INFORME DE DETERMINACIÓ DE L'ASSASSÍ MITJANÇANT LA TÈCNICA DE PCR

L'objectiu del repte era trobar d'entre tres sospitosos plantejats l'assassí/na, mitjançant
proves al laboratori, relacionant els resultats de les mostres trobades a l'escena del crim
amb les dels tres personatges escollits. Els nostres sospitosos proposats eren els següents:
Soci núm. 1 (Joan Terrats), la neta desapareguda i la dona del primer fill (Margarita
Solivella).

La tècnica escollida per determinar qui ha comès l'homicidi va ser la tècnica de PCR
(Reacció en cadena de la polimerasa) i la posterior electroforesis. Tot i que requereix cert
temps i que els equips de PCR són costosos, considerem que és d'entre totes les tècniques
la més precisa, més fiable i determinant, senzilla de realitzar i amb més aplicacions en altres
camps.
La PCR és basa en amplificar un fragment de DNA concret mitjançant el termociclador
utilitzant canvis de temperatura per desencadenar la reacció de la master mix amb el DNA
motllo que ens interessa replicar, el producte final és la porció de genoma desitjada en
molta quantitat per poder ser analitzada posteriorment. En aquest cas ens interessa
amplificar els STR (Short tandem repeat), uns fragments de material genètic no codificant
entre gens que són diferents en cadascun dels individus al ser hotpoints en els quals la RNA
polimerasa comet errors de transcripció.
L'electroforesi consisteix en la separació de molècules segons la mobilitat d'aquestes en un
camp elèctric. En el cas del DNA (càrrega negativa) sabem que migrarà cap al pol positiu de
l'aparell (dreta), sabent això carregarem les mostres al cantó esquerre i l'endollarem a la
corrent. Un cop acabat el temps d'exposició al voltatge els fragments més curts de DNA
correran més a través dels porus del gel d'Agarosa que no pas els més llargs. D'aquesta
manera, gràcies al marcador, podrem saber el número de nucleòtids dels fragments i si
aquests coincideixen amb els de l'escena del crim.

Programa utilitzat per la PCR:

Step Funció Temp Duració Nº de cicles

Desnaturalització Desnaturalitzar 94ºC 2 min X1

Cicle de Desnaturalització 94ºC 30seg X35

temperatura
Annealing 52ºC 30seg

Extensió 72ºC 1min

 Extensió final Extensió 72ºC 10min X1

Manteniment (hold) Hold 12ºC Indeterminat X1

Figura 1. ​Programa del termociclador.

Abans de realitzar l'electroforesi vam fer un gel d'Agarosa al 3% afegint prèviament de la

seva solidificació el SYBR safe (s'utilitza per llegir bandes d'ADN amb llum UV) a 1X (10µl).
Vam afegir també ORANGE G al nostre producte de PCR, aquest component ens ajuda que
la mostra sigui més densa i que per tant caigui millor als pous del gel d'Agarosa, també ens
serveix per saber com està corrent la mostra, ja que a part del pigment taronja conté un
fragment molt petit d'ADN (50 bases) que delimita i ens permet saber quan hem de parar
l'electroforesi. A continuació vam posar el gel a la cubeta, i la vam omplir de TAE 1X,
finalment vam carregar els pous. El vam connectar a la bateria 30 minuts a 300 V.
Els pous queden carregats de la següent forma:

ESCENA SOSPITÓS 1 SOSPITÓS 2 SOSPITÓS 3

RES MARCADOR DEL CRIM (Joan Terrats) (Neta desep.) (Margarita
Solivelles)

​Figura 2. Ordre de les mostres a l’electroforesi

Els resultats obtinguts han estat els següents:

Figura 3. ​
Gel d’agarosa sobre llum UV. ​Figura 4​. Lectura de resultats.

Les proves realitzades al laboratori ens han permès trobar un dels assassins. Després de
fer la PCR les bandes de la mostra del sospitós coincidien amb les de la mostra trobada a
l'escena del crim, per tant amb totes les dades recollides amb els interrogatoris i les
coartades, juntament amb aquestes proves realitzades al laboratori, podem afirmar com a
mínim un dels culpables de l'homicidi múltiple. L'assassina és ara la viuda Margarita
Solivella, dona del primer fill i la nostra tercera sospitosa.
Finalment podem concloure que la tècnica de PCR ens ha resultat per l'objectiu que
buscàvem. La hipòtesi, per tant, queda demostrada.

ACTIVITATS BIOLOGIA MOLECULAR,​ [LABSquad] Barcelona 2019. [fecha de acceso, 17

de mayo de 2019] Disponible en:
http://laboratorisquad.blogspot.com/p/activitats-acct.html

Dossier Espai Habilitats Avançat, [Projecte ACCTTUA] Barcelona 2019. [fecha de acceso,
17 de mayo de 2019] Disponible en:
https://docs.google.com/document/d/1NCL5pBQl0g6tPwv4_HvSpzUM3LJa9hU54N5lfvISGO
4/edit

Reacción en cadena de la polimerasa. [Wikipedia]. Fecha de acceso 17 de mayo [última

actualització noviembre 2018]. Disponible en:
https://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Reacci%C3%B3n_en_cadena_de_la_polimerasa&
action=history

Electroforesis en gel [Khan Academy]. España 2019; [fecha de acceso, 17 de mayo de

2019]. Disponible en:
https://es.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dna-sequencing-pcr-ele
ctrophoresis/a/gel-electrophoresis

Electroforesis en gel [Wikipedia] España 2017; [fecha de acceso, 17 de mayo de 2019].

Disponible en:
https://es.wikipedia.org/wiki/Electroforesis_en_gel#Revelado_y_visualizaci%C3%B3n