REPTE 4

1. Línies cel·lulars 2. Cáncer de còlon

HCT116 • Té una longitud aproximada de 1,5 metres i s'estén des del final de l'intestí prim fins a
Línia cel·lular derivada del càncer de còlon primari l'anus
còlon transvers còlon
d’Homo sapiens, correspon a un estadi avançat del La majoria dels càncers colorectals
càncer. descendent
comença amb la formació de pòlips còlon sigmoide
• Patrons d’expressió: CEA en el revestiment intern del colon o
• Marcadors específics:DHRF recte, provocat pel creixement
• Facilitat de proliferació incontrolat de cèl·lules pòlip recte
• No poseeix mutació APC
Cáncer de còlon i l’Irinotecan
Morfologia cel·lular Les cèl·lules cancerígenes moren en exposició a l’Irinotecan, ja que aquesta molècula atura
l’acció de la topoisomerasa I , com a conseqüència el teixit cancerós es destrueix
CRL-1539 3. Molècula derivada de l’ Irinotecan
Línia cel·lular de teixit de còlon normal, sense
L’Irinotecan és un fàrmac de quimioteràpia anticancerós.
anomalíes, d’ Homo sapiens
Com es classifica? com un "alcaloide vegetal" i un "inhibidor de la topoisomerasa I (Sociedad
• Cèl·lules normals per Española de Oncología. & SPARC (Organization), 2004)
evaluar la toxicitat S’utilitza en el tractament contra el càncer colorectal
de l’irinotecan Com actua? L’Irinotecan és un fàrmac que interfereixen en l'acció dels enzims
topoisomerases. Els enzims topoisomerases controlen la manipulació de l'estructura de
l'ADN necessària per a la replicació, el fàrmac ataca durant les diverses fases de la replicació
Morfologia cel·lular
Molécula d’Irinotecan
4. Tècniques d’assajos preclínics
Cultiu cel·lular Assaig MTT Western Blot
Aquesta tècnica s’utilitza per fer créixer els Es tracta d’un assaig colorimètric on s’avalua Consisteix en desnaturalitzar i separar proteïnes,
diferents tipus de cèl·lules en unes condicions la viabilitat cel·lular per reducció del compost aquestes són finalment transferides a un gel de
favorables i controlades, enfocat al nostre MTT. Aquest tipus d’assaig es realitza per les nitrocel·lulosa mitjançant transferència de
estudi, ens permet obtenir una quantitat cèl·lules HCT116 i CR´-1539. voltatge. L’utilitzem per detectar les proteïnes
suficient de cèl·lules canceroses i sanes amb les específiques intracel·lulars en HCT 116 i CRL-1539
que poder treballar posteriorment amb els marcadors apropiats
Determina la toxicitat:
NO
Metabolització
MTT Mort cel·lular

SI
Proliferació cel·lular

Comparació: les 3 tècniques ens proporcionen informació sobre l’efectivitat i toxicitat a l’exposició de la molècula derivada de l’irinotecan. Els cultius
ens indiquen el punt de senescència de HCT116 i CRL-1539, la WB ens informa sobre el moment de l’apoptosi, a diferència de l’assaig MTT, aquesta
tècnica ens indica la mort cel·lular mitjançant la metabolització del compost MTT.
5. Tècniques per identificació cel·lular
CARIOTIPATGE9****Ñ

CITOMETRIA DE FLUX CARIOTIPATGE REACCIÓ EN CADENA DE LA POLIMERASA

OBJECTIU: Discriminació de les cèl·lules tumorals OBJECTIU: Identificació de les dues tipologies OBJECTIU: S’utilitza per amplificar una regió
mitjançant antígens de membrana específics del
càncer de còlon i/o antígens específics de
l’apoptosi cel·lular. (Instituto Nacional de
Enfermedades Respiratorias (Mexico) et al., 2004)
El antígens són els següents:
• Marcadors tumorals de càncer còlon: Srm CEA,
Srm 19.9
• Marcadors d’apoptosi cel·lular: Fosfatidilserina,
Caspasa, Bcl-2
Ajust de voltatges
cel·lulars, mitjançant la comparació del d'interès utilitzant uns primers específics i una
cariotip de cadascuna d’elles. Taq polimerasa amb l’ajuda d’un termociclador,
(Espinosa Asuar, et alt.)
. La PCR ens va permet reconèixer la mutació
present en el codó 13 del proto-oncogen ras en la
línia cel·lular HCT116. Serà comprovada amb una
electroforesis
Carril 2: control negatiu, Carril 3:

Cariotip de la línia control positiu, presenta mutació

tumoral HCT116 Cariotip de la línia en el codó 13 amb 366 pb, Carril
cel·lular CRL-1539 4: mostra un pes de 366 pb, es
tracten de cèl·lules cancerígenes

Compensació de fluorescències

Comparació:la citometria ens proporciona informació sobre la morfologia cel·lular (antígens de membrana), a diferència de les altres tècniques que
ens ofereixen informació genètica: el cariotipatge indica la dotació cromosòmica i la PCR dóna informació del pes molecular del codó 13.
Bibliografia: Espinosa Asuar, L. (n.d.). Guía práctica sobre la técnica de PCR 517 Guía práctica sobre la técnica de PCR. Retrieved from
http://www.chemsoc.org/chembytes/ezine/1999/parkes_
Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias (Mexico), L. M., DRAGO SERRANO, M. E., PÉREZ RAMOS, J., SAINZ ESPUÑES, T. D. R., ZAMORA, A. C., GÓMEZ ARROYO, F., &
MENDOZA PÉREZ, F. (2004). Revista del Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias. Revista del Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias (Vol. 17). Instituto Nacional de
Enfermedades Respiratorias. Retrieved from http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0187-75852004000100007
Sociedad Española de Oncología., E., & SPARC (Organization). (2004). Oncología. Oncología (Barcelona) (Vol. 27). Ediciones Cutor. Retrieved from
http://scielo.isciii.es/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0378-48352004000400027