PREINFORMES

PRACTICA DE 1-3

CLARA ISABEL VARGAS VELASQUEZ

CODIGO: 1074130167

GRUPO: 201504_22

TUTORA

NIRA ESTHER DIAZ RODRIGUEZ

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

MICROBIOLOGIA

ESCUELA DE CIENCIAS BÁSICAS, TECNOLOGÍA E INGENIERÍA

ZOOTECNIA

MARZO DE 2019

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 INTRODUCCION

En el presente trabajo del curso de Microbiología, el cual cuenta con un entorno

practico, es necesario realizar ocho pre informes en los cuales se debe dar respuesta a
una serie de preguntas relacionadas con las normas de bioseguridad en el laboratorio,
preparación de medios de cultivo, microorganismos en el ambiente, siembra de
microorganismos,técnicas de tinción, factores que afectan el crecimiento de los
microorganismos, pruebas bioquímicas en algunas bacterias y control de
microorganismo por medio de factores físicos y químicos, correspondientes a cada una
de las diferentes prácticas.

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 PRACTICA NO. 1 – NORMAS GENERALES DE BIOSEGURIDAD

a. ¿Qué es bioseguridad?

Es un conjunto de normas, medidas y protocolos que son aplicados en múltiples

procedimientos realizados en investigaciones científicas y trabajos docentes con el
objetivo de contribuir a la prevención de riesgos o infecciones derivadas de la
exposición a agentes potencialmente infecciosos o con cargas significativas de
riesgo biológico, químico y/ físicos, como por ejemplo el manejo de residuos
especiales, almacenamiento de reactivos y uso de barreras protectoras entre otros.
(Universidad del Desarrollo, 2016).

b. ¿Cuáles son las normas básicas de bioseguridad en el laboratorio de

microbiología?

 Tener una actitud responsable y adecuada.

 Ingresar al laboratorio completamente sobrios.

 Portar todos los elementos de bioseguridad adecuados.

 No se debe pasar la mano por ojos y piel, cuando se tienen los guantes puestos.

 No usar ropa corta, zapatos abiertos, cabello suelto y joyas.

 No se debe ingerir alimento ni bebidas dentro del laboratorio.

 Prohibido ingreso a personal no autorizado y aquellos que no tengan los elementos

de bioseguridad completos.

 En cuanto a las sustancias expuestas para realizar la practica no se debe tener

contacto con ellas, (tocar, oler o probar).

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 Diariamente se debe limpiar y desinfectar el mesón de trabajo, mas aun cuando se
presenta derrames.

 Trabajar siempre acompañado.

 Las sustancias peligrosas no se deber verter por el desagüe, estas serán

depositadas en el recipiente destinado para ello.

 Se debe presentar el carnet, el cual debe estar vigente para préstamo de equipo y
material.

 No pipetear con la boca.

 Seguir las instrucciones del docente encargado de laboratorio.

 Cuando en el desarrollo de las prácticas se utilice ácido y agua en diluciones,

agregue el ácido sobre el agua.

 Al culminar el trabajo, dejar limpio y ordenado el mesón, devolver los elementos y

materiales perfectamente limpios, asegúrese de dejar cerrado el gas, agua y lavarse
las manos.

 Para la eliminación de los residuos se deben utilizar los recipientes destinados para
este fin siguiendo las indicaciones del docente responsable del laboratorio.

 Cualquier accidente por pequeño que sea debe comunicarse al docente

responsable del laboratorio.

Trabajo con material de vidrio

 No se debe calentar recipientes de vidrio común.

 No calentar directamente al mechero de gas ni colocar recipientes de vidrio vacíos o

húmedos por fuera en la parrilla eléctrica.

 Cuando utilice cubreobjetos, se deben revisar los mesones y evitar que queden
sobre ellos.

 Comprobar la temperatura del material de vidrio.

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 No forzar el cierre del material.

 Comprobar cuidadosamente la temperatura de los recipientes que hayan estado

sometidos a calor antes de tomarlos directamente con las manos.

 No lavar los elementos de vidrio de laboratorio con medios abrasivos que al rayar la
superficie debilitan el vidrio.

