REVIEW

TÉCNICAS PARA EL DIAGNÓSTICO DE LAS PAPERAS

GENLABS S.A.

J. Ferrer, N. López, E. Sánchez, E. Usán, T. Zuloeta

GSFP Laboratorio Clínico y Biomédico

18 de marzo de 2019
Abstract

The proposal of this study was to determine if the three immunologic methods were used to
detect mumps. Mumps is best known as a mild childhood disease and it is one of the most
common causes of viral meningitis. There are several techniques for the detection of mumps
IgA antibodies. These includes a highly sensitive radioimmunoassay and an enzyme-linked
immunosorbent assay (ELISA). It is described for detection of IgA antibodies to mumps virus.
Detection of high IgA titres in mumps patients by this technique indicates that the method has
potential for serodiagnosis of mumps infections since no mumps IgA antibodies were found in
46 control sera of healthy adults and patients hospitalised with other diseases. Immunity to
mumps virus was determined by EIA in serum samples and in dried whole blood specimens
spotted on Whatman filter paper. The comparison of the results obtained from 227 serum and
whole blood samples have demonstrated close agreement: 96% for mumps viruses. To
investigate the specificity of the EIA, 50 whole blood samples were tested by immunoblotting
to detect antibodies to MMR. Two out of the 50 whole blood specimens tested using Western
blot showed results discrepant with ELISA: both were positive in Western blot but negative in
ELISA. Therefore, whole blood dried on filter paper is a convenient alternative method for
collecting and transporting specimens and could be used for largescale epidemiological studies.
This method could solve the problem of sampling and could simplify studies of vaccine
efficacy. (Sarov, 1982) (Jeremy Mauldin, 2005) (Francesca Condorelli , Guido Scalia , Aldo Stivala , Rita
Gallo. , 1994)

Keywords: Paperas, Virus, Vacunación, Parotiditis, ELISA

ÍNDICE

- Abstract page. 1
- Keywords page. 1
- Introduction page. 3
- Hypothesis page. 5
- Theoretical Framework page. 5
- Discussion page. 7
- Conclusions page. 9
- Annex page. 10
- References page. 11
Introduction

El virus de las paperas es un virus de ARN de cadena negativa no segmentada de la familia

Paramyxoviridae, subfamilia Paramyxovirinae, género Rubulavirus que, inicialmente, se
multiplica en las células del aparato respiratorio y, posteriormente, la sangre lo transporta hacia
todos los tejidos, como las glándulas salivales, siendo la principal la parótida, causando la
enfermedad de las paperas. (Marija Brgles,corresponding author Maximilian Bonta, Maja Šantak, Maja
Jagušić, Dubravko Forčić, Beata Halassy, Günter Allmaier, and Martina Marchetti-Deschmann., 2016) Esta
infección suele ser leve en los niños y en el embarazo.

Es una enfermedad contagiosa que generalmente comienza con síntomas similares a los de la
gripe, y el síntoma más conocido de la enfermedad es la inflamación de las glándulas salivales
parótidas. (Ashutosh Kacker, MD, FACS, Professor of Clinical Otolaryngology, Weill Cornell Medical
College, and Attending Otolaryngologist, New York-Presbyterian Hospital, New York, NY. Review
provided by VeriMed Healthcare Network. Also reviewed by David Zieve, MD., 2017) (TECAN, 2019) El
contagio de la enfermedad puede ser por contacto directo o por objetos contaminados con saliva
u orina.

Los síntomas de las paperas son: fiebre de bajo grado, dolores musculares, agotamiento, dolor
de cabeza, falta de apetito, y mandíbula inflamada (parotitis). (Fraser, Marianne, MSN, RN
Haldeman-Englert, Chad, MD.) Esto causa una hinchazón dolorosa entre la oreja y la mandíbula.
Pero esta hinchazón no ocurre en todas las personas con paperas. Algunas personas no tienen
síntomas en absoluto.

Cuando tienes las paperas, tu sistema inmunológico produce anticuerpos para combatir el virus.
Estos son llamados paperas IgM y anticuerpos IgG. También desarrollará anticuerpos contra
las paperas después de la vacuna contra las paperas (MMR). (Fraser, Marianne, MSN, RN
Haldeman-Englert, Chad, MD.) La incidencia de estas infecciones virales ha disminuido
considerablemente debido a la introducción de programas de vacunación trivalentes. (Francesca
Condorelli , Guido Scalia , Aldo Stivala , Rita Gallo. , 1994) (Francesca Condorelli , Guido Scalia , Aldo
Stivala , Rita Gallo. , 1994)

La finalidad de esta investigación es conocer la técnica o técnicas de laboratorio más adecuadas

para detectar esta enfermedad.

Esta es altamente contagiosa, y es necesaria una detección precoz con el objetivo de que el
facultativo recete de manera inmediata el tratamiento adecuado a la persona afectada y, de esta
manera, la curación sea más efectiva además de prevenir que se ocasionen complicaciones por
una detección tardía, ja que en adultos son más peligrosas que en niños; evitando así el contagio
a otras personas. (TECAN, 2019)

Las complicaciones son poco frecuentes pero posibles, e incluyen la inflamación de las
meninges y el encéfalo (meningoencefalitis), de la epididimitis o la inflamación del testículo
(orquitis) que en algunos casos puede ocasionar una disminución de la fertilidad, del ovario
(ooforitis), del riñón (nefritis), del músculo cardiaco (miocarditis) o de las articulaciones
(artritis). El pronóstico para esta infección suele ser bueno. (Cuidate Plus, 2016)

La importancia de este artículo científico reside en divulgar el conocimiento obtenido, para que
las personas se puedan beneficiar informándose sobre esta enfermedad, cuál es su
sintomatología, y posibles complicaciones si no hay una rápida detección y tratamiento y así
poder evitar contagios. También podrán conocer la técnica o técnicas de laboratorio efectivas
para la detección de esta enfermedad.

Contextualization
Frecuentemente es asintomática. El cuadro clínico se manifiesta en forma de parotiditis, casi
siempre bilateral y acompañada de fiebre. La glándula afectada se agranda y alcanza su tamaño
máximo en 2-3 días. Pocos días después del inicio de la infección vírica puede aparecer una
tumefacción en otras glándulas (epidídimo-orquitis, ooforitis, mastitis, pancreatitis y tiroiditis)
y meningoencefalitis, aunque también puede hacerlo en ausencia de parotiditis. El virus afecta
al sistema nervioso central aproximadamente en el 50% de los pacientes, y el 10% de los
afectados puede presentar la sintomatología clínica típica de dicha infección, que se resuelve
casi siempre sin secuelas.

En el contexto de una situación epidémica, el diagnóstico suele ser clínico. En casos

esporádicos es importante hacer diagnóstico de certeza mediante la confirmación por métodos
de laboratorio.

El diagnóstico de infección aguda se puede confirmar mediante análisis serológicos. La

presencia de anticuerpos IgM determinados por ELISA o de un incremento en cuatro veces
entre los sueros de la etapa aguda y de la fase de convalecencia de los anticuerpos IgG, indican
una infección aguda. La determinación de IgG se puede realizar por pruebas de fijación de
complemento, inhibición por hemaglutinación o ELISA. Por lo general se evalúa la inmunidad
a la parotiditis mediante ELISA, ya que a su confiabilidad se une la facilidad de ejecución.
La medida preventiva más eficaz en la parotiditis es la vacunación sistemática de la población
infantil.

Se recomiendan que los enfermos permanezcan excluidos de centros educativos o centros de

trabajo hasta pasados 9 días desde el inicio de los síntomas, si en dichos centros hubiera
personas susceptibles que pudieran entrar en contacto con el enfermo. (Verdugo)

Hemos escogido esta enfermedad infecciosa debido a que actualmente hay una epidemia en
Barcelona y, concretamente, en el centro escolar dónde estudiamos. Una de las mentoras del
centro Jesuïtes-el Clot -en concreto del Ciclo Formativo de Grado Superior de Laboratorio
Clínico y Biomédico- contrajo el virus que provoca esta enfermedad altamente contagiosa
denominada paperas.

Con este trabajo, podremos diagnosticar -con la técnica más efectiva- esta enfermedad tan
contagiosa.

Hypothesis

▪ Las paperas se pueden diagnosticar mediante la técnica ELISA.

▪ Las paperas se pueden diagnosticar con una Western Blot.
▪ Las paperas se pueden diagnosticar produciéndose aglutinación al realizar dicha técnica.

Theoretical Framework

En el estudio realizado por Juan Carlos Sanz, Belén Ramos, Aurora Fernández, Luis García-
Comas, Juan Emilio Echevarría y Fernando de Ory, sobre el diagnostico serológico de
parotiditis epidémica, su objetivo fue determinar el corte de la titulación de IgG mediante
ELISA, en el cual se estudiaron 85 casos de parotiditis, previamente confirmados por PCR en
saliva, y más de 2.350 controles de la población de la comunidad de Madrid.

Dio positivo en 21 pacientes, el mejor punto de corte de IgG corresponde a títulos ≥ títulos
4.900, presentando una sensibilidad del 64,7% y especificidad del 86,1%. De 42 pacientes
vacunados con 1 dosis de triple vírica (sarampión, rubeola y paperas) se detectó IgM en 4,
mientras que la detección de IgG ≥ 4.900 fue positiva en 29.
Esto quiere decir que la obtención de un resultado de IgG ≥ 4.900 fue casi 5 veces más probable
en un paciente que padece parotiditis que en otra persona que no ha sido infectada.

