UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO INGENIERÍA

AMBIENTAL

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA
ESCUELA DE INGENIERÍA AMBIENTAL

“EVALUACIÓN DE LA CAPACIDAD DEGRADATIVA DE

MICROORGANISMOS”

CURSO
BIOTECNOLOGIA AMBIENTAL

SECCIÓN
B
RESPONSABLES

CAMPOS SANDOVAL, Osbel

NIQUIN CASTILLO, Elías
QUIROZ LOPEZ, Yesy

Trujillo – Perú
2019

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Contenido
I. INTRODUCCIÓN .................................................................................................... 4
II. OBJETIVOS ............................................................................................................. 5
III. ATERIALES Y METODOS ................................................................................. 5
3.1. Materiales ........................................................................................................... 5
3.2. Método ............................................................................................................... 5
IV. RESULTADOS ..................................................................................................... 6
V. DISCUSION ............................................................................................................. 6
VI. CONCLUSIONES ................................................................................................. 7
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS .................................................................. 8
VIII. ANEXOS ........................................................................................................... 9

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I. INTRODUCCIÓN
Metabolismo de carbohidratos
Para realizar un trabajo químico tan complicado los microorganismos necesitan
captar del exterior sustancias química como los carbohidratos, proteínas y lípidos,
etc, que necesariamente deben ser incorporados a los medios de cultivo.
Como fuente de carbono los microrganismos pueden utilizar monosacáridos como
glucosa, disacáridos como la sacarasa, maltosa, etc. Y polisacáridos como
almidón celuloso, etc. La capacidad de utilizar o no un determinado sustrato
dependen de la presencia o no de las enzimas específicas que están gobernadas
genéticamente.
La glucosa es un monosacárido que es utilizado por la mayoría de los
microorganismos, cuando es incorporado a un medio de cultivo puede ser
metabolizada por diferentes vías metabólicas y derivar fácilmente en la
producción de ácidos y/o gas.
El almidón es un polímero de glucosa y es usado como fuente de carbono por
aquellos microorganismos que tienen capacidad de hidrolizarlos en sustancias
simples y asimilables. Esta capacidad está gobernada genéticamente por la síntesis
o no de las amilasas que son enzimas producidas por ciertos microrganismos
cuando crecen en presencia de almidón.
Metabolismos de proteínas
Existen microorganismos que son muy activos frente a ciertos compuestos. Los
proteolíticos, se caracterizan por ser degradadores de proteínas en forma mas
activa que otras; de igual manera los amilolíticos, los lipolíticos, hemolíticos, etc.;
que se comportan como proteolíticos debido a que tienen un sistema enzimático
muy versátil.
La degradación se puede demostrar por la aparición de unidades monoméricas
derivados de los compuestos poliméricos, así, de las proteínas, se obtendrán
aminoácidos, y a partir de estos derivados como indol, escatol, ácido sulfhídrico,
amoniaco etc.
Metabolismo de los lípidos
El proceso de degradación de los lípidos se llaman lipolisis. Las grasas pertenecen
a los lípidos donde también se incluyen fosfolípidos y esteroles.
Las enzimas denominadas lipolíticas o lipasas son las encargadas de la
degradación de lípidos las cuales son moléculas insolubles en agua. Este tipo de
enzimas revisten de gran importancia en la industria por sus múltiples
aplicaciones debido a que llevan a cabo la degradación de sustratos con alto
contenido graso, así como en reacciones de esterificación en la industria
alimenticia, farmacéutica y cosmética. Las lipasas han sido encontradas en
muchas especies de animales, plantas y microorganismos. Sin embargo, las
lipasas microbianas son mucho más versátiles y presentan características
interesantes como estabilidad en solventes orgánicos, actividad bajo diversas
condiciones, alta especificidad de sustrato, así como regio y enantio selectividad
Los microorganismos con alto potencial para producir lipasas pueden ser
encontrados en diferentes hábitats, principalmente en desechos o residuos de
aceites vegetales empleados en la elaboración de frituras, industrias de productos
lácteos, suelos contaminados con aceites y alimentos deteriorados.

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II. OBJETIVOS
• Observar e interpretar las diferentes reacciones metabólicas de los
microorganismos en sustratos específicos.
• Explicar la formación del halo en el metabolismo de carbohidratos
(almidón).
• Evaluar la degradación de compuestos nitrogenados mediante la prueba de
aminoácidos (indolisis).
• Evaluar el metabolismo de lípidos en Agar lecitina.
• Identificar las diferentes fuentes para aislar ciertos microrganismos de
acuerdo con la materia orgánica que se desea biodegradar.

III. ATERIALES Y METODOS

3.1. Materiales
• Material de vidrio
- Placa Petri
- 4 tubos de ensayo
- Mechero
• Material biológico
- E. coli
- Bacillius
- Pseudomona sp
• Medios de cultivo
- Agar almidón
- Agar lecitina
-
• Reactivos
- Lugol fuerte
- Reactivo de kovac´s

3.2. Método

Medio para evaluar la degradación de carbohidratos:

• Se sembró dos microorganismos, Staphylococcus aureus y Basillus sp, en medio
de cultivo de agar almidón soluble.
• El método de siembra que se utilizo fue por puntura.
• Para evaluar que los microorganismos han degradado el almidón agregamos el
yodo y en la placa Petri y si esta se torna de color azul lo evidenciara.
Medio para evaluar la degradación de lípidos:
• Para aislar las bacterias que degradan lípidos se deben buscar donde hay fuentes
de grasas.
• Se sembró microorganismos del cuero cabelludo, ya que estos tienen capacidad
de hidrolisis de lípidos.
• El medio de cultivo que se utilizo fue agar lecitina.

