Diagnóstico de Influenza y otros Virus

Respiratorios
Toma de muestra, conservación y transporte

Laboratorio de Referencia Nacional Instituto

Nacional de salud

Lic. TM. Maribel Huaringa Núñez

Responsable de Laboratorio Virus respiratorios
Instituto nacional de salud
mhuaringa@ins.gob.pe/
maribelhunu@gmail.com

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• Virus de Influenza
• Toma de muestra
• Transporte de muestras
• Métodos de Diagnóstico

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Curso Virtual «Vigilancia, Prevención y Control de Influenza y otros Virus Respiratorios»
 VIRUS INFLUENZA

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Cambios antigénicos del virus

• Drift: Cambio menor, mismo subtipo

Mutaciones puntuales en genes
Puede causar brotes, epidemia

• Shift: Cambio mayor, nuevo subtipo

Intercambio de segmentos de genes
Puede causar pandemia

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Nomenclatura
Virus Influenza

Tipo de influenza Año de aislamiento Subtipo Hemaglutinina

A/Sydney/5/99 (H3N2)
Ubicación geográfica N° aislamiento Subtipo Neuraminidasa
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 Vía de Transmisión

Contacto directo
• Persona a persona – contacto
próximo
• Gotas - hasta 1m de
distancia

Contacto indirecto
• Aerosoles – puede ocurrir en
situaciones especiales de
estímulo
• Por objetos (fómites)

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Precauciones de Gotita

• Prevenga infección por gotitas

grandes debido a
• Estornudar
• Toser
• Hablar

• Ejemplos
• Neisseria meningitidis
• Tos Ferina
• Influenza
• Influenza Aviar (probable)

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Curso Virtual «Vigilancia, Prevención y Control de Influenza y otros Virus Respiratorios»
 El Rol de los Centros Nacionales de Influenza (CNI)
Desarrollar y reforzar la red nacional de laboratorios para la vigilancia de la influenza en
humanos.

Monitorear las cepas de influenza circulantes en el país, y permanecer alerta ante un

aislamiento viral no subtipificables.

Detectar casos humanos de infección por un nuevo subtipo del virus de la influenza lo
más temprano posible.

Brindar pautas y capacitación a los laboratorios sobre recolección de especímenes,

almacenamiento, transporte , diagnóstico, y medidas bioseguridad

Evaluar la capacidad diagnóstica general en los laboratorios de la Red Nacional

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LABORATORIO DE REFERENCIA NACIONAL VIRUS RESPIRATORIOS / CENTRO
NACIONAL DE INFLUENZA (NIC-191)

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 Para que la vigilancia virológica

Monitoreo viral

Detección
temprana de Determinar Recomendaciones
nuevos virus o patrones de para la formulación Susceptibilidad a
variantes circulación viral de vacunas antivirales

• -Evaluación del riesgo

• -Recomendaciones para políticas de salud
Cómo usar pública
esta • -Generando datos para la vigilancia
epidemiológica
información ? • -Alertar sobre la aparición de virus nuevos
con potencial pandémico

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 Vigilancia Centinela de influenza y otros virus respiratorios

Virus influenza Parainfluenza Adenovirus

Metapneumovirus
Curso Virtual VSR
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 Centros centinelas para la vigilancia de influenza

Criterios :
• Definición de caso:
ETIs ( Temperatura ≥ 38°C mas un síntomas
IRAG (Temperatura ≥ 38°C mas un síntomas, además estar hospitalizado)
• Ficha epidemiológica: fecha inicio de síntomas y fecha obtención muestra para calcular tiempo de enfermedad
• Prueba IFD :Tiempo de enfermedad hasta 3 días para ETIs y 7 días para IRAG
• Prueba rRT-PCR: todas las muestras, hasta 10 días de enfermedad
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 Criterios para la Toma de
muestra
Tipos de muestra y su colección
apropiada

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 Centros centinelas para la vigilancia de influenza según Directiva N° 045-
MINSA/2012
FLUJOGRAMA DE MUESTRAS ,PARA EL DIAGNOSTICO PARA LA VIGILANCIA DE INFLUENZA Y OTROS
VIRUS RESPIRATORIOS

CENTROS CENTINELAS

SG / ETIs IRAG

NOTA:
• OTROS LUGARES CONSULTAR AL
LABORATORIO.
• EN CASO DE CLINICAS SOLO SE
ENVIO DE MUESTRAS AL INS RECIBEN CASOS DE IRAG

