Practica N°10

Enzima Amilasa
I. Objetivo
Determinar la actividad enzimática de la amilasa.
II. Fundamento teórico
La α-amilasa es una enzima proteica que se encuentra en la saliva humana y cataliza la degradación del
almidón, que es un polisacárido de reserva vegetal. El almidón está formado por dos tipos de moléculas: la
amilosa y la amilopectina, ambos polisacáridos de glucosa. La amilosa se conforma por cadenas lineales de
glucosas unidas por enlaces α- C1-C4, mientras que la amilopectina tiene, además de estos últimos enlaces,
uniones C1 con C6, formando cadenas ramificadas. La α-amilasa rompe uniones C1-C4, tanto en la amilasa
como en la amilopectina, dejando dextrinas lineales y ramificadas (oligosacáridos) como productos. Para
medir la actividad enzimática de la α-amilasa, se utilizará un test colorimétrico que detecta el almidón. Para
ello se contará con una solución de iodo/ioduro de potasio (I 2 /IK), ya que el almidón en presencia de esta
solución adquiere una coloración azulada característica. Esto tiene una explicación física: el iodo se coloca
en el interior de la hélice que forma la amilosa (en las regiones hidrofóbicas), formando un complejo de
color azul. Cuando la α-amilasa actúa, degrada la amilosa, se desintegra la hélice y por tanto en presencia
de I 2 /IK ya no dará una coloración azul. Por lo tanto, en este TP mediremos la desaparición de sustrato
(evidenciada por el test colorimétrico) para determinar la actividad de la enzima. Además, analizaremos
cómo afectan las distintas condiciones en que actúa la enzima (pH, temperatura, concentración de NaCl),
así como los efectos que pueden causar diferentes retratamientos (proteinasa, calor). La dilución óptima nos
indicará cuánto debemos diluir la saliva para que se logre el efecto acromático dentro del rango propuesto
(8-15 minutos).
III. Materiales y reactivos
Materiales:
 8 tubos de ensayo.
 Mechero bunsen.
 Mortero (triturador)
 Varrilla de vidrio.
 Vaso de precipitado
Reactivo:
 Agua destilada,
 Almidon.
 Lugol
 Felling A – celeste.
 Felling B – transparente.
IV. Parte experimental
Prueba N°1: Solución almidón

5 gotas de almidón a cada tubo ensayo.

Prueba N°2: Solución con papa.

 Primero triturar la papa (aprox. 5g) para volverla una pasta y repartirlo en cada tubo.

Después.

PASO N° 1:
  Machacar la papa hasta hacer una pasta..
 Poner la papa machacada en 4 tubos de ensayo. (P1)
 Poner Almidon de Yodometria en 4 tubos de ensayo. (P2)
 Agregar saliva a los tubos 3 y 4 de P1 y P2.
 Llevar a baño Maria los tubos 3 y 4 de P1 y P2 por 15 minutos.

P1: PAPA .

5g 5g 5g Observacion:La reaccion resulto POSITIVA, ALTO de almidon.

1
.
FA . FB . Lugol.
Color: Celeste con burbujas Blancas.

2 5g 5g Observacion: contiene altas cantidades de Almidon.

. FA . FB .
Color: Morado Oscuro Claro
BAÑO MARIA :

3 5g 5g saliva. Observacion:POSITIVO, el almidon se convierte en glucosa con la saliva.

. FA . FB .
Color: rojo ladrillo, amarillo, verde.
saliva.
4 5g 5g Observacion: Negativo, debido al lugol.
.
FA . FB .
Color: Rojo ladrillo (Naranja Intenso.)

P2: ALMIDON

5g 5g Observacion:el reactivo se quedo en el fondo del tubo y no se mezclo, no tiene mucho almidon
1
FA . FB .
. Color: AZUL
5g Observacion: POSITIVO, el almidon se convierte en glucosa con la saliva.
2 5g 5g
.
. FA . FB . Lugol
Color: morado
BAÑO MARIA:
3 5g 5g saliva. Observacion: POSITIVO, el almidon se convierte en glucosa con la saliva.
.
FA . FB .
Color: rojo ladrillo. (Naranja Intenso.)
4 saliva. Observacion: no contiene mucho almidon. Se precipito solo un poco
5g 5g
.
FA . FB .
Color:CELESTE

V. Conclusiones y recomendaciones.
Aprendimos que la acción de la enzima amilasa sobre el almidón se puede observar o más bien deducir por
medio de nuestros reactivos auxiliares; el lugol nos permitió identificar la presencia de almidón tomando un
color azul marino o violeta, mientras que el Felling nos permitió identificar la presencia de azucares simples
al obtener un color rojo ladrillo o naranja.

VI. Cuestionario
2: