidroksil pemulungan
aktivitas antioksidan
aktivitas tetapi memiliki kekuatan mengurangi lebih rendah. Hasil ini menunjukkan bahwa hidrolisat GAS protein memiliki potensi sebagai
antioksidan alami untuk digunakan dalam pengolahan makanan.

© All Rights Reserved

pengantar Al., 2007). Response Surface Method (RSM) secara luas

Umumnya, hidrolisat protein yang dihasilkan oleh
hidrolisis enzimatik protein asli fragmen peptida kecil yang
berisi 2-20 asam amino (Pihlanto et al., 2000).
enzimatik
hidrolisis dipengaruhi oleh beberapa faktor termasuk suhu, pH,
enzim / konsentrasi substrat, dan waktu; yang masing-masing
kooperatif mempengaruhi aktivitas enzim dan dengan demikian
membuat proses lebih terkendali (Viera et al., 1995; Liaset et al., 2002).
Protein hidrolisis menurun ukuran peptida pembuatan hidrolisat
sumber asam amino yang paling tersedia untuk berbagai fungsi
fisiologis dan sudah tersedia sumber protein bagi manusia dan
hewan karena sifat fungsional yang sangat baik mereka (Benjakul
dan Morrissey, 1997). Beberapa penelitian telah melaporkan hasil
yang menjanjikan untuk hidrolisat protein ikan seperti threadfin
bream (Normah et al., 2005), dan kulit ikan mas rumput (Wasswa et
al., 2007).
Optimalisasi jangka telah umum digunakan dalam kimia
analitik untuk menggambarkan kondisi yang berlaku yang
menghasilkan hasil terbaik mungkin (Myers dan Montgomery,
2008). penelitian sebelumnya telah melaporkan pada hidrolisat
dioptimalkan dari daging ayam (Kurozawa et al., 2008); limbah
visceral dari catla (Bhaskar et al., 2008); dan lumpur bekicot (Xia et
digunakan untuk optimasi simultan variabel untuk mencapai
kinerja sistem yang terbaik '(Madamba, 2002). RSM terdiri
umum digunakan teknik matematika dan statistik yang
mengoptimalkan proses hidrolisis dan mudah diterapkan bila
respon yang diinginkan atau satu set tanggapan yang /
dipengaruhi oleh beberapa variabel termasuk suhu, pH, enzim /
konsentrasi substrat, dan waktu.
Siput murbai (GAS) adalah organisme akuatik dan mudah
ditemukan di sekitar sawah. Meskipun mereka tidak berasal
dari Malaysia, siput telah beradaptasi dengan lingkungan
setelah diimpor beberapa waktu lalu untuk makanan dan
tujuan dekoratif. Hal ini sekarang dianggap sebagai hama
tanaman padi di seluruh bangsa, terutama di daerah utara
Vietnam (UAF, 2004).
Di Laos, kerusakan tanaman
dari GAS telah dicegah di masa lalu dengan mengumpulkan
mereka di ladang, yang sejak itu menjadi tidak efisien di beberapa
daerah. Selanjutnya, karena petani kendala tenaga kerja telah
berpaling ke bahan kimia spesifik untuk meringankan masalah
(misalnya niklosamida atau Baylucide, dan Tembaga Sulfat).
petani padi di Laos menggunakan GAS untuk makanan (85%),
pakan ternak (14%), dan cair bio-pupuk atau kompos (1%).
Menurut tes dari spesies siput lainnya seperti disalurkan keong ( Pomacea
canaliculata),

* Penulis yang sesuai. E-mail: norizah@umt.edu.my

Telp: +609 668 4968; Fax: +609 668 4949

1616 Hamid et al./IFRJ 22 (4): 1615-1623
kandungan kimia mereka termasuk protein 62,0% mentah (daging, tidak
termasuk shell) dan 14,9% bahan kering (Padi Teknologi Bulletin, 2001)
dengan mineral tinggi dan kandungan vitamin (Yahya et al., 2006). GAS
tampaknya menjadi sumber mineral yang baik yang ditunjukkan dengan
kalsium mereka (35% di shell) dan konten fosfor (1,2%), dan mereka
juga merupakan sumber energi yang baik (13,94 MJ kg- 1) ( Kaensombath,
2005). Oleh karena itu, studi tentang penggunaan potensi GAS
diperlukan.
Antioksidan banyak digunakan dalam industri makanan
didefinisikan sebagai substansi dengan kemampuan untuk
menunda atau menghambat oksidasi (Chalamaiah et al., 2012).
Beberapa antioksidan sintetis seperti butylated hydroxyanisole
(BHA), butil hidroksitoluen (BHT) dan propil gallate biasanya
ditambahkan untuk mencegah oksidasi lipid (Umayaparvathi et al.,
2014). Baru-baru ini, pencarian antioksidan alami tumbuh
karena bahaya kesehatan dari antioksidan sintetik. hidrolisat
protein ikan menunjukkan aktivitas antioksidan seperti garis
kuning travelly (Klompong et al., 2007) dan bulat ikan layang
(Thiansilakul
et al., 2007) telah dilaporkan. Namun, tidak ada penelitian telah
dilakukan pada potensi hidrolisat GAS (Pomacea canaliculata)
protein sebagai antioksidan.
Oleh karena itu, tujuan kami untuk upaya saat ini untuk (i)
menentukan komposisi kimia dari apel siput Emas (GAS); (Ii)
menetapkan kondisi yang optimal untuk produksi hidrolisat
GAS protein dihasilkan dari kombinasi yang berbeda dari
parameter independen (suhu, rasio tingkat enzim substrat, pH
dan waktu hidrolisis) pada hasil dan aktivitas antioksidan dan
iii) untuk membandingkan aktivitas antioksidan dari
dioptimalkan GAS hidrolisat dengan antioksidan komersial.
Bahan dan metode
bahan
Apel emas Siput (GAS) (Pomacea
canaliculata) yang dibeli dari pemasok lokal di Pekan, Pahang,
Malaysia dan membawa hidup ke laboratorium. Daging dipisahkan
secara manual, dicuci, dan cincang dengan menggunakan blender
Waring (model HGB2WTS3, Connecticut, USA) dan disimpan pada
21C sebelum analisis lebih lanjut. Alcalase 2.4L FG, sebuah
endoprotease bakteri yang diproduksi oleh Bacillus licheniformis
diperoleh dari Novozymes. Semua reagen kimia yang digunakan
adalah kelas analitis.
analisis komposisi kimia dari GAS
kimia Komposisi (protein, lemak,
kelembaban dan abu) dari GAS diperkirakan oleh AOAC ()
metode 2002. pengukuran protein dilakukan dengan metode
Kjeldahl menggunakan
analyzer protein Kjeltec (Foss-Tecator AB, Swedia). konten
karbohidrat dihitung dengan metode 'perbedaan'. Di mana
100% - (protein, lemak, air dan abu)%.
Persiapan hidrolisat protein GAS
hidrolisat GAS protein disusun dengan menggunakan
metode yang dijelaskan oleh Adler-Nissen (1986) dengan sedikit
modifikasi. Sekitar 22 g cincang daging GAS dicampur dalam
121 g air suling dan cincang dalam blender. Campuran itu
kemudian ditempatkan dalam bak air. Suhu yang ditetapkan
untuk 45, 55 dan 65C sementara pH diatur 8, 9 dan 10 (Tabel
1). Setelah suhu dan pH stabil, alcalase di enzim-to-substrat
rasio (E / S) dari 2, 3 dan 4% ditambahkan. waktu pengolahan
hidrolisis yang ditetapkan untuk 60, 120 dan 180 menit. pH yang
konstan sepanjang periode hidrolisis dengan menambahkan 4N
NaOH. Setelah masing-masing campuran menyelesaikan masa
hidrolisis tertentu yang mereka tidak aktif di 90C selama 15
menit. Campuran tersebut kemudian disentrifugasi pada 5000
rpm pada 4C selama 20 menit. Supernatan masing dikumpulkan
kemudian beku kering (Labconco,
Mengoptimalkan kondisi GAS hidrolisis
Response Surface Methodology (RSM) dipekerjakan untuk
memprediksi kondisi yang optimal untuk hidrolisis GAS protein
dengan alcalase sambil mengamati empat variabel independen:
pH (A); waktu di min (B); Suhu di ° C (C); enzim dengan substrat
konsentrasi dalam% (v / w) (D). Sebanyak tiga puluh (30)
berjalan pada tiga tingkat berjarak sama (-1, 0 dan 1) yang
dicapai. Desain parameter dioptimalkan kemudian divalidasi
dengan mengukur persentase hasil dan aktivitas antioksidan
pemulungan [2, 2-diphenyl- 1-pikrilhidrazil (DPPH)] untuk setiap
GAS protein hidrolisat produk akhir.
Penentuan aktivitas antioksidan
2, 2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) aktivitas radikal
DPPH aktivitas radikal-pembilasan diukur mengikuti Yen dan
Wu metode (1999) dengan beberapa modifikasi. Sejumlah 4 ml
larutan hidrolisat (20 mg / ml) dicampur dengan 1 ml 0,2 mM
DPPH dan penuh semangat campuran. Campuran tersebut
diinkubasi selama 30 menit dalam gelap pada suhu kamar
sebelum absorbansi ditentukan pada 517 nm menggunakan
spektrofotometer (Spectroquant Pharo 300, Eropa). Sebuah
sampel kontrol sama diperlakukan menggunakan air suling tanpa
penambahan sampel. DPPH aktivitas antioksidan dihitung
sebagai:
 Hamid et al./IFRJ 22 (4): 1615-1623
(1- A 517 sampel) / (A 517 kontrol) x 100.
GAS protein hidrolisat efek chelating ion besi
Chelation ion besi dengan hidrolisat GAS protein ditentukan
dengan metode yang dijelaskan oleh Dinis et al. ( 1994) dengan
sedikit modifikasi. Secara singkat, 0,025 ml 2 mM FeCl 2 ditambahkansintetis, BHT, digunakan sebagai referensi. Peningkatan absorbansi
campuran reaksi yang ditunjukkan peningkatan dalam mengurangi
ke 1 mg / ekstrak hidrolisat ml. reaksi dimulai dengan
kekuasaan. nilai uji akhir disajikan sebagai sarana rata-rata dari tes
penambahan 5 mM ferrozine (0,1 ml), penuh semangat
terpisah dari tiga sampel untuk masing-masing lima konsentrasi.
terguncang dan kemudian didiamkan pada suhu kamar selama
10 menit dengan BHT sebagai kontrol. Spektrofotometri
(Spectroquant Pharo 300, Eropa) absorbansi diukur pada 562
nm dan aktivitas logam kelat dari masing-masing sampel dihitung
sebagai berikut: efek Logam pengkelat (%) = [(Abs 1- Abs 2) / Abs 1] x
100 Dimana Abs 1 adalah absorbansi kontrol dan Abs 2 adalah
absorbansi diamati untuk sampel protein GAS konsentrasi
hidrolisat.
GAS protein hidrolisat hidroksil aktivitas antioksidan (HRS)
Fenton Reaksi digunakan untuk mengukur pemulungan
radikal hidroksil sesuai dengan metode yang dijelaskan oleh
Yu et al. ( 2004). Sampel campuran reaksi terkandung 60 ml
1,0 mM FeCl 3,
90 ul dari 1mM 1,10-fenantrolin, 2,4 ml 0,2 M penyangga
fosfat (pH 7,8), 150 ml 0,17 MH 2 HAI 2
dan 1,5 ml hidrolisat GAS protein untuk 1 mg /
ml. Reaksi dimulai dengan penambahan H 2 HAI 2.
Setelah inkubasi pada suhu kamar selama 5 menit,
spektrofotometer (Spectroquant Pharo 300, Eropa) digunakan
untuk mengukur absorbansi pada 560 nm. Persamaan berikut
dipekerjakan untuk menghitung aktivitas radikal hidroksil:
Inhibisi (%) = (A 0- SEBUAH 1) / SEBUAH 0 x 100) Dimana A 0 merupakan
faktor musiman dan ukuran GAS kemungkinan account untuk kadar air
kontrol absorbansi (kosong tanpa peptida), dan A 1 merupakan
absorbansi sampel. nilai uji akhir disajikan sebagai sarana
diambil dari tes terpisah dari tiga sampel untuk setiap
konsentrasi.
mengurangi daya
pengurangan GAS protein hidrolisat dari besi (III)
ditentukan dengan metode Yildirim et al.
(2001). Aliquots 1,25 ml hidrolisat untuk 1 mg / ml dicampur dengan
1,25 ml 0,2 M penyangga fosfat (pH 6,6) dan 1,25 ml 1% kalium
ferricyanide. Setiap campuran diinkubasi pada 50ºC selama 30
menit setelah 1,25 ml 10% (b / v) asam trikloroasetat ditambahkan
dan kemudian disentrifugasi pada 1650 xg selama 10 menit.
1617
Akhirnya, 1,25 ml supernatan dicampur dengan
1,25 ml air suling dan 2,5 ml 0,1% (b / v) ferric chloride. Setelah
memungkinkan 10 menit waktu reaksi, absorbansi untuk solusi yang
dihasilkan diukur pada 700 nm dengan menggunakan
spektrofotometer (Spectroquant Pharo 300, Eropa). Antioksidan
Analisis statistik
Data dianalisis menggunakan Desain Ahli 6.0.10 software
(Stat-Kemudahan 2003) untuk memberikan Model
statistik ringkasan; Model jumlah kuadrat; tabel ANOVA;
persamaan akhir; statistik kasus diagnostik; plot permukaan
respon; dan menyarankan solusi. percobaan acak dijalankan
selama tiga puluh set uji hidrolisis protein dilakukan sesuai
dengan Desain Komposit Central berpusat muka (CCD).
Parameter yang diteliti adalah suhu (˚C), konsentrasi enzim
(%), waktu (menit), dan pH di samping hasil hidrolisat (%) dan
aktivitas antioksidan (%) (DPPH assay). Untuk analisis
komposisi kimia, semua perawatan dan analisis dilakukan
dalam rangkap tiga.
Hasil dan Diskusi
komposisi kimia dari GAS
Analisis komposisi kimia dari konten GAS daging menghasilkan
hasil sebagai berikut: kelembaban (83,85%); abu (1,54%); protein
(10,79%); lemak (1,40%); dan karbohidrat (2,42%). Sebuah studi oleh
Kaensombath (2005) melaporkan kadar air yang lebih rendah untuk
GAS (Pomacea canaliculata) di 18,1%. kadar air yang lebih tinggi
dilaporkan oleh Xia et al. ( 2007) untuk protein kaki bekicot (78,82%).
yang lebih tinggi.
kandungan protein yang diamati (10,79%) lebih rendah dari
yang dilaporkan oleh Kaensombath (2005) untuk GAS ( Pomacea
canaliculata) ( 62,1%), namun, Ogungbenle dan Omowole (2012)
melaporkan periwinkle bahwa ( Tympanotonus fuscatus var
radula),
yang memiliki kelas yang sama dengan siput Nigeria, memiliki kadar
protein 74,74%. Sementara itu, Xia et al. ( 2007) menemukan bahwa
spesies yang berbeda dari gastropoda menghasilkan kandungan protein
yang lebih tinggi (hingga 59,58%). kandungan protein yang lebih rendah
mungkin karena faktor lingkungan yang berbeda dan kebiasaan makan.
Memberi makan kebiasaan dominan dari canaliculata Pomacea adalah
macrophytophagous, yang, dari perspektif pertanian dan lingkungan,
sangat signifikan. Namun demikian,
1618 Hamid et al./IFRJ 22 (4): 1615-1623

