AISLAMIENTO, SELECCIÓN Y CONSERVACION DE LEVADURAS PURAS APARTIR DE

FLORA EPIFITICA DE FRUTILLA

ANTECEDENTES

 La ciudad de Neiva (Colombia) cuenta con diversidad de frutos tropicales, de los cuales el
pomorroso (Syzygium malaccense) es uno de los más abundantes y poco consumido. En
este estudio se aislaron y caracterizaron levaduras presentes en el fruto a partir de
muestras tomadas en diferentes puntos de la comuna. Para el recuento de UFC/g de fruto
se realizaron diluciones seriadas que posteriormente se cultivaron en agar papa dextrosa
(PDA) con gentamicina. La caracterización de los diferentes morfotipos se realizó mediante
descripción de las colonias en placa y de las células a microscopio. Además, se realizaron
pruebas fisiológicas y bioquímicas como la evaluación del crecimiento a 37° C y a
temperatura ambiente, y la asimilación de algunos azúcares simples; las levaduras aisladas
mantuvieron su viabilidad 6 meses después de mantenerse conservadas bajo capa de
aceite mineral. Los resultados obtenidos en este estudio pueden ser útiles para la
selección de levaduras de importancia en la industria biotecnológica. 1
 En el Departamento de Microbiología-III. Facultad de Ciencias Biológicas .Universidad
Complutense de Madrid. La industria enológica persigue la búsqueda continua de cepas de
levadura para el desarrollo óptimo de sus procesos de fermentación dirigidos. El
aislamiento de cepas autóctonas de levadura Saccharomyces cerevisiae se impone como
una opción muy favorable que nos permite complementar las ventajas del uso de
levaduras seleccionadas como inóculos frente a los procesos de fermentación espontánea,
con las propiedades más apreciadas de éstas aportadas por la microbiota autóctona
asociada a ellas. 2
 el estudio de aislamiento, selección e identificación de levaduras saccharomyces spp.
nativas de viñedos en querétaro, méxico se relalizo con el fin de mejorar la
comercialización ya que la comercialización es difícil por la falta de calidad y tipicidad. una
alternativa es tener levaduras nativas seleccionadas para aumentar el potencial de los
mostos y dar originalidad a los vinos. por tanto se estudió el aislamiento, selección con
base en su potencial enológico e identificación de levaduras saccharomyes nativas de
viñedos queretanos.El estudio reveló el potencial de levaduras nativas para su utilizacion .3

OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL

 obtener levaduras puras a partir de flora epifica de frutilla para tener una entidad que
comercialice en nuestro medio.

OBJETIVO ESPECIFICO

 Preparar el mosto estéril de uva

 Preparar el medio de cultivo agar malta
 Aislar levaduras mediante siembra de diluciones 1:10 en medio agar malta
 Purificar por resiembra
 Seleccionar levaduras puras mediante observación al microscopio.
 Aislar levaduras puras por agotamiento en medio agar malta
 Conservar levaduras puras sembrando por estriado en medio solido pico de flauta agar
malta.
Tabla:
OBJETIVO ESPECIFICO
O.E N°1 : Preparar el mosto estéril de uva
O.E N°2 : Preparar el medio de cultivo agar
malta
O.E N°3 : Aislar levaduras mediante siembra
de diluciones 1:10
O.E N°4 : Purificar por resiembra
O.E N°5 : Seleccionar levaduras puras
O.E N°6 : Aislar levaduras puras
O.E N°7 : Conservar levaduras puras
ACCIONES
-Triturar uvas sin lavar (mosto virgen de uva)
-Filtrar
-Hervir aprox. 2 min
-Colocar cascaras de frutilla
-agitar jarabe de malta
-Medir volumen necesario (350 ml)
-Pesar agar en la cantidad necesaria siendo
que la relación es por cada 100 ml de medio
de cultivo hay 1,7 gr de agar.
-Mezclar bien el medio de cultivo con agar
- calentar a ebullición 1-2 min
- luego dosificar en caliente a los tubos de
ensayo o cajas Petri
-llevar a cabo para esterilizar
- en 5 tubos colocar 9 ml de agua hervida fría
c/u.
-al primer tubo añadir 1 ml de mosto
fermentado y hacer dilución 1:10
-se toma una gota de la dilución en 1:10 de
los tubos 3 al 5 preferentemente
-sembrar en el medio de cultivo con la
técnica de radio para diseminar
- por repique seleccionar una parte de la
colonia de levadura
- colocarla sobre un portaobjetos que
contenga una gota de agua de ampolla y
mezclar.
- colocar el cubreobjetos
Observar al microscopio.
- identificar y seleccionar levaduras puras
posterior a observación en microscopio
- a partir del frasco que contiene la levadura
pura sembrar en el agar malta por
agotamiento.
- observar al microscopio
- las levaduras puras hacer un repique para
tomar la colonia
- de forma directa sembrar por estriado en
medio solido pico de flauta agar malta.
RESULTADOS

