VALIDACIÓN DE MÉTODOS ANALÍTICOS

Pablo Richter

Introducción

La validación de un método analítico tiene como objetivo establecer por medio de estudios científicos, que un método tiene las características de desempeño que son adecuadas para cumplir los requerimientos de las aplicaciones analíticas pretendidas. Una vez validada una metodología analítica, el laboratorio de ensayo deberá fijar los intervalos de aceptabilidad para el control de calidad de cada una de las propiedades analíticas del método. Una metodología, aún cuando tenga el carácter de método estándar u oficial, debería ser validada antes de ser utilizada en forma rutinaria.

Introducción

Las propiedades analíticas que necesariamente deberán ser documentadas en un proceso de validación, son la siguientes: Precisión al nivel de replicabilidad y repetibilidad Exactitud Incertidumbre Intervalo de linealidad Límite de detección del método

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Límite de cuantificación del método

Campo de Aplicación

El presente documento corresponde a una guía técnica que define los términos y los procedimientos relativos a la validación de un método de análisis. En todas las actividades de laboratorio es esencial uniformar las definiciones y los métodos de cálculo para los diferentes términos. En este documento se establecen las definiciones relativas a propiedades de métodos analíticos que se utilizarán en los laboratorios de rutina del país.

Definiciones
 CURVA DE CALIBRACIÓN: Representación gráfica bidimensional, que muestra la variación de la señal analítica con la concentración del analito. Esta última se obtiene al graficar el valor obtenido de la señal analítica (valor absoluto, altura, área, etc.) versus las concentraciones de los estándares respectivos.  SENSIBILIDAD: Propiedad analítica que se define como la capacidad de un método para discriminar entre concentraciones (cantidades) semejantes de analito. La sensibilidad de un método analítico corresponde a la pendiente de la curva de calibración. Algunas veces se expresa informando la razón entre el valor de señal obtenida a una concentración dada de estándar.

.Definiciones  LIMITE DE DETECCIÓN: Existen distintas formas de definir los límites de detección de un método de acuerdo a criterios estadísticos. a) Límite de Detección IUPAC: Concentración de analito que origina una señal que puede diferenciarse estadísticamente de un blanco analítico. basados en el cuociente entre la magnitud de la señal de la medida y el ruido de fondo producido por el instrumento o por el blanco analítico.

Límites de detección y cuantificación ¿Cuál es la menor concentración que podemos detectar o cuantificar con este método de análisis? S= Señal Razón señal ruido S/n LD => S/n = 3 n = ruido LC => S/n = 10 .

sin la presencia de la matriz. incluyendo separaciones y pretratamientos. estadísticamente diferente a la señal producto del blanco obtenido en las mismas condiciones. c) . Límite de Detección del Método (LDM): Corresponde a la concentración mínima de un compuesto que puede ser detectada en una matriz real. un instrumento puede detectar con una fiabilidad definida y que es estadísticamente diferente de la respuesta correspondiente al ruido de fondo obtenido por el instrumento. la cual es tratada siguiendo todas las etapas del método completo.b) Límite de Detección Instrumental (LDI): Corresponde a la concentración mínima de un compuesto analizado que. Esta mínima concentración produce una señal detectable con una fiabilidad definida.

la cual es tratada siguiendo todas las etapas del método empleado. Este intervalo esta comprendido entre la concentración correspondiente al del LCM y la concentración máxima que entrega el límite de linealidad. .Definiciones  LÍMITE DE CUANTIFICACIÓN DEL MÉTODO (LCM): Corresponde a la concentración mínima de un analito que puede ser cuantificada en una matriz real.  INTERVALO DE LINEALIDAD O DE DETERMINACIÓN: Corresponde al intervalo de concentración más fiable de medida para la determinación analítica del analito. Esta mínima concentración produce una señal cuantificable con una nivel de confianza definido. incluyendo separaciones y pretratamientos.

“within lab reproducibility”) Reproducibilidad (Reproducibility conditions. “between lab precision”) .Definiciones  PRECISIÓN: Grado de concordancia de un grupo de resultados entre sí. Existen tres formas de plantear un estudio de precisión:    Replicabilidad (Repeatability. “within run precision”) Repetibilidad (Intermediate precision. Dispersión de estos resultados alrededor de su media.

por el mismo operador y con las mismas herramientas analíticas. para determinar el mismo analito. y al menos una de las siguientes condiciones es diferente: analista. para determinar el mismo analito.Niveles de Precisión  Replicabilidad: Forma de plantear el estudio de precisión. en el mismo laboratorio. instrumento. y en las siguientes condiciones: diferente analista. para determinar el mismo analito. diferente instrumento.   Esta propiedad analítica no se determina de forma rutinaria en un procedimiento de validación. en el mismo laboratorio. Se define como la dispersión de resultados originados por aplicaciones del mismo método a alícuotas de la misma muestra. día. igual o diferente día. Se define como la dispersión de resultados originados por aplicaciones del mismo método a alícuotas de la misma muestra. en diferentes laboratorios. . Reproducibilidad : Forma de plantear el estudio de precisión. Sólo es aplicable a ejercicios de intercomparación. Se define como la dispersión de resultados originados por aplicaciones del mismo método a alícuotas de la misma muestra. Repetibilidad: Forma de plantear el estudio de precisión. en un corto intervalo de tiempo.

generalmente como error relativo (Ver más adelante SESGO). dividido por la concentración de sustancia agregada.Definiciones  EXACTITUD: Expresa la cercanía entre el valor que es aceptado. como un valor de referencia (material de referencia certificado) y el valor encontrado (valor promedio) obtenido al aplicar el procedimiento de análisis un cierto número de veces. .  RECUPERACIÓN: Corresponde a la diferencia (en porcentaje) entre la concentración medida de un analito en una muestra fortificada (a la que se le ha agregado una cantidad conocida de estándar) y la concentración medida en la misma muestra sin fortificar. La exactitud se expresa en términos de error.

una media de los mismos y el valor considerado verdadero.Definiciones  INCERTIDUMBRE: Se puede distinguir entre los siguientes conceptos: Incertidumbre genérica: Duda acerca de la composición química de un objeto o una muestra. para su identificación y/o cuantificación. Incertidumbre específica: Intervalo de valores en que puede encontrarse un resultado. SELECTIVIDAD: Capacidad de un método analítico para originar resultados que dependan de forma exclusiva del analito. a) b)  . Es lo contrario a información.

5 = 0.8 mg / Kg .4 mg / Kg Incertidumbre: 0.9 – 2.8 mg / Kg Valor certificado: 2.9 ± 0.5 ± 0.2 mg / Kg Error: 2.Error vs Incertidumbre Resultado de un análisis: 2.

PROCEDIMIENTOS .

y . Posteriormente determinar la señal analítica que origina cada una de las soluciones. Calibración del método 1) Procedimiento para construir una Curva de calibración Preparar una batería de estándares de concentración conocida en el solvente apropiado. dentro del intervalo de concentraciones en que se estima que estarán las muestras a analizar.I.

obtener la recta de calibración: Y = S C + Yb. Calcular también los límites inferior (LI) y superior (LS) a partir de los cuales los cuocientes (señal / masa) o (señal / concentración) indiquen que un punto está fuera del intervalo lineal LI = 0. respectivamente. graficando los puntos experimentales disponibles y verificando visualmente si existe alguna desviación de la linealidad y aproximadamente a partir de qué valor ésta se manifiesta. Realizar una inspección preliminar. donde C es la masa o la concentración de la sustancia a ser cuantificada y S e Yb la pendiente y ordenada en el origen de la recta.95s y LS= 1. Calcular los coeficientes S. A partir de la curva de calibración estimar la parte lineal.05s.  . descartando los puntos preliminarmente eliminados en la etapa anterior. respectivamente. Yb y r (coeficiente de correlación) para la curva de calibración.

si el correspondiente cuociente (señal / masa) o (señal / concentración) es menor que LI o mayor que LS) o si algún punto inicialmente excluido debería de ser considerado para el cálculo de la curva de calibración. . Verificar si existe algún punto preliminarmente incluido en la curva de calibración que. el procedimiento está terminado. por comparación con los límites de corte calculados en b) debería de ser excluido (o sea.  Inclusión o exclusión de nuevos valores en la curva: Si el examen hecho en c) indica que todos los puntos de la curva preliminarmente incluidos (o excluidos) lo han sido correctamente. En caso contrario. hasta que ningún valor sea rechazado o considerado para el cálculo de la curva de calibración. repetir las etapas de b) a d). incluyendo o excluyendo los puntos necesarios.

00 50.5 7. mM 0. Calcule la concentración de MVK en la muestra.00 2.5 9.5 3.1.8 y 10.EJEMPLO – Curva calibrado     Los siguientes datos son las áreas máximas relativas en cromatogramas de disoluciones patrón de metil vinil cetona (MVK): Determine la recta por el método de los mínimos cuadrados Una muestra dio una señal para MVK con un área relativa de 10.20 47.03 32. Dos evaluaciones adicionales de la muestra dieron como resultado las siguientes áreas. Conc.3.02 9.5 5.5 Área relativa 3. MVK.5 6. 10.42 27.5 8.03 21.20 .5 15. Calcule la precisión de esta determinación.97 39.00 44.5 1.5 4.

utilizar el método de la adición estándar de acuerdo a los siguientes procedimientos alternativos. luego enriquecer con estándar a diferentes niveles de concentración. se determine que hay interferencia de la matriz. a) Con muestra sintética: Utilizar una mezcla preparada en el laboratorio de todos los componentes de la matriz de la muestra sin el principio activo a determinar. (curva en presencia de matriz) . Calibración del método 2) Adición de estándares Cuando en el proceso de calibración del método.I. en este caso se mantiene constante la cantidad de muestra sintética y se agregan cantidades variables del estándar. Para preparar las soluciones.

00 y = 19162x + 4564.00 Conc.00 100.00 Conc: (ng/ml) 50.Ácido oxolínico  Curva de Calibración de Estándar de ácido Oxolínico  Curva de Calibración de ácido Oxolínico en matriz Curva Oxolínico 15000000 y = 42084x .7 R2 = 0. Oxolínico en Matriz 5000000 4000000 3000000 2000000 1000000 0 0.4 R2 = 0. (ng/g) .9997 Área Curva Calibración Ác.00 100.00 400.00 150.00 200.00 300.9982 Área 10000000 5000000 0 0.00 200.9036.

proceder a enriquecer las muestras con estándar a diferentes niveles de concentración. recomienda preparar muestras independientes por triplicado a cada nivel de concentración. en este caso se mantiene constante la cantidad de muestra tomada y se agregan cantidades variables del estándar.I. trabajar directamente con una muestra real.  . una vez conocida la señal promedio. con el método a validar. Calibración del método 2) Adición de estándares b) Con muestra: Cuando no es posible contar con una muestra sintética (o matriz blanco). Para preparar las soluciones. La ICH (International Conference Harmonization). Determinar por duplicado la señal promedio del analito en la muestra.

99 µA y 10. 2 y 3 ml de solución estándar del analito de 10 µg/l. Las señales respectivamente obtenidas son: 4.EJEMPLO – Adición estándar  En una muestra de agua de mar se determina cobre por voltamperometría de redisolución anódica (ASV). µA 4.99 10. Determinar la concentración de cobre en la muestra.1 6.15 µA.05 µA. µg/l 0 1 2 3 Señal. 7. 6.xls . Cu. Una alícuota de 5 ml de muestra es diluida en un matraz de 10 ml con agua destilada.11 µA. Enseguida en tres matraces de aforo de 10 ml se agrega una alícuta de 5 ml de muestra y respectivamente se agrega un volumen de 1.05 ejemplo adicion estándar.15 7.

a las pérdidas durante la evaporación del solvente. o durante los procedimientos de derivatización. a la pérdida durante la extracción.I. Si esto no es posible. particularmente en cromatografía. y la irreproducibilidad debida a las técnicas de transferencia y de inyección. se elegirá un compuesto que posea propiedades físicoquímicas similares a las del analito. debe emplearse un estándar interno (explicar diferencia con estándar subrrogate).  . idealmente. un homólogo del analito.  Calibración del método 3) Uso de estándar interno Siempre que sea posible. Los estándares internos deben ser. puesto que esto minimiza los errores debidos a la adsorción en superficies. completamente resuelto de cualquier otra sustancia presente. Las propiedades cromatográficas del estándar interno deben ser tales que eluya muy cerca del analito pero aún así.

Como estándar interno se utilizó pireno (C13).01 . Construya la curva de calibrado correspondiente. BP.13 0.5 1.0 5.41 6.EJEMPLO – Estándar Interno Los siguientes datos de calibración han sido obtenidos en una determinación de benzopireno (BP) por GC-MS. ppm Area BP Area estándar interno Area relativa 0.65 1.48 13.1 0. Conc.0 1100 5200 18000 59000 95000 8600 8000 12800 9100 7300 0.0 10.

00 Conc: (ng/ml) 50. (ng/g) .00 Conc.00 150.9997 Área Curva Calibración Ác.00 100. Procedimiento para determinar la sensibilidad Una vez establecida la curva de calibración de acuerdo al procedimiento anterior.00 400.4 R2 = 0.00 100.00 200.  Curva Oxolínico 15000000 y = 42084x .00 300.9982 Área 10000000 5000000 0 0.7 R2 = 0.9036.00 y = 19162x + 4564.II.00 200. Oxolínico en Matriz 5000000 4000000 3000000 2000000 1000000 0 0. lo cual define la sensibilidad del método. determinar la pendiente de la curva (S).

lo que se consigue por extrapolación gráfica en la curva de calibrado. el límite de detección es: YLD = YB + 3 σB  A una señal YLD le corresponde una concentración CLD. Procedimiento para determinar el límite de detección IUPAC  Medir la respuesta de al menos 10 blancos analíticos independientes. YLD Curva de Calibrado CLD El límite de detección debe expresarse en unidades de concentración .III. De acuerdo a la IUPAC. de los que se deduce la media YB y la desviación estándar σB.

70. 0. 0. ug/L Intensidad de Fluorescencia 1.73.52 4.0 16. 0.60 6.75.71. 0. 0.68 10. En otra serie de experimentos. obteniéndose los siguientes resultados: Quinina.0 8.71.69 y 0. se le añaden cantidades crecientes de quinina para preparar 7 muestras artificiales.71 8.70.xls . En la primera. 0.73.0 20.0 4.60 3. 0.0 6. 0. al agua tónica sin quinina. 0.72.81 Determinar la sensibilidad y límite de detección del método ejemplo Limite deteccion quinina.0 12.51 2.0 2. se realizan 11 medidas repetidas del blanco (agua tónica en ausencia de quinina suministrada por el fabricante) y se obtiene los siguientes datos de intensidad de fluorescencia: 0.74.EJEMPLO – LD  Para estudiar la sensibilidad de un método de determinación de quínina en agua tónica se han realizado dos series de experimentos.74.

catálogo del equipo.IV.). . Se determina la señal analítica Yb y su desviación estándar (σB) de acuerdo a la siguiente expresión: σB = ( (Xi. Someter esta solución a medición (n replicas independientes de la solución) en el sistema instrumental.promedio)2/n-1)1/2  La expresión para calcular el límite de detección instrumental es la siguiente: YLD = 3 σB n ≥10 Después utilizando la curva de calibrado se obtiene la concentración en el límite de detección. etc.  Procedimiento para la determinación del Límite de Detección Instrumental (LDI) Agregar una alícuota de solución estándar de analito en “agua pura” o en el solvente adecuado. razón señal / ruido. de manera de obtener una concentración correspondiente a 2-10 veces el LDI estimado (obtener el límite estimado alternativamente de valores reportados en literatura.

 Procedimiento para la determinación del Límite de Detección del Método (LDM) Determinar el límite de detección del método en una muestra real. según el siguiente procedimiento 1) Si la concentración del compuesto analizado se sitúa entre 2 y 10 veces la concentración del límite de detección estimado. ajustar mediante la adición de un estándar la concentración del compuesto de interés. cambiar de muestra. pasar a la etapa siguiente. 2) Separar a lo menos 10 alícuotas de la muestra utilizada para evaluar el LDM y realizar todas las etapas implicadas en el método analítico. para situarla entre 2 y 10 veces el límite de detección estimado. . Si por el contrario la concentración es demasiado elevada.V. Si la concentración es demasiado baja.

calcular la media y la desviación estándar (σB) de las replicas: La expresión para calcular el límite de detección del método es la misma anterior. 3) .V. Procedimiento para la determinación del Límite de Detección del Método (LDM) A partir de los resultados obtenidos.

sobre matriz de muestra.VI. en un intervalo de concentraciones cercano al cero (lo más bajo que pueda ser detectado) (n ≥ 4) . a través de la construcción de una curva de calibración Construir curva de calibración. determinar: a) b) Ordenada en el origen de la línea de regresión: YB Desviación estándar de la regresión (se obtiene con cualquier programa estadístico): σy/x σy/x (yi n ˆ 2 yi) 2 1) 2) Donde: yi: Valor observado del punto en la ordenada ŷi: Valor teórico del punto obtenido por la predicción del modelo de regresión n: Número de puntos de la curva de calibración (n ≥ 4) c) Pendiente de la curva de calibración: S . Procedimiento para la determinación del límite de detección de un método analítico. A partir de la curva.

Procedimiento para la determinación del límite de detección de un método analítico.VI. a través de la construcción de una curva de calibración 3) Calcular Límite de detección: Señal del Límite de detección: yLD = yB + 3 sy/x Concentración del Límite de detección se calcula haciendo uso de la ecuación de la curva de calibración. .

. Procedimiento para la determinación del Límite de Cuantificación del Método (LCM)  El límite de cuantificación del método se determina siguiendo el mismo procedimiento que el usado para el LDM pero finalmente en la expresiones respectivas el factor 3 se sustituye por 10.VII.

pero finalmente la expresión que debe considerarse es: Señal del Límite de cuantificación: yLCM = yB + 10 sy/x Concentración del límite de cuantificación a través de la curva de calibración . Ej: Procedimiento para la determinación del límite de cuantificación de un método analítico. a través de una curva de calibración.VIII. a través de la construcción de una curva de calibración  El límite de cuantificación del método. se determina siguiendo el mismo procedimiento que el usado para el LDM.

mismo instrumento y mismo día. respetando las siguientes condiciones: mismo analista. Para realizar los cálculos que requiere el método e informar los resultados. La replicabilidad se expresa como la desviación estándar relativa o coeficiente de variación (CV).  . utilizar las unidades apropiadas y el número de cifras significativas necesarias. separar 10 alícuotas de una muestra y aplicarles el método completo. Procedimiento para calcular replicabilidad (Precisión) la  Dentro del intervalo de 2 a 10 veces el límite de cuantificación del método.IX.

X. Los resultados se expresan como desviación estándar relativa o coeficiente de variación (CV). separar 10 alícuotas de una muestra y aplicarles el método completo. el instrumento o el día. Para realizar los cálculos que requiere el método e informar los resultados. Procedimiento para calcular repetibilidad (Precisión) la  Dentro del intervalo de 2 a 10 veces el límite de cuantificación del método. cambiando al menos una de las siguientes condiciones: el analista. utilizar las unidades apropiadas y el número de cifras significativas necesarias.  .

%). puede ser necesario hacer el cálculo estadístico para la equivalencia con el material de referencia.XI. Para determinar el error relativo del método (E. aplique la siguiente ecuación: E(%) (Vo Vc) 100 Vc  Vc = Valor certificado. Vo = media de los valores obtenidos aplicado el método. utilizando el test de varianzas homogéneas . aplicar el método analítico completo “n” veces (n = 3-10 replicas) a una muestra en la cual el parámetro a medir esté certificado por un organismo reconocido (material de referencia certificado).  Procedimiento para determinar la exactitud Dentro del intervalo de determinación.  Además.

con un método absoluto Comparar el método con un método independiente.XI. Procedimiento para determinar la exactitud Si no existe o no está disponible el material de referencia. Recuperación en una matriz real con 2 niveles de concentración distintos. Los niveles de concentración deben estar. entre 20 y 30 veces el LCM. en un caso entre 2 y 10 veces el LCM y en el otro. a lo menos 2 laboratorios que utilicen 2) 3) 4) . Intercomparación entre metodologías validadas. ya sea éste de referencia o validado previamente. y en siguiente orden de prioridad: 1) Comparación del método en la misma muestra. la determinación de la exactitud puede llevarse a cabo de acuerdo a una de las siguientes posibilidades.

Procedimiento para determinar la recuperación  Analizar una muestra real y en paralelo analizar la misma muestra a la que se ha agregado una concentración dada de estándar. . La concentración final debe estar dentro del rango de determinación del método. Calcular la recuperación de acuerdo a la siguiente expresión: (Cs C) 100 Ca Recuperación (%) Cs = concentración de la muestra fortificada C = concentración en la muestra no fortificada Ca= concentración agregada.XII.

la probabilidad de incluir todas las contribuciones de incertidumbre se maximiza. • En este contexto. que en algunos casos esta metodología subestima la incertidumbre de las mediciones. intermedia) de las mediciones se combina con la estimación del sesgo del método. • Una forma común de presentar las diferentes contribuciones a la incertidumbre de la medición total es usar los diagramas de causa y efecto. Sesgo: Diferencia entre el valor medio medido a partir de una serie de resultados de ensayo y un valor de referencia aceptado (un valor certificado o nominal). Procedimiento para el cálculo de la incertidumbre Cuantificación de los componentes de incertidumbre.XIII. usando el control de calidad existente y los datos obtenidos en la validación del método analítico. • Se ha demostrado. dado que es difícil poder incluir todas las posibles contribuciones de incertidumbre en tal enfoque. . el grupo de expertos en calidad y metrología de “Nordtest (2004)” ha propuesto el modelo para el cálculo de la incertidumbre en el que la repetibilidad (P. Así. Este enfoque puede resultar muy útil cuando se estudia o cuantifica componentes de incertidumbres individuales. sin embargo.

XIII. un laboratorio puede combinar dichos componentes individuales en 2 tipos de incertidumbre: incertidumbre derivada de la repetibilidad (P. Intermedia) del método (urep) y la incertidumbre derivada del sesgo (usesgo). Procedimiento para el cálculo de la incertidumbre En este plano. participación en rondas interlaboratorios o ensayos de recuperación. La manera más común de estimar los componentes del sesgo son: el uso de material de referencia certificado. .

n = número de datos.95. Cálculo de incertidumbre repetibilidad del método (urep): urep = *t (0. n 1) n Donde: = Desviación estándar al nivel de repetibilidad. Procedimiento para el cálculo de la incertidumbre Cálculo de Incertidumbre Expandida (U). . Para realizar el cálculo de U.XIII. t = Coeficiente de student para un 95% de nivel de confianza. se deben determinar previamente las dos incertidumbres estándares antes expuestas.

XIII. Procedimiento para el cálculo de la incertidumbre Cálculo de incertidumbre derivada del sesgo (usesgo): usesgo = Donde: (sesgo) 2 (uCER) 2 sesgo = el valor puede ser determinado alternativamente por medio del análisis de un material de referencia certificado. participación en rondas interlaboratorios o ensayos de recuperación . u(CER) = Incertidumbre del material de referencia certificado o del patrón de referencia (valor certificado) utilizado en el ensayo de recuperación .

considerando un factor de recubrimiento igual a 2: U= 2 (urep) 2 (usesgo) 2 Incertidumbre Expandida (U): Cantidad que define un intervalo alrededor del resultado de una medición que se espera que abarque una gran parte de la distribución de valores que se podrían atribuir razonablemente al mensurando. para un cierto nivel de confianza. . Una Incertidumbre expandida (U) se calcula de una incertidumbre estándar combinada (u) y un factor de cobertura k usando: U = k x u. Procedimiento para el cálculo de la incertidumbre Finalmente la incertidumbre expandida (U) del proceso analítico. se expresa combinando ambas incertidumbres antes mencionadas.XIII.

El estándar de calibración corresponde a una solución en metanol que certifica que las concentraciones de los compuestos son las nominales ± 0. El sesgo del método fue determinado a través de un ensayo de recuperación.2 Tolueno µg/g O 9. o) en una muestra de agua. R: valor de referencia): Benceno µg/g O 10.0 R 11.0 R 11.0 .EJEMPLO – Calculo incertidumbre  Determinación de BTEX Se lleva a cabo una determinación de benceno.5 (m+p)-XIL µg/g O 25.0 R 11. con los siguientes datos (O: valor promedio obtenido. tolueno.5%. etilbenceno y xilenos (m+p.0 o-XIL µg/g O 11.9 E-Bz µg/g O 11.1 R 11.0 R 11.