Tabel 1. Analisis Variance (ANOVA) model dan variabel yang dipilih pada hasil protein GAS
hidrolisat

kandungan protein yang lebih tinggi dilaporkan oleh Kaensombath

(2005) adalah mungkin karena lingkungan di mana suhu (Filipina)
adalah sekitar 20˚C dan di mana GAS iklim membutuhkan lebih
banyak makanan untuk bertahan hidup (Cowie dan Thiengo, 2003).
Meskipun kandungan protein yang diamati dalam penelitian ini
lebih rendah dibandingkan hasil yang diperoleh untuk Siput murbai
dari lokal lain, perlu dicatat bahwa jenis spesies, umur, musim,
status gizi dan kondisi lingkungan semua mempengaruhi komposisi
siput (Anthony et al., 1995). Kadar abu dari sampel makanan
menunjukkan jumlah mineral hadir. sampel GAS ini penelitian berisi
tentang 1,54% abu. Ogungbenle dan Omowole (2012) menemukan
periwinkle abu adalah

Gambar 1: Response Surface Grafik GAS Protein Hydrolysate

9,56% dan Xia et al. ( 2007) melaporkan kadar abu 16,48%. kadar abu Yield (%) sebagai fungsi waktu dan suhu (˚C).
yang lebih rendah diperoleh dalam penelitian ini mungkin bisa
disebabkan oleh jenis tanah dan faktor lingkungan lainnya.
aktivitas tertinggi (92,60%) tercatat sebesar 65C dengan
konsentrasi enzim 2%, pH 10, dan hidrolisis waktu 60 menit.
Isi GAS karbohidrat diukur dalam penelitian ini adalah
2,42%. Namun, kandungan karbohidrat siput daging ( Achatina
Achatina) dilaporkan oleh Xia
Analisis hasil hidrolisat protein GAS
et al. ( 2007) adalah 22,86% sedangkan 3,26% dilaporkan oleh
Engmann et al. ( 2013) yang relatif rendah dan seperti yang
ringkasan statistik model untuk hasil hidrolisat protein GAS
diharapkan karena aktivitas metabolik siput dan penggerak lambat
hanya membutuhkan toko-toko kecil glikogen. Selanjutnya,
Ringkasan Model kuadrat disarankan untuk GAS protein
hewan ini memiliki
hasil hidrolisat. penelitian sebelumnya juga telah dilaporkan
kapasitas penyimpanan glikogen terbatas dan kelebihan setiap
sebuah model kuadrat untuk hidrolisis enzimatik limbah ikan
dimetabolisme lemak (Berg et al., 2012). Akibatnya, persentase rendah
(Nilsang et al., 2005; Bhaskar
lemak juga diamati dalam penelitian ini (1,4%), yang mirip dengan
et al., 2008).
temuan yang dilaporkan oleh Ogungbenle dan Omowole (2012)
(1,32%) dan oleh Xia et al. ( 2007) 0,65%.
Analisis varians (ANOVA) pada hasil hidrolisat protein GAS

Analisis varians (ANOVA) dari hasil dari Permukaan Respon

Optimasi hidrolisis protein enzimatik
Mengurangi kuadrat Model setelah pengurangan model ini
Optimasi kondisi hidrolisis pada GAS menunjukkan
ditunjukkan dalam Tabel 1. Syarat dikeluarkan dari model adalah
protein hasil hidrolisat berkisar antara
A, B, C, D, A 2, C 2,
5,69-19,52% dengan yield terbesar (19,52%) yang dihasilkan di
D 2, AB, AC, AD, BD, CD, A 2 B, A 2 C, A 2 D, dan AB 2.
bawah kondisi berikut: 45C, konsentrasi enzim 4%, pH 8, dan
Istilah 'B' dan 'C' tetap dan menunjukkan efek dari waktu dan
waktu hidrolisis 180 menit. Sementara aktivitas scavenging
suhu masing-masing. Kurangnya-of-Fit 'F-nilai' adalah 2,83
antioksidan pada DPPH berkisar antara 11,8% sampai 92,60%
yang berarti signifikan dengan
dengan
 Hamid et al./IFRJ 22 (4): 1615-1623 1619

Tabel 2. Analisis Variance (ANOVA) model dan variabel yang dipilih pada aktivitas antioksidan
hidrolisat protein GAS

sehubungan dengan kesalahan. “F-nilai” untuk model kuadrat kami

adalah 3,20 dengan R 2 nilai 0,8070 (data tidak ditunjukkan),
menunjukkan signifikansi model dengan hanya kesempatan 2,99% dari
kemanjurannya karena kebisingan. Sementara itu, p-value (<0,05) juga
tersirat bahwa istilah model yang signifikan-dalam hal ini, B 2 dan BC
untuk protein hasil-sementara hidrolisat 'kurangnya fit' p-value juga
tidak signifikan. Persamaan akhir, dalam hal faktor kode yang diberikan
oleh perangkat lunak, adalah sebagai berikut:

Yield = 2.09 + 2.11 * B + 0,25 * C + 6,76 * B 2 - 2,67 * B * C

Gambar 2. Respon grafik permukaan aktivitas antioksidan dari

Hasil dikutip menunjukkan bahwa waktu adalah faktor yang paling
hidrolisat protein GAS (%) sebagai fungsi waktu (min) dan pH
berpengaruh, diikuti oleh suhu. Oleh karena itu, persamaan dapat
digunakan untuk memprediksi dan mengontrol GAS protein hidrolisat
produksi dengan alcalase. Analisis aktivitas antioksidan dari hidrolisat protein GAS

