AMM CAPITOLUL|I. MATERIALE $I METODE DE CERCETARE in studiu au fost inclusi 236 de bolnavi cu hepatita viralé C acuta si 368 - cu hepatitd virala B acuta. Au fost investigati la AgHBs 4766 seruri de la 9 gru- puri de risc; s-au examinat 2158 de femei gravide, 435 de persoane din 165 focare cu hepatite B si D - forma acuta si cronica, 336 — pacienti cu HVCC, 280 - cu HVBC si 260 - cu HVDC. Bolnavii aflati in studiu au fost examinati clinic, epidemiologic, biochimic, serologic, imunologic, molecular biologic. Metodele biochimice. Au fost efectuate in laboratorul biochimic al IMSP SCBI nloma Ciorba” (Director — dr. V. Deatisen). Pentru evaluarea gradului de al- terare hepatica, utilizand teste de rutina in determinarea bilirubinei totale sia fractiilor ei prin metoda lendrassic-Grof (norma 3,59-17,95 mcmol/l), activitatea ALAT prin metoda Reitman-Frenkel (norma 0,1 — 0,68 mmol/1), activitatea ASAT prin metoda cineticd (norma — pana la 40 UI/|). Proba cu timol (norma ~ 0,3-4,0 un) si proba cu sublimat (norma - 1,8-2,0 ml) prin metoda unificata de sedimentare, indexul protrombinic — prin metoda uni- ficaté Quik (norma 80-100%), fractile proteice — metoda electroforeza (nor- ma: proteina totala — 60 — 80%, albumina — 50 - 60%, globuline: a, -3-5 %, a, ~ 5,7-8%, B - 7-12%, y - 13-19%, A/G - 1,3]. La unii pacienti s-a determi- nat colesterolul, B-lipoproteidele, y-GTP, fosfataza alcalina, glicemia. La toti pacientii s-a efectuat hemoleucograma si sumarul de urina. Diagnosticul hepatitelor virale C, B si D acute si cronice a fost confirmat prin testarea markerilor serologici: AgHBs, anti-HBcor IgM, anti-HBcor sum, AgHBe, anti-VHC IgM, anti-VHC sum, anti-VHD IgM si anti-VHD sum, iar evo- lutia spre vindecare a hepatitelor virale B si D prin determinarea anti-HBs, in laboratorul serologic al IMSP SCBI Toma Ciorba" prin metoda ELISA, uti- lizand seturile de diagnostic ale firmei Dia Pro” Diagnostic Bioprobes SRL (Milano-Italy). Rezultatele ELISA s-au evaluat in UI, fiind masurate la anali- Zatoare imunologice STAT FAX 303 (SUA). Determinarea spectrului anti-VHC (anticorpi catre proteinele structurale si nestructurale) a fost efectuat in la- boratorul imunologic ,Padure SRL" (director - dr. Galina Padure), utilizand seturile de diagnostic ale firmei,Vector Best”, Determinarea ARN-VHC test cantitativ cu utilizarea testului PCR (Roche Am- plicor, Elvetia) s-a efectuat in laboratorul virusologic al firmei_,Insect Farm” (director Dr. docent M. Ciuhrii); testul cantitativ si genotipul viral s-au investi- gat in laboratorul Centrului medical ,| munotehnomed” (director - dr.in me- eaqueg ODI, | SDINOYD 1S UNIV GIS 8D JTVMIA aTALLLGSH 1Victor Pantea | HEPATITELE VIRALE C,B $ID ACUTE SI CRONICE 12 dicina $.Rata) prin PCR cu utilizarea sursei comerciale HAM Snugemuonorma (Rusia), Ribosorb seria 190707, Sorb B seria 150607, Amplisens — ARN C seria 040707, Amplisens HCV genotip seria 090507. La pacientii cu HVCC investi- gatiile s-au efectuat in laboratorul imunologic (sef ~ dr. L. Ratuc) a Centrului de Diagnosticare Medicala Republican, prin PCR test cantitativ Real-Time, utilizand trusa comerciala (AS Roboscreen Gmbh, Germania) Evaluarea statusului imun s-a determinat in laboratorul imunologic de cer- cetari stiintifice al USMF ,Nicolae Testemitanu’ si a IMSP SCBI,Toma Ciorba’, Celulele cu proprietati imunoreglatoare T-helper si T supresoare (norma 38 58% si 12-28%) au fost determinate prin metoda de rozetare in prezenta teofilinei. Concentratia complexelor imune circulante (CIC, norma < 60 UE) s-a stabilit prin metoda de precipitare cu solutie PEG. Concentratia imuno. globulinelor serice de clasa M, G si A s-au investigat prin metoda de imuno- difuzie radiala simpla Mancini. Examenul instrumental: ultrasonografie, scintigrafia ficatului, tomografia conputerizata. Metodele de evaluare statistica a rezultatelor obtinute. Rezultatele ob- tinute au fost supuse unui calcul statistic general acceptat prin intermediul programelor EXCEL si SPSS. Veridicitatea diferentelor dintre valorile medii ale parametrilor analizati in diferite loturi s-a determinat, folosind criteriul t - Student. Pentru determinarea eficacitatii tratamentului a fost caiculat RR(riscul relativ) si li(intervalul de incredere), NTN(numarul de tratamente necesare). Analiza dispersionala a fost utilizata pentru aprecierea rezultate- lor tratamentului la distanta (criteriul F).EM CAPITOLULII. PARTICULARITATILE ETIOLOGICE, EPIDEMIOLOGICE, CLINICE, BIOCHIMICE, IMUNOLOGICE, DE DIAGNOSTIC SITRATAMENTUL IN HEPATITA VIRALA C ACUTA 2.1. ETIOLOGIE Virusul hepatic C (fig.1) a fost clonat in a.1988 de o grupa de cercetatori in frunte cu M. Houghton si Choo QLL,, utilizand noi metode molecular-bio- logice [18], din plasma cimpanzeilor infectati cu acest virus. La cimpanzeii infectati, ARN-VHC devine detectabil in sange la 3 zile dupa inoculare [3, 15, 18, 32, 39, 43], Drept consecinta a descoperirii VHC, a devenit posibild identificarea si exprimarea antigenului nestructural al acestuia, permitand astfe| elaborarea unui test serologic pentru identificarea anticorpilor anti- VHC [19, 144]. Protein € Protein €? Protein €2 oe stop} f Stecurdia Non-structure genes. ; oy | : ee : Figura 1. Structura virusului hepatic C S0INOUDIS 31NW GIS gD JIV¥IA TTALILARH payed JOIN B