格列美脲清洁验证分析方法验证

扬子江药业集团广州海瑞药业有限公司“启航＂ＱＣ小组
一、产品概况
格列美脲是德国赫斯特公司开发的新一代磺酰脲类药物，适用于控制饮食、运动疗法及

减轻体重均不能满意控制血糖的ＩＩ型糖尿病。有良好的发展前景和可观的经济效益。格列美

脲片为我公司固体制剂车间的主打品种之一，它的批量为１１０万片，采用阶段式生产，每年

生产近４０个批次。

二、ＱＣ小组概况
１．小组简介
Ｉ ｛

小组名称 启航ＱＣ小组 小组注册号 ＹＺＪＨＲ００ １

成立时间 ２０１０．０７．１５ 。 活动时间 ｇ

２０１０．０８．０１．２０１ １．０１．２８

课题名称 格列美脲清洁验证分析方法验证

课题注册号 ＨＲｌ０００１ 小组人数 ８

ｊ ，活动次数 ８次 ｉ 活动出勤率 ：。
１００％

制表人：钟剑制表时间：２０１０年８月３日

２．小组成员明细表
疆

卜姓名； 性别 学历 组内分工 ＴＱＣ培训时阕；

任亚东 男 研究生 总体负责 １２ｈ

孙大鹏 男 本科 设计实施 １２ｈ

张婷 女 研究生 设计实施 １２ｈ

钟剑 男 本科 设计实施 １２ｈ

戚大卫 男 专科 论文发表及实施 １２ｈ

肖俊杰 男 本科 具体实施 １２ｈ

吴雪玉 女 本科 具体实施 １２ｈ

曾菊香 女 本科 具体实施 １２ｈ

制表人：钟剑制表时间：２０１０年８月３日

三、活动计划
１．培训情况

ＱＣ小组成员均参加过厂级以及质量管理部门组织的ＴＱＣ知识学习，能熟练地掌握和运

用ＴＱＣ的有关常用数理统计工具，从而在技术力量和分析能力等方面有了明显的提高。
２．活动情况

１７
【活动制度】有目的、有计划、有内容、有措施、有检查。

【活动内容】ＴＱＣ知识培训、实施技术攻关并总结、讨论和解决攻关中出现的问题、提出下

一步计划。

【活动形式】讨论分析、培训学习、现场实践、验证效果。

【活动计划】具体分ＰＤＣＡ四个阶段：

Ｐ阶段（２０１０年０８月初一２０１０年１０月上旬）：选题，并最终确定实验设计：

Ｄ阶段（２０１０年１０月中旬一２０１０年１１月下旬）：根据实验设计进行实施；

Ｃ阶段（２０１０年１２月上旬－－２０１０年１２月下旬）：效果检查；

Ａ阶段（２０１１年１月上旬．２０１１年１月下旬）：总结经验今后打算。

四、选题理由
１．公司相当重视防止生产中的污染、交叉污染以及混淆、差错等风险的产生。因此在年度验

证计划中规定必须实施该项目。
２．格列美脲片为固体制剂车间的主打品种之・，它的批量为１１０万片，采用阶段式生产，每
年生产近３０个批次。固体制剂车间还有其他主打品种，生产能力总计可达每年３００批次。

为了有效防止污染和交叉污染需要对生产系统清洁情况进行验证。

３．考虑到清洁剂的残留小，选择用水作为清洁剂，但水对格列美脲的清洁能力不强，为确保
清洁的有效性，避免药品的交叉污染，急需制定出一种有效的检验方法来确认清洁的效果。

五、制定目标
１．方法选择

在制定目标之前，我们小组成员一致认为必须首先确定格列美脲的检测方法。因此，我
们了查阅格列美脲和格列美脲片的质量标准，发现格列美脲使用容量分析法检测，而格列美

脲片使用高效液相色谱法检测。另外小组还通过经验总结、集体讨论等方式，对容量分析法
和高效液相色谱法这两种方法做了对比，最终决定选择专属性强、自动化程度高的高效液相

色谱法作为该清洁验证的检测方法。

２．目标确定

（１）分析方法目标值ｔ

专属性：与格列美脲对照品图谱比较，空白溶剂图谱和阴性对照图谱无与格列美脲峰相同保

留时间的色谱峰；

检测限：信噪比３：１，且峰面积ＲＳＤ≤１０％；

定量限：信噪比１０：１，且峰面积ＲＳＤ≤１０％；

精密度：ＲＳＤ≤２．Ｏ％：

线性关系：ｒ≥Ｏ．９９９。

（２）取样方法目标值：取样回收率≥５０％， ＲＳＤ≤２０％。

１８
六、制定对策
１．方法学验证方案

１．１专属性试验：

操作方案 结果判定
一婴旦一一Ｌ．
空白溶剂 ｌ 取（色谱级）甲醇，检测。 ｌ与格列美脲对照品图谱比较，

乙醇（色谱级）润湿棉签，至２５ｍｌ量瓶，加甲醇， ｌ空白溶剂图谱和阴性对照图谱
阴性对照溶液ｌ
超声１０ｍｉｎ，定容，检测。 无与格列美脲峰相同保留时间

对照品溶液 配制０．２ｍｇ／ｍｌ的格列美脲对照品溶液，检测。 的色谱峰。

制褒人：钟剑制农时间：２０１０年０９月１０ Ｅ］

１．２定量限和检测限：

通过查文献确定， 该项目的方案ｔ将一定浓度的格列美脲对照品溶液逐级稀释后，检测

其信噪比。取信噪比为３：１的溶液为检测限，信噪比为１０：１的溶液为定量限。

１．３精密度：

根据中国药典２０１０版二部附录《药品质量标准分析方法指导原则》制定该项目的方案：

取格列美脲对照品溶液，重复检测６次，并计算峰面积的相对标准偏差。

１．４线性关系：

经过小组讨论，一致认为，格列美脲残留量可能在一个很宽的范围，所以确定定量限浓

度到格列美脲片含量测定时标准溶液的浓度（４０９９／ｍ１）为线性范围。

２．取样回收率方案

为了确定取样回收率的实施方案，小组成员共同分析出实施方案中三个关键的项目，再

利用理论知识和观察比较对各个项目的实施方案进行评分，确定最佳方案。
。

”１８
鹫 ｉ

釜一。．琢睡。㈡。蠹案内耷一。Ｊ～一一一一。。…一。。帮谗～。～。—一，。一…。评分山一。最佳条往。。．ｊ
Ａ、水 格列美脲不溶于水，取样不彻底 ｌ

取样溶剂 Ｂ、乙醇 溶于乙醇，且无毒性 ３ Ｂ

Ｃ、甲醇 易溶于甲醇，但有毒性 ２

Ａ、小头细杆 与设备接触面积小，吸附药品量小 １
取样棉签 Ｂ
Ｂ、大头硬杆 与设备接触面积大，吸附药品量大 ２

Ａ、一次 数据量少，无说服力 １

取样次数 Ｂ、两次 结果出现不平行后无法判断。 ２ Ｃ

Ｃ、三次 有文献支持，有利于结果分析 ３

制表人：钟剑制表时间：２０１０年ｌＯ月１０目

通过小组讨论最终决定：乙醇为取样溶剂，用大头硬干棉签取样，用取样三次的结果平

均作为最终结果。

１９
 ３．根据５Ｗ１Ｈ的原则制定对策表
……５
酽 …’
”ｌ
一
‘ｆ一＋１ ４‘’。。‘…。｝ｔ １…’”１
序 对策 目标 措施 ：负责入 地点 完成 ＋：

１目的
：号． Ｗｈａｔ， Ｗｈｙ。；Ｈｏｗ ｉ Ｗｈｏ｛Ｗｈ．ｅｒｅ Ｗｈｅｎ～。ｊ

阴性对照溶
专属 配制空白溶液、 对空白溶液、阴性对 高效
液和空白溶
１ 性试 阴性对照溶液， 照溶液进行检测，记 吴雪玉 液相 ２０１０．１１．２５
液对检测无
验 检测。 录其色谱图，并比较。 室
干扰

将一定浓度的格列美
定量 将一定浓度的 检测限：信噪
脲溶液逐级稀释后， 高效
限和 格列美脲溶液 比３：１：定量
２ 平行进样三次，检测 钟剑 液相 ２０１０．１１．２５
检测 逐级稀释后检 限：信噪比
其信噪比。并比较三 室
限 测其信噪比。 １０：１
次的峰面积。

取格列美脲对 检测６次，并
取格列美脲对照品溶
照品溶液，重复 计算峰面积 高效
精密 液，重复检测６次，
３ 检测６次，并计 的相对标准 曾菊香 液相 ２０１０．１１．２５
度 并计算峰面积的相对
算峰面积的相 偏差小于等 室
标准偏差
对标准偏差。 于２．Ｏ％

确定定量限浓 将格列美脲对照品溶

度到格列美脲 液稀释Ｏ．１０ｐｇ／ｍｌ、

片含量测定时 线性回归方 Ｏ．５甥／ｍｌ、２鹇／ｍｌ、 高效

Ｏ删，
线性
４ 标准溶液的浓 程的相关系 １０¨ｇ／ｍｌ、４ 肖俊杰 液相 ２０１０．１１．２５
关系
度为线性范围， 数ｒ≥Ｏ．９９９ 分别精密量取ｌＯ山， 室

并计算线性回 检测并记录峰面积，

归方程。 计算线性回归方程。

乙醇为取样溶 回收率≥
取样 按照对策，取样三次，
剂，用大头硬于 ５０％，取样间 检验
５ 回收 以三次结果的平均值 吴雪玉 ２０１０．１１．２５
棉签取样，用取 回收率ＲＳＤ 一室
率 作为最终结果
样三次。 ≤２０％

制表人：张婷制表时间：２０１０年１０月１２曰

七、实施对策
１．专属性试验

１．１阴性对照的制备：

用乙醇（色谱级）润湿棉签，并将其靠在溶剂瓶上挤压以除去多余的溶剂，放入２５ｍｌ

２０
量瓶，加适量甲醇，超声ｌＯｍｉｎ。放冷加甲醇稀释至刻度，作为阴性对照。

１．２对照品溶液制备：

取格列美脲对照品约２０ｍｇ，精密称定，置ｌＯＯｍｌ量瓶中，加甲醇适量，超声２ｍｉｎ使溶

解，放冷后加甲醇稀释至刻度，摇匀，得到０．２ｍｇ／ｍｌ的格列美脲对照品溶液。精密量取上述

对照品溶液５ｍｌ，置ｌＯＯｍｌ量瓶，加甲醇稀释至刻度，得到ｌＯｌａｇ／ｍｌ格列美脲对照品溶液。
１．３空白溶液：以甲醇（色谱级）作为空白溶液。

１．４测定：分别精密吸取上述３种溶液各ｌＯｇｌ，注入高效液相色谱仪，并记色谱图。
１．５结果：与格列美脲对照品图谱比较，空白溶剂图谱和阴性对照图谱无与格列美脲峰相同保