Respon Plot permukaan dan pengaruh faktor pada hasil

hidrolisat protein GAS
Studi ini menemukan bahwa waktu dan suhu adalah faktor
yang paling signifikan mempengaruhi GAS protein hasil hidrolisat.
pengaruh diamati dari variabel independen terhadap hasil protein
hidrolisat yang terbaik digambarkan oleh tiga pandangan dimensi
'permukaan respon dan plot 'kontur' seperti yang ditunjukkan pada
Gambar 1 yang menunjukkan fungsi waktu dan suhu.
Berdasarkan respon permukaan 3-D plot, hasil meningkat karena
suhu naik ke 65C dan hasil yang lebih tinggi juga diamati sebagai
waktu hidrolisis meningkat menjadi 180 menit. Hasil panen
maksimal diamati pada 65C dan 180 menit.
ringkasan statistik model untuk aktivitas antioksidan pada hidrolisat
protein GAS
Ringkasan Model yang disarankan oleh analisis statistik
dari aktivitas antioksidan dari hidrolisat protein GAS adalah
model 2FI.
Analisis varians (ANOVA) pada aktivitas antioksidan dari
hidrolisat protein GAS
Analisis varians (ANOVA) dari Permukaan Respon
Mengurangi 2FI Model untuk aktivitas antioksidan dari hidrolisat
protein GAS ditunjukkan pada Tabel 2. Syarat dikeluarkan dari
model yang B, C, D, A 2,
B 2, C 2, D 2, AB, AC, BC, BD, CD, A 2 B, A 2 C, A 2 D, dan ABC. Syarat B, C
dan D tetap, dengan demikian, efek dari tiga faktor yang
menunjukkan: waktu (B), suhu (C) dan konsentrasi enzim (D). The
Kurangnya Fit 'F-nilai' tidak signifikan (0,26), menyiratkan bahwa
hasilnya bukan karena kesalahan dengan kesempatan 77,74%
1620 Hamid et al./IFRJ 22 (4): 1615-1623
Tabel 3. Direkomendasikan solusi untuk mengoptimalkan kondisi untuk produksi protein GAS
hidrolisat
kurangnya-of-fit 'F-nilai' (3,38) adalah akibat kebisingan, dengan demikian,
menunjukkan bahwa model sesuai dengan data dengan baik dengan hanya
kesempatan 1,11% untuk terjadinya acak.
P-value (<0,05) tersirat relevansi yang signifikan untuk istilah yang
dipilih model. Dalam hal ini, A, AD, AB 2 dan BCD untuk aktivitas
antioksidan pada GAS protein hidrolisat sementara, pada saat yang
sama, nilai p karena kurangnya-of-fit tidak signifikan. Dalam sebuah studi
optimasi, hasil signifikan lebih disukai karena mereka menunjukkan model
cocok dengan data eksperimen yang diamati. Persamaan akhir, dalam hal
faktor kode yang diberikan oleh perangkat lunak, adalah sebagai berikut:
Aktivitas antioksidan DPPH = 770,54-71,12 * A-23,82 * B
- 2,42 * C + 64,94 * D + 0,09 * B 2 + 2,47 * A * B13.93 * A * D +
0,05 * B * C + 0,88 * B * D + 1,31 * C * D-0.01 * A * B2-0.02 * B * C * D.
Hasil ini menunjukkan bahwa yang paling
Faktor-faktor yang berpengaruh yang mempengaruhi aktivitas
antioksidan dari hidrolisat GAS protein waktu diikuti oleh konsentrasi
enzim, pH dan suhu masing-masing. Persamaan ini dapat digunakan
untuk percaya diri memprediksi dan mengendalikan produksi
hidrolisat GAS protein dengan alcalase.
Respon Plot permukaan dan pengaruh faktor aktivitas
antioksidan dari hidrolisat protein GAS
Gambar 2 mengilustrasikan faktor yang secara signifikan
mempengaruhi aktivitas antioksidan pada GAS protein hidrolisat,
khususnya, waktu dan pH. Ini
independen pengaruh variabel pada aktivitas antioksidan yang terbaik
digambarkan oleh pandangan 3-D dari permukaan respon dan plot
kontur (Gambar 2). Oleh karena itu, kita dapat menyimpulkan bahwa
sebagai waktu hidrolisis meningkat dan suhu mendekati maksimal
153˚C, persentase aktivitas antioksidan juga meningkat. Namun,
setelah mencapai 153˚C, sedikit penurunan aktivitas antioksidan
tercatat, kemungkinan besar disebabkan oleh denaturasi termal dari
struktur protease, dengan demikian, juga mengurangi aktivitas
enzimatik (Liaset et al.,
2002).
Optimalisasi persentase hasil dan aktivitas antioksidan dari
hidrolisat protein GAS
Setelah keterbatasan dikutip diatas ditentukan, protokol
optimasi didirikan dengan menggunakan 6.0.10 software
Design Expert yang menghasilkan lima set yang paling
menguntungkan dari kondisi untuk evaluasi lebih lanjut (Tabel
3). A 'value keinginan' mendekati 1,0 dianggap solusi terbaik.
Tabel 4 menunjukkan bahwa kondisi optimum termasuk suhu
45C; enzim dengan substrat tingkat 2%; pH 10; dan hidrolisis
waktu 159 menit.
tes validasi
uji validasi dijalankan untuk menentukan hasil aktual dan
aktivitas antioksidan dalam kondisi optimal menyatakan. Hasil
eksperimen untuk hidrolisis dioptimalkan menghasilkan yield
9,72% dengan aktivitas antioksidan rata-rata dari 73,54%. Kedua
nilai yang kurang dari nilai prediksi yang mengantisipasi hasil
11,36% dan aktivitas antioksidan 78,88%. Hasil ini lebih rendah
kemungkinan besar karena kerugian yang terjadi selama proses
pengeringan beku sebagai konsekuensi dari pengeringan batch
kecil (Abdul Hamid dan Bee, 2002).
Aktivitas antioksidan dioptimalkan hidrolisat protein GAS
Antioksidan memainkan peran penting dalam industri makanan
untuk tujuan pelestarian gizi dan pencegahan warna dan rasa
kerusakan. Analisis aktivitas antioksidan pada hidrolisat GAS protein
menunjukkan pengkelat yang lebih tinggi besi (46.80%) dan kegiatan
radikal hidroksil pembilasan (80,58%) dibandingkan dengan BHT
(36,09% dan 51,93%), masing-masing (data tidak ditampilkan).
Namun, BHT menunjukkan kekuatan mengurangi lebih tinggi
(2,52%) dibandingkan dengan hidrolisat GAS protein (0,62%). Ion
besi (Fe 2+) adalah pro-oksidan yang berinteraksi dengan hidrogen
