Antibiotikumok

aktuális problémái
2013
Antibiotikum kutatás I.
Alexander Fleming felfedezése
 Antibiotikum kutatás I.

Howard Florey
A penicillin terápiás
alkalmazása.
Earnst Boris Chain
A penicillin kémiai
szerkezete.
Közös Nobel-díj
(1945)
 Antibiotikum kutatás II.
Selman Abraham Waksman
(1944): streptomycin izolálása

Gram-negatívok ellen első antibiotikum.

Mycobacterium tuberculosis.
Streptomyces griseus-ból vonták ki. 1952 Nobel díj.
Antibiotikumokat termelő
mikroorganizmusok
 Az antibiotikumok aranykora
Felfedezés
Discovery Előállítás
Introduction
1929 Penicillin
1930
1932 Sulphonamides

1939 Gramicidin
1940
1942 Penicillin
1943 Streptomycin &Bacitracin
1945 Cephalosporins
1947 Chloramphenicol &Chlorotetracycline
1949 Neomycin
1948 Trimethoprim
1950 Oxytetracycline
1952 Erythromycin

1956 Vancomycin
1957 Kanamycin

1960 Methicillin
1961 Nalidixic acid Ampicillin
1963 Gentamicin
1964 Cephalosporins
1966 Doxycycline
1967 Clindamycin
1968 Trimethoprim
1970
1971 Tobramycin
1972 Cephamycins &Minocycline
 Antibiotikumok és kemoterápiás
szerek, fogalma
hatásuk

baktericid
bakteriosztatikus : veszély

endotoxin sokk
Penicillin
 Lehetséges mellékhatások
allergia
 penicillinek!
 I típusú túlérzékenységi reakció (anaphylaxia)
toxikus hatás
 vese, máj , csontvelő - tetraciklin
 halláskárosodás - streptomycin
 csontok, fogak - chloramphenicol
diszbakteriózis
= normál flóra kipusztulása - chloramphenicol
 Az antibiotikum terápia fajtái
Célzott
 antibiotikumérzékenységi tesztek
eredményei alapján: E-test, MIC, Korong
diffúzió
Empírikus
 tünetek,ill. szokások alapján
 epidemiológiai adatok ismerete! S. Pyogenes

Profilaktikus
 pl. bélműtétnél megelőző
 Antibiotikum hatása lehet:

Szűk spektrumú Széles spektrumú (több

rendszertani egységre is
(csak kevés hatékony)
baktériumfaj ellen
hatásos)
AZ ANTIBIOTIKUMOK HATÁS
MECHANIZMUSAI
Antimikrobiális szerek
támadása
G+

