UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL

CONTROL HIGIENICO SANITARIO DE AMBIENTES Y SUPERFICIES DEL

CENTRO DE INFORMACIÓN DE LA FACULTAD DE INGENIERÍA
AMBIENTAL CIFIA-UNI

TRABAJO DE INVESTIGACION

Integrantes:
BERROCAL CORONEL, Jefferson Alexis-20162733H
ESPINOZA PORTALATINO, Cinthya Rosmery – 20161230B
GUEVARA VALENCIA, Samantha Isabel – 20161408F
SILVERA PECHE, Anthony – 20164543A
VILLANUEVA ARAKAKI, Wendy Rosita – 20162655G

DOCENTE: ALVARO MARTIN MARTINEZ VILA

3 Junio
Lima – Perú
2017

1
 INDICE

1. RESUMEN ............................................................................................................... 3
2. ABSTRACT............................................................................................................... 3
3. LUGAR DE EJECUCION Y DEL MUESTREO............................................................... 4
4. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES ........................................................................... 7
5. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ......................................................................... 8
6. HIPOTESIS............................................................................................................... 9
7. OBJETIVOS .............................................................................................................. 9
OBJETIVO GENERAL......................................................................................................... 9
OBJETIVOS ESPECIFICOS ................................................................................................. 9
8. MARCO TEORICO ................................................................................................. 10
9. IMPORTANCIA Y JUSTIFICACION DEL PROYECTO................................................. 18
10. MATERIALES, EQUIPOS Y OTROS ......................................................................... 19
11. METODOLOGÍA (PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL) DE INVESTIGACIÓN ........... 20
12. NORMAS INTERNACIONALES ............................................................................... 24
13. RESULTADOS ........................................................................................................ 27
14. CONCLUSIONES .................................................................................................... 28
15. BIBLIOGRAFÍA....................................................................................................... 28

2
 RESUMEN

Nuestro trabajo de investigación consiste en realizar un control higiénico

sanitario de las superficies con la finalidad de mejorar la calidad de vida de la
población universitaria, para esto es necesario mantener las condiciones
Higiénico - Sanitarias de los ambientes concurrentes a la hora de estudio en el
Centro de Informacion de la Facultad de Ingeniería Ambiental de la Universidad
Nacional de Ingeniería.

Utilizaremos como nuestra muestra las superficies que tengan contacto directo
con las personas, y procederemos a preparar el medio de cultivo para determinar
la presencia de los microorganismos indicadores de contaminación de ambientes
superficiales como: estafilococos, Ecoli, coliformes,fecales,recuento total de
bacterias mohos y levaduras.

ABSTRACT

Our research work consists in carrying out a hygienic sanitary control of the
surfaces with the purpose of improving the quality of life of the university
population, for this it is necessary to maintain the Hygienic - Sanitary conditions
of the concurrent environments at the time of Information Center Of the Faculty of
Environmental Engineering of the National Engineering University
We will use as our sample the surfaces that have direct contact with people, and
proceed to prepare the culture medium to determine the presence of
microorganisms indicative of contamination of surface environments such as:
staphylococci, Ecoli , faecal coliforms, total count of bacteria ,molds and yeasts

3
 LUGAR DE EJECUCION Y DEL MUESTREO

-Lugar de ejecución: Laboratorio de la Facultad de Ingeniería Ambiental

Localización

Dirección Av. Túpac Amaru 210, Rimac

Lima, Perú

Coordenadas 12°01′11″S 77°02′55″O

4
-Lugar de muestreo: Centro de información de la facultad de ingeniería ambiental
cifia-uni

5
6
 CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES

Semanas
Descripción de 3/04/2017 2 3 4 5 6 7 8 9 10 10/06/2017
actividades
reunión del equipo de x
trabajo
aporte de ideas para tema x
de investigación
discusión de ideas para x
determinar el tema de
investigación
recopilación bibliográfica de x
fuentes informativas de los
lugares
visita a la CIFIA x
procesar la información x
solicitar materiales para x
realizar el muestreo
solicitar los medios de x
cultivo
realización del trabajo x x
experimental en el
laboratorio
resultados x
discusión x
redacción del informe final x
presentación y sustentación x
del informe final del proyecto

7
 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Los peligros biológicos presentes en las superficies y medio (aire) es debido a

los posibles microorganismos patógenos que se encuentran con muy pocas
barreras y pueden multiplicarse hasta niveles de riesgo.

Las bacterias que colonizan las superficies pueden actuar como reservorios de
microorganismos alterantes como pseudomona aeruginosa o patógenos como
staphylococcus aureus, E.coli, y Listeria monocytogenes; los cuales pueden
sobrevivir al tratamiento de limpieza y desinfección especialmente si forman
biofilms. Considerando que los biofilms son comunidades de microorganismos
que sintetizan una serie de sustancias que les confieren estabilidad, nutrición y
protección frente agente hostiles, con implicaciones directas o indirectas sobre la
salud de los consumidores.

Las enfermedades causadas por los microorganismos patógenos del medio

(aire) pueden ser: Conjuntivitis, dermatitis, salpullido, bronquitis, sinusitis.

Las enfermedades causadas por microorganismos patógenos que se encuentran

en las superficies son: las enfermedades pulmonares (producidas por mohos y
levaduras), alergias y enfermedades dérmicas.

Podremos comprender la necesidad de adoptar medidas de higiene más

específicas respecto a los programas de higienización de superficies y la
necesidad de emplear métodos de control que nos permita verificar su eficacia.

La utilidad de los métodos de control de higiene de superficies debe

considerarse como un eslabón crucial para la identificación de microorganismos
banales como patógenos.

Es importante mencionar que en la actualidad no existen protocolos

suficientemente eficientes para poner de manifiesto la presencia de
microorganismos, su adhesión y su posible multiplicación en las superficies de
trabajo de forma rutinaria, así como poner de manifiesto la eficacia real del
desinfectante aplicado.

Por tal motivo nos enfocamos en realizar este trabajo de investigación con la
finalidad de determinar las condiciones higiénico-sanitarias en las que se ofrece
el servicio estudiantil en la Universidad Nacional de Ingeniería; y así conocer si
las mismas representan un posible riesgo para la salud de los estudiantes de
esta universidad, en la posible presencia de los indicadores contaminantes.

8
 HIPOTESIS

 La confluencia de individuos en el Centro de Información de la

Facultad de Ingeniería Ambiental (CIFIA) de la Universidad Nacional
de Ingeniería; alrededor de las 16:00 a 18:00 horas del día (donde
hay mayor concurrencia); sin mantener una limpieza adecuada,
origina una alta carga microbiana en superficies y en el ambiente
(aire).
 La limpieza y desinfección de contaminantes microbiológicos, que se
da por parte de los trabajadores, no es la suficiente y adecuada, para
mantener a los estudiantes libres de riesgos de contaminación
microbiana según sugiere los límites máximos permisibles.

OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL

 Realizar una evaluación del control higiénico sanitario de superficies y

medio (aire) en el Centro de Información de la Facultad de Ingeniería
Ambiental (CIFIA) de la Universidad Nacional de Ingeniería.

OBJETIVOS ESPECIFICOS

 Conocer los diferentes microorganismos (E.Coli, mohos y levaduras

Staphylococcus, Coliformes) que existen en superficies y aire.
 Determinar cuantitativamente los microorganismos presentes en las
superficies inertes, que representen un riesgo para la salud de los
estudiantes.
 Uniformizar los procedimientos que se deben aplicar en la selección,
toma de muestras y para los análisis microbiológicos de superficies vivas
e inertes.

9
  Establecer los límites microbiológicos para evaluar las condiciones
higiénicas sanitarias de las superficies vivas e inertes que entran en
contacto con los alumnos universitarios.

MARCO TEORICO

Los microorganismos se encuentran presentes en todos los ambientes: en el

aire, en el agua, en la superficie de los objetos e incluso sobre nuestra piel.
Cuando el tema a tratar es la microbiología de ambientes, superficies y
manipuladores; es importante determinar el grado de contaminación ambiental,
ya que las condiciones higiénicas del lugar de trabajo (utensilios, superficies,
etc.) y del propio manipulador van a influir en el número y tipo de
microorganismos del ambiente de estudio.

Definiciones previas
Conceptos necesarios que debemos tener en cuenta para poder realizar,
entender y comprender el fondo de este trabajo de investigación.

a) Análisis microbiológico: procedimientos que se siguen para determinar

la presencia, identificación, y cantidad de microorganismos patógenos e
indicadores de contaminación.

b) Calidad sanitaria. Es el conjunto de requisitos microbiológicos, físico-

químicos y organolépticos que debe reunir un alimento para ser
considerado inocuo para el consumo humano.

c) Criterios microbiológicos: es la aceptabilidad sanitaria de una

superficie basada en la ausencia, presencia, o en un límite permisible de
microorganismos del ámbito muestreado.

d) Superficies: Parte externa de un cuerpo que sirve de delimitación con el

exterior.

e) Microorganismos: Un microorganismo, también llamado microbio u

organismo microscópico, es un ser vivo que sólo puede visualizarse con
el microscopio. Son organismos dotados de individualidad que presentan,
a diferencia de las plantas y los animales, una organización biológica
elemental.

10
 Es una bacteria que se encuentra
normalmente en el intestino del ser
humano y de los animales de sangre
caliente. La mayoría de las cepas de E.
E. Coli
Coli son inofensivas. Sin embargo
alguna de ellas como E.Coli productora
de Shiga, pueden causar graves
enfermedades.

Es una bacteria anaerobia Gram

positiva, que es capaz de producir
coagulasa y catalasa. Esta bacteria está
Staphilococcus ampliamente distribuida por todo el
Aureus mundo y puede producir una amplia
gama de enfermedades que van desde
enfermedades cutáneas y de las
mucosas.

Es el nombre de un grupo de bacterias.

Es la causa más común de las
enfermedades transmitidas por
Salmonella
alimentos. La salmonella se encuentra
en las aves crudas, los huevos, la carne
vacuna, entre otros.
Son un reino de seres vivos unicelulares
o pluricelulares que no forman tejidos y
cuyas células se agrupan formando un
Mohos cuerpo filamentoso y muy ramificado.
Según su tipo de vida, los hongos
pueden ser saprofitos, parásitos y
simbiontes.
Son un tipo de hongos muy pequeños
que solo pueden verse por medio de un
microscopio. Les gusta mucho
alimentarse de azúcares, que
Levaduras
transforman en otras sustancias y en
anhídrido carbónico o CO2 en un
proceso llamado fermentación.
Son bacterias que forman parte del total
del grupo coliforme. Son definidas como
bacilos Gram Negativos, no esporulados
Coliformes
que fermentan la lactosa con producción
fecales
de ácido y gas a 44.5 °C. La mayor
especie en el grupo de coliforme fecal es
el Escherichia Coli.

11
 Es un género de bacterias Gram
negativas, inmóviles no formadoras de
Shigella esporas e incapaces de fermentar la
lactosa, que pueden ocasionar diarrea
en los seres vivos.

f) Indicadores de esterilización: Son equipos o reactivos que tienen como

objetivo certificar o validar que el proceso se efectuó de forma adecuada.
Los indicadores se clasifican en: físicos, químicos y biológicos.

 Indicadores Físicos: Son elementos incorporados al esterilizar como

termómetros, manómetros de presión, sensores de carga, válvulas y
sistemas de registro, Estos monitores físicos son de gran utilidad,
pero no son suficientes como indicadores de esterilización. Los
métodos físicos se dividen en:

Flameado
Calor Seco Incinerado
Horno Pasteur
Tindalización (Calentamiento 3
veces)
Calor Húmedo Uperización ( Hasta 150° C 1-20
segundos)
Autoclave (vapor saturado a presión)
Rayos X
Radiaciones
Rayos Gamma
Ionizantes
Rayos ultravioleta

 Indicadores químicos: Son dispositivos que contiene sustancias

químicas que cambian de color o estado cuando se exponen a una o mas
variables criticas del proceso de esterilización como temperatura-
humedad o temperatura-concentración del agente esterilizante.

 Indicadores biológicos (IB): Dispositivos de monitoreo en el proceso de

esterilización que consiste en una población viable estandarizada de
microorganismos conocidos por su resistencia al modo de esterilización
que se está monitoreando. Los indicadores biológicos son poblaciones de
esporas bacterianas según el modo de esterilizarlas:

12
 Vapor
Geobacillus
Ozono
Stearothermophilus
H2O2
Bacillus atrophaeus Oxido de Etileno

g) Medios de cultivo: Son una mezcla de nutrientes que, en

concentraciones adecuadas y en condiciones físicas óptimas, permiten
el crecimiento de los microrganismos. Son esenciales en el laboratorio de
microbiología por lo que un control en su fabricación, preparación,
conservación, y uso; asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad
de los resultados obtenidos.

Medio usado como diluyente y para

enriquecimiento bacteriano a partir de
Agua Peptonada alimentos y otros materiales de interés
sanitario. Medio preparado color ámbar
claro.

Medio utilizado para propósitos

generales, favorece el desarrollo y
Agar TSA aislamiento de una gran variedad de
microorganismos aerobios y anaerobios
facultativos y estrictos

Medio de cultivo selectivo y diferencial,

utilizado para el aislamiento y
diferenciación de estafilococos. Es
Agar Manitol Salado recomendado para el aislamiento de
estafilococos patogénicos a partir de
muestras clínicas, alimentos y otros
materiales de importancia sanitaria.

Medio utilizado para el aislamiento,

Agar Sabouraud identificación y conservación de hongos
Glucosado (ASG) patógenos y saprofitos. También es útil
para el cultivo de levaduras.

Es utilizado para el aislamiento selectivo

de bacilos Gram negativos de rápido
Agar con eozina y
desarrollo y escasas exigencias
azul de metileno
nutricionales. Permite el desarrollo de
(EMB)
todas las especies de la familia
Enterobacterias.

13
 Medio recomendado para detección y
Caldo Lauril Sulfato recuento de coliformes en aguas, aguas
de Sodio residuales y alimentos. Incubar los tubos
24-48 horas a 35-37°C.
Es un medio solido muy apropiado para el
Caldo BHI cultivo de bacterias y hongos, incluyendo
los de difícil desarrollo.

h) Pruebas bioquímicas: Permiten determinar las características

metabólicas de las bacterias de objeto e identificación. Algunas son
rápidas ya que evalúan la presencia de una enzima preformada y su
lectura varia entre unos segundos hasta unas pocas horas. Otras
pruebas requieren para su lectura el crecimiento del microorganismo con
una incubación previa de 18 a 48 horas.

Estudia la capacidad de degradas el

Indol triptófano con producción de Indol y
metabolitos indolicos
Estudia la fermentación acido mixta con
Rojo de Metilo producción de ácidos estables en el
tiempo.

Estudia la fermentación Butanodiólica

con formación de un metabolito
intermediario neutro. Técnica: sembrar
Voges Proskauer la muestra en el medio e incubar de 24-
48 horas a 37°C. VP Positivo= Color
rojo. Negativo= Color amarillo en la
superficie.

Estudia la capacidad de utilizar el citrato

Citrato
como única fuente de carbono.

i) Enfermedades: Existen enfermedades que son producidas por la

contaminación y otros trastornos que también pueden aparecer como
resultado de haber estado expuestos a un agente contaminante durante
un tiempo prolongado.

