MÉTODOS DE ESTUDIO DE LAS

ENTEROPARASITOSIS
2 IMPORTANCIA

 Diagnóstico de enteroparasitosis sintomáticas,

asintomáticas.
 Diagnóstico diferencial de infecciones entéricas.
 Diagnóstico diferencial con otras patologías del
aparato digestivo.
 Tratamiento específico.
 Valoración de respuesta al tratamiento.
 Prevención.
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3
DIAGNÓSTICO
DE ENTEROPARASITOSIS

ETAPAS DEL DIAGNÓSTICO

Pre-analítica
Analítica
Post-analítica

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4
DIAGNÓSTICO DE
ENTEROPARASITOSIS
MÉTODOS DIRECTOS:
 Coproparasitario

 Coloraciones

 Método de Graham - Espátula adhesiva

 Sondeo Duodenal

 Biopsia duodenal

 Coproantígenos

MÉTODOS INDIRECTOS:
 En suero: anticuerpos séricos

 Amibiasis invasiva, estrongiloidiasis,fasciolosis,esquistosomiasis, etc

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 ETAPA PRE-ANALÍTICA

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6 ETAPA PRE-ANALÍTICA

Indicaciones del examen parasitario

 Pacientes con sintomatología sugestiva; pacientes asintomáticos con

antecedentes epidemiológicos relevantes; control o control post-tratamiento

Solicitud del examen parasitario

 Datos filiatorios del paciente

 Datos clínicos (síntomas y signos, diagnóstico clínico presuntivo)

 Antecedentes personales: inmunosupresión, viajes al exterior

 Antecedentes familiares

 Antecedentes ambientales (agua potable, saneamiento)

 Tratamientos previos anti diarreicos, antiparasitarios, antibióticos etc.

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7 ETAPA PRE-ANALÍTICA

Indicación de Régimen alimentario

 48 a 72 hs antes de realizarse el estudio (libre de frutas,

verduras y grasas dado que estas preparaciones obstaculizan
la visualización microscópica lo que puede conducir a
resultados Falsos Negativos o Falsos Positivos).

 Necesario?

Emisión

 Espontánea.

 No en período menstrual, ni posterior a realización de

estudio radiológico con bario.
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8 ETAPA PRE-ANALÍTICA

Muestra de materia fecal

 Aproximadamente 50 grs (tamaño de una nuez) si heces formadas,

o 10 a 15 ml si heces líquidas.

 Rotular adecuadamente.

 En recipiente de boca ancha, transparente y con tapa de rosca.

 Emitidas recientemente o conservadas en heladera hasta 24 horas.

 Evitar contaminación con orina para evitar deterioro de los

parásitos.

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 ETAPA ANALÍTICA

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10
COPROPARASITARIO
DEFINICIÓN
 Conjunto de técnicas diagnósticas complementarias que permiten la
identificación de la mayoría de las enteroparasitosis causadas por
protozoarios y helmintos intestinales o de aquellos que si bien tienen
una localización tesidual sus huevos se eliminan en las materias fecales.
 Se debe tener en cuenta a la hora de su indicación que esta
metodología es útil para protozoarios y helmintos cuyas formas
evolutivas se eliminan con las materias fecales:
 Trofozoítos
 Quistes
 Ooquistes
 Huevos
 Larvas
 Adultos
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 11 EXAMEN COPROPARASITARIO
SERIADO
 Se considera que muestras únicas solo permiten un diagnóstico positivo en
un 60% aprox. de las materias fecales con parásitos (debido a que en los
ciclos de los parásitos alternan períodos negativos de eliminación de
quistes) *

 Esquemas sobre la secuencia de recolección de materia fecal para realizar el

examen coproparasitario. Los más usados son:

 3 muestras seriadas en días alternos

 3 muestras separadas por intervalos de una semana entre sí

* Manual de Toma de muestras para estudio Bacteriológico y Micológico.