留时间的色谱峰。

制图人：吴雪玉制表时间：２０１０年１１月２０日

２．定量限和检测限

２．１操作和测定

将格列美脲对照品溶液（１０ｐｇ／ｍ１）逐级稀释成Ｏ．１Ｉｔｇ／ｒｎｌ、Ｏ．０５Ｉｔｇ／ｍｌ、Ｏ．０４９９／ｍｌ、Ｏ．０３ Ｊ．ｔｇ／ｒｎｌ

Ｏ．０２｝ｔｇ／ｍｌ浓度。精密量取ｌＯｐ．１，注入高效液相色谱仪，测定其信噪比，每个浓度样品测定３
次。

２．２结果
擎 ８碍

！对照晶浓度（ｆｌｇ，ｍ１）４
’。… 一
０．０２ ０．０３ ０．０４ Ｏ．０５ ０．１
ｆ…＋‘’ ＋ｉ

｝信磉诧平均值 ｛ ３．０ １．５ ３．Ｏ ４．２ １０．Ｏ

移一…？ｊｊ～１｜

｝蜂菰积鼬Ｄ％ ｛ １３．９％ ３．９％ ８．９％ ５．９％ ４．９％

｝ 裣霸限 ｛ ０．０４嵋，Ｉｎｌ

０．１０删
｝ ｛

釜。～．定量限，。。ｊ
制表人：肖俊杰制表时间：２０１０年１１月２１日

２１
３．重复性

３．１操作和测定

精密量取对照品溶液（１０ｐｇ／ｍ１）ｌＯｍｌ到２５０ｍｌ量瓶，加甲醇稀释至刻度。精密量取ｌＯｍ，
注入高效液相色谱仪，重复进样６次，记录峰面积，计算其相对标准偏差。

３．２结果：

油定获翊 － ２ ３ ４ ５ ６

ｉ峰面积ｌ ７１．５７４９１ ７０．８０８９４ ７０．１４１０５ ７０．０１２２９ ６９．９０８５０ ７０．１１８０８

ｊ ＲＳＤ％…Ｉ １．ｏ％

制表人：曾菊香制表时间：２０１０年１１月２１日

４．线性范围

４．１操作和测定

将格列美脲对照品溶液（０．２ｍｇ／ｍ１）稀释成０．１肛ｇ／ｍｌ、ｏ．５Ｈｇ／ｍｌ、２删、１０１ａｇ／ｍｌ、４０ｔｔｇ／ｍｌ
浓度。精密量取１０山，注入高效液相色谱仪，记录其峰面积。
４．２结果

以对照品溶液的浓度（“ｇ／ｎｇ）为横坐标，其峰面积Ａ为纵坐标绘制标准曲线，计算出格
列美脲的回归方程和相关系数。结果见下表：

ｆｒ……一…‘‘’‘ｉ
序号 ’ｊ ｌ ２ ３ ４ ５

，浓度（肛ｇ／ｍｉ）： ０．１０ ０．５ ２ １０ ４０

｛
｝峰面积 ３．５０６２９‘－ １５．２６９３６ ７０．４５０３ １ ３４５．６０２６３ １ ３３０．４５７
ｒ ｛

｝线性方程 ：
Ｙ＝Ｏ．０３０７８３Ｘ．０．１ ５７ １ ５

０．９９９９
。相关系数一。：
制表人：吴雪玉制表时间：２０１０年１１月２３日

５．取样回收率

用乙醇润湿棉签，并将其靠在溶剂瓶上挤压以除去的溶剂。将棉签头按在取样表面上，
用力使其弯曲，平移而缓慢地擦拭取样表面。在向前移动的同时将其一边移动到另一边。擦

拭过程应该覆盖整个表面。翻转棉签，让棉签的另一面也进行擦拭。但与前次擦拭移动方向
垂直，见下图。取１根棉签照上述方法擦拭，擦拭完毕后，将棉签放入２５ｍｉ量瓶，加甲醇适

量，超声ｌＯｍｉｎ，放冷，加甲醇稀释至刻度。作为供试品溶液。分别取１０山，进样，记录色
谱图峰面积，代入回归方程计算每ｌＯｃｍ２格列美脲实际含量，按下式计算取样回收率。
 １。 ２－＇ 弘 ４－＇

