ESPECTROSCOPIA DE

FLUORESCENCIA MOLECULAR
FLUORESCENCIA
 Espectroscopia de Fluorescencia Molecular (EFM)

Fluorímetro
Espectroscopia de Fluorescencia Molecular (EFM)

filter

Fluorímetro
LÁMPARA DE MERCURIO

Longitud de onda
Color
(nm)
184,9499 ultravioleta (UVC)
253,6517 ultravioleta (UVC)
296,7280 ultravioleta (UVC)
365,0153 ultravioleta (UVA)
404,6563 violeta
435,8328 violeta-azul
546,0735 verde
1013,976 infrarrojo

Líneas de emisión de una lámpara de Mercurio.

 Especies Fluorescentes
 Compuestos con grupos C=O , dobles enlaces (C=C)
 Hidrocarburos aromáticos no sustituídos

* Heterociclos (piridina, furano, tiofeno y pirrol ) NO presentan fluorescencia

Compuesto Λ (nm)
Excitación Emisión
Benceno 270 - 310
Tolueno 270 - 320
Clorobenceno 275 - 345
Fenol 285 - 365

Anillos bencénicos fusionados

(quinoleína, isoquinoleína, indol)
ESPECTROSCOPIA ATOMICA BASADA EN LA
ATOMIZACIÓN CON LLAMA Y
ELECTOTÉRMICA
Esquema de un Espectrofotómetro de Absorción
Atómica de Llama
Espectrofotómetro de Llama de haz sencillo
Fuentes de Radiación para Absorción Atómica

Función: Excitación de iones atomizados

Tipo fuente: Línea

Hecho del metal que

se desea analizar
Fuentes de Radiación para Absorción Atómica
Atomizador para Absorción Atómica de Llama
Nebulizadores para Absorción Atomización con Llama
Espectrofotómetro de
Absorción Atómica de
Llama
Atomizador para Absorción Atómica Electrotérmica

1. Secado: evaporación de
muestra (baja temperatura)

2. Calcinación: T° media

3. Atomización: 2000-3000 °C
Espectroscopía Atómica basada en la Atomización
Electrotérmica
APLICACIONES:

 Análisis de más de 60 elementos químicos (metales o

metalóides)
 Agua, suelos, alimentos, tejidos animales, sangre, plantas,
derivados del petróleo, minerales,…

LÍMITES DE DETECCIÓN

- 1 a 20 ppb (atomización con llama)

- 0,002 a 0,01 ppb (atomización electrotérmica)

EXACTITUD

- Error = 1 - 2% (llama)
- Error = 5 – 20% (electrotérmica)
PREPARACION DE LA MUESTRA

- La muestra debe estar líquida Requiere tratamiento previo

- Tratamiento con ácidos en caliente (HCl, H2SO4, HNO3)
- Oxidación
- Combustión
- Digestión a elevada T°

* Algunos materiales pueden atomizarse directamente

(atomización electrotérmica)

CALIBRACIÓN

- Debe calibrarse cada vez que se vaya a analizar

 Método de adición estándar
ESPECTROSCOPIA ATÓMICA DE EMISIÓN
BASADA EN LA ATOMIZACIÓN CON
PLASMA
Esquema general de un Espectrofotómetro de Emisión Atómica
de Plasma Acoplado Inductivamente- ICP-AES
Espectroscopía Atómica de Emisión de Plasma (ICP-AES)
Plasma: Mezcla gaseosa conductora de electricidad
con alta concentración de iones y cationes (su carga
neta es cero)- Ar, e- y M+ (muestra)
T° 10000 K

* campo de radiofrecuencias (plasma

acoplado inductivamente- ICP)
Campo
magnético
 El Ar fluye a 11-17 L/min

 La bobina es refrigerada con agua y

ANTORCHA alimentada por un generador de
radiofrecuencias (2Kv a 27MHz)

 Los iones interaccionan con el campo

magnético Trayectorias anulares

 Calentamiento (resistencia a este mov.)

 El flujo tangencial enfría las paredes del

tubo y centra el plasma (5 a 15 L/min)
 AES-ICP

 Núcleo: (blanco, brillante intenso)

Emisión de iones Ar+

 Entre 10 y 30 mm por encima del

núcleo la emisión de Ar se desvanece

 Las mediciones de elementos se

hacen entre 15 a 20 mm por encima
de la bobina de inducción.

