Nama : Wilda Iqrima

NPM : 112170073
Yang dimaksud dengan isolasi sel adalah proses pengambilan suatu partikel sel dari
tempat asalnya untuk diteliti lebih lanjut. Sel dapat diisolasi dari suspensi jaringan.
Isolasi sel dapat dilakukan dengan 2 cara, yaitu:
1. Fluorescence-Activated Cell Sorter
Prinsip metode ini ialah menggunakan antibodi yang berikatan dengan zat fluoresen
untuk melabel sel spesifik. Suspensi sel dilewatkan pada sinar laser dan dibaca oleh
detektor. Suspensi yang mengandung sel diberi sinyal positif atau negatif bergantung
pada selnya mengandung zat fluoresen atau tidak. Suspensi kemudian melewati aliran
listrik dan dipisahkan ke tempat masing-masing sesuai muatannya.
2. Laser Capture Microdissection
Prinsip metode ini menggunakan laser untuk memotong bagian tertentu dan
memindahkannya ke tempat lain, contohnya memisahkan sel tumor dari jaringannya.
Isolasi Mitokondria
Isolasi mitokondria melibatkan gangguan sel dan sentrifugasi. Proses gangguan sel
melibatkan melanggar terbuka sel sehingga tumpah isi dalam sel. Sentrifugasi adalah proses
dimana campuran komponen sel yang dipisahkan oleh gaya sentrifugal. Partikel lebih padat
bermigrasi menjauh dari sumbu, sedangkan komponen kurang padat dari campuran
bermigrasi menuju sumbu centrifuge. Teknik sentrifugal yang digunakan untuk memisahkan
komponen sel dari seluruh sel disebut sentrifugasi diferensial. Sentrifugasi diferensial hanya
memberikan ekstrak kasar.
Gangguan sel Metode :
Proses dimana isi sel yang tumpah keluar dari penghalang membran plasma disebut
gangguan sel. Langkah gangguan sel harus cukup lembut untuk tidak merusak struktur
organel. Ada beberapa teknik yang terlibat dalam gangguan sel. The gangguan sel Metode
yang digunakan dalam percobaan adalah penggilingan.
1. Grinding.
2. Cutting.
3. Ultrasonic getaran.
4. Tekanan tinggi.
5. Metode enzimatik.
Sumber : MitoSciences: Mitochondrial Antibodies, Mitochondrial Assays, and Mitochondrial Toxicity
Screening Products
Langkah-langkah mengisolasi mitokondria dalan sel :
1. Osmotikum. Hal ini diperlukan untuk mencegah mitokondria dari kehilangan konten
matriks mereka karena pembengkakan dan meledak. Untuk isolasi tanaman
mitokondria ada tradisi menggunakan sukrosa atau manitol pada 0,2-0,5 M,
sedangkan 0,15 M KCl standar untuk isolasi mitokondria mamalia. Dalam kasus ini
juga tidak meniru justru kondisi di sitosol, tetapi bekerja.
2. Buffer. PH dalam sitosol dari sel tumbuhan adalah sekitar 7,5, dan homogenat harus
buffer pada pH 7-8. Sebuah penyangga karenanya harus disertakan dan sejumlah
besar buffer yang berbeda yang tersedia. Pilih satu murah dengan pKa 7-8 (misalnya,
4-morpholinopropane asam sulfonat = MOPS) dan pastikan untuk menggunakan
cukup untuk mengimbangi konten vacuolar asam. Jenis jaringan, rasio jaringan /
menengah dan konsentrasi penyangga menentukan apakah konten vacuolar asam
dinetralkan dengan benar. Jaringan Jelas khusus seperti lemon atau tanaman CAM
dipanen larut malam atau di pagi hari memerlukan perawatan khusus!
3. Ion logam chelators. EDTA biasanya disertakan untuk mengikat terutama Ca2 + dan
Mg2 +, yang dinyatakan dapat mengaktifkan enzim proteolitik.
4. Antioksidan. Antioksidan (reduktan) seperti asam askorbat, dithiothreitol, atau sistein
digunakan terutama untuk melindungi kelompok sulfhidril pada protein terhadap
oksidasi.
5. Bovine serum albumin (BSA). Ini protein dari darah sapi biasanya disertakan untuk
melindungi mitokondria: BSA mengikat asam lemak (fungsinya dalam darah) dirilis
oleh aksi phospholipases pada fosfolipid. BSA juga dapat mengikat fenolat yang
dilepaskan dari vakuola. Kedua kelompok senyawa lain dapat mengganggu
nantinya.Selain itu, BSA dapat mencegah protease dari protein mitokondria
merendahkan dengan melayani sebagai substrat alternatif hadir pada konsentrasi
tinggi.
6. Polivinil pirolidon. Sebuah polimer yang sering termasuk untuk menyerap senyawa
fenolik.
7. Penyaringan. Untuk menghapus fragmen jaringan yang lebih besar, dinding sel dan
sering butir pati, homogenat selalu disaring, biasanya melalui jaring nilon dengan
ukuran lubang 30-100 pM.
8. Pemurnian Mitokondria
Langkah pertama dari pemurnian biasanya sentrifugasi diferensial. Ini berarti bahwa
homogenat disaring disentrifugasi pertama di kecepatan rendah untuk waktu yang
 singkat (misalnya, 3000 g selama 5-10 menit) dan pelet (fragmen dinding sel yang
mengandung, biji-bijian pati, inti, plastida utuh) dibuang. Supernatan kemudian
disentrifugasi lebih cepat dan untuk waktu yang lama (misalnya, 10 000 g selama 10-
20 menit) dan pelet disebut mitokondria mentah dikumpulkan. Ini berisi membran
mitokondria serta peroksisom dan plastid utuh dan rusak. Supernatan dibuang.
Segera setelah mitokondria telah pellet dan dengan demikian dihapus dari berpotensi
merusak zat larut dalam homogenat, media dapat sangat disederhanakan. Biasanya media
mencuci disebut mengandung penyangga hanya osmotikum dan lemah (tidak perlu untuk satu
yang kuat karena tidak ada isi vakuola untuk menetralisir). Namun, bisa bijaksana untuk
memasukkan EDTA untuk mengikat kation divalen dan BSA untuk menyerap setiap asam
lemak yang dikeluarkan oleh aksi phospholipases.Mitokondria mentah resuspended sering
diencerkan sampai 50-100 ml dengan media mencuci dan mengalami satu putaran
sentrifugasi lambat dan cepat untuk menghilangkan kontaminan lebih.
Tujuan dari langkah berikutnya adalah untuk memisahkan mitokondria utuh dari
kontaminan. Ini biasanya melibatkan sentrifugasi gradien densitas dengan Percoll baik sendiri
(misalnya, Struglics et al. 1993) atau bersama-sama dengan bahan padat lainnya (misalnya,
Hari et al. 1985). Percoll (silika koloid dilapisi dengan polivinilpirolidon, PVP) adalah inert
dan tidak aktif secara osmotik. Ini memiliki keuntungan lebih lanjut bahwa gradien Percoll
adalah diri menghasilkan karena Percoll mikrosfer pelet sangat lambat selama sentrifugasi
tersebut. Mitokondria mentah yang berlapis-lapis di atas media mencuci mengandung
konsentrasi yang tepat Percoll (biasanya 25-30%). Jika konsentrasi Percoll dan kecepatan dan
durasi sentrifugasi telah dipilih dengan benar, mitokondria utuh akan membentuk sebuah
band yang berbeda jauh dari kontaminan. Band ini dapat dikumpulkan, dicuci bebas dari
Percoll oleh pengenceran diulang dan sentrifugasi, dan baik digunakan segera, atau
dibekukan dengan 5% (v / v) dimetilsulfoksida (untuk menjaga integritas) dalam nitrogen cair
dan disimpan pada -80 ° C sampai digunakan. Persiapan ini bisa stabil selama berbulan-
bulan, jika tidak bertahun-tahun.
Hasil panen adalah 1-50 mg protein mitokondria per 100 g berat segar tergantung pada
jaringan. Ini merupakan paling 20 persen% dari mitokondria dalam jaringan.

Sumber : Buku Biologi Umum, Program Studi Pendidikan Biologi FKIP Universitas
Siliwangi 2011
Nama : Wilda Iqrima
NPM : 112170073

Teori Telomere
Pada choromosome strand terdapat stuktur khusus yang disebut telomere. Secara
biokimia,telomere terdiri dari hexsanu cleotide dengan setiap replikasi sel,telomere
memendek pada setiap pembelahan sel,telomere telah dipakai dan pembelahan sel berhenti.
Menurut hayflick(1998),mekanisme telomere tersebut menentukan rentang usia sel dan pada
akhirnya juga rentang usia organisme sendiri. Pada penelitian laboratorium diketahui bahwa
sel normal mempunyai kapasitas untuk melakukan pembelahan. Sebagai contoh sel orang
dewasa membelah lebih sedikit dibandingkan sel janin. Sel dewasa yang dibekukan,bila
dicairkan akan kembali ke kemampuan membelahnya seperti sebelumnya. Perkecualian
terjadi pada sel ganas,yang kemampuan membelahnya tidak terbatas

Buku : Anti Aging Medicine, Memperlambat Penuaan Meningkatkan Hidup.

Pengarang : Wimpie P
Tahun : 2007
Penerbit : Kompas
Kota : Jakarta