L= levaduras
B= bacterias (frasco candidato a desechar)
L-B= levaduras- bacterias
P=puras
M= mezclas

Frasco N°1 Frasco N°2 Frasco N°3 Frasco N°4

L-B= L-B
Frasco N°5 Frasco N°6 Frasco N°7 Frasco N°8
L-B L-B L-B L-B

Frasco N°9 Frasco N°10 Frasco N°11 Frasco N°12

L-B L-B L=
-M: redondas
pequeñas, elípticas
medianas, pequeñas.
Frasco N°13 Frasco N°14 Frasco N°15 Frasco N°16
L=
-M: elípticas,
ovoides, apiculadas,
alimonadas,
redondas pequeñas.
Frasco N°17 Frasco N°18 Frasco N°19 Frasco N°20
L-B L=
-M: elípticas,
alimonadas,
redondas medianas
Frasco N°21 Frasco N°22 Frasco N°23 Frasco N°24
L-B L-B L-B L-B
Frasco N°25 Frasco N°26 Frasco N°27 Frasco N°28
L= L-B L=
-M: elípticas, ovoides -P: redondas
pequeñas y
medianas, redondas
pequeñas, apiculadas
Frasco N°29
L-B

Segundo Aislamiento:

Frasco N°1 Frasco N°2 Frasco N°3 Frasco N°4

L= L= L= L=
-M: elípticas -M: -M: ovoide mediano
predominan, Ovoide pequeña, y pequeña.
redondas pequeñas mediana
Frasco N°5 Frasco N°6 Frasco N°7 Frasco N°8
L= L= L= L=
-M: ovoide -M: redonda -M: ovoide pequeña -M: ovoide mediana,
predomina, redonda mediana predomina, y mediana, redondas pequeña
pequeña,eliptica redonda pequeña, pequeñas.
ovoide,
apiculadaspequenas.
Frasco N°9 Frasco N°10 Frasco N°11 Frasco N°12
L= L= L= L=
-M: ovoide mediana -M:ovide pequeña -M: elípticas,ovoide -M: elípticas
predomina, ovoide predomina, ovoide mediana, redondas predomina , redonda
pequeña, redondas mediana, redonda pequenas. pequeña, alimonada.
pequenas , mediana, pequeña, eliptica.
eliptica
Frasco N°13 Frasco N°14 Frasco N°15 Frasco N°16
L= L= L= L=
-M:ovoide mediana, -M:ovoide mediana, -M: ovoides grandes, -M:ovoide mediana,
pequeña, redonda pequeña,elíptica medianas, pequenas, pequeña, redonda
pequena mediana, elípticas medinas y mediana, elíptica
pequeña,redonda pequenas, redondas. mediana , pequeña.
pequeña.
Frasco N°17 Frasco N°18 Frasco N°19 Frasco N°20
L= L= L= L=
-M:ovoide mediana -M: ovoide medianas, -M: alimonada, -M: ovoide mediana
predomina, ovoide elíptica mediana ovoide mediana y y pequeña.
pequeña. pequeña.
Frasco N°21 Frasco N°22 Frasco N°23 Frasco N°24
L= L= L= L=
-M: ovoide grandes -M: epliptica, ovoide -M: elíptica mediana -M: elíptica mediana,
predomina, ovoide pequeña y pequeña, ovoide ovoide mediana,
mediana, elíptica mediana, pequeña, pequeño, redonda
redonda pequeña.
Frasco N°25 Frasco N°26 Frasco N°27 Frasco N°28
L= L= L= L=
-M: ovoide grande, -M: ovoide mediana, -M:eliptica grandes, -M: ovoide mediana,
mediana, pequeña. alimonada, elíptica. mediana, pequeña, pequeño, elíptico
ovoide grande , mediana, pequeño,
mediana, pequeña, redonda pequeño.
redonda pequeña.
Frasco N°29 Frasco N°30 Frasco N°31 Frasco N°32
L= L= L= L=
-M: ovoide mediana , -M:ovoide mediana, -M: eliptica, ovoide -M:eliptica grande,
elíptico, alimonada pequeña. mediana, pequeña, mediana, pequeña,
redonda. ovoide grande ,
mediana, pequeña.
Frasco N°33 Frasco N°34 Frasco N°35 Frasco N°36
L= L= L= L=
-M: ovoide mediana, -M:ovoide mediana, -M: ovoide mediana, -M:ovoide mediana,
pequeña, eliptica pequeña, alimonada. pequeño. alimonada.
Frasco N°37 Frasco N°38 Frasco N°39 Frasco N°40
L= L= L= L=
-M: ovoide grandes, -M:ovoide mediana, -M: eliptica grande, -M:eliptica grande,
medianas, pequeñas, elíptica mediana, pequeña, ovoide mediana, pequeña,
elípticas medianas. pequeña, redonda mediana, pequeña. ovoide mediana,
mediana. pequeña, redonda
mediana
Frasco N°41 Frasco N°42
L= L=
-M: ovoide mediana, -M: ovoide mediana,
pequeña. pequeña.

