PROCEDIMIENTO PARA LA VALIDACIÓN DE LA CUANTIFICACIÓN DE HIERRO EN AGUA

CON FENANTROLINA

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1. Objetivo
Realizar la validación de la cuantificación de hierro en agua con fenantrolina.
2. Alcance
Una vez culminado la validación de este método analítico estará al alcance y disposición
del laboratorio LaQuAmaz para el análisis, investigación y proceso de acreditación.
3. Definiciones

Validación del método: confirmación, a través de la aportación de evidencia objetiva,

de que se han cumplido los requisitos para un uso o aplicación específico previsto1.

Límite de detección: concentración más baja del analito que puede ser detectada por
el método a un nivel de confianza especificado.

Límite de cuantificación: mínimo nivel de analito que puede ser determinado con
desempeño aceptable. “Desempeño aceptable” es considerado de diversas formas por
diferentes guías incluyendo precisión y veracidad, o incertidumbre de medición2.

Sensibilidad analítica: variación de la respuesta del instrumento que corresponde a

una variación de la magnitud medida (por ejemplo, una concentración de analito), es
decir, el gradiente de la curva de respuesta3,4.

Veracidad: expresión de la proximidad de la media de un número infinito de resultados

(producidos con el método) a un valor de referencia.

Aplicabilidad: Es el alcance y define como “los analitos, matrices y concentraciones

para las cuáles el método de análisis se puede usar satisfactoriamente”.

4. Descripción
Las soluciones preparadas se deben almacenar en frascos de vidrio color ámbar, las
soluciones de hierro estándar no son estables, preparar diariamente según sea necesario
diluyendo la solución madre. Los estándares visuales en los tubos nessler son estables
durante varios meses si están sellados y protegidos de la luz.
Preparación de soluciones (con un contenido bajo en hierro).
No. PASOS A REALIZAR DESCRIPCIÓN RESPONSABLE
Solución de Ácido Concentrado, con un contenido menor a
1 Analista
clorhídrico 0,5 ppm de hierro.
Solución de Retire el plato y el anillo, sin hacerle
2 Analista
Hidroxilamina presión al soporte del plato.
Debido a que incluso un buen grado de
acetato de amonio contiene una cantidad
Solución tampón de significativa de hierro, preparar nuevos
3 Analista
acetato de amonio estándares de referencia con cada
preparación de tampón.
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No. PASOS A REALIZAR DESCRIPCIÓN RESPONSABLE

Disolver 250 g de NH4C2H3O2 en 150 mL
de agua tipo 1, agregue 700 mL de ácido
acético (glacial) concentrado.
Para obtener una concentración de a 0.02
Solución acetato de M debe disolver 200 g de NaC2H3O2·3H2O
4 Analista
sodio en 800 mL de agua tipo 1.
Se debe desechar la solución si se
oscurece. No es necesario calentar si se
agregan 2 gotas de HCl concentrado al
agua. (Nota: Un mililitro de este reactivo es
Solución de suficiente para no más de 100 ug de Fe).
5 Analista
fenantrolina
Disolver 100 mg de monohidrato de 1,10-
fenantrolina en 100 mL de agua mediante
agitación y calentamiento a 80 C.
Usar metal (1) o sal (2) para preparar la
solución madre:
1) Usar alambre de hierro electrolítico o
"alambre de hierro para estandarizar" para
preparar la solución. limpiar el alambre con
papel de lija para quitar cualquier capa de
óxido y para producir una superficie
brillante. Pesar 200,0 mg de alambre y
colocar en un matraz aforado de 1000 mL.
Disolver en 20 mL de ácido sulfúrico 6N
(H2SO4) y diluir para aforar con agua; 1
Solución de hierro mL= 200 ug Fe.
6 Analista
común 2) Si se prefiere sulfato de amonio ferroso,
agregue lentamente 20 mL de H2SO4
concentrado a 50 ml de agua y disuelva
1.404 g de Fe(NH4)2(SO4)2-6H2O. Agregar
lentamente permanganato de potasio
hasta que persista un débil color rosado.
Agregar los últimos mililitros de la solución
gota a gota. Se necesitarán
aproximadamente 50 mL del
permanganato de potasio. aforar a 1000
mL con agua tipo 1 y mezclar; 1 mL = 200
ug Fe.
Permanganato de Disolver 0.316 g de KMnO4 en agua de
7 potasio reactivo y diluir a 100 mL. Analista

Preparar diariamente para su uso.

Dependiendo de la cantidad requerida se
Solución de hierro puede escoger entre la opción 1 y 2:
8 Analista
estándar 1.Pipetear 50 mL de solución madre en un
dúplex volumétrico de 1000 mL y diluir para
aforar con agua tipo 1; 1 mL = 10 ug de Fe.
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No. PASOS A REALIZAR DESCRIPCIÓN RESPONSABLE

2. Pipetear solución madre de 5 mL en un
matraz volumétrico de 1000 mL y diluir
para aforar con agua tipo 1; 1 mL = 1 ug
Fe.