 Enfermedades producidas por la contaminación del aire

Son provocadas por compuestos tóxicos como plomo, cobre, Zinc y
óxidos de carbono, azufre y nitrógeno que son arrojados como

14
 consecuencia de actividades humanas e incendios forestales. Las
fuentes que emiten tóxicos pueden fijos (calentadores, estufas,
quema de basura, industrias, etc.) o móviles (automóviles, transporte
público, etc.). Entre las principales enfermedades causadas por la
contaminación se aire se encuentran:

Es la inflamación del tejido que

 Staphylococcus
cubre la parte blanca del ojo y el
 Neumococo
Conjuntivitis interior de los parpados
 Haemophylus (conjuntiva). Ocasiona lagrimeo y
influenzae enrojecimiento del globo ocular.

Hinchazón cutánea causada por el

contacto directo con una sustancia
 Hongos
Dermatitis irritante, la piel se enrojece y se
experimenta incomodidad
persistente.
 Hongos
Trichophyton,
Candida,
criptococosis, Granitos o ronchas en la piel que
aspergilosis ocasionan comezón y ardor,
Sarpullido
histoplasmosis además de que duelen e incluso
 Bacterias llegan a producir adormecimiento.
Staphylococcus
Streptococcus
Pseudomonas
 Mycoplasma
Pneumoniae Inflamación de los bronquios o
 Bordetella Pertusis estructuras internas de los
Bronquitis  Haemophilus pulmones; se manifiesta con tos
Influenzae leve, dolor de garganta y exceso
 Streptococcus de mucosidades o flemas.
Pneumoniae
Infección ocasionada por la
obstrucción de uno o más senos
paranasales (pequeñas cavidades
o túneles situados al lado de la
 Streptococcus
nariz que ayudan a filtrar, calentar
Pneumoniae
y humedecer el aire que
Sinusitis  Haemophilus
respiramos; también dan la
Influenzae
resonancia a la voz y aligeran el
 Moraxella catarrhalis peso del cráneo), aunque
igualmente puede ser una
complicación derivada de alguna
infección en vías respiratorias.

15
  Enfermedades producidas por la contaminación de superficies
Se deben a que este es contaminado con plaguicidas, restos solidos
procedentes de las viviendas, detergentes, etc.

Constituye un serio problema.

Los seres humanos son
susceptibles de padecer
Parasitismo  Bacterias alrededor de 300 especies de
intestinal  Virus helmintos (llamados "gusanos" o
"lombrices"), y más de 70
protozoos entre los que se
encuentran las amebas y giardia.
La hepatitis es una inflamación
del hígado. La afección puede
remitir espontáneamente o
evolucionar hacia una fibrosis
 Bacterias (cicatrización), una cirrosis o un
Hepatitis
 Parasitos cáncer de hígado. Los virus de la
hepatitis son la causa más
frecuente de las hepatitis, que
también pueden deberse a otras
infecciones, sustancias tóxicas
Estas enfermedades afectan los
conductos que transportan
 Neumococo oxígeno y otros gases dentro y
Enfermedades
Pulmonares  Haemophilus fuera de los pulmones. Por lo
Influenzae tipo B regular causas un estrechamiento
u obstrucción de las vías
respiratorias.

Operaciones generales

 Operaciones de campo
Las operaciones en campo son aquellas que se realizan en los
establecimientos donde se procesan, elabora, almacenan, fraccionan
o, sea fábrica, almacén, servicios de alimentos, quiosco, puesto,
comedor u otro; en este caso el CIFIA (Centro de investigación de la
Facultad de Ingeniería Ambiental).

Comprende las siguientes operaciones consecutivas, realizadas por personal

capacitado en la materia:

I) Procedimiento para la selección de la muestra

16
 II) Selección del método del muestreo

III) Procedimiento para la toma de muestra

 Operaciones analíticas
Las operaciones analíticas son aquellas que se realizan en un
laboratorio destinado y acondicionado para el control de la calidad
sanitaria e inocuidad del ambiente a estudiar.

Comprende las siguientes operaciones consecutivas, realizadas por personal

capacitado en la materia:

I) Determinación de los ensayos microbiológicos

II) Procedimiento de análisis microbiológicos
III) Cálculo y expresión de resultados
IV) Interpretación de resultados de acuerdo a los criterios
microbiológicos.

Análisis del aire

El aire, además de partículas en suspensión, es portador de bacterias o sus

esporas. Por ello, puede ser causa tanto de contaminación de alimentos y
superficies como de infecciones en el hombre (patologías respiratorias, etc.).
Existen distintos métodos para el análisis del aire: sedimentación, filtración,
choque en líquidos y precipitación electrostática, entre otros. En esta práctica
vamos a explicar el primero, por ser uno de los métodos más empleados. El
método de sedimentación en placa es uno de los más sencillos para la
determinación de microorganismos del aire. A pesar de ello, los resultados
obtenidos son orientativos de las cifras de microorganismos presentes en el aire,
ya que estos niveles varían en función de las corrientes de aire y del tamaño de
las partículas en suspensión.

Análisis de superficie

Para llevar a cabo una correcta manipulación de los alimentos es necesario

mantener una limpieza adecuada tanto en las superficies de trabajo como en los

17
utensilios que hay que emplear. A no ser que los alimentos hayan sido
esterilizados, todos los productos llevarán microorganismos. En la manipulación,
el envasado y el almacenaje de los alimentos, estos microorganismos deben
mantenerse en todo momento en niveles que aseguren la calidad microbiológica
del alimento. El objetivo de los análisis microbiológicos de superficies es
comprobar el estado higiénico del lugar de trabajo, de modo que evitemos
contaminaciones cruzadas durante el procesado de los alimentos. Existen
distintos métodos para el examen microbiológico de las superficies: método del
hisopo, de la placa de contacto, de la jeringa de agar, de la lengüeta (o película
pegajosa), etc. En esta práctica se describen el método del hisopo (para el
estudio de superficies no planas) y el de placa de contacto Rodac (para el
estudio de superficies planas).

IMPORTANCIA Y JUSTIFICACION DEL PROYECTO

Se resalta la importancia de mantener las condiciones Higiénico - Sanitarias de

los ambientes concurrentes a la hora de estudio, para garantizar una mejor
calidad de vida para los que conforman la comunidad universitaria.

Las enfermedades causadas ya sea por ambientes o superficies pueden

describir numerosos agentes causantes de enfermedades transmitidas, entre los
que se incluyen bacterias, hongos, parásitos, virus. Generalmente los
microorganismos contaminan en pequeñas cantidades, pero cuando encuentran
en ellos las condiciones adecuadas para sobrevivir y multiplicarse pueden
alcanzar los niveles necesarios para ser infectantes o producir la suficiente
toxina para causar la enfermedad

La Universidad debe de ser un centro en donde los estudiantes y demás

personas que la conforman, se sientan seguros y en un ambiente adecuado
desde el punto de ambiente microbiológico; por ello la importancia en el análisis
de esta, pues de esta manera podremos advertir si existe algún microorganismo
que sea perjudicial para la salud sobre todo en los biblioteca, en la cual el
alumno se encuentra expuesto cada vez que concurre o solicita algún servicio de
la misma.

18
 MATERIALES, EQUIPOS Y OTROS

Materiales

 Balanza electrónica

 Autoclave

 Pipeta graduada, de 1 ml y de 10ml (estériles)

 Pera de succión

 Placa Petri de vidrio (estériles)

 Tubos de ensayo 16 x 150 mm

 Mechero bunsen

 Espátula de Drigalsky

 Guantes

 Papel kraft

 Pabilo

 Matraz de 500ml

 6 Torunda de algodón con vástago de madera

 Plantilla de aluminio (10 x 10 cm)

Medios de Cultivo

 Agua peptonada al 0.1%

 Agua peptonada (0.1%) + Tween 80 (1%)

 Agar TSA

 Agar Manitol Salado

 Agar Sabouraud Glucosado (ASG)

 Agar Eosina azul de metileno (EMB)

19
  Caldo Lauril Sulfato de Sodio

 Batería Gram

 Caldo BHI

 Peróxido de hidrogeno 3%

 Prueba bioquímica (IMVIC)

Indol
Rojo de metilo
Voges-Proskauer
Citrato

METODOLOGÍA (PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL) DE INVESTIGACIÓN

Método de superficies (método del hisopado)

1. Elegir una superficie de muestra del CIFIA y delimitarla con la plantilla

de aluminio.
2. Tomar el primero de tres hisopos y lo sumergimos en 10ml agua
Peptonada con tween 80, sacar el exceso de líquido presionando el
hisopo en la pared del tubo y frotar la superficie con una inclinación
de 45° en líneas verticales.
3. Seccionar la porción del hisopo que contiene la muestra para
sumergirla en 10 mL de agua Peptonada.
4. Tomar un segundo hisopo y proceder en forma similar el paso 2 pero
frotar esta vez en líneas horizontales.
5. Repetir el paso 3.
6. Tomar el tercer hisopo y proceder en forma similar el paso 2 pero
ahora frotar de forma oblicua (de esta manera se asegura cubrir gran
parte del área delimitada).
7. Repetir el paso 3.
8. Agitar el tubo con las tres secciones durante 20’ (este proceso se
lleva a cabo para realizar la revivificación de los microorganismos).
9. Proceder a desarrollar los métodos:

20
Método cuantitativo:

 Tomar 0.1 mL del agua con las muestras y diseminar en cada uno
de los medios, para cada medio de cultivo a incubar: Agar TSA,
Manitol Salado, EMB y el Sabouraud Glucosado.
 Incubar las placas para bacterias a 35 – 37 °C por 48 h(Agar TSA,
Manitol Salado, EMB) .
Incubar las placas para hongos a 20 – 24°C por 5 días
(Sabouraud Glucosado)
 Realizar el conteo de colonias en N°colonias(UFC)/CM

Cualitativo:(presencia, ausencia)

 Tomar 1ml del paso 8 y sembrar en caldo BHI luego encubar

37°c por 24H.
 Observar la turbidez del calo BHI y sembrar por estriado en
cada uno de los medios, para cada medio de cultivo a incubar:
Agar TSA, Manitol Salado, EMB y el Sabouraud Glucosado.
 Incubar las placas para bacterias a 35 – 37 °C por 48 h(Agar
TSA, Manitol Salado, EMB) .
Incubar las placas para hongos a 20 – 24°C por 5 días
(Sabouraud Glucosado)

21
Método cuantitativo:

22
Cualitativo: (Presencia, ausencia) para hallar los indicadores que están
presentes o ausentes

Control de ambientes

1. Elegir una zona estratégica para exposición de los agares al aire.

2. Colocar los medios indicados en dichas zonas.

3. Abrir las tapas y exponer los agares por 15’.

4. Cerrar las tapas.

5. Incubar las placas para bacterias a 35 – 37 °C por 48 h (invertidas).

Incubar las placas para hongos a 20 – 24 h por 5 días (sin invertir)

23
 Agar Endo
o EMB

Agar TSA INTERNACIONALES

NORMAS Agar manitol Agar
Con el objetivo de uniformizar
salado todos los procedimientos del laboratorio, se han
Sabouraud
redactado unos Procedimientos Normalizados de Trabajo (PNT) que dan las
Glucosado
instrucciones para la realización de todos estos documentos, tanto de métodos
de análisis de alimentos como los de preparación y control de calidad de los
medios de cultivo y reactivos necesarios para ellos. Los Procedimientos
Normalizados de Trabajo (PNT) son un conjunto de instrucciones escritas de
obligado y riguroso cumplimiento que describen cómo deben realizarse
determinados métodos de ensayo, como deben manejarse los equipos de
análisis o cómo se debe proceder ante cualquier otra actividad del laboratorio.
Las normas ISO, EN, NF, AENOR (Asociación Española de Normalización) se
van elaborando y revisando de forma continúa.

Estas normas nos sirven como guía en la metodología utilizada al realizar el

proyecto.

Métodos normalizados

Para aerobios mesófilos:

 ISO 4833 Directiva general para el recuento de microorganismos. Método

por recuento de colonias a 30º C

Este método se basa en la siembra en profundidad en un medio de cultivo

definido, vertido en dos placas de Petri, con una cantidad determinada de
muestra si el producto a examinar es líquido, o con una cantidad determinada de
suspensión madre en el caso de otros productos. En las mismas condiciones,
siembra de las diluciones decimales obtenidas de la muestra o de la suspensión
madre. Incubación a 30º C, en aerobiosis durante 72 horas. A partir del número
de colonias obtenidas en las placas de Petri, calcular el número de
microorganismos por mililitro o por gramo de muestra.

24
  AF V 08-01 Método de rutina para el recuento de microorganismos.
Método de recuento de las colonias a 30º C

Este método se basa en la siembra en profundidad en un medio de cultivo

definido, vertido en una placa de Petri, con una cantidad determinada de muestra
si el producto a examinar es líquido, o con una cantidad determinada de
suspensión madre en el caso de otros productos. En las mismas condiciones,
siembra de las diluciones decimales obtenidas de la muestra o de la suspensión
madre. El recuento podrá ser realizado utilizando un sembrador espiral (NF V08-
100) Incubación a 30º C, en aerobiosis durante 72 horas. A partir del número de
colonias obtenidas en las placas de Petri escogidas, calcular el número de
microorganismos por mililitro o por gramo de muestra.

Para mohos y levaduras

 ISO 7954 Directiva general para el recuento de levaduras y mohos.

Técnica de enumeración de las colonias a 25º C

Este método se basa en la siembra en profundidad en un medio de cultivo

selectivo determinado, en dos placas de Petri, con una cantidad determinada de
muestra si el producto a examinar es líquido, o con una cantidad determinada de
suspensión madre en el caso de otros productos. En las mismas condiciones,
siembra de las diluciones decimales obtenidas de la muestra o de la suspensión
madre. Incubación de las placas en aerobiosis a 25º C, durante 3, 4 ó 5 días.
Cálculo del número de levaduras y mohos por mililitro o por gramo de muestra a
partir del número de colonias obtenidas en las placas escogidas a los niveles de
dilución que dan un resultado significativo.

25
  NF V 08-059 Método de rutina para el recuento de levaduras y mohos.
Técnica de enumeración de las colonias a 25º C

Este método se basa en la siembra en superficie en un medio de cultivo definido,

repartido en placas de Petri, con una cantidad definida de muestra por ensayo si
el producto a examinar es líquido, o con una cantidad determinada de
suspensión madre en el caso de otros productos. El recuento puede ser
igualmente realizado en profundidad. Incubación de las placas en aerobiosis a
25º C, durante 3, 4 ó 5 días. En el caso de recuento de especies de mohos
supuestos conocidos la temperatura de incubación puede ser diferente de 25º C,
buscando después el acuerdo entre las dos partes (20º C ó 22º C) e indicándolo
en el informe del ensayo. A partir del número de colonias obtenidas en las placas
de Petri retenidas, calcular el número de levaduras y mohos por mililitro o por
gramo
de

muestra.

26
 RESULTADOS:
A Microorganismos MAÑANA TARDE
G que se desarrollan
A Superficie Aire Superficie Aire
R

A Estafilococos 292 UFC/cm2 127 178 115

M UFC/placa/min UFC/cm2
S UFC/placa/min

E Enterobacterias, 16 UFC/cm2 8 8 UFC/cm2 5

M coliformes UFC/placa/min
B UFC/placa/min

T Microorganismos 366 273 345 210

S aerobios y
A anaerobios UFC/cm2 UFC/placa/min UFC/cm2 UFC/placa/min
facultativos y
estrictos

27
CONCLUSIONES
Los agentes microbiológicos contaminantes en el CIFIA (Centro de Información
de la Facultad de Ingeniería Ambiental), si son abundantes, todos se encuentran
por encima de los límites máximos permisibles pues el sistema de higiene del
lugar no es el adecuado.

Por ello concluimos que la Facultad de Ingeniería Ambiental no cuenta con una
biblioteca adecuada, libre de contaminantes microscópicos, lo cual perjudica a
los estudiantes que hacen uso de esta.

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