 Función: Atomización y Excitación

 T° de atomización: 6000 K

 Atomización mas completa que en

AES con llama

 Calibración lineal en amplio rango

 Espectroscopía Atómica de Emisión de Plasma (ICP-AES)

Antorcha de cuarzo

diámetro externo = 2,5 cm

 AES-ICP

Introducción de la muestra

La muestra se introduce al plasma por

el tubo central (flujo 0,3 a 1,5 L/min)

Aerosol nebulizador
Vapor vap. Electrotérmica
 Cuantificación con ICP-AES

Curva de calibración con una fuente de plasma acoplado inductivamente

Espectrofotómetro de Emisión Atómica de Plasma Acoplado Inductivamente
LIMITES DE DETECCIÓN EN ESPECTROSCOPIA ATÓMICA
ESPECTROSCOPIA DE
ABSORCION EN EL
INFRARROJO
 Espectroscopia de Absorción en el IR

Región Infrarroja: entre 12800 y 10 cm-1 ó 0,78 a 1000 µm

Subdivisiones: IR cercano 780 - 2500 nm
IR medio 2500 – 50000 nm
IR lejano 50000 – 1000000 nm

- Aplicaciones: compuestos orgánicos (huella única, excepto isómeros)

- Análisis cualitativo (Infrarrojo medio)
- Análisis cuantitatvo (Infrarrojo cercano- NIR)
 Espectroscopia de Absorción en el IR

Monocromador

Depende de
la muestra

Espectro IR
 Espectroscopia de Absorción en el IR
La mayoría de datos útiles en análisis cualitativo aparecen a números de onda menores a
2000 cm-1
 Espectroscopia de Absorción en el IR
 La frecuencia de la radiación absorbida corresponde a la
frecuencia de vibración molecular

 La radiación IR es de baja E, no produce transiciones electrónicas

 La absorción de E se da por diferencias de energía entre estados

vibracionales y rotacionales

El momento dipolar depende de: - diferencia de carga de dos elementos en una molécula
- distancia entre ambos centros de carga.

 Cuando la molécula vibra el momento dipolar fluctúa generando un campo que puede
interaccionar con el campo eléctrico de la radiación IR

Si ν de la radiación = ν de vibración natural transferencia de E Absorbe radiación

Especies homonucleares: O2, N2 o Cl2 el momento dipolar no se altera (No absorben en IR)
Espectroscopia de Absorción en el IR

Tipos de Vibraciones Moleculares

Las posiciones de los átomos no es fija

sufren diferentes tipos de vibraciones

Hay 2 tipos de vibración:

Tensión y Flexión

Cambia la Cambio en el
distancia ángulo entre
entre átomos enlaces

Se explica por el - Tijereteo

modelo cuántico - Balanceo
del oscilador - Aleteo
armónico - Torsión
 Acoplamiento Vibracional
La energía de una vibración (λ del pico de absorción) puede estar afectada (acoplada)
por otros osciladores de la molécula

Ej: Molécula de CO2 Molécula lineal

Tiene 4 modos de vibración: * 2 vibraciones de tensión (1 simétrica y 1 asimétrica)

* 2 vibraciones de tijereteo

Tijereteo
Tensión

No cambia el dipolo Hay cambio de dipolo Las dos vibraciones tienen

Inactiva en el IR Absorbe a 2330 cm-1 la misma E
Producen 1 pico a 667 cm-1
Espectroscopia de Absorción en el IR
 Acoplamiento Vibracional
Molécula no lineal triatómica: H2O, SO2, NO2

- 3 modos de vibración

- El átomo central no esta en línea la tensión simétrica altera el dipolo absorbe

H2O : 2 picos de tensión (3650 y 3760 cm-1)

1 pico de flexión (1595 cm-1)

*Puede emplearse para deducir la forma de una

molécula
Alcoholes
Frecuencia de tensión de C-O de:
 Metanol = 1034 cm-1
 Etanol = 1053 cm-1
 2-butanol = 1105 cm-1

Acoplamiento de la tensión C-O

con las adyacentes C-C ó C-H
 ALICACIONES CUALITATIVAS DE LA ABSORCIÓN EN EL
IR MEDIO
Identificación de compuestos:

