PUNTO ISOELECTRICO

OBJETIVO:
1. Demostrar los factores de solubilidad proteica: Estructura acuosa (emulsoides) y
repulsión de moléculas proteicas con cargas eléctricas iguales (suspensiones).

2. Demostrar la precipitación de una proteína en su punto isoeléctrico (PE). La menor o

mayor solubilidad según estén cercanos a lejanos al P.I

3. Ver la reversibilidad de los precipitados. – La no reversibilidad de la

desnaturalización.

NOCIONES PRELIMINARES
La fórmula corresponde a un péptido por 3 aminoácidos (glicina, alanina y
valina), los cuales se unen por enlaces peptídicos COHN. A determinado pH
del medio, el número de cargas ( +) igual al número de cargas (-). Hay
igualdad de CARGAS de destino nombre (ISOELECTRICIDAD)
Si la carga neta de una molécula está dada por la diferencia (suma algebraica) entre el
número de cargas (+) y número de cargas (-), en este caso tendríamos:

A este pH del medio en que la proteína tiene el mismo número de carga (+) y (-) se llama
PUNTO ISOELÉCTRICO .

PROPIEDADES DE UNA PROTEINA EN SU PUNTO ISOELECTRICO

1. El número de cargas (+) igual al número de cargas (-).

2. La carga neta de la proteína es igual a 0.

3. Puesta la proteína en un campo eléctrico no migra ni al nodo ni al cátodo.

4. En el punto isoeléctrico la proteína se hace menos soluble (precipitación de la

proteína en el P.I)

5. Cada proteína posee un punto isoeléctrico distinto, lo que se puede aprovechar para
extraerla de una solución con diversas proteínas: precipitándola y luego
extrayéndola.
 CUADRO DEL PUNTO ISOLECTRICO DE ALGUNAS PROTEINAS
PROTEINAS PUNTO ISLOELECTRICO
FIBRONA DE LA SEDA 2 - 2.4
CASEINA 4.6
GELATINA 4.8 - 4.85
OVO ALBUMINA 4.64 - 4 .90
SEROALBUMINA 4.88
ALFA 2 GLOBULINA 4.9
ALFA GLOBULINA 5.2
FIBRINOGENO 5.3
INSULINA 5.30 - 5.35
BETA GLOBULINAS 5.40 - 6.30
GAMMA GLOBULINAS 6.30 - 7.30
HEMOGLOBINAS 6.79 - 6.83

FACTORES QUE MANTIENEN LA SOLUBILIDAD PROTEICA

1. ENVOLTURA ACUOSA: A no ser que se las deshidrate, las proteínas están rodeadas
por una capa de agua, la cual impide a su agregación (precipitación).

2. REPULSION DE CARGAS ELECTRICAS IGUALES: Se basa en el hecho de que las

proteínas se cargan de acuerdo al pH del medio o sea la carga netas de las proteínas
(+) o (-). Las cargas iguales se repelen, manteniendo su máxima solubilidad.
Ej: Una proteína tiene 18 aminoácidos, de los cuales 4 tienen cargas (-) y las 14 cargas
(+). ¿Cuál es la carga neta de las proteínas . R= + 10 si este tipo de proteína está en un
medio, no precipitan.

EMULSOIDES

Son coloides que mantienen su solubilidad por presentar una envoltura acuosa (E.A).
A) EMULSOIDES DESCARGADOS: - Es la forma como está la proteína en su punto isoeléctrico.
Tiene un solo factor de solubilidad.

EA EA

Carga Neta: 0

B) EMULSOIDES CARGADOS: - Es la forma como se encuentran las proteínas en un medio ácido

o alcalino. Tienen presentes los dos factores de solubilidad.

En nuestro organismo, en la sangre, cuyo pH es ligeramente alcalino, las proteínas están como
emulsoides con carga (-).

Carga Neta: -2
EA (ALCALINO)

EA Carga Neta: +2
(ACIDO)

SUSPENSOIDES
Son coloides que han perdido su envoltura acuosa.

a) SUSPENSOIDES DESCARGADOS: Si en un punto isoeléctrico se agrega a una proteína

alcohol, se la somete a calor moderado, pierde su envoltura acuosa y desaparece el único
factor que impide su precipitación.

+ +
- -

En este estado la proteína posee el mínimo de solubilidad.

b) SUSPENSOIDES CARGADOS: Si se agregan agentes deshidratados a proteínas

cargadas (en medio acido o alcalino), éstas se mantienen solubles sólo por
repulsión de cargas igual.
REACTIVOS Y APARATOS
1. Albumina al 5%
2. Buffer ph 4,8
3. Ácido acético
4. Etanol
5. CLH 1N
6. NAOH 1N
7. Leche
8. Mediadores zonales de ph
9. Tubos de ensayo, centrifugas y pipetas
10. Baño María

Reactivos 1 2 3
CLH 3ml -- --
PH=0
Buffer -- 3ml --
PH=4,8
NAOH 0,1 -- -- 3ml
PH=13
Albumina al 5% 1ml 1ml 1ml

NOTA:
No agitar el tubo con la solución de albumina. Deben preparar varios tubos 4(2).

DIFERENCIAS ENTRE PRECIPITACION Y DESNATURALIZACION

a) Un tubo del punto isoeléctrico (NO. 2) agregar gota a gota HCL 1N 0,5 – 1ML
b) A otro tubo del tubo isoeléctrico agregar gota a gota NAOH 1N 0,5 -1ML
c) Hervir el tubo isoeléctrico. Luego agregar gota a gota HCL 1N 0,5-1ML
d) Hervir otro tubo y agregar NAOH 1N 0,5 -1ML