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Departamento de Laboratorio Clínico. Hospital de Clínicas. 2004.
12 EXAMEN MACROSCÓPICO

 Consistencia: moldeada, pastosa, semilíquida, inhomogénea

 Color: marrón, amarillo, macilla, negruzco, verdoso
 Olor: “sui generis”, fétido, butírico
 Presencia de elementos anormales: sangre, mucus, pus
 Presencia de seudoparásitos
 Búsqueda de parásitos macroscópicos

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13 EXAMEN MACROSCÓPICO

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 14 EXAMEN MACROSCÓPICO

 En el caso de hallar proglótides de Taenia:

 Dejar en agua destilada durante 24hs
 Colocar el segmento sobre un recuadro de papel
 Comprimir entre dos láminas
 Observar las ramificaciones del útero
 También se pueden teñir con Carmín Clorhídrico

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15 EXAMEN MICROSCÓPICO

 Examen directo de una pequeña porción de heces frescas

 Examen después de aplicar un método de concentración

 Examen de frotis o preparaciones permanentes

EXAMEN DIRECTO

 Suero Fisiológico

 Lugol
 Objetivo 10 x
 Objetivo 25-40 x
 Habitualmente no se emplea objetivo de inmersión
 Importante: No diluir demasiado las muestras
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16 EXAMEN MICROSCÓPICO

DIRECTO EN FRESCO CON SUERO FISIOLÓGICO Y LUGOL

Inconvenientes:
 Escaso material, por lo que es necesario la realización de técnicas
de Enriquecimiento o Concentración (Ritchie, Faust, Sheater)

Ventajas:
 Movilidad de trofozoítos, células intestinales, células inflamatorias,
mala absorción.

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 17
MÉTODOS DE ENRIQUECIMIENTO
O CONCENTRACIÓN

Aumentan el número de parásitos a partir de un volumen conocido.

Procedimientos por
Sedimentación
Procedimientos por Flotación

Procedimientos Biológicos

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18
TÉCNICAS DE ENRIQUECIMIENTO
O CONCENTRACIÓN
MÉTODOS FÍSICOS

o Dilución minuciosa de heces en líquido o solución de densidad:

o Inferior a la de los parásitos (Técnicas de sedimentación)

o Superior a la de los parásitos (Técnicas de flotación)

o Ventajas:
o Realización muy simple
o Precisan poco material

o Inconvenientes:
o Procesos largos
o Exigen mucha manipulación
o No aplicables a series grandes de muestras

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19 MÉTODOS FÍSICOS

SEDIMENTACIÓN SEDIMENTACIÓN -
SIMPLE CENTRIFUGACIÓN
• Espontánea • Ritchie (formol-éter)
• Telemann (éter-
ácido clorhídrico)
• Carles y Barthélémy
(éter-ácido cítrico)

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 TÉCNICAS DE ENRIQUECIMIENTO
20
POR SEDIMENTACIÓN
 Basados en la utilización de suero fisiológico (SF) y otras soluciones de
baja densidad.

 Se recuperan huevos, larvas, ooquistes y quistes del fondo de un tubo

en el que se depositan por ser más densos.

SEDIMENTACIÓN SIMPLE
 Lentos y poco prácticos

 Mayor utilidad para huevos de trematodos

SEDIMENTACIÓN /CENTRIFUGACIÓN
 Se destaca el método de Ritchie (con formol y éter o acetato de etilo),
que es el más usado en los laboratorios de nuestro medio

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21 SEDIMENTACIÓN SIMPLE
o Homogeneizar 2 a 5 gr de heces (10-20 gr) en 10 ml de SF o agua.
o Colocar la dilución en tubo cónico de 50 ml, filtrando a través de gasa.
o Completar el volumen con SF o agua de la canilla.
o Agitar y dejar reposar por 45 minutos.
o Desechar sobrenadante.
o Resuspender con SF o agua de la canilla.
o Dejar sedimentar 45 minutos.
o Desechar sobrenadante.
o Repetir esta operación varias veces, hasta que el sobrenadante quede
transparente.
o Tomar con pipeta el material sedimentado.
o Hacer tres tomas:
o Superficie
o Media altura
o Fondo ASIST.DRA.MARÍA JOSÉ CABRERA Sensibilidad 55%
 22
MÉTODO DE RITCHIE
SEDIMENTACIÓN-CENTRIFUGACIÓN
o Homogeneizar materia fecal con SF (aprox. 25 ml).
o Filtrar suspensión por embudo con triple gasa a tubo de centrífuga de fondo
cónico.
o Centrifugar a 2300 rpm por 1 min, descartar sobrenadante, resuspender con SF
y agitar con varilla de vidrio.
o Centrifugar nuevamente a 2300 rpm por 1 min, repitiendo hasta 3 veces o hasta
obtener un sobrenadante límpido.
o Agregar al sedimento obtenido 3 a 5 ml de formol al 10%, homogeneizando con
varilla o pipeta Pasteur.
o Dejar reposar por 5 min con fines de fijación.
o Agregar 1 ml de éter o acetato de etilo, agitar vigorosamente el tubo tapado
para extraer las grasas.
o Centrifugar tubo a 1500 rpm durante 2 min.
o Descartar sobrenadante y limpiar la boca del tubo con hisopo de algodón.
o Tomar con pipeta el sedimento obtenido .
o Depositar sobre lamina y laminilla con SF y lugol parasitológico.
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23 MÉTODO DE RITCHIE

