Taller 2 manejo genético

Cultivos in vitro

Blanca Lizet Gómez Pita

Docente: Jennifer Ricaute Galvis

Universidad industrial de Santander

UIS

Tec. Profesional en producción agroindustrial

II nivel

2018
 1. ¿Qué condiciones climáticas se requiere para cultivar in vitro? (temperatura,
humedad Relativa, etc.)

Los cultivos invitro deben mantenerse en condiciones ambientales semejantes alas

naturales mas favorables, como la luz, la temperatura y la humedad relativa, la mayoría
de los cultivos se desarrollan a una intensidad luminosa entre 5 a 25 w/m2 (1000 a 5000
lux) en general se utiliza la luz blanca, pobre en longitudes de onda larga, el fotoperiodo
utilizado es de 16 horas de luz y 8 horas de oscuridad, aunque algunos cultivos
requieren mas oscuridad.

Las cámaras del cultivo se regulan en general entre 22 y 28 ºc permitiendo así el

desarrollo tanto de especies de climas templados como de plantas tropicales, durante el
periodo iluminado, la temperatura en el interior de los frascos del cultivo es de 1-2ºc
superior ala de la cámara, debido al efecto invernadero, se crea un termo periodo
suave.la humedad relativa se mantienen al rededor de 70% en las condiciones en las que
se realiza habitualmente los cultivos, el porcentaje de humedad relativa no es reportado
en la mayoría de los trabajos sobre invitro de vegetales.

2. ¿Cómo ocurre el proceso de organogénesis vegetal?

Formación de un primordio unipolar a partir de una yema y el desarrollo de ese

primordio en brotes vegetativos que luego enraízan vía la formación y proliferación de
meristemas radicales, se desarrolla por inoculación de tejido meristematico estéril es un
medio suplementado con niveles óptimos de sales, de compuestos orgánicos y de
reguladores de crecimiento, la calidad y cantidad de los componentes del medio
dependerá de la especie y la inducción de un tipo especifico involucra señales aun poco
conocidas.

3. ¿Cómo ocurre el proceso de embriogénesis somática vegetal?

Embriones que no son resultado de la fusión de gametos son estructuras bipolares con
un eje radical apical y son capaces de crecer y formar plantas normales, se puede
obtener directamente a partir de células aisladas o utilizando callos.se usan comúnmente
cotiledones e hipocotilos para producir embriones somáticos.

La inducción de la embriogénesis y el desarrollo de los estados subsiguientes dependen

de la presencia de nitrógeno reducido.

4. ¿Cuáles son las fases de la propagación in vitro? Describa cada una.

Dentro del proceso de propagación diferenciamos varias fases:

 Selección y preparación de la planta madre: para establecer un cultivo con

condiciones de asepsia, se debe obtener explantes con un nivel nutricional y u n
grado de desarrollo adecuado, para obtener dichos explantes se recomienda
mantener a las plantas madres o plantas donadoras de yemas durante un periodo
de tiempo que puede oscilar entre una semanas o varios meses en un invernadero
bajo condiciones controladas. En este ambiente se cultiva una planta con
condiciones sanitarias optimas con un control nutricional y riegos adecuados
para así permitir un crecimiento vigoroso y libre de enfermedades.
 Desinfección del material vegetal: una vez elegida la planta madre, se extraen
los fragmentos a partir de los cuales se obtendrán los explantes.
Los explantes pueden ser yemas, trozos de hojas, porciones de raíces o semillas
etc.
Antes de extraer los explantes se hará una desinfección de los fragmentos de la
planta madre para eliminar los contaminantes externos y contaminantes comunes
como: hongos, bacterias etc. luego se procede a mantener el material vegetal en
condiciones de asepsia, se realiza dicha desinfección del material a utilizar con
hipoclorito de sodio durante un periodo de 5 a 15 minutos seguido por 3 a 4
enjuagues en agua esterilizada.

 Introducción del material invitro: las semillas o las yemas dependiendo del
material seleccionado, se ponen en medio del cultivo estéril, en un periodo de
una semana o quince días, comienza el proceso de germinación o regeneración
de nuevos tejidos vegetales, iniciando el ciclo del cultivo invitro

 Multiplicación de los brotes: durante esta fase se espera que los explantes que
sobrevivieron en la fase 1 y 2 originen brotes de procedencia axilar o adventicia
con varias hojas, en la base de cada hoja ay una yema que se desarrollara luego
 de ser puesta en contacto en el medio del cultivo, el numero de plantas que se
obtendrán dependerá de la especie vegetal y de las condiciones del medio.