Curvas de calibración.
No. PASOS A REALIZAR DESCRIPCIÓN RESPONSABLE
Se deben realizar por lo menos 7 curvas de
calibración, con 10 puntos cada una. El
mismo analista deberá ser quien prepare
las soluciones para la misma curva de
Preparar curvas de calibración, la curva deberá contener los 10
1 Analista
calibración puntos entre 0 ppm y 5 ppm.

Por lo menos 2 analistas deberán dividirse

las 7 curvas de calibración por realizar:

2 Blanco Agua tipo 1 será el blanco. Analista

Determinación de parámetros de validación6.

PASOS A
No. DESCRIPCIÓN RESPONSABLE
REALIZAR
A partir de la elaboración de 7 curvas de
calibración con por lo menos 10 datos en cada
1 Linealidad Analista
una. Se debe graficar absorbancia vs
concentración y observar su R2.
La sensibilidad analítica no es una
característica de desempeño muy importante.
En sistemas de medición espectrofotométrica,
se puede predecir la absorbancia a partir de la
2 Sensibilidad Analista
ley de Beer-Lambert. Esto puede utilizarse
como una verificación del desempeño del
instrumento, y a veces las normas exigen
realizar dichas verificaciones5.
Realizar 10 medidas del blanco y determinar
su desviación estándar promedio (σ).

Límite de detección (LOD).

LOD = 3xσ
3 Limites Analista
Límite de cuantificación (LOQ).
LOQ=10xσ

La estimación de LOD/LOQ obtenida durante

la validación debería ser tomada como un
valor indicativo.
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PASOS A
No. DESCRIPCIÓN RESPONSABLE
REALIZAR

Repetibilidad, precisión intermedia y

reproducibilidad:

Medir materiales de referencia (MR),

muestras excedentes de ensayo o blancos de
4 Precisión Analista
muestra adicionados a diversas
concentraciones en todo el intervalo de
trabajo. La repetibilidad y la precisión
intermedia se pueden determinar a partir de
estudios por separado o simultáneamente en
un solo estudio.

Medir el material de referencia 10 veces para

la determinación práctica del sesgo, la cual se
basa en la comparación de la media de los
resultados del método candidato con un valor
de referencia adecuado.

A. Análisis de materiales de referencia.

B. Experimentos de recuperación
utilizando muestras adicionadas.

C. comparación con resultados

obtenidos mediante otro método.

Los estudios de sesgo deben cubrir el alcance

del método y, por lo tanto, pueden requerir el
5 Veracidad análisis de diferentes tipos de muestra y/o Analista
diferentes niveles de analito.

El sesgo puede expresarse en términos

absolutos

𝑏 = 𝑃𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 − 𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑟𝑒𝑓𝑒𝑟𝑒𝑛𝑐𝑖𝑎

o en términos relativos en porcentaje

𝑃𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 − 𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑟𝑒𝑓𝑒𝑟𝑒𝑛𝑐𝑖𝑎

𝑏(%) = 𝑥 100
𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑟𝑒𝑓𝑒𝑟𝑒𝑛𝑐𝑖𝑎

o como recuperación relativa de adiciones

𝑃𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 muestra adicionada − Promedio
𝑅 ´ (%) = 𝑥 100
𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑎𝑑𝑖𝑐𝑖𝑜𝑛𝑎𝑙

Este método espectrofotométrico es apto para

6 Aplicabilidad la determinación de hierro en agua y aguas Analista
residuales.
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5. Anexos

6. Documentos de Referencia
1. ISO 9000:2005 Quality management systems – Fundamentals and vocabulary, ISO
Geneva.
2. Shrivastava, V. B. Gupta, Methods for the determination of limit of detection and limit of
quantitation of the analytical methods, Chronicles of Young Scientists, 2011, 2(1), 21.
3. International vocabulary of metrology – Basic and general concepts and associated terms
(VIM), JCGM 200:2012, www.bipm.org. A previous version is published as ISO/IEC Guide
99:2007, ISO Geneva.
4. Compendium of analytical nomenclature (IUPAC orange book), www.iupac.org.
5. ISO 11732:2005 Water quality – Determination of ammonium nitrogen – Method by flow
analysis (CFA and FIA) and spectrometric detection, ISO Geneva.
6. Guía U, Laboratorio D, Métodos V De. La Adecuación Al Uso de Los Métodos Analíticos.

Elaborado por: Revisado por: Aprobado por:

Firma: Jhoam Sebastian C.R. Firma: Firma:

Nombre: Jhoam Sebastian Correa Restrepo. Nombre: Nombre:

Cargo: Miembro del semillero C&T+C Cargo: Cargo:

Fecha: 15-06-2018 Fecha: Fecha: