PNT Anàlisi microbiològic de sang

Autors/es:
Los Corrosivos
Paula Boqué, Jordi Diéguez,
Sandra Martín, Paula Monzón

Revisors/es:
Mentors/es

Data:
05/05/2019

Pàgina | 1
Índex

Fase Pre-Analítica ....................................................................................................... 3

Recollida d’una mostra de sang per extracció venosa ............................................... 3
Fase Analítica.............................................................................................................. 6
Tinció de gram .......................................................................................................... 6
Observació microscòpica a partir de la tinció de gram feta a partir del cultiu de
microorganismes d’una mostra de sang .................................................................... 8
Hemocultiu .............................................................................................................. 10
Antibiograma ........................................................................................................... 12
Oxidasa ................................................................................................................... 14
Catalasa .................................................................................................................. 15
API .......................................................................................................................... 16
Control de canvis .................................................................................................... 19

Pàgina | 2
 PNT anàlisi Codi PNT: 405380
microbiològic mostra Pàgina 3 de 19
de sang Versió: 0
Data: 06/05/2019

Fase Pre-Analítica
Recollida d’una mostra de sang per extracció venosa

Objectiu: Obtenir una mostra de sang per seguidament ser analitzada.

Abast: L’extracció de sang la pot realitzar infermeres o tècnics/ques de laboratori.

Definicions:
Smarch: Banda elàstica de goma que la seva funció és detenir el fluid sanguini del
braç per a ressaltar les venes i d'aquesta manera facilitar la localització de la vena a la
qual se li extraurà la sang.
EPIS: Equip de protecció individual, per exemple, bata, guants, etc.

Material

Smarch Vacutainer
Antisèptic Agulla
Apòsits de cel·lulosa Recipients de recollida
EPIS Gases

Procediment

-Rentar-se les mans i preparar el material.

-Explicar al pacient el procediment, i si es una pacient que té aprensió a la tècnica
acomodar-lo de manera adequada.
-Col·locar el smarch a tres dits per sobre de la zona de la punció, palpar amb els dits
índex i anular i trobar la vena on es farà la punció.
-Rentar amb una gasa i antisèptic la zona de la punció.
-Introduir la agulla del vacutainer per la vena, l’agulla en un angle de 45º.
-Treure el smarch, no pot estar més de 2 minuts col·locat.
-Posar el tubs en la vacutainer i recollir la mostra.
-Treure l’agulla i tot seguit col·locar l’apòsit i indicar al pacient que faci pressió en el
lloc de punció una estona per evitar el sagnat.
-Recollir el material assegurant tirar les coses al contenidor adequat, i el tubs amb
l’etiquetatge correcte.

Etiquetatge de la mostra

Rotular l’etiqueta amb:

- Data de recollida
- Número de la mostra

Pàgina | 3
 - Zona de recollida
- Tractament de la mostra
- Nom de la persona que ha extret la mostra

Omplir la fitxa d’extracció amb:

- Data de recollida
- Número de la mostra
- Zona de recollida
- Tractament de la mostra
- Profunditat de l’extracció
- Volum de la mostra recollida

Transport i conservació d’orina

Ha de ser remès al laboratori tan ràpidament com es pugui, cal conservar a l’àrea
d’extracció a temperatura ambient.

Acceptació i rebuig de mostres d’orina

El tècnic de laboratori dicta si una mostra és acceptada o rebutjada segons els

següents criteris.

Acceptació

- L’etiqueta de la mostra conté la informació del pacient, el número de registre i

la data d’extracció
- A la sol·licitud s’especifica el tipus de mostra que és
- S’ha efectuat un transport i una conservació correcta de la mostra
- Tot el material ha de ser estèril tant el de recollida com conservació, i s’ha
d’haver realitzar en les màximes condicions d’asèpsia.
- La mostra mai ha de estar en contacte amb antisèptics.
- La mostra ha sigut recollida abans d’un tractament antibiòtic.

Rebuig

- La mostra es troba coagulada.

- Hemòlisi.
- Falta l’etiqueta.
- No hi ha consentiment.
- No ha sigut correcte el transport.
- Falta de quantitat de mostra.

Pàgina | 4
Registre:

Mostra Data de Tipus Transport Conservació Rebuig/ac

recollida ceptació

44589 05/05/2019 Extracció de 2 hores Tºambient Rebuig

sang amb
vacutainer

88977 06/05/2019 Extracció de Immediat al Tº ambient Acceptada

sang amb laboratori
vacutainer

Annexes:

Pàgina | 5
 PNT anàlisi Codi PNT: 405380
microbiològic mostra Pàgina 6 de 19
de sang Versió: 0
Data: 06/05/2019

Fase Analítica
Tinció de gram

Objectiu: Identificar el tipus de paret cel·lular que té el bacteri per a la seva

identificació.

Responsabilitat i abast: Tècnics de laboratori.

Definicions:
EPIS: Equip de protecció individual, per exemple, bata, guants, etc.

Materials:
- Portaobjectes
- EPIS
- Aigua destil·lada
- Mostra de bacteri
- Micropipeta
- Puntes estèrils de micropipeta
- Pont de tincions
- Cubeta
- Cristall violeta
- Lugol
- Timer
- Bec-bunsen
- Pinça de fusta
- Safranina
- Barreja alcohol/acetona
- Microscopi òptic

Descripció del procediment:

- Netejar-se les mans i la zona de treball.
- Preparar el material necessari.
- Pipetejar 40 microlites de la mostra de bacteri i es posen al
portaobjectes.
- Pipetejar 60 microlites d’aigua destil·lada i es posen en el portaobjectes
juntament amb els bacteris.
- Escalfar el portaobjectes a sobre del Bec-bunsen, progressivament fins
que la gota d’aigua destil·lada i bacteri s’evapora i queda fixada en el
portaobjectes.
- Cobrir el portaobjectes amb solució cristall violeta i deixar actuar 1
minut.
- Rentar amb aigua destil·lada breument l’excés de colorant i escorre el
portaobjectes.

Pàgina | 6
 - Cobrir el portaobjectes amb lugol i deixar actuar 1 minut-
- Rentar amb aigua destil·lada l’excés de colorant i escorre el
portaobjectes.
- Cobrir el portaobjectes amb una barreja d’alcohol/acetona en proporció
1:1 durant 30 segons.
- Rentar amb aigua destil·lada l’excés de colorant i escorre el
portaobjectes.
- Cobrir el portaobjectes amb solució de safranina durant 2 minuts.
- Rentar amb abundant aigua destil·lada l’excés de colorant i deixar
assecar el portaobjectes.
- Visualitzar al microscopi òptic, els bacteris gram + es veuen de
color blau/lila i els bacteris gram - es veuen de color rosa/vermell.
- Recollir i netejar el material i la zona de treball.

Registres:

Colorant Temps espera

Cristall violeta 1 minut

Lugol 1 minut

Alcohol-acetona 30 segons

Safranina 2 minuts

Annexes:

Pàgina | 7
 PNT anàlisi Codi PNT: 405380
microbiològic mostra Pàgina 8 de 19
de sang Versió: 0
Data: 06/05/2019

Observació microscòpica a partir de la tinció de gram feta a partir del

cultiu de microorganismes d’una mostra de sang

Objectiu: Detectar la presència de microorganismes i poder observar la seva forma i

diferenciar-los segons siguin gram positiu o gram negatiu.

Responsabilitat i abast: Tècnics de laboratori.

Definicions:
EPIS: Equip de protecció individual, per exemple, bata, guants, etc.
Sobrenedant: Part superior clara després de la centrifugació

Materials
-Microscopi òptic
-Tinció de gram feta a partir de cultiu de microorganismes d’una mostra
de sang
- Cobreobjectes
- Oli
- EPIS
Descripció del procediment:
- Netejar-se les mans i la zona de treball.
- Preparar el material necessari.
- Posar portaobjectes amb la mostra tenyida al microscopi.
- Observar primerament amb l’objectiu de 40X per desprès passar
a observar-lo amb el de 100X.

Registres

Bacteri Resultat

Corinebacteryum Gram positiva

E. coli Gram negativa

Staphylococsus Gram negativa

Streptococcus Gram positiva

Pàgina | 8
Annexes:

Pàgina | 9
 PNT anàlisi Codi PNT: 405380
microbiològic mostra Pàgina 10 de 19
de sang Versió: 0
Data: 06/05/2019

Hemocultiu

Objectiu: Observar el creixement de microorganismes, poder aïllar-los i fer un

recompte de colònies.

Responsibilitat i abast: Tècnics de laboratori duen a terme aquesta

Definicions:
EPIS: Equips de protecció individual, per exemple, guants, bata ,etc.
Inocular: Introduir la sang en el flascó per observar el seu creixement microbià
posteriorment.