G-
 Cephalosporinok
β–laktám + 6 tagú /=cephem-/ gyűrű kénnel

 több szubsztitúciós lehetőség

 Gram-negatívok ellen is!
 class C β–laktamáz = cephalosporináz

I. gen.: cefazolin, cephalexin, ...szűk sprectum

II. gen: cefuroxim, cefaclor, cefoxitin, cefaclor...
III. gen.: cefotaxim, ceftriaxon, …erős hatás
Enterobacteriaceae tagjai ellen, de
Enterococcusokra nem
IV. gen.: cefepim, cefpiron, széles
,antipseudomonas hatású
 Glycopeptidek
 vancomycin, teicoplanin
 óriás molekulák
 hármas hatás:
 sejtfal szintézis
 membrán permeabilitás
 DNS szintézis (?)
 tartalék antibiotikumok!
 VRE!!
 Csak G+, szűk spektrum, de
jó G- porphyromonasokra is
 Polypeptidek
 Bacitracin:
 főleg Gram+, lokálisan, sejtfalszintézis gátló
 Bacillus subtilis termeli
 bactericid, szűk spektrum
 Polymixin:
 sejtmembrán dezintegrációja
 Bacillus polymyxia
 Gram- , lokálisan (égés - Pseudomonas!)
 bactericid, szűk spektrum
 Aminoglikozidok
 bactericid!
 a 30S riboszóma alegységhez kötődnek
 Átjutás a sejtfalon aktív transzport ,oxigén igényes ezért
anaerobokra nem hat.
 streptomycin: TBC ellen is (ma: csak itt)
 Rezisztenciához egy mutáció elég, ezért gyorsan kialakul
 Sőt dependencia is kialakul, vagyis csak streptomicin jelenlétében tudnak
szaporodni
 ma főleg:
 amikacin, netilmycin: súlyos szisztémás fertőzések
 tobramycin, gentamycin: parenterálisan vagy
szemcsepp
 neomycin: szemcsepp
 nincs teljes keresztrezisztencia
 gyakran toxikus (süketség!, veseműködés)
 Tetracyclinek
 chlortetracyclin, doxycyclin, oxytetracyclin
(Tetran)
 a 30S riboszóma alegységen hat, az aminoacil-
tRNS bekötődését gátolja
 nagyon széles spektrumú (állatoknak is adják!),
de ma már 70-80%-os a rezisztencia ellenük
 aktív az IC baktériumok ellen, mert
felhalmozódnak az emlős sejtekben
 Chlamydia, Mycoplasma, Rickettsia
 mellékhatások:
 májkárosodás (terhesség!), vesekárosodás
 felhalmozódás a csontokban (gyerekek foga!)
 súlyos hasmenés, nyálkahártya gyulladása
 Chloramphenicol
 az 50S riboszóma alegységen hat peptidkötés
létrejöttének gátlásával
 Streptomyces venezuelae (Ehrlich), szintetikus
 széles spektrumú diszbakteriózis !!
 ma főleg:
 typhus abdominalis intravénásan
 de: a fejlődő országokban gyakran! (olcsó)
 per os, vagy szemcsepp / kenőcs (Chlorocid)
 DE bél normál flóráját teljesen elpusztítják, és
rez. Clostridiumok ill Staph. telepednek meg
bélelhalással járó vastagbélgyulladást okozva!!!
 toxikus hatások:
 csontvelő károsodás
 „Gray baby syndrome” újszülöttekben
 Makrolidok
 az 50S riboszóma alegységen hatnak
 a peptidlánc elongációját gátolják
 nagyobb koncentrációban baktericiddé válik
 csoportok:
 14 tagú gyűrű: erythromycin, clarithromycin
 15 tagú gyűrű: azythromycin
 16 tagú gyűrű: josamycin
 különböző spektrum (Streptococcusok;
Bordetella, STD, RTI /Haemophilus, pneumo/,
Helicobacter, Chlamydia)
 keresztrezisztencia van!
 Enyhe mellékhatások
 Nukleinsav szintézis gátlása
Quinolonok
 DNS giráz gátlása (emlős sejtekben is !! ezért toxikus)
 eredeti vegyület: nalidixinsav
 fluoroquinolonok (FQ):
 ciprofloxacin, ofloxacin, norfloxacin, sparfloxacin
 széles spektrumú (Intracelluláris ellen is!)
 újabb FQ-ok (szélesebb spektrum, jobb hatás) – főleg a G+
felső légúti fertőzéseket okozók ellen :
 levofloxacin, moxifloxacin, gatifloxacin, gemifloxacin
 nem adható terhességben vagy kisgyerekeknek!
 Gyorsan alakul ki rezisztencia ellenük
 ANTIBIOTIKUM ÉRZÉKENYSÉG
LABORATÓRIUMI MEGHATÁROZÁSA
 Papír korong
diffúziós módszer I.
E-test II.
 MIC meghatározás higítással III.
agarhigítás (az AB higítási
sora a táptalajba keverve)
0 1 2
R “breakpoint”
10
8
4 8 16
6
(mg/L) 4
2
0
1 2 4 8 16 >16

MIC (mg/L)

csősorozat higítás (csövekben)

vagy mikrodilúció (96 lyukú
16 8 4 2 1 0,5 0,25
plate-en)
(mg/L)
 AB érzékenységi guideline-ok

 Cél: standard eredmények

 nemzeti és nemzetközi guideline-ok, pl.

 CLSI: Clinical and Laboratory Standard
Institute (amerikai)
 BSAC: British Society for Antimicrobial
Chemotherapy
 EUCAST: European Committee on
Antibiotic Susceptibility Testing
 Miért van szükség
standardizálásra?
 breakpoint-ok meghúzása (R, MÉ, É)
 epedemiológiai adatok állandó frissítése
 baktérium inokulum pontos szabályozása
 inkubációs körülmények szabályozása (pl. levegő
vagy emelt CO2)
 kontroll törzsek:
 ATCC: American Type Culture Collection
 NCTC: National Collection of Type Cultures
Antibiotikum rezisztencia
kialakulása
A rezisztencia első megjelenése

