PROBLEMAS DE INHIBICIÓN

1. Se estudia la cinética de una enzima en ausencia y presencia de un inhibidor A, a

una concentración 10 mM. La velocidad inicial viene dada en función de la
concentración de sustrato. Los datos obtenidos son:

[S] (mM) V (mM min-1)

Sin inhibidor Inhibidor A
1.25 1.72 0.98
1.67 2.04 1.17
2.50 2.63 1.47
5.00 3.33 1.96
10.00 4.17 2.38

a. Determina Vmax y KS en ausencia y presencia del inhibidor

b. ¿Qué tipo de inhibición se produce?
c. Calcula la constante de disociación (Ki) de la reacción de inhibición.
Solución:
Graficar 1/v versus 1[S]
1.2

0.8 y = 0.8582x + 0.3369

0.6 1/Vo
1/Vi
0.4

0.2 y = 0.4843x + 0.1951

0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1

Sin inhibición
1 1
Vmax = = = 5.13mM / min
b 0.1951
K S = Vmax * (m ) = 5.13 * 0.4843 = 2.48mM

Con inhibición
1 1
app
V´max = = = 2.97 mM / min
b 0.3369
K Sapp = Vmax
app
* (m ) = 2.97 * 0.8582 = 2.55mM

Comaprando:
Vmax > Vmax
app

K S ≈ K Sapp
Por lo tanto es una INHIBICIÓN NO-COMPETITIVA

KI =
[I ] =
10mM
= 13.75mM
Vmax 5.13mM / min
app
−1 −1
Vmax 2.97mM / min

2. En un experimento se midió la tasa inicial de una reacción enzimática, v, a varias

concentraciones de substrato [S]. La concentración de la enzima es 10 nM. Se graficó
1/v versus 1/[S] y se observó una línea recta en la cual el intercepto-y es 0.005 nM-1 seg
y la pendiente es 200 seg. ¿Cuál es el valor de KM y el de Vmax para esta reacción
enzimática? ¿Cuál es el valor de kcat para esta enzima? ¿Determine el coeficiente de
especificidad? 30 µM de un inhibidor, E, es adicionado y se observó que el intercepto-
y es 0.0065 nM-1 seg y la pendiente es 260 seg. ¿Qué tipo de inhibición se observó?
¿Cuál es el valor de Ki para el inhibidor con esta enzima?

Solución:
Se observa que se utilizó la ecuación de Lineweaver-Burk
1 KM 1 1
= +
v Vmax [S ] Vmax
1/v

1/Vmax KM/Vmax

Los datos del problema son:

m = 200 s -1/KM
1/[S]
b = 0.005 s nM-1
1
Vmax = = 200 ⋅ nM ⋅ s −1
0.005
K M = 200 ∗ Vmax = 200 ∗ 200 = 40,000 ⋅ nM
Sabemos que Vmax = kcat [E]t, por lo tanto
V 200 ⋅ nM ⋅ s −1
k cat = max = = 20 ⋅ s −1
[E ]t 10 ⋅ nM
El coeficiente de especificidad es:
k 20 ⋅ s −1
α = cat = = 0.0005 ⋅ s −1 nM −1
K M 40,000 ⋅ nM
En presencia del inhibidor tenemos
m = 260 s
b = 0.0065 s nM-1
 1
app
Vmax = = 153.846 ⋅ nM ⋅ s −1
0.0065
K Mapp = 260 ∗ Vmax = 260 ∗ 153.846 = 40,000 ⋅ nM

Se observa que: K M = K Mapp , y Vmax > Vmax

app

Por lo tanto se trata de una Inhibición no competitiva, entonces

Vmax
app
Vmax =
 [I ] 
1 + 
 K i 
Despejando Ki

Ki =
[I ] =
30,000
= 100,000 ⋅ nM
V max 200
app
−1 −1
V max 153.846

3. Para una reacción enzimática en presencia de un inhibidor competitivo, la

velocidad de reacción observada a una concentración de sustrato [S]i = 1.5 x 10-3 M es
igual a la velocidad de reacción sin el inhibidor a una concentración de sustrato [S]0 =
7.69 x 10-5 M. Calcule la constante de inhibición, Ki, del inhibidor si su concentración
[I] = 3.7 x 10-4 M.

Solución:

Para un inhibidor competitivo la relación [S]0 a [S]i para observar una misma velocidad es:

[S ]i = [S ]0 1 + [I ] 
 
 Ki 
Despejando Ki

[I ]
−4
3.7 x10 M −5
Ki =
[S ]i − 1 = 1.5x10 −3 M = 2x10 M
−1
[S ]0 7.69 x10 −5 M