Éter
Restos vegetales y
grasa

Formol 10%

Sedimento (Parásitos)

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24 EQUIPOS COMERCIALES DE
SEDIMENTACIÓN - CENTRIFUGACIÓN

Aspectos comunes Diferencias

• Unidades de • Tubos
filtración • Con o sin
• Limpios conservantes
• Bioseguridad • Con o sin
surfactante
• Cucharitas
• Hisopos
• Bolsas

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 25 FECAL PARASITE CONCENTRATOR
JUMBO EVERGREEN ®

• Remplaza embudo y gasa.

• Los orificios del filtro permiten pasar larvas, huevos, quistes y retienen la mayor
parte de los desechos fecales.
• Surfactante Tritón x-100, disuelve y disgrega las heces y el mucus.
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 TÉCNICAS DE
26
ENRIQUECIMIENTO POR
FLOTACIÓN
FLOTACIÓN -
FLOTACIÓN SIMPLE
CENTRIFUGACIÓN
• Bass • Faust (Sulfato de Zinc)
• Sheater modificado
(azúcar). Para
coccidios
• Bailinger (Éter y
Sulfato de Zinc)
• Quinn (Sulfato de
Magnesio)

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 TÉCNICAS DE CONCENTRACIÓN
27
FLOTACIÓN
Los elementos parasitarios se recogen de la superficie de un
líquido denso al cual ascienden por su menor peso
específico. Película
superficial
Características a considerar:
Densidad solución empleada, densidad de parásitos,
concentración en superficie.
Importante:
• Manipular rápidamente
• Posible alteración en la morfología
de los huevos
Sulfato Zinc

Sedimento

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 MÉTODO DE BAERMANN
28
TÉCNICAS BIOLÓGICAS DE
CONCENTRACIÓN

 Basados en el conocimiento
del ciclo vital del parásito

MÉTODO DE BAERMANN
 Apropiado para el diagnóstico de
Estrongiloidiasis (aprovechando la
termofilia e hidrofilia de las larvas
de Strongyloides stercoralis)

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 MÉTODO HARADA - MORI
29
TÉCNICAS BIOLÓGICAS DE
CONCENTRACIÓN

 Busca embrionar huevos de

trematodes y cestodes.

 Larvas de nematodes.

 Strongyloides stercoralis

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 30
TÉCNICAS PARA RECUENTO
DE HUEVOS

 Intensidad de infección de helmintos transmitidos por el suelo.

 Cuantifican el número de huevos por gramo de materia fecal.

 Recuento en placa microscópica.

 Técnica de Kato – Katz.

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31 COLORACIONES

Coloraciones temporarias
 Lugol, Clorazol, Tionina

Coloraciones permanentes (Frotis)

 Ziehl Neelsen modificado o Kinyoun para diagnóstico de
coccidiosis intestinales (Criptosporidiosis, Isosporosis,
Ciclosporosis)
 Hematoxilina Férrica para amibiasis

 Tricrómica y Gram Cromotrope para microsporidiosis

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32
COLORACIÓN DE KINYOUN
ZIEHL NEELSEN MODIFICADO EN FRÍO
 PARA COCCIDIOS INTESTINALES
 Fijación frotis: Metanol por 30 seg