1928: penicillin felfedezése

1940: első β-laktamáz leírása

1945: 50%-os penicillin rezisztencia

Staphylococcus aureus-ban
 Természetes rezisztencia 1.

 saját maguk által termelt antibiotikum

ellen rezisztensek
 sejtfal barrier (Gram-negatívok), vagy
sejtfal hiánya (Mycoplasma)
 kötőhely hiánya
Antibiotikum rezisztencia
evolúciója
Antibiotikum rezisztens baktériumok
szelekciója
AB rezisztenciát kiváltó
mechanizmusok
 β-laktamázok

 nagyon sokféle ~ kb 50
 főleg plazmid-kódolt (néha kromoszomális)
 konstitutív vagy indukálható (= a β–laktám
jelenlétében termelődik)
 ESBL: „extended spektrum” β–
laktamázok !!
 gyakorlatilag minden, kórházi gyakorlatban
elterjedt széles spektrumú penicillint és
monobactamot, az összes szűk és széles
spektrumú cefalosporint inaktiválják : pl
Klebsiellák
–
Kötőhely módosítása mutációval
 csökkent vagy megszűnt affinitás
 penicillinek (pbp- transzpeptidáz enzim
kötőhely módosulás), aminoglycosidok és
makrolidok (30S és 50S riboszóma alegység),
quinolonok (gyrA,B)

Efflux pumpa
• Antibiotikum “kitessékelése”
• nem túl hatékony
• makrolidok, quinolonok, tetracyclin
 Membrán permeabilitás
megváltozása
• aktív transzport blokkolása
• pl. MRSA: megváltozott membrán lipid szerkezet
 Pseudomonas aeruginosa
rezisztencia mechanizmusa
 A sejtmembrán nehezen átjárható
 Gyógyszerpumpa ( drugpumpa)
MexAB-OprM pumpa
 Mutációk a kromoszomálisan kódolt
génjeiben
MexAB-OprM aktív pumpa rendszer mely a
sejtmembránokon tör át

MexAB-OprM rendszer sematikus képe

 Efflux pumpa működése
 Aktív transzport mechanizmus, mely működéséhez ATP
igényel.
 Megtalálhatóak: a baktérium plazma membránjában, Gr-
a baktérium outer membránjában.
 Pumpák alacsony cc-ban tartják az antibiotikumot
 B-laktámok, fluorokinolonok, tetraciklinekkel szemben a
legnagyobb az aktivitás.
 Pumpálhat egy vagy több antibiotikumot, ezért szűk
vagy széles lehet a sprektuma.
 Efflux pumpákat gének kódolják, plazmid vagy
transzpozoonok.
 Szerzett rezisztencia - 2
horizontális: rezisztencia gének átadása
más baktériumoknak
 plazmid (konjugáció)

 bakteriofág (transzdukció)

 transzpozon (ugráló genetikai elemek)

 transzformáció (csupasz DNS)

Baktériumok mérete közötti
különbségek
Rezisztencia plazmid
 A plasmid felvételt/megtartást
szabályozó rendszerek 1
A H-NS gén:
-gén represszor: alapvetően a környezeti tényezők
megváltozásához történő alkalmazkodást segíti.
-képest különbséget tenni kromoszomális és plazmid gének
között.
-az utóbbiak közül a sejt számára „nem kívánatosak”
expresszióját megakadályozza