2-metilbutano

Pequeñas diferencia en la estructura

Tensión C-H (alcanos) 2850 a 2970 cm-1
producen grandes cambios en esta
Flexión C-H (1375 cm-1 y 1450 cm-1)
región (singularidad de espectros)
 ALICACIONES CUALITATIVAS DELA ABSORCIÓN EN EL
IR MEDIO
Identificación de compuestos:

2,3-dimetilbutano

Tensión C-H (alcanos) 2850 a 2970 cm-1

Flexión C-H (1375 cm-1 y 1450 cm-1)
 ALICACIONES CUALITATIVAS DE LA ABSORCIÓN EN EL IR MEDIO

Identificación
de
compuestos

Tensión O-H
3200 cm-1
4-metil-2-pentanol

Tensión C-Cl
a 800 cm-1

Cl
2,2-clorometilbutano
 Identificación de compuestos:

Región de
Frecuencias de
Grupo
 Fuentes y Detectores de Infrarrojo

Fuente: tiene un sólido inerte que se calienta a 1500 -2200 K

Máxima intensidad radiante entre 5000 y 5900 cm-1

El emisor de Nernst: Constituido por óxidos de tierras raras

forma cilíndrica
d.i. 1-2 mm
l = 20 mm
extremos unidos a conductores de platino
T° 1200 – 2200 K

La fuente Globar: varilla de carburo de silicio

l = 50 mm
d.i. = 5 mm
se calienta eléctricamente (T° 1300 a 1500 K)
 Fuentes y Detectores de Infrarrojo
Fuentes
La fuente de filamento
incandescente: Consiste en una espiral de alambre de Cromo o Rodio
dentro de un cilindro de cerámica
se calienta por el paso de una corriente eléctrica

El arco de mercurio: Para la región del infrarrojo lejano (λ > 50 µm)

Tubo de cuarzo con vapor de Hg a p > 1atm
El paso de electricidad por el vapor genera la radiación IR

Fuente láser de CO2: radiación entre 900 a 1100 cm-1 (11 a 9 µm)
esta constituida por 100 líneas
para determinación de amoniaco, butadieno, etanol, NO2
y tricloroetileno.
 Fuentes y Detectores de Infrarrojo
Detectores  Detectores Térmicos
 Detectores Piroeléctricos
 Detectores Fotoconductores

Detectores térmicos:

- La respuesta depende del efecto calorífico de la radiación

- Se debe aislar de la radiación térmica externa

- Termopares: dos piezas de metal (bismuto) unidas a otro metal (antimonio)

su potencial varía en función de la T°
responde a diferencias de T° de 10-6 K

- Bolómetros: es un tipo de termómetro de resistencia de platino o níquel

su resistencia varía con la T°
para radiación entre 2000 a 25 µm
 Fuentes y Detectores de Infrarrojo
Detectores  Detectores Térmicos
 Detectores Piroeléctricos
 Detectores Fotoconductores
Detectores Piroeléctricos:

- Se construyen con láminas de materiales dieléctricos (aislantes)

- El mas usado es el sulfato de triglicina (NH2CH2COOH)3.H2SO4
- El campo eléctrico aplicado genera una polarización que depende de la cte
dieléctrica del material

Detectores Fotoconductores:

- Consiste en una delgada película de un material semiconductor (sulfuro de plomo,

teluro de cadmio y mercurio, antimoniuro de indio) depositado en una superficie de
vidrio y sellada en una cámara de vacío.

- PbS: los mas utilizados para IR cercano (10000 a 333 cm-1 ó de 1 a 3 µm)
- CdHgTe: para IR medio y lejano – se deben enfriar con N líquido para minimizar el
ruido
 INSTRUMENTOS DE INFRARROJO

1. Instrumentos dispersivos:

- De doble haz (los mas usados porque elimina interferencias)

- Utilizan redes de reflexión para dispersión de la radiación

2. Espectrómetros con transformada de Fourier (FTIR):

- Se basan en el interferómetro de Michelson (convierte –modula- una señal

de alta frecuencia en una de frecuencia medible sin distorsionarla)
 FTIR
Espectrometría IR con Transformada de Fourier
1. Es una operación matemática que transforma una señal (senoidal) de dominio
de tiempo a dominio de frecuencia.
2. Mejor relación señal/ruido.
3. Puede tener una resolución de menos de 0.01 cm-1