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• La degradación de los lípidos se evidencia por la formación de unos halos de
proteólisis alrededor de la colonia.
Medio para evaluar la degradación de compuestos nitrogenados:
• Al degradarse las proteínas estas se transforman en aminoácidos. se realiza la
prueba de indolisis o prueba del aminoácido.
• Dos microorganismos producen compuestos indolicos, se evaluó si las
Pseudomonas sp y E. coli reducen al nitrato a nitrito, usando un medio de caldo
peptonado, esta reducción se evidencia por una coloración roja.
• Para evaluar la reducción de nitrato a nitrito se hace una prueba de indol se agrega
el reactivo de Kobacs.

IV. RESULTADOS
Se obtuvieron los siguientes resultados:
1. Degradación de carbohidratos: En la placa de evaluación de metabolismo
de almidón se observó que alrededor la colonia de Bacillus sp. se formo el
halo de hidrolisis.

Microorganismo Metabolismo de carbohidratos

Bacillus sp. ✓
Staphylococcus aureus.

2. Degradación de lípidos: En la placa que se evaluó la hidrolisis de la yema de

huevo y se observó la formación del halo de lipolisis, pero también se formo
el halo de proteólisis.
3. Degradación de compuestos nitrogenados: Para calificar si hubo una
reducción de nitrato a nitrito se agregó el reactivo de kobacs se observó la
coloración roja en el tubo de ensayo en el cual se inoculó Escherichia coli,
mientras que en el tubo de ensayo en el cual se inoculó Pseudomonas sp. no
se observó dicha coloración.

V. DISCUSION
Degradación de carbohidratos:
• En la placa para evaluar la degradación del almidón se observó que
alrededor de la colonia de Bacillus sp. se formó el halo de hidrolisis, esto
indica que este microorganismo produce enzimas hidrolasas, así, hidroliza
el almidón.
Degradación de lípidos:
• En la placa que se evaluó la hidrolisis de la yema de huevo y se observó la
formación del halo de lipolisis, esto indica la degradación de lípido hasta
acido graso. Y el segundo halo que se observa corresponde al halo de
proteínas ya que en la yema de huevo también se encuentran proteínas.
Degradación de compuestos nitrogenados:
• Al agregar el reactivo de kovacs se observó la coloración roja en el tubo
de ensayo en el cual se inoculó Escherichia coli, esto significa que el
nitrato fue reducido a nitrito.

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𝑁𝑖𝑡𝑟𝑎𝑡𝑜 𝑟𝑒𝑑𝑢𝑐𝑡𝑎𝑠𝑎 𝑁𝑖𝑡𝑟𝑖𝑡𝑜 𝑟𝑒𝑑𝑢𝑐𝑡𝑎𝑠𝑎
𝐾𝑁𝑂3 → (𝑁𝑂3 )− + 2ⅇ − + 2𝐻 + → (𝑁𝑂2 )− + peter gries

En el caso de las Pseudomonas sp. no se observó la coloración roja debido

a que lleva el nitrato a nitrógeno molecular (N2).

VI. CONCLUSIONES
• Se concluye que es posible aislar microorganismos de diferentes fuentes
de acuerdo con la materia orgánica que se desee metabolizar y/o degradar.
• Se logró identificar las diferentes reacciones metabólicas de los
microorganismos en sustratos específicos.
• Se explicó la formación del halo en el metabolismo de carbohidratos
(almidón).
• Se evaluó la degradación de compuestos nitrogenados mediante la prueba
de aminoácidos (indolisis).
• Se evaluó el metabolismo de lípidos en Agar lecitina.
• Se identificó las diferentes fuentes para aislar ciertos microrganismos de
acuerdo con la materia orgánica que se desea biodegradar.

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VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
• Alva, E., Metabolismo de los carbohidratos. 2013.
• Alva, E., Metabolismo de proteinas. 2013.
• Van Der Walle N. Über synthetische Wirkung bakterieller lipasen. Cbl
Bakt Parasitenk Inktionskr.
• Ferrer P, Montesinos JL, Valero F, Sola C. Production of native and
recombinant lipases by Candida rugosa. Appl Biochem Biotechnol.

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VIII. ANEXOS

Ilustración 1: lugol fuerte.

Ilustración 2: alcohol yodado

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Ilustración 3: mechero.

Ilustración 4: tubos conteniendo E. coli y Pseudomonas sp.

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Ilustración 5: Evidencia de bacterias que degradan lípidos.

Ilustración 6:se evidencia que donde se sembró Basillus ocurrió degradación del almidón.

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Ilustración 7: colonias de Staphylococcus aureus y Basillus sp., para la evaluación del metabolismo de
carbohidratos.

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