 Al lavar el material utilice guantes y gafas de seguridad y no deje residuos.

 Al lavar la vidriería de laboratorios no se debe someter a cambios brusco de

temperatura.

PRACTICA NO. 2 – PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

a. ¿Qué es un medio de cultivo; de qué están compuestos principalmente?

Son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones adecuadas y en condiciones

físicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Son esenciales en
el Laboratorio de Microbiología por lo que un control en su fabricación, preparación,
conservación y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los
resultados obtenidos.(«Medio de cultivo (Microbiología) - EcuRed», s. f.)

Ingredientes de los medios de cultivo

 Agua

 Bases nutritivas

 Peptonas, hidrolizados y digeridos •Extractos, infusiones y dializados

- Carbohidratos

 Azúcares, Agua y derivados •Almidones •Otros.

 Sales Minerales.

 Macroelementos (fósforo, azufre, sodio, cloro, hierro y otros) • Microelementos (zinc,

cobre y otros).

 Colorantes e indicadores.

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 Factores de crecimiento.

 Vitaminas -Proteínas -Otros.

 Antibióticos y lípidos.

b. ¿Cómo se clasifican según su proporción de Agar y según su suministro de

nutrientes?

Estado físico

 Sólidos, presentan en su composición una agente solidificante (AGAR) en

proporción de 12 a 15 gramos por litro.

 Semisólidos, presentan Agar en su composición, pero a una concentración mucho

menor, entre 2,5 a 4 gramos del agente solidificante.

Según su composición

 Empíricos, en su composición aparecen sustancias orgánicas.

 Sintéticos, en su composición aparecen sustancias químicas definidas.

 Semisintéticos, en su composición aparecen moléculas naturales hidrolizadas.

c. ¿Cuál es la utilidad de los medios de cultivo y qué diferencia un caldo de un

medio sólido?

 Aislamiento de bacterias desde una muestra o material patógeno (secreción

purulenta, orina, órgano, fecas, etc.) o de un alimento (leche, carne, etc.)

 Estudio morfológico de las colonias.

 Conservación de cepas identificadas (colección de cepas microbianas o cepario).

 Clasificación y tipificación de bacterias por estudio de sus propiedades bioquímicas

en medios diferenciales.

 Obtención de toxinas o investigación de sus características.

 Cultivo y cosecha de bacterias para la elaboración de productos biológicos

(vacunas, antígenos, bacterinas, toxoides, etc.).

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 Un caldo es conocido también como un medio liquido, los cuales contienen los
nutrientes en solución acuosa se utilizan preferentemente para favorecer el
desarrollo bacteriano de células estresadas.Caso contrario al medio solido, se
utilizan para obtener bacterias aisladas por la formación de colonias sobre la
superficie del medio de cultivo y para el estudio de la morfología de las colonias.

d. ¿En qué momento se esteriliza un medio de cultivo y por qué?

Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la
aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el
crecimiento microbiano normal del o de los especímenes inoculados en dichos
medios. El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es la autoclave (que
utiliza vapor de agua a presión como agente esterilizante).(«Medio de cultivo
(Microbiología) - EcuRed», s. f.).

PRACTICA NO. 3 – MICROORGANISMOS EN EL AMBIENTE

a. ¿Qué es un medio de cultivo selectivo y un medio de cultivo no selectivo?

Un medio selectivo es un medio de cultivo en el que sólo puede crecer un tipo de

microorganismo (hongos, bacterias entéricas, protozoos...).Un ejemplo de medio
selectivo sería usar un medio rico en un antibiótico, como la ampicilina, para permitir
únicamente el crecimiento de las bacterias resistentes a éste.(«Medio selectivo -
Wikipedia, la enciclopedia libre», s. f.).

Los medios diferenciales consisten en un medio de cultivo que es capaz de

distinguir dos microorganismos por su crecimiento diferencial en el mismo, usando
las propiedades metabólicas de ambos en presencia de un determinado nutriente y
de un indicador que evidencia, por ejemplo, un pH ácido en su entorno.

b. En ciertos procesos industriales se requiere de áreas blancas. ¿Qué significa

el término anterior?

