‫‪GRAM STAIN‬‬

‫صبغة غرام‬

‫سييس‬
‫عبدالمجيد ر‬
‫‪MAY 14,2018‬‬
 ‫مقدمة‪:‬‬
‫الممية لمعظم خاليا طالئعيات النوى حيث تتألف معظم‬‫ز‬ ‫يعد الجدار الخلوي من أهم الخصائص‬
‫بروتين سكري هو الببتيدوغليكان ‪Peptidoglycan‬‬ ‫ز‬ ‫الجدر الخلوية من معقد‬
‫ي‬
‫ز‬
‫الدينمارك (هانس كريستيان غرام) عام ‪ 1884‬تقنية خاصة يف الصباغ (تقانة التلوين‬
‫ي‬ ‫لقد طور العالم‬
‫وه ‪:‬‬ ‫ز‬ ‫ز‬ ‫ز‬
‫بغرام) قادرة عىل أن تمي نوعي من الجراثيم حسب االختالف يف بنية تركيب جدرانها الخلوية ي‬
‫‪Gram Positive Bacteria‬‬ ‫الجراثيم االيجابية الغرام‬

‫‪Gram Negative Bacteria‬‬ ‫الجراثيم السلبية الغرام‬

‫مبدأ االختبار‪:‬‬
‫تعتمد طريقة التلوين بصبغة غرام عىل قدرة األحياء الدقيقة ‪ Microorganisms‬عىل االحتفاظ باللون‬
‫البنفسج ‪ Crystal Violet‬خالل عملية إزالة اللون‬ ‫البنفسج الناتج عن صبغة الكريستال‬ ‫ز‬
‫األرجوان أو‬
‫ي‬ ‫ي‬ ‫ي‬
‫باستخدام الكحول أو مزيل اللون و منه معرفة إن كانت الجراثيم موجبة أو سالبة الغرام‪.‬‬

‫الهدف وأهمية االختبار‪:‬‬

‫يعد التلوين بملون غرام أداة تشخيصية هامة حيث‬
‫تعد الجراثيم سالبة الغرام بشكل عام ر‬
‫أكي امراضية‬
‫من غيها حيث تملك طبقة شحمية سكرية خارجية‬
‫تحم الجراثيم من الصادات الحيوية و‬
‫ي‬ ‫تعد سامة و‬
‫الن يبديها الجسم‪ ,‬وبذلك االختبار يمكن‬
‫المقاومة ي‬
‫تحديد هوية بعض الجراثيم المجهولة بسهولة‪.‬‬

‫األدوات الالزمة لالختبار‪:‬‬

‫البنفسج ‪– Crystal Violet‬‬
‫ي‬ ‫جرثوم رقيق منتظم – صبغة الكريستال‬
‫ي‬ ‫ضون بسيط ‪ -‬غشاء‬
‫ي‬ ‫مجهر‬
‫محلول األيودين ‪ - Iodine‬كحول إيتيىل – ورق ترشيح – السفر ز‬
‫اني ‪ – Safranin Dye‬زيت األرز ‪.‬‬ ‫ي‬
 ‫أهم رشوط االختبار‪:‬‬
‫جرثوم سميك‪.‬‬
‫ي‬ ‫‪ )1‬عدم تحضي غشاء‬
‫ز ز‬
‫المحض يف مزيل اللون لمدة طويلة‬ ‫‪ )2‬عدم ترك‬

‫‪ )3‬استخدام مزارع جرثومية فتية بعمر ‪24-16‬‬

‫للحصول عىل نتائج موثوقة‪.‬‬

‫طريقة العمل‪:‬‬
‫جرثوم رقيق منتظم‪.‬‬ ‫‪ )1‬ز‬
‫حض غشاء‬
‫ي‬
‫‪)2‬لون الغشاء بنقاط من صبغة الكريستال‬
‫البنفسج لمدة ‪ 60-30‬ثانية‪.‬‬
‫ي‬
‫‪)3‬أغسل بتيار خفيف من الماء وتخلص من الماء الزائد برسعة‪.‬‬

‫‪)4‬ضع عدة نقاط من محلول األيودين لمدة دقيقة واحدة‪.‬‬

‫ز‬
‫المحض إلزالة آثار األيودين بتيار خفيف من الماء‪.‬‬ ‫‪)5‬أغسل‬
‫ز ز‬
‫اإليتيىل بنسبة ‪ %95‬لمدة ‪ 20-10‬ثانية‪ .‬هذه الخطوة حساسة جدا‬
‫ي‬ ‫الكحول‬ ‫ف‬‫‪ )6‬ضع المحض ي‬
‫ز‬
‫الثخي يحتاج لزمن أطول من الغشاء الرقيق‪.‬‬ ‫فالغشاء‬
‫المحض بتيار خفيف من الماء إليقاف عمل الكحول ز يف إزالة اللون‪.‬‬
‫ز‬ ‫‪)7‬أغمس‬
‫اني لمدة ‪ 30-20‬ثانية‪.‬‬ ‫ز‬
‫المحض بالسفر ز‬ ‫‪)8‬لون‬
‫ز‬
‫المحض بلطف بورق اليشيح‪.‬‬ ‫ز‬
‫ثوان ومن ثم نشف‬ ‫ز‬
‫‪)9‬أغسل المحض بلطف لمدة ي‬
‫المحض بوضع قطرة من زيت األرز تحت العدسة الغاطسة حيث تبدو الجراثيم موجبة‬ ‫ز‬ ‫‪)10‬افحص‬
‫بنفسج أو أزرق و الجراثيم سالبة الغرام بلون زهري أو أحمر‪.‬‬
‫ي‬ ‫الغرام بلون‬