Descripció del procediment:

Extracció sanguínia

Material

- Compressor
- Xeringues
- Guants estèrils
- Agulles intravenoses
- Solució antisèptica (alcohol 70º)
- Gases
- Camp estèril
- Flascons d’hemocultiu aerobi i anaerobi

Procediment

- Col·locar tot el material necessari i explicar al pacient el procediment

- Preparar el camp estèril i col·locar-se els EPIS
- Localitzar la vena de punció i netejar la zona amb alcohol
- Col·locar 4 dits sobre del colze el compressor
- Netejar les membranes dels flascons
- Punxar la vena i extreure la sang
- Indicar al pacient que pressioni la zona de punció amb una gasa

Inoculació

- Retirar l’agulla i la xeringa a la vegada del recipient (Recipient anaerobi)

Pàgina | 10
 - Retirar l’agulla primer del recipient (Recipient aerobi)
- Moure els recipients uniformement per mesclar la sang
- Rotular els recipients amb la informació del pacient i la recollida
- Tornar a realitzar el procediment amb l’altre braç

Incubació i sembra
Material
- Xeringa
- Nansa de sembra
- Bec-bunsen
- Placa d’agar sang

Procediment
- Introduir els recipients a les estufes amb el seu medi de cultiu corresponent
- Retirar els flascons de les estufes
- Agafar una 10 μl de sang amb la xeringa
- Dipositar la gota a la placa d’agar
- Esterilitzar la nansa de sembra al bec-bunsen
- Retirar del foc i esperar a que es refredi
- Extendre la gota de sang amb la tècnica d’estria per esgotament
- Incubar la mostra a l’estufa

Registre
Mostra Data Temperatura Tipus
88977 07/05/2019 37ºC Agar Sang

Annexes

(Sembra d’estria per esgotament)

Pàgina | 11
 PNT anàlisi Codi PNT: 405380
microbiològic mostra Pàgina 12 de 19
de sang Versió: 0
Data: 06/05/2019

Antibiograma

Objectiu: Mètode que te com objectiu determinar una concentració

mínima inhibitòria d'antibiòtic que segons els resultats dels ceps es determina la
resistència o susceptibilitat del bacteri amb respecte el halús de creixement al voltant
del antibiòtic.

Abast: Aquesta tasca ve realitzada per un tècnic de laboratori clínic i biomèdic o un

professional de microbiologia.

Definicions:

Antibiòtic: Un antibiòtic és una substància química capaç, a baixes concentracions,

d'inhibir el creixement d'altres microorganismes o d'eliminar-los.
Hemocultiu: Un hemocultiu és un cultiu microbiològic de la sang.

Material:
- Discs de diferents concentracions d’antibiòtic
- Dispensador de discos d'antibiòtic/pinces metàl·liques
- Placa de petri amb medi de Mueller-Hinton
- Estufa de cultius
- Hisop
- Bec de bunsen
- Placa de petri amb el hemocultiu
- Alcohol 70ºC

Descripció del procediment:

- En primer lloc hem de preparar un hisop estèril que extraurà una mostra del
hemocultiu.
- S'impregna tot el medi de Mueller-Hinton de manera massiva sense deixar
espais buits per un creixement bacterià en tapis. (tot a la bora del bec bunsen).
- A continuació les pinces metàl·liques es mullen en alcohol.
- S'esterilitzen en el bec bunsen, es deixen refredar i es passen a recollir els
diferents discs d’antibiòtic.
- Son separats en distàncies iguals tots ells en el medi de Mueller-Hinton. (fent
petites pressions amb les pinces per que quedin adherits).
- La placa es porta a incubar durant 24 hores a 37ºC.
- Després es llegiran els resultats mesurant el diàmetre dels halos d'inhibició del
creixement al voltant dels discs d'antibiòtic.

Pàgina | 12
 - Es valorarà l'efectivitat dels mateixos consultant la taula corresponent on
segons l'antibiòtic, i la mesura d'halo es correlacionarà a un bacteri sensible,
moderadament sensible/de sensibilitat intermèdia, o resistent.

Registres:
Bacteri Resistència antibiòtica Sensibilitat antibiòtica

α-hemolitic

Annexes:

Pàgina | 13
 PNT anàlisi Codi PNT: 405380
microbiològic mostra Pàgina 14 de 19
de sang Versió: 0
Data: 06/05/2019

Oxidasa

Objectiu: Determinar si un microorganisme produeix l’enzim citocromo-oxidasa.

Responsabilitat i abast: Tècnics de laboratori.

Definicions: No aplica.