Una sala blanca o limpia es un área científicamente construida para trabajar en

condiciones de asepsia; es así como las instalaciones nucleares, microelectrónicas,
alimentarías, cosméticas, de bioseguridad, farmacias de formulación magistral, de

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 terapia celular, las instalaciones de metrología, laboratorios de investigación
tecnológica y las industrias farmacéuticas las utilizan. Específicamente en la
industria farmacéutica, para garantizar las condiciones en los laboratorio donde se
realizan las pruebas de esterilidad, se deben conocer los principales factores para el
control, operación y desinfección de las salas blancas, los cuales mantienen la
concentración de partículas en niveles aceptables de contaminación.(Vargas
Valverde, 2017).

PRACTICA No. 4 – SIEMBRA DE MICROORGANISMOS

a. ¿Qué es una unidad formado de colonia?

Unidad de medida que es utilizada para cuantificar el numero de bacterias o células

fúngicas, posibles en una muestra solida o liquida.

b. ¿Qué técnicas existen para hacer una cuantificación del crecimiento de los
microorganismos?

Métodos para el conteo de microorganismos viables

- Cuenta en placa

 Vaciado en placa

 Extendido en placa

 Asa calibrada

 Miles y Mirsa

 Filtración

- Número más probable (NMP).

Métodos para el conteo de microorganismos totales

- Recuento microscópico

 Cuenta de Breed.

 Cámara de Neubauer.

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 Cámara de Prettof Hausser.

- Turbidimetría

c. ¿Los microorganismos pueden vivir de forma indefinida en un medio de

cultivo? Sustente su respuesta.

Los microorganismos son los seres más abundantes de la tierra, pueden vivir en
condiciones extremas de pH, temperatura y tensión de oxígeno, colonizando una
amplia diversidad de nichos ecológicos. Entre los requerimientos más importantes
para su desarrollo están el carbono, el oxígeno, nitrógeno, dióxido de carbono e
hidrógeno. Muchas bacterias sin embargo necesitan del aporte extra de factores de
crecimiento específicos en forma de suero, sangre y extracto de levadura entre
otros.(Tévez, 2006). Es decir, si se ha sembrado sobre el medio de cultivo elegido
las muestras en las que los microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar
colonias, efectivamente pueden vivir de forma indefinida.

PRACTICA No. 5 – TÉCNICAS DE TINCIÓN

a. Establezca las diferencias entre una coloración simple y una coloración de

gram

COLORACIÓN SIMPLE COLORACIÓN GRAM

Un solo colorante y que sea básico. Se agrega pequeñas cantidades de
etanol a las células teñidas con cristal
violeta.
Necesita fijación previa. El citoplasma de las células que han
perdido el cristal violeta se tiñe con otro
colorante.
Permite la visualización la concentración, La diferencia de color se relaciona con el
morfología y el modo de agrupación tipo de pared celular.
bacteriana.

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b. Investigue que coloración se debe utilizar para observar las endoporas o
esporas bacterianas, y para observar la cápsula.

La técnica conocida como Tinción de Moeller, que permite que se muestre la

endospora en color rojo, mientras que el resto de la célula permanece en color azul.
Otra técnica de tinción para el estudio de la endospora es la Tinción de Schaffer-
Fulton con la que vemos la endospora verde y la bacteria roja.

PRACTICA No. 6 – FACTORES QUE AFECTAN EL CRECIMIENTO DE

LOS MICROORGANISMOS

a. El efecto de la temperatura en bacterias psicrófilas, mesófilas, termófilas.

- Mesófilas: Su temperatura óptima se encuentra entre los 25-45ºC. Incluye

microorganismos patógenos y comensales del hombre y animales de sangre
caliente y algunos de vida libre.

- Termófilas: Su temperatura óptima se encuentra entre 45-70ºC. Suelen ser

microorganismos de vida libre.

- Psicrófilas: Su temperatura óptima de desarrollo se encuentra entre los 12 – 15°C.

