Se lava 7 veces para poder eliminar totalmente el anticeptico.

Del primo aislamiento se transfiere a un medio que tiene azul de bromotimol, el cual al incubarlo a
28°C por dos días se observan los rizobios de rápido crecimiento (Rhizobium), además de que se
puede observar que el medio se torna de color amarillo, ya que dan una reacción acida en medio
ELMA con azul de bromotimol.

En el caso de los rizobios de lento crecimiento (Bradyrhizobium), aparecerán en 6 a 8 dias, el

medio se observa de un color azul, ya que dan reacción alcalina en medio ELMA con azul de
bromotimol ( a pH de 6 se torna amarilo y a un pH de 7.6 se torna azul).

Bradyrhizobium

Son rizobios que viven en zonas tropicales generalmente son de crecimiento lento, presentan
flagelos subpolar, dan reacción alcalina, muestran una baja o nula especificidad por el hospedero,
su tiempo de generación es de 6 a 8 horas, crecen mejor en glicerol y pentosas son aerobios y
heterótrofos.

Rhizobium

Son rizobios de las zonas templadas que presentan un crecimiento rápido, tienen flagelos
peritricos, dan reacción acida en el medio, muestra una alta especificidad por el hospedero, son
móviles, aerobios, heterótrofos, cresen mejor en sacarosa y manitol, requieren de vitaminas y
aminoácidos.

Es gram negativo, forma de bastones pleomorficos, no esporulados, forman asociaciones

simbiótica con leguminosas, utilizan la via de ENtner-Doudoroff, la via del ciclo de Krebs, la via de
embden meyerhof.