peroksida (reaksi Fenton) untuk menghasilkan spesies oksigen
reaktif (ROS) dan hidroksil (OH) radikal bebas, yang dapat memulai
dan / atau mempercepat oksidasi lipid (Stohs,
1995). Pembentukan kompleks dari ion besi adalah
 Hamid et al./IFRJ 22 (4): 1615-1623
terganggu ketika agen chelating yang hadir, yang mengakibatkan
penurunan warna (Thiansilakul et al., 2007). Adapun mengurangi daya,
kehadiran antioksidan dalam hidrolisat GAS protein menyebabkan
pengurangan kompleks ferisianida ke bentuk besi nya. Hasil ini
menunjukkan bahwa hidrolisat GAS protein mungkin mengandung
asam amino atau peptida yang bertindak sebagai donor elektron yang
dapat bereaksi dengan radikal bebas untuk membentuk senyawa yang
lebih stabil.
Kesimpulan
Studi ini menunjukkan bahwa GAS daging memiliki
kelembaban yang tinggi, protein yang relatif tinggi, serta lemak
dan abu konten rendah dan bahwa hidrolisat GAS protein
secara signifikan dipengaruhi oleh waktu hidrolisis dan suhu
sementara aktivitas antioksidan sangat dipengaruhi oleh
hidrolisis, pH dan suhu. Hasil juga menunjukkan bahwa
aktivitas antioksidan dari hidrolisat protein GAS memiliki
potensi sebagai pemulung radikal karena chelation tinggi dari
ion besi serta aktivitas antioksidan hidroksil.
Selain itu, meskipun lebih rendah dari BHT,
hidrolisat protein GAS telah mengurangi aktivitas listrik.
Referensi
Abdul-Hamid, JB dan Bee, GH 2002. Gizi
kualitas semprot-kering hidrolisat protein dari Hitam Tilapia. Food
Chemistry 78: 69-74.
Adler-Nissen, J. 1986. enzimatik hidrolisis makanan
protein. Elsevier Applied Science, NY Anthony, PU, ​Edet, OA
dan Ironge, EI 1995. Nutrisi
dan anti-nutrisi dalam siput kecil ( Limicolaria aurora).
Food Chemistry 53: 239-241.
AOAC. 2002. Metode Resmi analisis (16 th ed.).
Asosiasi resmi Analytical Kimiawan, Washington, DC.
Benjakul, B. dan Morrissey, MT 1997. Protein
hidrolisat dari Pacific kapur sirih limbah padat. Jurnal
Pertanian dan Pangan Kimia 45: 3423-
3430.
Berg, JM, Tymoczko, J. dan Stryer, L. 2012. Biokimia
(7 th ed.). pp. 338. WH Freeman, New York. Bhaskar, N., Benila, T.,
Radha, C dan Lalitha, RG 2008.
Optimalisasi enzimatik hidrolisis protein limbah visceral dari catla
( Catla catla) untuk mempersiapkan hidrolisat protein
menggunakan protease komersial. Bioresource Teknologi 99:
335-343.
Chalamaiah, M., Dinesh Kumar, B., Hemalatha, R. dan
Jyothirmayi, T. 2012. Ikan protein hidrolisat: Komposisi
proksimat, komposisi asam amino, kegiatan antioksidan dan
aplikasi: review A. Food Chemistry 135: 3020-2038.
Cowie, RH dan Thiengo, SC 2003. apel siput dari
Amerika (Mollusca: Gastropoda: Ampullariidae:
1621
Asolene, Felipponea, Marisa, Pomacea, Pomella): a
nomenclatural dan jenis katalog. Malacologia 45 (1): 41-100.
Dinis, TCP, Madeira, VMC dan Almeida, LM
1994. Aksi derivatif fenolik (acetaminophen, salisilat, dan
5-aminosalisilat) sebagai inhibitor dari membran lipid
peroksidasi dan sebagai pemulung radikal peroxyl. Archives
of Biokimia dan Biofisika 315: 161-169.
Engmann, FN, Afoakwah, NA, Darko, PO dan Sefah,
W. 2013. proksimat dan komposisi mineral dari siput
(Achatina Achatina) daging; Pembenaran gizi untuk manfaat
kesehatan diakui? Jurnal Dasar dan Terapan Riset Ilmiah 3 (4):
8-15. Kaensombath, L. 2005. Evaluasi nilai gizi
dari ensiled dan segar Emas siput Apple ( Pomacea
spp) untuk tumbuh babi. Makalah penelitian, National University of
Laos, Vienetiane, Laos. Klompong, V., Benjakul, S., Kantachote, D.
dan Shahidi, F.
2007. Kegiatan antioksidan dan sifat fungsional dari hidrolisat
protein dari stripe selar kuning
(Selaroides leptolepis) yang dipengaruhi oleh tingkat hidrolisis dan
enzim jenis. Food Chemistry 102: 1317-1327.
Kurozawa, LE, Park, KJ dan Hubinger, MD 2008.
Optimasi hidrolisis enzimatik daging ayam menggunakan
Response Surface Methodology. Journal of Food Science 73:
405-412. Liaset, B., Nortvedt, R. dan Lied, E. 2002. Studi pada
recovery nitrogen dalam hidrolisis enzimatik salmon Atlantik ( Salmosalar
L.) frame oleh Protamex protease. Proses Biokimia 37:
1263-1269. Madamba, PS 2002. Metodologi respon permukaan:
Sebuah aplikasi untuk mengoptimalkan operasi dari tanaman pertanian
yang dipilih. Ilmu dan Teknologi Pangan 35: 584-592.
Myers, RH dan Montgomery, DC 2008. Response
Permukaan Metodologi: Proses dan produk
optimasi menggunakan Desain Expert. (3 rd ed.). pp 704. Washington:.
Wiley Press.
Nilsang, S., Lertsiri, S., Suphantharika, M. dan Assavanig,
A. 2005. Optimasi hidrolisis enzimatik ikan konsentrat larut
oleh protease komersial. Journal of Food Teknik 71: 571-578.
Normah, I., Jamilah, B., Saari, N. dan Yaakob, BC
2005. Optimasi kondisi hidrolisis untuk produksi threadfin
bream ( Nemipterus japonicus)
hidrolisat oleh Alcalase. Journal of Muscle Foods 16: 87-102.
Ogungbenle, HN dan Omowole, BM 2012.
Kimia, komposisi fungsional dan asam amino dari periwinkle ( Tympanotonus
fuscatus var radula) daging. International Journal of
Pharmaceutical Sciences Ulasan dan Penelitian 13 (2): 128-132.
Pihlanto, LA, Koskinen, P., Piilola, K., Tupasela, T.
dan Korhonen, H. 2000. Angiotensin I-converting enzyme sifat
penghambatan whey mencerna protein: konsentrasi dan
karakterisasi peptida aktif. Journal of Dairy Penelitian 67: 53-64.
Beras Teknologi Bulletin. 2001. pilihan Manajemen untuk
1622 Hamid et al./IFRJ 22 (4): 1615-1623

Golden Keong. Departemen Pertanian, Filipina Beras Institute

(Phil Beras). Tidak ada 33. Diperoleh dari http://www.applesnail.net/pestalert/
management_guide / pest_management.php.

Stohs, SJ 1995. Stres oksidatif yang disebabkan oleh 2, 3, 7,

8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD). Radikal Bebas Biologi
Kedokteran 9: 79-90.
Thiansilakul, Y., Benjakul, S. dan Shahidi, F. 2007.
Komposisi, sifat fungsional dan aktivitas antioksidan dari
hidrolisat protein dibuat dari putaran ikan layang ( Decapterus
maruadsi). Food Chemistry 103 (4): 1385-1394.

UAF. 2004. Kimia komposisi daging Emas

siput apel (GAS). Animal Nutrition Laboratorium Universitas
Pertanian dan Kehutanan UAF (Nom Lam University). Kota Ho
Chi Minh, Vietnam. Umayaparvathi, S., Meenakshi, S.,
Vimalraj, V.,
Arumugam, M., Sivagami, G. dan Balasubramanian,
T. 2014. Antioksidan aktivitas dan antikanker efek peptida
bioaktif dari hidrolisat enzimatik dari tiram ( Saccostrea
cucullata). Biomedis dan Pencegahan Gizi 233: 1-11.

Viera, GHF, Martin, AM, Saker-Sampaiao, S., Omar,

S. dan Goncalves, CF 1995. Studi pada hidrolisis enzimatik
lobster Brasil ( Panulirus spp.) limbah Pengolahan. Jurnal Food
Science Pertanian 69: 61-65.

Wasswa, J., Tang, J., Gu, X. dan Yuan, X. 2007. Pengaruh

dari tingkat hidrolisis enzimatik pada sifat fungsional dari
hidrolisat protein dari rumput ikan mas
(Ctenopharyngodonidella) kulit. Food Chemistry 104: 1698-1704.

Xia, SH, Wang, Z. dan Xu, SY 2007. Karakteristik

Bellamya purificata protein kaki siput dan hidrolisat enzimatik.
Food Chemistry 101: 1188-1196. Yahya, H., Wan ZM dan
Mohd, IHS 2006. emas
apple snail ( Pomacea sp.) sebagai potensi hewan dan budidaya
pakan. Penelitian Pertanian Malaysia dan Pengembangan
Institute, MARDI, Serdang,
Malaysia.
Yen, G. dan Wu, J. 1999. Antioksidan dan radikal
pemulungan sifat ekstrak dari Ganoderma tsugae. Food
Chemistry 65: 375-379.
Yildirim, A., Mavi, A. dan Kara, AA 2001. Penentuan
kegiatan antioksidan dan antimikroba
Rumexcrispus L. ekstrak. Jurnal Pertanian dan Pangan Kimia
49: 4083-4089.
Yu, W., Zhao, Y. dan Shu, B. 2004. radikal pemulungan
kegiatan dari akar (Puerariaeisoflavonoids:
chemiluminescence) belajar. Food Chemistry 86: 525-
529.