MUESTRA: HISOPADO NASOFARINGEO Y

ASPIRADOS
CLASIFICACION ( PRUEBAS) Y
CODIFICACION DE MUESTRA ENVIO DE MUESTRA AL
INGRESO DE FICHAS AL NETLAB
LABORATORIO

Criterios :
• Definición de caso:
ETIs ( Temperatura ≥ 38°C mas un síntomas
IRAG (Temperatura ≥ 38°C mas un síntomas, además estar hospitalizado)
• Ficha epidemiológica: fecha inicio de síntomas y fecha obtención muestra para calcular tiempo de enfermedad
• Prueba IFD :Tiempo de enfermedad hasta 3 días para ETIs y 7 días para IRAG
• Prueba rRT-PCR: todas las muestras, hasta 10 días de enfermedad
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 FLUJOGRAMA VIGILANCIA DE INFLUENZA Y
OTROS VIRUS RESPIRATORIOS – PERÚ

Vigilancia ETI e IRAG

Centros Centinelas

Obtención y Envió de muestra

LRR
Método IFD
Reporte resultados
Sub tipo Flu A NETLAB
(H3N2,H1N1 ) FLUNET
Método PCR tiempo
LRN real PCR +
Envió de muestra , Confirmación
Ingreso resultados Flu A y Flu B
Flu A
al NETLAB
no subtipificable

Aislamiento viral
Envío al CDC
IFD Positivo
Flu A y Flu B
Reporta a la Oficina
Epidemiología CDC- MINSA

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 ¿A quienes se toman muestras?

Síndrome gripal (SG) • Es toda persona que presenta: Fiebre (mayor o igual a 38°C) de inicio
brusco acompañado de tos o dolor de garganta. Puede acompañarse
o enfermedad tipo de síntomas sistémicos como mialgias, postración, cefalea o malestar
influenza (ETI): general.

• Síndrome que se presenta en un paciente de cualquier edad, con

Infección respiratoria aparición súbita de fiebre superior a 38°C o historia de fiebre y que
aguda grave (IRAG): presenta: Tos, dificultad para respirar y Que, por el compromiso de su
estado general, debería ser hospitalizado.

Vigilancia nacional de
IRAG inusitado

Muerte por IRAG

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 ¿Cuando tomar las muestras?

• Preferentemente dentro de
las primeras 72 hrs desde el
inicio de los síntomas

• Antes de iniciar tratamiento

antiviral

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 Colección apropiada

2. La calidad de
la muestra
1. Etapa de la
infección
cuando se
colecta la
muestra
Antibodies

Éxito en la 3. La
detección conservación de
5 15 5 15
la muestra

Un diagnóstico exitoso depende fundamentalmente

de la calidad de la muestra y de sus condiciones de
almacenamiento y transporte antes de su
procesamiento en«Vigilancia,
Curso Virtual el laboratorio.
Prevención y Control de Influenza y otros Virus Respiratorios»
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CONSIDERACIONES:

Tener la orden y/o ficha clínica epidemiológica con la

información completa y legible.
Fecha de inicio de síntomas
Personal de laboratorio debe colocar la fecha de obtención
de muestra.
Rotular el tubo medio transporte viral y verificar que
coincidan el nombre o código del paciente.

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 Fichas Epidemiológicas

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 MEDIO TRANSPORTE VIRAL

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 Colección Apropiada
Hisopos
•Deben ser hisopos de fibras
sintéticas (rayón, poliester)

•NO se debe usar hisopos de

alginato de Calcio o algodón, ni
hisopos con mangos/palo de
madera porque puede inhibir
algunas pruebas de laboratorio

Medio de Transporte Viral

(MTV)

Medio de cultivo celular

Solución salina
Infusión Triptosa-fosfato
Caldo infusión de ternera
Proteína (albúmina bovina o
gelatina)
Antibióticos
Antimicóticos
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 TIPO DE MUESTRAS

• Hisopados: Nasal y • Tejido: Del tracto

faríngeo (y combinado). respiratorio alto y bajo
• Lavados: nasal y principalmente de los
broncoalveolar. pulmones, bronquios y
• Aspirados: nasofaríngeo, tráquea
endotraqueal

Muestras Tejidos
respiratorias

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 TOMA DE MUESTRAS Y ENVIO:

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Responsable de Laboratorio Virus respiratorios
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maribelhunu@gmail.com

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Curso Virtual «Vigilancia, Prevención y Control de Influenza y otros Virus Respiratorios»
• Aspirado traqueal
Situaciones Especiales (UCI)

• Tejidos: Pulmón

Lavado broncoalveolar

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 Obtención de muestra de Hisopado nasal
•Primero levante la cabeza del
paciente.
•Introducir suavemente el hisopo
como indica la figura.
•Realizar movimiento rotatorio
haciendo presión sobre las
paredes de la fosa nasal.
•Retirar el hisopo, luego colocar en
el medio transporte viral.