49
 MANIPULCIÓN DE MUESTRAS PARA IR

No existen buenos disolventes que sean transparentes a la radiación IR

Muestras de Gases: el gas se deja expandir en una cubeta en la que se ha

hecho vacío (trampa de gases)

Disoluciones:
 MANIPULCIÓN DE MUESTRAS PARA IR

Líquidos Puros: Una gota del líquido puro se comprime entre dos placas de sal de
roca obteniendo una placa de grosor 0,01 mm que se coloca en la trayectoria del
haz
* Los datos no son muy reproducibles (se limita al análisis cualitativo)

Sólidos: Se dispersa el analito en una matriz líquida o sólida y se analiza la mezcla

1er método: - Triturar 2-5 mg de muestra (< 2µm) en aceite pesado de hidrocarburo
(Nujol) ó un polímero halogenado (Fluorolube)
- se pone entre dos placas de sal

2° método: - Triturar 1mg de muestra y mezclar con 100 mg de polvo de KBr

- se comprime (presión: 700 a 1000 Kg/cm2) para obtener un
disco transparente.
- el disco se coloca en el haz del instrumento
*presentan bandas debidas a la humedad absorbida (345 y 1640 cm-1)
MANIPULCIÓN DE MUESTRAS PARA IR
 APLICACIONES CUALITATIVAS DE LA ABSORCIÓN EN
EL IR MEDIO

Identificación de compuestos:

Determinación de grupos funcionales

1a etapa: Región de frecuencias de grupo
entre 3600 – 1200 cm-1

Comparación detallada del espectro desconocido

2a etapa: con espectros de compuestos puros que contienen
los grupos funcionales encontrados inicialmente
Región de la huella digital
entre 1200 y 600 cm-1
ALICACIONES CUALITATIVAS DE LA ABSORCIÓN EN EL IR MEDIO

• El análisis IR Permite la
identificación
aproximada de
compuestos

• Catálogos de espectros
IR - búsqueda manual

• Sistemas de búsqueda
por computador-
contienen librerías con
120000 espectros

• Se debe complementar
con otros análisis
(MS, RMN y análisis
elemental)
 Aplicaciones Cuantitativas del IR

 Los datos cuantitativos son de menor calidad que los de UV-Vis

 Mayor complejidad de los espectros

 Baja sensibilidad de los detectores en la región IR

 Relación no lineal entre la Abs y la Conc (incumplimiento de la Ley de Beer)

 Se deben corregir los efectos de la radiación dispersada y absorbida por el

disolvente y la celda.
 Aplicaciones Cuantitativas del IR

13,47 13,01 12,58

Análisis de una mezcla de

hidrocarburos aromáticos

14,36
 Aplicaciones Cuantitativas del IR

Determinación de contaminantes del aire

 ESPECTROSCOPIA DE INFRARROJO CERCANO (NIR)

 Región IR entre 700 a 3000 nm (13000 cm-1 a 3300 cm-1)

 Las bandas de absorción son combinaciones de bandas vibracionales de tensión

que se producen entre 3000 y 1700 cm-1

 Enlaces implicados: C-H, N-H y O-H

 Absorbancias molares pequeñas, Límites de detección del 0,1%

Instrumentación
- Similar a la empleada en UV-Vis
- Lámpara: Tungsteno
- Cubetas: de cuarzo o sílice fundida (0,1 a 1 cm)
- Detector: Fotoconductor de sulfuro de plomo

*Espectrofotómetros con λ entre 180 y 2500 nm se pueden usar para IR cercano

 ESPECTROSCOPIA DE INFRARROJO CERCANO (NIR)

 Determinación de Agua en: glicerol, hidracina, películas orgánicas y HNO3

 Det. de Fenoles, alcoholes, ácidos orgánicos se basan en la vibración de tensión O-H

que absorbe a 7100 cm-1

 Det. de Esteres, cetonas y ácidos carboxílicos absorben en la región de 3300 a 3600

cm-1 por la vibración de tensión del carbonilo

En disoluciones de tetracloruro de carbono y cubetas de 10 cm

 Det. de Aminas primarias (bandas de tensión N-H a 5000 cm-1) solo las 1as
 Aminas primarias y secundarias tienen bandas superpuestas entre 3300 a 10000 cm-1
 Aminas terciarias no presentan estas bandas