 Tinción: 5 min (frío) con solución de Fucsina básica

 Fucsina básica 4 g
 Fenol 8 g
 Etanol (95%) 90 ml
 Agua destilada 100 ml

 Lavado
 Etanol 50%: 3-5 min
 Agua corriente

 Decoloración: Ácido sulfúrico 1% por 2 min

 Contracoloración: Verde de Malaquita o Azul de Metileno por 1-2 min

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 OTROS EXAMENES DIRECTOS
33
PARA DIAGNÓSTICO DE
ENTEROPARASITOSIS
EXAMEN DIRECTO DE LÍQUIDO DUODENAL
o Se obtiene por sondeo duodenal o con cápsula entérica o test del cordón o
“Enterotest”
o Observación

o Fresco (directo o tras centrifugación)

o Frotis coloreados

o Utilidad / Rendimiento
o Trofozoítos de Giardia lamblia
o Ooquistes de Isospora y Cryptosporidium
o Huevos de Fasciola hepatica
o Larvas de Strongyloides stercoralis
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34
ELEMENTOS NO PARASITARIOS
EN LAS HECES
o Restos alimenticios semi-digeridos

o Células epiteliales (mucosa intestinal)

o Células sanguíneas
• Leucocitos (úlceras intestinales)
• Macrófagos  amebas patógenas
• Hematíes

o Bacterias

o Hongos
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35
ELEMENTOS NO PARASITARIOS
EN LAS HECES
Restos alimenticios
o Tejido conjuntivo
o Fibras musculares estriadas (carne)
o Grasas neutras  Glóbulos refringentes tamaño variable
o Ácidos grasos  Agujas finas
o Almidón
o Crudo: Granos en capas concéntricas
o Células reserva amilácea
o Celulosa
o Digerible: Masas celulósicas (células reserva)
o No digerible: Traqueadas, pelos vegetales, polen etc.

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36
ELEMENTOS NO PARASITARIOS
EN LAS HECES

Cristales
o Origen alimentario (oxalato de calcio)
o Endógeno (Ox. calcio, fosfato amónico-
magnésico, Charcot-Leyden)
o Medicamentos

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 37
MÉTODO DE ESPÁTULA ADHESIVA
TÉCNICA DE GRAHAM
o Oxiurosis o Enterobiosis (Enterobius vermicularis)
o Observación microscópica del material recogido de la zona perianal, por aplicación de
una superficie adhesiva.

o La cinta se dispone sobre un soporte rígido, con la superficie adhesiva hacia el exterior.

o Se aplica varias veces sobre la piel de la región perianal sin introducir en el recto.

o Se envía al laboratorio y se observa al microscopio (10X).

IMPORTANTE
o Realizar la toma de muestra a 1ª hora por la mañana, antes de levantarse de la
cama, durante 3 mañanas consecutivas

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38 MÉTODO DE GRAHAM
DIAGNÓSTICO OXIURIOSIS

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 ETAPA POST-ANALÍTICA

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40 ETAPA POST-ANALÍTICA

 Validación
 Informe correcto de los resultados
 Importancia de la buena comunicación con
el médico clínico
 Observaciones, orientaciones y sugerencias

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41 METODOLOGÍA
COLORACIONES MACROSCÓPICO
• Ziehl Neelsen • Nematodes
• Tricrómica • Platelmintos
• H. férrica

ENRIQUECIMIENTO COPROPARASITARIO COPROANTÍGENOS

• Quistes de patógenos: • G. lamblia

• Primarios • Crypto. spp
• Oportunistas • E. histolytica
• Discutidos
EXAMEN DIRECTO
• Huevos
• Larvas • Trofozoítos
• B. hominis

ESPÁTULA ADHESIVA

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42 ORIENTACIÓN CLÍNICA
EOSINOFILIAS:
CPs+EA

DOLOR
ABDOMINAL: SÍNTOMAS
CPs+EA INESPECÍFICOS:
CP+EA

DIARREA
CUADROS CLÍNICOS
DIARREA DEL VINCULADOS A
CRÓNICA CON
ADULTO: CP ENTEROPARASITOSIS MALABSORCIÓN:
CPs+CAg

DIARREA AGUDA
DIARREA DEL INFANTIL,DIARRE
VIAJERO: CP+ZN A PROLONGADA:
CP+ZN
INMUNODEPRIMI
DOS CON
DIARREA:
CPs+ZN+TRIC+CA
g+CAcp

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43

MUCHAS GRACIAS

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