Tercer aislamiento:

Frasco N°1 Frasco N°2 Frasco N°3 Frasco N°4

L= L= L= L=
-M: ovoide pequeña , -M: ovoide mediana, -M :ovoide mediana, -M: ovoide ,eliptica,
mediana, elíptica un pequeña. pequeña, grande redonda
poco
Frasco N°5 Frasco N°6 Frasco N°7 Frasco N°8
L= L= L= L=
-M: ovoide, redonda, -M: ovoide, redonda -M: ovoide pequeña, -M:ovoide pequenas,
eliptica eliptica eliptica.
Frasco N°9 Frasco N°10 Frasco N°11 Frasco N°12
L= L= L= L=
-M:ovoide pequeño, -M:ovoide mediana, -M:ovoide mediana, -M: ovoide mediano,
mediana, poco poco eliptica. pequeño. pequeño.
elípticas.
Frasco N°13 Frasco N°14 Frasco N°15 Frasco N°16
L= L= L= L=
-M: ovoide mediana, -M: ovoide mediano, -M:ovoide mediano, -M:eliptica, ovoide
elíptica pequeño, elíptico. pequeño, redondo. mediano, redondo.
Frasco N°17 Frasco N°18 Frasco N°19 Frasco N°20
L= L= L= L=
-M: ovoide mediana, -M: ovoide mediana, -M: ovoide mediana, -M: predomina
elíptica. elíptica, redondas. eliptica. ovoide
Frasco N°21 Frasco N°22 Frasco N°23 Frasco N°24
L= L= L= L=
-M: ovoide pequeño, -M: eliptica, ovoide -M: ovoide mediana, -M: predomina
redondo, elíptica. mediana. eliptica. ovoides.
BIBLIOGRAFIA

1. Trujillo L. ,Echeverry s. Aislamiento y caracterización de levaduras presentes en el

fruto del Syzygium malaccense (l.) Merr. &L.M Perry (pomorroso) en la comuna 1 de la ciudad
de Neiva- Huila. Revista Ingeniería y Región. 2015;13(1):37-45
disponible en: https://dialnet.unirioja.es/descarga/articulo/5432278.pdf

2.Belda, I., Navascués, E., Alonso, A., Marquina, D., & Santos, A. (2014).
Microbiología del proceso de vinificación: selección de levaduras Saccharomyces
cerevisiae autóctonas con óptimas propiedades enológicas. REDUCA (Biología), 7(1).

3.Disponible en: http://www.scielo.org.mx/pdf/agro/v49n7/v49n7a5.pdf.