La detección de títulos elevados de IgG frente a parotiditis puede ayudar a mejorar el

diagnóstico de la IgM en personas ya vacunadas. (Ory, 2018)

En la revista de Investigación Científica en Ciencias de la Salud, han publicado un estudio

experimental, agregando estabilizadores químicos a las vacunas vivas para mejorar la
estabilidad del virus. Su objetivo es evaluar los efectos de los estabilizadores para conservar la
inmunogenicidad de las vacunas contra las paperas liofilizadas. Este estudio ha sido
experimentado en tres grupos de conejillos de indias, inyectándoles 3 vacunas contra las
paperas con diferentes formulaciones, más un grupo de control al cual se le añadió agua estéril.

Los anticuerpos de las paperas en los sueros se midieron utilizando el ensayo de inhibición de
la hemaglutinación (HAI), cuyas muestras de sangre se recogieron antes de la inoculación, y
días después de la inyección (a los 14, 28 y 42 días). Después de dos semanas, estas vacunas
indujeron anticuerpos en los conejillos de Indias.

La primera formulación contenía dihidrato de trehalosa (C12H22O11), y la segunda incluía

anticuerpos estimulados con albúmina de suero humano en el nivel más alto.

Estos estabilizadores tienen diferentes niveles de conservación afectando de manera diferente

la respuesta inmune contra el virus; concluyendo que se pueden producir vacunas más estables
y más inmunogénicas usando estabilizadores que contengan trehalosa dihidratada. (Jamil, 2017)

En el estudio realizado por Patrick Davison y Jason Morris, destacan la importancia de abogar
por el uso de la vacuna MMR, que es vital por los beneficios que esta presenta, ya que en la
actualidad hay un movimiento creciente sobre la anti-vacunación.

La aparición de los brotes de las paperas se puede prevenir con una buena educación a los
pacientes por parte de los profesionales de la salud, fomentado la vacunación a sus hijos. Esta
enfermedad no es altamente mortal, pero en el caso de que los ovarios o testículos se vean
afectados, puede tener una morbilidad considerable. (Davison & Morris., 2018)
Detection
El virus se puede aislar a partir de saliva, orina, faringe, secreciones del conducto de Stensen y
líquido cefalorraquídeo. Está presente en la saliva aproximadamente durante 5 días tras el inicio
de los síntomas, y en la orina hasta 2 semanas. Crece bien en cultivos de células de riñón de
mono. Si empleamos técnicas de cultivo rápido (Shell-vial) la detección será más precoz (días)
que si realizamos cultivo convencional (semanas).

La técnica de la reacción en cadena de la polimerasa con retrotranscripción puede ser útil en el

diagnóstico de infección aguda, dada su mayor sensibilidad, pero no es una técnica disponible
en la mayoría de los laboratorios.

El genotipo predominante en las actuales epidemias es el G, siendo los más frecuentes los
subgenotipos G1 y G5. Ninguno de los otros posibles agentes que causan inflamación de las
parótidas (virus coxsackie, parainfluenzae, Epstein-Barr) tiene capacidad epidémica.
El virus se inactiva con agentes químicos como formol y éter, así como con los rayos
ultravioleta o el calor.

En “Mayo Clinic” actualmente tienen un tratamiento-seguimiento en el cual, previamente,

miran si estás vacunado y, a continuación, realizan un análisis de sangre para buscar la
evidencia del virus de las paperas.
El tratamiento consta de un aislamiento en cuarentena (recomendado) para el paciente i en la
toma de analgésicos (p.e. paracetamol) para calmar los dolores, debido a que los antibióticos
no son efectivos.
No hay ningún tratamiento específico para este virus porqué no es un virus mortal, y
actualmente otros tienen prioridad en la investigación para su erradicación.

Discussion
• Técnica ELISA: se describe un ensayo inmunoenzimático sensible para la detección
de anticuerpos IgA contra el virus de las paperas en suero. (Sarov, NCBI, 1982)
Se pudieron demostrar anticuerpos específicos contra IgA de paperas en 10 pacientes
con infecciones por el virus de las paperas. No se detectaron paperas específicas de
anticuerpos IgA mediante ELISA en 46 controles. Se discute la posible aplicación de
la técnica ELISA de paperas de IgA en el diagnóstico serológico de las infecciones de
paperas.
 En el presente estudio hemos desarrollado una enzima ensayo inmunoabsorbente
(ELISA) para detección de anticuerpos IgA contra el virus de las paperas. En nuestro
estudio se encontraron altos títulos de anticuerpos IgA específicos. Detección de títulos
altos de IgA en pacientes con paperas por la técnica ELISA descrita indica que el
método tiene potencial para serodiagnóstico de las infecciones de paperas sin
anticuerpos IgA. (Sarov, PubMed, 1982)
Con esta técnica se pueden detectar las paperas.

• Técnica Western Blot: los antígenos víricos se utilizan en la transferencia de Western

Blot. La monocapa de la célula se infecta con el virus de las paperas y cuando es visible
entre el 80% y 90% se hacen 20 pases.
Esta técnica se lleva a cabo en células Vero como antígenos de control. Las proteínas
virales y celulares se transfieren en una membrana de nitrocelulosa utilizando una celda
de transferencia electroforética y se trata con heparina; a continuación, se satura con
leche en polvo al 5% sin grasa en PBS durante 2 horas a 37ºC. Durante este tiempo se
utiliza el sistema multipantalla y durante la noche se introduce en nitrocelulosa a 4ºC.
Se hace un lavado en PBS y se deja reaccionar durante 2 horas a 37ºC en HRPO.
Se añaden inmunoglobulinas de conejo conjugadas a IgG humana, se hace una dilución
1:300 en tampón de transferencia y se repite el lavado.
Se deja reaccionar a temperatura ambiente en la oscuridad durante 30 minutos con 0.5
mg/ml de naftol en PBS.
La reacción se lavó con agua destilada y se fijó por inmersión de nitrocelulosa.
(Condorelli F1, Scalia G, Stivala A, Gallo R, Marino A, Battaglini CM, Castro A. , 1994)
Con esta técnica se pueden detectar las paperas.

• Técnica de Aglutinación:
El virus de las paperas se absorbe en partículas de lecitina-colesterol, y la prueba de
aglutinación detecta anticuerpos del tipo antígeno V específico. Los virus de influenza
A2 y APR8 reaccionaron sólo con su tipo de anticuerpos específicos y no con antisueros
de otros tipos o con antisueros a un antígeno soluble purificado preparado a partir de la
Tensión PR8.
El lote de antígeno PR8 utilizado en esta prueba es poco reactiva pero la especificidad
es la adecuada. (Morton Klein, Sandra Chaefsky and Margaret Muller , 1966)
Con esta técnica se pueden detectar las paperas.
Fig. 1 Sueros IgA positivos y negativos específicos para paperas como determinado por ELISA.

Curvas de titulación de un suero positivo para las paperas IgA específica (0) y un suero negativo (A).
Sólido líneas, símbolos sólidos: suero probado en antígeno de paperas.

Salpicado líneas, símbolos abiertos: suero probado en antígeno Vero control.

El título de IgA de paperas de ELISA determinado para los sueros positivos fue 640. La absorbancia a
450 nm dada en la figura representa la densidad óptica de las muestras sin diluir. (Sarov, NCBI, 1982)

Gracias a estos estudios realizados hemos podido comprobar que estas 3 técnicas son válidas
para la detección de las paperas y, por lo tanto, hasta que no haya nuevos
avances/descubrimientos, todas las técnicas serán válidas.

Conclusions

1. Gracias al estudio que se ha realizado, se puede determinar que la técnica ELISA es

apta para llevar a cabo la detección de las paperas.
2. Los resultados obtenidos, nos permiten apuntar que la técnica Western Blot, también se
considera aceptada para detectar este tipo de enfermedad.

La prueba de aglutinación es una de las más simple de todas las pruebas serológicas. Estas
pruebas no han sido utilizadas generalmente como diagnóstico de rutina en procedimientos en
virología debido a la dificultad de obtención concentrada y purificada de antígenos. Pero
gracias al estudio mencionado anteriormente:

3. La serie de resultados que se han reclutado, en cuanto a la técnica usada por

aglutinación, también nos permiten concretar que esta técnica también se puede usar
para la detección de las paperas.
4. Podemos concretar que la técnica con mayor precisión para detectar esta enfermedad
es la técnica ELISA, ya que, en todos los aspectos, en cuanto a los resultados se refiere,
son los adecuados, hecho que no sucede cuando se trabaja con las otras técnicas.
5. Para llevar a cabo estas técnicas inmunológicas, se debe disponer de un presupuesto
elevado, pero tampoco desorbitado, por lo que vale la pena trabajar con calma y
precisión, ya que un importe extraordinario para realizar este experimento supondría
una seria limitación.
Annex

Fig. 1 Reacciones observadas en la aglutinación.

 References
Ashutosh Kacker, MD, FACS, Professor of Clinical Otolaryngology, Weill Cornell Medical College, and
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