36 31.63 47.25 44.91 12.41 48.70 32.17 42.15 13.17 31.91 31.42 43.60 43.52 43.41 43.Determinación de BTEX En la validación del método analizaron separadamente 8 alícuotas de una muestra real obteniéndose las siguientes concentraciones: Nº µg/g BEN µg/g TOL µg/g ET-BEN µg/g (m+p)-XIL µg/g o-XIL 1 2 3 4 5 6 7 8 43.29 48.20 48.33 43.15 44.59 13.68 44.14 32.19 12.64 44.xls .57 42.03 14.96 13.27 48.14 31.44 48.21 31.67 43.80 31.61 43.80 Ejemplo incertidumbre.62 48.07 13.06 12.22 44.56 47.67 45.

.

0.98.00.1.39.008. 250.015.) y 250 mg de nitrofurantoina pura.44. 0. 250.010. En seguida se mide la respuesta instrumental (señal analítica) de cada solución y se obtienen los siguientes datos: CONCENTRACIÓN mg/l 0 0.015. almidon. 0.11 (a)Determine la Sensibilidad del método. 251. A la solución resultante se le determina su respuesta instrumental dando un valor de 0.36.11 0. se prepara una muestra artificial de tableta que contiene 750 mg de excipientes comunes (estereato de magnesio.010.08 12 15 20 1.272. 249.99. Las respuestas instrumental obtenidas son: 0. 0. Para la determinación analítica de nitrofurantoína en formas farmacéuticas se añaden cantidades crecientes de la droga de la droga en dimetilformamida (DMF).12 1. 0. 10 porciones de una muestra real de tabletas de nitrofurantoína se analizan independientemente por el método analítico y se obtienen los siguientes resultados (mg): 250.98.01 0. colorante. 0.009.1 1.445 0.010.67 0. Una porción de 10 mg de muestra artificial se agrega en un matraz de aforo de 1 litro y se afora con DMF. (d) Determine la precisión del método (desviación estándar relativa).35. 248. 0.012. (b) Determine la exactitud del método (error relativo) e indique si hay interferencia por parte de los excipientes de la formulación. 250.012.058 1 2 4 6 8 10 0. gelatina etc.225 0.5 Respuesta Instrumental 0.015. . 0. 250. talco. 249. 248. Por otra parte. al no disponer de un material de referencia certificado. 0. 10 muestras que contienen sólo la mezcla de excipientes (sin nitrofurantoína) son analizadas independientemente por el método.05. (c) Determine el límite de detección del método.98.89 1.

. La prueba estadística Q se utiliza para decidir si un dato debe retenerse o rechazarse. xq es el valor dudoso. Primero se calcula un valor de Qexp y se rechaza el dato cuando el valor es mayor que el valor estadístico (Qcrit)  Qexp xq xn xm ax xm in .Rechazo de datos dudosos   Un dato dudoso difiere excesivamente de la media. xn es el valor más cercanoal valor dudoso.

Valores de Qcrit Número de Datos 3 4 5 Qcrit a 90% de probabilidad 0.710 6 0.765 0.941 0.560 0.829 0.625 .642 Qcrit a 95% de probabilidad 0.970 0.

Ejemplo: Prueba Q Valor (x)  x2 12.3 2.5 Qcrit .61 Para las mediciones replicadas que aparecen al lado.5 3.1 3. 2.60 3.5 3.642 para 5 valores y a 90% de probabilid ad. se retiene el valor.61 10.1 0. . Use un Qcrit a 90% de confianza. 3. aplique la prueba Q para el valor 2.89 6.5 (x)=15.5 2.5.5 Qcrit Qexp Qexp 0.25 9.61 9.25 (x2)=48.1 3.