Temperatura mínima: la fluidez de la membrana: debajo de esta temperatura no

hay crecimiento.

Temperatura optima: Máxima tasa de crecimiento y reacciones enzimáticas.

Temperatura maxima: tasa de crecimiento: daño en biomoléculas - cesa la actividad

- a >T no hay crecimiento.

 Efecto del pH.

Respecto del margen normal de pH a los que crecen las bacterias, éstas se pueden
clasificar en:

Neutrófilas, si crecen de modo óptimo en torno a la neutralidad (entre pH 5.5 y 8).

Acidófilas, si crecen normalmente entre pH 0 y pH 5.

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 Alcalófilas, si crecen entre pH 8.5 y pH 11.5.

La mayor parte de las bacterias son neutrófilas. Muchas bacterias neutrófilas

modifican el pH del medio, y resisten entornos relativamente ácidos o alcalinos. Por
ejemplo, algunas bacterias fermentativas excretan ácidos, mientras otras alcalinizan
el medio, p. ej., produciendo amonio a partir de desaminación de aminoácidos. Por
otro lado, la mayor parte de los hongos y levaduras requieren pHs ligeramente
ácidos (en torno a 4-5).

Aunque los microorganismos pueden crecer en un margen más o menos amplio de

pH (alrededor de un óptimo), los cambios bruscos pueden ser lesivos (afectando a
la membrana y al transporte de solutos, e inhibiendo enzimas). Si el pH citoplásmico
cae rápidamente hasta 5 o menos, la bacteria puede morir.

Uno de los mecanismos que, al menos en neutrófilos parece controlar el pH interior

es un sistema de antiporte H+/K+: a pH ácidos, el interior celular puede quedar en
principio más alcalino que el exterior. Este sistema introduce protones en el interior
y saca iones potasio. De esta manera neutralizan el pH interior y siguen teniendo un
potencial de membrana para establecer una fuerza protón motriz que les suministre
energía.Si el pH interior cae en torno a 6 o 5.5, bacterias como E. coli o S.
typhimurium inducen una respuesta de tolerancia a ácidos, consistente en ATPasas
translocadoras de protones (expulsan protones al exterior) y chaperonas (proteínas
celadoras) para corregir las proteínas desnaturalizadas.

 Disponibilidad del agua

Actividad agua (Aw).

La disponibilidad de agua en un alimento es el agua que se encuentra libre en el

mismo y es necesaria para que las bacterias se multipliquen. Este agua "no
comprometido" con ningún nutriente recibe el nombre de actividad de agua (aw). y
se indica con un número que va desde 0 hasta 1.

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 Cuanto más cercano a cero es ese valor, menos disponible está el agua para las
bacterias y mayor tiempo durará el alimento sin deteriorarse. La mayoría de los
alimentos frescos tienen valores de actividad de agua cercanos a 1.

Es una medida para el agua no ligada, la que está disponible para los
microorganismos.

El metabolismo y la reproducción de los microorganismos dependen del agua. No

se trata del agua del ambiente, sino del agua libre disponible en los alimentos
(leche, carne, etc). El agua libre disponible se denomina actividad agua y su medida
se expresa: aw.

 Halófilos: se emplea para todos aquellos microorganismos que viven mejor en

medios hipersalinos que en medios carentes de sal; son una clase interesante de
microorganismos capaces de competir exitosamente en los medios salinos y resistir
los efectos desnaturalizantes de la sal.

 Oxígeno.

CONCLUSIONES

Se logro dar respuestas a cada uno de los interrogantes propuestos por la guía del
curso. De igual forma resaltar la importancia de las normas de
bioseguridad,teniendo en cuenta que el no cumplimiento de una de ellas, podría
poner en riesg nuestra integridad y la de los demás, por ello es fundamental
conocerlas y sobre todo aplicarlas acabalidad.

Asi mismo en cuanto a la información obtenida sobre los medios de cultivo, su

utilidad y dierencias, ha sido una información muy importante para lograr entender
mejor el curso y posterior a ello las actividades a realizar en cada una de las
diferentes practicas.

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