Nota: Si el paciente presenta secreción

mucosa, debe limpiarse antes de obtener la
muestra.Curso Virtual «Vigilancia, Prevención y Control de Influenza y otros Virus Respiratorios»
 Obtención de muestra de Hisopado faríngeo
Procedimiento :
• Levantar la cabeza del paciente.
• Pedir al paciente que abra la boca y con ayuda de bajalengua presionar la
lengua.
• Introducir el hisopo como indica la figura y obtener la
muestra de faringe posterior.
• Retirar el hisopo, luego colocar en medio de transporte viral.

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 Colocar el hisopo en el Medio de transporte viral

Introducir ambos hisopos en

el medio de transporte, y
romper el mango excedente
de los hisopos un poco menos
de la altura de la boca del
tubo para que pueda cerrarse
herméticamente.

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 Concepto básico del empaque
• Usar triple empaque (3 contenedores)
• El primer contenedor debe ser resistente a filtraciones
• Utilizar material absorbente en cada contenedor

Contenedor Envase ó contenedor Contenedor

primario secundario exterior

http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/2/28/Tripe_embalaje.png

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 Conservación y transporte de
muestras

Conservación y transporte de muestras

• Las muestras deben ser conservadas en cadena de frío ( 2 - 8° C), evitar
congelar y descongelar , y envíe al laboratorio dentro de las 48 horas.

El traslado de muestras deben usar un triple empaque:

• Contenedor primario, deposito donde se coloca la muestra (medio de
transporte viral).
• Contenedor secundario, recipiente para proteger la muestra.
• Tercer Contenedor , recipiente cooler o caja de tecknopor donde se coloca
cojines de hielo para conservar la muestra en cadena de frio ( 2 - 8° C)

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 MétodMétodos de Diagnóstico

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Responsable de Laboratorio Virus respiratorios
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 Detección por laboratorio
El éxito dependera de:

Calidad de la muestra:
Bien tomada (Celularidad)
Bien conservada (Viabilidad viral, Integridad de AN)
Bien enviada (Oportunidad y bioseguridad)
Momento de la infección en que se toma la mx:
Dinámica viral
Respuesta inmune

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 Ensayos virológicos

Virus
respiratorios

Detección viral ó antigénica Detección genómica

INMUNOFLUORESCENCIA CULTIVO CELULAR rRT-PCR PCR convencional
IFA / IFD

INMUNOFLUORESCENCIA
(DFA y/o IFA)

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Carga Viral Ensayos virológicos

1 3 5 7 9
Dias de síntomas

Detección por lab

IF AV RT-PCR

Immunofluorescencia
Aislamiento Viral
RT-PCR

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 Prueba rápida para influenza

Desventajas:
• No recomendada para la
vigilancia epidemiológica
• Baja sensibilidad y
especificidad comparada
con otros métodos
• Obtención de resultados
falsos negativos
• No permiten la
Identificación del subtipo
viral

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 Método de Inmunofluorescencia

Detecta partículas virales presente en las muestras

clínicas , Virus de Influenza A, B; Parainfluenza 1, 2
y 3, VRS, Adenovirus y Metapneumovirus.

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 Método de Inmunofluorescencia

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 Aislamiento Viral

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 RT PCR EN TIEMPO REAL

ARN PCR en tiempo real ha sido detectar y

cuantificar las secuencias específicas
de ácidos nucleicos mediante el uso de
cADN sondas fluorescentes en la reacción.
pcr, es una técnica, cuyo objetivo es
obtener un gran número de copias
de un fragmento de ADN particular,
partiendo de un mínimo

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 Método Molecular

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 Red Nacional de Laboratorios de Salud Pública

La Red Nacional de Laboratorios de

Laboratorio de Referencia Nacional de
Virus Respiratorios está compuesta por
16 laboratorios de referencia regional
(Cusco, Puno, Ayacucho, Arequipa,
Ancash, Huancavelica, Junín, Tacna,
Piura, Cajamarca, Tumbes, Iquitos,
Ucayali, La Libertad, Apurimac,
Lambayeque) Hospital Emergencias
Pediátricas, Instituto Nacional de
Neoplásicas

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 INFORMACIÓN

PÁGINA NETLAB www.netlab.ins.gob.pe

ENERO – DICIEMBRE (todo los días)

FLUNET - OMS (http://gamapserver.who.int/GlobalAtlas/home.asp)

ENERO – DICIEMBRE (semanal)

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 Gracias….

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