５， ６， ７Ｆ 和

９ｐ １００ １１， １２０

１孓 １４— １孓 １和

图ｌ棉签擦拭取样示意图 图２钢板编号示意图
制图人：肖俊杰制图时间：２０１０年１１月２４日

回收率＝蔫慧１０ｃｍ蔫豢籍川。％
一“。
２格列美脲含量……”
理论每
结果见下图：
’ “
”，
？ ■

。序号 回收率（≥５０％）
｝。；一 ￡｝ ～…’川 ，Ｊ二， 。，…。¨ｌ。．ｏ。。 ‘，，。 。 ～。．Ａ。：。ｌ。，．。～。． 』Ｉ 一・…，

ｌ ８０．４％ ７９．７％ ８５．０％

２ ８２．５％ ７７．５％ ７９．３％

３ ７０．９％ ８５．９％ ７８．１％

４ ７１．５％ ７２．２％ ７５．５％

５ ７２．９％ ７２．７％ ８３．１％

６ ６７．２％ ７４．６％ ８１．１％

７ ８６．９％ ８３．４％ ８９．３０％

８ ７０．４％ ７１．８％ ７４．６０％

９ ７６．７％ ７４．６％ ８３．９％

１０ ８３．４％ ８８．３％ ７３．７％

ｌｌ ７３．５％ ７６．１％ ７０．２％

１２ ７０．１％ ７３．９％ ７５．９％

１３ ７４．５％ ７０．０％ ７２．５％

１４ ８８．３％ ７８．２％ ８５．４％

１５ ７２．４％ ８２．７％ ６９．１％

１６ ６５．９％ ７０．８％ ８１．１％

ＲＳＤ％ ９．１％ ７．２％ ７．３％

平均 ７７．０％

制表人：吴雪玉制表时间：２０１０年１１月２４日

取样回收率试验的总回收率为７７．Ｏ％，ＲＳＤ≤１０％。

八、效果检查
１．有形效果
 ”…
’Ｆ…一……“一ｒｊ州。”～…‘’一ｐ“ｒ：ｏ∥；。”｝‘川”一’一７ｑ～１Ｉ””‘一…。一’≯７…’；ｗ“
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与格列美脲对照品图谱比较，空白溶剂图 与格列美脲对照品图谱比较，空白溶剂图

专属性 谱和阴性对照图谱无与格列美脲峰无相 谱和阴性对照图谱无与格列美脲峰无相

同保留时间的色谱峰 同保留时间的色谱峰

检测限 信噪比３：１，且峰面积ＲＳＤ≤１０％ 信噪比３：１，且峰面积ＲｓＤ≤８．９％

定量限 信噪比１０：１，且峰面积ＲＳＤ、＜１０％ 信噪比１０：１，且峰面积ＲＳＤ≤４．９％

精密度 ＲＳＤ≤２．０％ ＲＳＤ≤１．０％

线性关系 ｒ≥０．９９９ ｒ－－０．９９９９

回收率 ≥５０％ ７７．Ｏ％

制表人：钟剑制表时间：２０１０年１２月２４日

２．无形效果

（１）、增强了小组成员的质量意识，营造了一个人人参与质量分析，勇于创新的氛围。

（２）、人员的操作水平不仅得到了高，技术水平在整个团队的创新中得到了质的飞跃。

（４）、增强了小组人员分析问题，解决问题的能力。

（３）、通过本次活动，小组全体成员的团队精神，质量意识、创新和改进意识等又有了进一

步的增强，参与意识越来越浓。小组于２０１１年０１月２０日召开了小组会议，对活动前后的团

队精神、质量意识等几个方面进行评价和对比。
黪一：’ ７’“＋～ｆ…一… 。。一７…’……”’１ ｉ—ｆ”……………‘’’｝～…一”＋‘”‘…一’…一‘’”…瑚
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团队精神 ３ ５ 工作热情 ３ ４

质量意识 ３ ４ 改进意识 ４ ５

进取精神 ４ ４ ｜ ｜ ｆ

制表人：张婷制表时间：２０１０年０１月２１日

九、总结回顾及今后目标
通过此次活动，从专属性、检测限和定量限、精密度、线性关系、取样回收率验证了美
脲清洁验证检测方法的可靠性。并且根据该次验证的结果制定了《格列美脲清洁验证检测方

法标准操作规程》。提高实验室员工的分析问题解决问题的能力、增强了员工质量意识、创新

意识和凝聚力并充分调动了工作积极性、坚定了进行小组ＱＣ活动的信心。下一步我们小组
的ＰＤＣＡ循环定为“滴定法测定格列美脲片含量测定’’，以提高化验室检验效率及节约化验

室检验成本。