PRACTICA Nº 05

DETERMINACIÓN DE LÁCTICO DESHIDROGENASA

COMPETENCIAS PROCEDIMENTALES
Al finalizar la Práctica de Laboratorio el alumno será capaz de:
1. Determinar la actividad enzimática de la Láctico Deshidrogenasa en suero.
2. Interpretar y explicar el significado de la elevación de la Láctico Deshidrogenasa en
suero.

INTRODUCCIÓN: SIGNIFICADO CLINICO

La enzima Lactato deshidrogenasa se encuentra concentrada en el corazón, riñón, hígado,

músculo y otros tejidos corporales. El daño a alguno de estos tejidos resulta en un aumento
de los niveles séricos de LDH.

La determinación de la actividad de lactato deshidrogenasa (LDH) en suero, tiene una gran

variedad de aplicaciones clínicas. Niveles elevados de LDH están asociados con infarto del
miocardio, daño renal, hepatitis, enfermedades musculares y otras patologías. Existen al
menos cinco isoenzimas de LDH dependiendo de su origen tisular.

En el caso del infarto agudo de miocardio (IAM), la actividad de LDH total (junto con las
enzimas CK y GOT) constituye un elemento importante de diagnóstico. La misma comienza
a aumentar de 12 a 24 horas después de producido el infarto; alcanza un pico entre las 48
- 72 horas y permanece elevada hasta el séptimo o décimo día.

Por otra parte, también se registra un aumento de la actividad de LDH total en pacientes
con necrosis hepática (producida por agentes tóxicos o por infecciones agudas como la
hepatitis viral) e incluso acompañando a necrosis tubular renal, pielonefritis, etc.

FUNDAMENTO.-
La enzima LDH cataliza la reacción reversible de Piruvato a Lactato, pudiéndose emplear
ambos como sustratos.
El protocolo a trabajar está basado en el siguiente esquema de reacción:

LDH
Piruvato + NADH + H +
 L-Lactato + NAD+

En este caso la enzima cataliza la reducción del Piruvato a Lactato oxidando el NADH a
NAD+. La coenzima NADH tiene un pico de absorbancia característica a 340 nm.
La concentración de LDH se determina midiendo la disminución de absorbancia a 340 nm
a medida que se oxida el NADH.

REACTIVO PROVISTO (se empleará un kit comercial)

Solución de buffer Tris, pH 7,2 conteniendo Piruvato y cloruro de sodio.
Solución conteniendo NADH.

PRECAUCIONES
Los reactivos son para uso diagnóstico "in vitro".

B. MUESTRA
Se debe obtener suero de la manera usual libre de hemólisis y separar del coágulo dentro
de las dos horas de su obtención. También puede usarse plasma

C. MATERIAL Y EQUIPOS DE LABORATORIO

- Espectrofotómetro.
- Micropipetas.
- Pipetas capaces de medir los volúmenes.
- Tubos de ensayo.
- Cubetas espectrofotométricas.
- Reloj.
- Baño de agua a temperatura indicada en el procedimiento.

D. DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD DE LDH

1.- En una cubeta de cuarzo mantenida a la temperatura de trabajo de 30-37°C colocar:

REACTIVOS CUBETA
Reactivo LDH 2000 uL
Agua Destilada 1000 uL
Pre-incubar unos minutos, luego agregar
Muestra 50 uL

2.- Mezclar inmediatamente y disparar simultáneamente el cronómetro.

3.- Esperar 30 segundos.
4.- Leer la Absorbancia inicial y luego a los 1, 2 y 3 minutos de la primera lectura a 340 nm.
5.- Determinar la diferencia promedio de Absorbancia/min (ΔAbs/min), restando cada
lectura de la anterior y promediando los valores.
6.- Utilizar este promedio para los cálculos.

CALCULO DE LOS RESULTADOS

Los cálculos se realizan como sigue:

LDH (U/L) = ( Abs / min) x 8095

VALORES DE REFERENCIA
120 – 240 U/L a 25°C
160 – 320 U/L a 30°C
230 – 460 U/L a 37°C

CUESTIONARIO:
1. ¿Por qué es necesario obtener suero libre de hemólisis?
2. Si la reacción enzimática se midiera usando como sustrato lactato, ¿cómo
realizaría la medición de la actividad enzimática?
 3. En un paciente con IAM cuando se debería determinar la concentración de la enzima
LDH.
4. Un paciente con cáncer le comenta a Ud.: me hice el examen LDH me salieron los
valores 19701 U/L? ¿Cómo explicaría esa situación?
5. Un paciente de 37 años lleva haciendo ejercicios por una temporada y al realizar
esfuerzos siente mucho dolor muscular en los días siguientes. El médico le ha
realizado una serie de pruebas para determinar si tiene algún problema muscular,
una de las pruebas ha sido la actividad de LDH sérica. El resultado ha sido que todo
está bien menos en la parte de bioquímica suero, ya que la enzima LDH está por
debajo de los niveles adecuados; el valor encontrado fue 160U/L cuando tendría
que estar entre 240-480. ¿Cómo explicaría esa situación?

BIBLIOGRAFIA:
Devlin T. Bioquímica. Libro de texto con aplicaciones clínicas. Tomo I. 2ªedición.
Barcelona: Reverté. 1991
Devlin T. Bioquímica. Libro de texto con aplicaciones clínicas. Tomo II. 2ªedición.
Barcelona: Reverté. 1991
Fritz, J . S. Schenk, G. H. Química Analítica Cuantitativa. Editorial Limusa. S.A. México
D.F. México.1992
Mathews K. Y Van Holde K.E. Bioquímica. McGraw-Hill-Interamericana, 1998.
Montgomery R, Conway TW, Spector AA., Chappell D. Bioquímica. Casos y Texto. Sexta
edición. Madrid:Harcourt Brace. 1999
Stryer L. , Berg J.M y Tymoczko J.L. Bioquímica. 5ª Edición Reverté, 2003