2. En la orina se determinan si hay substancias prohibidas (en este caso efedrina). Indique: cuál es el objeto. 1. Al analizar esta muestra diez veces de manera independiente se obtuvieron los siguientes valores en ng/ml: 2. 3.05 ± 0. Qcrit (tabla (n=10) 0. Esta tenía un contenido certificado de 2.98. 2. al final de cada partido.EJEMPLO – Dato dudoso En el mundial de fútbol de Alemania 2006.08.xls .05. 2. Previamente el laboratorio que hizo el análisis validó su método con muestras certificadas de efedrina en orina. 1. 2. llevan a un par de jugadores para hacer la prueba del doping.08 ng/ml.99.14. cuál es la exactitud y precisión del método que utiliza el laboratorio.09.21.91. 2.464)    ejemplo prueba Q. 2.01. el analito y la muestra para el análisis.09.

de forma tal que el comportamiento del método en el tiempo pueda ser trazable.xls . todos los controles de calidad relacionados con las propiedades analíticas deben ser documentadas a través de la construcción de Cartas de Control. EJEMPLO carta control turbiedad.Cartas de Control  Una vez que ha sido validada una metodología y se comienza con su aplicación en análisis de rutina.

GLOSARIO .

Proceso de medición con fines cualitativos. que no contiene el analito. Alícuota: porción bien definida (masa. si lo hace ésta se denomina “señal blanco”. a través de las características químicas o fisicoquímicas del mismo o de su producto de reacción Caracterizar: acción de establecer los aspectos diferenciales de un objeto o sistema.        Identificar: proceso analítico cualitativo que implica un reconocimiento del analito. El blanco analítico es un elemento de control de calidad utilizado en la rutina analítica el que se procesa como una muestra más en un análisis Interferente: Todo compuesto. generalmente artificial. toda partícula o todo factor que afecte el resultado generado por un método analítico Determinación (cuantificación): proceso para conocer la cantidad /concentración de un analito (o familia) de una muestra que es analizada Detectar: Acción de un instrumento para producir una señal y transducirla en una magnitud física fácilmente medible. volumen) de la muestra Muestra: es la parte (alícuota) del objeto que contiene los analitos Análisis: someter una muestra a un proceso analítico para conocer información química sobre la misma Blanco analítico: Muestra. todo elemento. a partir de los resultados analíticos  . Teóricamente no debería originar señal.

para analizar alícuotas de la misma muestra para determinar los mismos analitos     . Implica el empleo de un instrumento Método Analítico: corresponde a la Adaptación específica de una técnica analítica para un propósito de medición seleccionado. bajo la coordinación de un ente competente. Técnica: principio científico que se utiliza para extraer información analítica. asignación de valores a materiales o evaluación de métodos analíticos Material de referencia certificado: son materiales de referencia que tienen certificados uno o varios valores de sus propiedades (con sus incertidumbres específicas) obtenidos por procedimientos especiales (Ejemplo: ejercicio de intercomparación) bajo la responsabilidad de un organismo competente e independiente Ejercicio de intercomparación: conjunto de procesos de medida (método) llevados a acabo por diferentes laboratorios. homogéneas y estables. que se emplean para calibración. en el cual una o más de sus propiedades están suficientemente bien establecidas. Es un conjunto de operaciones especificas para caracterizar cuali y/o cuantitativamente a un analito (o familia) en una determinada muestra. Implica el empleo de un técnica (instrumento)   Método absoluto: es aquel método de cuantificación calculable que no se basa en el empleo de estándares analíticos Procedimiento: descripción pormenorizada de una metodología analítica Material de referencia: Material o sustancia.

242. Statistic for Analytical Chemistry. Nordtest Report 537.CITAC Guide: 2000.Referencias  J. Norma IRAM 301:2000-Norma ISO/IEC 17025: 1999. Protocole pour la validation d'une méthode d'analyse en chimie DR-12-VMC. Ellis Horwood Limited edition. España. 1999. Centre d'expertise en analyse environnementale du Québec. Miller and J. Guide EURACHEM. M. Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement. The Fitness for Purpose of Analytical Methods. Spectrochim.Miller. Teddington: 1998. 2004. Holcombe. IUPAC. pag. EURACHEM Guide.C. Acta 33 B. LGC. Edition 2000-03-01 . Editor: H.N. Springer-Verlag Ibérica. Principios de Química Analítica. Valcarcel. England. 1978.         Norma ISO 9000: 2000. 115-118. Chichester. Limit of Detection. A Laboratory Guide to Method Validation and Related Topics. 3rd edition. Handbook for Calculation of Measurement Uncertainty in Environmental Laboratories. Barcelona. 1993.

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