Materials:
- Colònies bacterianes crescudes en medi de cultiu sòlid
- Tires de paper absorbent amb una zona reactiva que conté diclorur de
N, N-dimetil-1,4- fenilendiamoni 0,1µmol;1-naftol 1,0 µmol
- Nansa de plàstic d’un sol ús

Descripció del procediment:

- Dipositar colònia en la zona reactiva de la tira.

- Fregar amb la nansa en la zona reactiva de la tira.
- Esperar entre 10 i 30 minuts.
- Interpretar resultats.

Registres:

Tira Resultat
Tira 4 Oxidasa positiva
Tira 20 Oxidasa negativa Temps espera 10-30 minuts
Tira 11 Oxidasa negativa
Annexes:

Pàgina | 14
 PNT anàlisi Codi PNT: 405380
microbiològic mostra Pàgina 15 de 19
de sang Versió: 0
Data: 06/05/2019

Catalasa

Objectiu: Detectar la presència de l’enzim catalasa als organismes a partir de la

reacció del microorganisme amb el peròxid d’hidrogen.

Responsabilitat i abast: La prova és realitzada per qualsevol personal facultatiu del

laboratori i per tècnics de laboratori.

Definicions: No aplica.

Materials:

- Suspensió bacteriana
- Bec-Bunsen
- Portaobjectes
- Micropipeta
- Puntes de micropipeta estèrils
- Nansa de sembra
- Peròxid d’hidrogen

Descripció del procediment:

- Afegir una gota de peròxid d’hidrogen amb la micropipeta sobre el

portaobjectes.
- Esterilitzar la nansa de sembra al Bec-Bunsen.
- Esperar uns segons a que la nansa es refredi sense apartar-la del camp estèril.
- Introduir la nansa de sembra a la suspensió microbiana.
- Fregar la gota amb la nansa que conté bacteris.
- Detectar la presència de bombolles.
- Anotar i registrar els resultats.

Registres:

Mostra Resultat
A Catalasa negativa
B Catalasa positiva

Annexes:

Pàgina | 15
 PNT anàlisi Codi PNT: 405380
microbiològic mostra Pàgina 16 de 19
de sang Versió: 0
Data: 06/05/2019

API

Objectiu: A través de la determinació de l’activitat metabòlica amb les proves

bioquímiques s’obté la informació necessària per la identificació de bacteris.

Responsabilitat i abast: Aquest procediment és realitzat per tècnics de laboratori o

personal especialitzat en bioquímica.

Definicions:
Galeria API 20E: Taula separada per tubs per estudiar diferents paràmetres
Inocular: Introduir la suspensió microbiana en cada un dels tubs.
Taula de referència: Taula on apareixen diferents resultats per contrastar amb els
resultats obtinguts a fi d’identificar les propietats dels microorganismes.

Materials:
 Galeria API 20E
 Nansa de sembra
 Bec-Bunsen
 Aigua destil·lada
 Cultiu microbiològic
 Solució salina
 Micropipeta
 Puntes de micropipeta

Descripció del procediment:

 Preparació de la galeria:
- Afegir aigua destil·lada a la base de la galeria.
- Retirar l’excés d’aigua.

 Proves API:
- Esterilitzar la nansa de sembra al Bec-Bunsen fins que es trobi
incandescent.
- Deixar refredar per evitar cremar els microorganismes.
- Recollir una mostra del cultiu ja sembrat amb la nansa.
- Introduir la mostra en un tub amb solució salina.
- Inocular cada tub.
- Pipetejar la suspensió a cada tub sense arribar a la cúpula amb
l’ajuda de la micropipeta.

Pàgina | 16
  Excepcions:
- Les proves anomenades VP, GEL i CIT s’omplen de suspensió
completament, fins a omplir la cúpula completament.
- Els tubs que contenen ADH, LDC, ODC, H2S i URE s’omplen
fins al tub amb suspensió microbiana però se’ls hi afegeix a la
cúpula parafina líquida.

 Incubació i lectura de resultats:

- Tapar la galeria per evitar l’evaporació.
- Introduir-la en l’estufa d’incubació a 37ºC durant 24h.
- Passades les 24h retirar la galeria de l’estufa i fer la lectura de
resultats.
- Contrastar els canvis en cada medi amb la taula de referència.
- Anotar els resultats i registrar-los.

Registres:
Mostra Data API Temps Temperatura

88977 09/05/2019 API 20E 24h 37ºC

Annexes:
Proves API

Pàgina | 17
Lectura de resultats

Pàgina | 18
Control de canvis

Versió número Canvis realitzats Data

0 Pendent a revisar 06/05/2019

Pàgina | 19