-Lucchini2006
 A plasmid felvételt/megtartást
szabályozó rendszerek 2
 Clustered regulatory interspaces palindromic repeats
(CRISPR)
 A baktérium sejtek „örökölt immun rendszere” az
idegen nukleinsavakkal szemben
 20-50 ismétlődő egymástól gyakran „spacer”-rel elválasztott
nukleotidból állnak
 A”spacer” szekvenciák fág, valamint plasmid szekvenciáknak
felelnek meg
 Nem kívánatos idegen DNS bekerülésekor a velük
homológ „spacer”ről kis méretű RNSe-k képződ-
nek, amelyek az idegen génhez hozzátapadva azt
represszálják.
 A H-NS rendszer befolyásolja működését Mojica 2009
 A plasmid felvételt/megtartást
szabályozó rendszerek 3
 Stabilizációs és replikációs faktorok
 A plasmidokon számos u.n. stabilizációs és
replikációs faktor található, amelyek a
plasmid és a gazdasejt kölcsönhatását
szabályozzák.
 A plasmid felvételt/megtartást
szabályozó rendszerek 4
 Nukleotidokhoz kapcsolódó fehérjék
/nucleotid-associated proteins:NAPs/
- a NAP fehérjék a nukleotidokkal
komplexeket képeznek, amelyek a fehérje
expressziót befolyásolják
 A plasmidokon található NAP fehérjék
elősegítik a plasmidok transzmisszióját
 Takeda 2011
 Problémás baktériumok
 Staphylococcus aureus – MRSA, VRSA
• (methicillin- és vancomycin rezisztencia)
 Enterococcus faecalis és faecium – VRE
– (vancomycin rezisztencia)
 Carbapenem rezisztens
 Acinetobacter baumannii
 Pseudomonas aeruginosa
 Klebsiella spp.
 Stenotrophomonas maltophilia
 MDR és XDR Mycobacterium tuberculosis
 A rezisztencia kialakulásának
humán okai
 antibiotikumok túl gyakori fölírása
 túl hosszú terápia, túl alacsony dózisban
 antibiotikum szedésének idő előtti
abbahagyása
 antibiotikumok használata
állattenyésztésben
 rezisztens törzsek kórházi terjedése
(hygiéne!)
MULTI DROG
REZISZTENCIA !!!
Normál flóra egyensúlyának
megbomlása
Antibiotikumot Rovarpatogén
termelő baktériumok
(Heterorhabditis,
Steinernema
nematoda (EPN)
fajok obligát
szimbiózisban
élnek
entomopatogén
baktérium (EPB)
fajok
(Photorhabdus,
Xenorhabdus)
törzseivel.
X. budapestensis DSM16342T
X. szentirmaii DSM16338T*
 ANYAG ÉS MÓDSZER I.
FELÜLRÉTEGZÉSES (OVERLAY)
BIOSSAY
X. budapestensis (EMA, bal),
X. szentirmaii (EMC, jobb)

Foto: Fodorné Máthé Andrea

 ANYAG ÉS MÓDSZER II

AGARDIFFÚZIÓS TESZT:

A. Curtobacterium
flaccumfaciens pv. betae NCAIM
B 01612: EMA („Észak”) EMC
(„dél”).

B.: Xanthomonas axonopodis pv.

phaseoli NCAIM 1523;

C.: Dyckeya chrysanthemi

NCAIM B 01839;
D.: Erwinia amylovora (Ea1)
Hevesi Mária.


Foto: Dr. Hevesi Mária.

 EREDMÉNYEK
 A vizsgált Salmonella
törzsek érzékenysége
X. budapestensis
anyagokkal szemben
az E. coli törzsekéhez
volt hasonló.
 FOTO: Dr. Pintér Csaba
 S. tiphymurium
 NCAIM B 01186/EMA
felülrétegzéses teszt
 EREDMÉNYEK ANAEROB !!!

A Clostridium
perfringens NCAIM 1417
törzse rárétegzéses és
agardiffúziós
tesztekben egyaránt
érzékeny a
X. budapestensis és a
X. szentirmai
antibakteriális
aktivitásával szemben.
Dr. Pintér Csaba
Sejtmentes X. szentirmaii hatása a
myceliumok növekedésére

P. citricola

Sejtmentes (25 V/V% )

Kontrol EMC-fermentlé
(Sárgarépa- agar)
(Fotó: Pintér, Cs., 2011)
59
 Négy Photorhabdus törzs antibakteriális aktivitása

Bal:Photorhabdus luminescens HP88 (A) alacsony szintű

antibiotikum termelése. P. luminscens ssp. laumondii ARG (B)
hasonló telep morfológia és antibiotikum activitás.
Jobb: P. stackebrandii HIT(A) narancs-piros pigmentek
Photorhabdus luminescens ssp. laumondii AZ 29 téglaörös (B):
Alacsony antibiotikum termelés( Photo: Cs. Pintér, 2010).
L. Donovanii eredményei
Az EPB fajok az evolúció során olyan komplex kémiai arzenált
fejlesztettek ki, amely a talaj mikroorganizmusai ellen biztosít
védelmet a rovarpatogén fonalférgek által elpusztult
rovartetemen belül a talajban.
Más szavakkal: monoxénikus (EPN/EPB) kultúra feltételeit
bizosítja polixénikus viszonyok között.
EPB ellen rezisztencia kialakulásának esélye kicsi, mert nem
egyetlen anyagról, hanem szinergisztikus anyagok komplexéről
van szó.
Köszönöm a figyelmet!