 Elección de un medio de enraizamiento de los explantos: para enraizar los

explantes se utilizan principalmente plantines individuales de un tamaño
aproximado de 2 centímetros, algunas especies no necesitan pasar por esta etapa
y emiten raíces en el mismo medio de cultivo donde desarrollan yemas nuevas,
transcurriendo su enraizamiento en forma simultánea.

 Aclimatación de los explantos enraizados: los explantes recién enraizados son

muy sensibles a los cambios ambientales de manera que el éxito o el fracaso de
todo el proceso depende de la aclimatación, las plantas sufrirán cambios de
diferente tipo que que permitirán la adaptación de las mismas a vivir en
condiciones naturales.

5. ¿Qué medios de cultivos caseros se pueden realizar?

Conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes que crean las

condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos.

 AGAR: utiliza como agente gelifacante para solidez a los medios de cultivo
 Extractos: su preparación consiste en que ciertos órganos o tejidos animales o
vegetales son extraídos con agua y color y posteriormente concentrados hasta la
forma final de pasta o polvo estos preparados deshidratados son a menudo
empleados en la elaboración de los medios de cultivo los mas utilizados son
extractos de carne levadura y de malta.
 Peptonas: son mezclas complejas de compuestos orgánicos nitrogenados y sales
minerales, que se obtienen por digestión enzimática o química de proteínas
animales o vegetales.
 Medios de cultivo:
 Medios generales: son aquellos que permiten el crecimiento de una gran
variedad de microorganismos
 Medios de Enriquecimiento: Son aquellos que favorecen el crecimiento de un
determinado tipo de microorganismo sin llegar a inhibir totalmente el
crecimiento de los demás
 Medios diferenciales: son aquellos en los que se pone de manifiesto
propiedades que un determinado tipo de microorganismo posee.
 6. Describa el proceso de micro propagación con un diagrama de flujo teniendo en
cuenta cada una de sus características.

Fases del proceso de

micropropagaciòn

Preparación de la planta
madre: explantos con nivel
nutricional alto y grado de
desarrollo adecuado.

Introducción del Multiplicación de brotes:

Desinfección del material vegetal:
material in vitro: subcultivar nuevos brotes en
extracción de fragmentos donde se
introducción de un nuevo medio.
obtendrán los explantos tales como
semillas y yemas Aumentando el número de
yemas, trozos de hojas raíces o
en medio del plantas
semillas.
cultivo estéril en
un periodo de
quince días.

Elección de un medio de
enraizamiento de los explantos:
utilización de platines individuales
de un tamaño de 2 cm el proceso
de multiplicación y enraizamiento
transcurre en forma simultanea
en algunas plantas.

Aclimatación de los explantos

realizados: sensibles alos cambios
ambientales, de manera que el éxito o
el fracaso se debe ala aclimatación.
 7. Describa cada uno de los contenidos del medio de cultivo.

Sales minerales, vitaminas aminoácidos, azucares y reguladores de crecimiento.

 Composición mineral: se define en forma precisa en cada uno de los medios y

dada por los macroelementos (N, P, K, S, MG, Y CA) como por los
microelementos ( B,MN, ZN, CU, NI, CO, MO, AL, Y FE) deben estar en una
concentración tal que permita el adecuado crecimiento celular.
 Vitaminas: se pueden necesitar añadirlas al medio de cultivo para la prosperidad
de tal cultivo, las vitaminas favorecedoras del desarrollo del cultivo invitro y que
se añaden rutinariamente son: tiamina, piridoxina, y acido nicotínico, otras que
suelen ser útiles como: acido pantotenico, biotina, riboflarina, colina,
cranocobalamina y acido fólico.
 Aminoácidos: es la nutrición de los tejidos y células vegetales es complejo, los
tejidos responden en forma diversa a su suplemento.
 Azucares: actúan como fuente energética y de carbono e incrementan el
potencial osmótico del medio.
 Reguladores de crecimiento: moléculas orgánicas difusibles que modulan el
proceso de crecimiento y desarrollo de las plantas. Influye en las respuestas de
muchas partes del vegetal dependiendo de dicha especie, del órgano vegetal del
estado de desarrollo de las concentraciones endógenas y exógenas de las
interacciones entre reguladores de crecimiento y de diversos factores
ambientales.

8. Realice un cuadro sinóptico de los reguladores de crecimiento. (Auxinas, Citocinas,

giberelinas, Acido Abscisico, Etileno, Poliaminas, jasmonatos, ácido salicílico y
brasinoestroides)

Auxinas: Es una familia de sustancias químicas que tienen en común la

capacidad de regular el crecimiento, la división celular y la diferenciación de
raíces en los cultivos in vitro. En las plantas, las auxinas intervienen en el
tropismo a la gravedad y a la luz, la dominancia apical, el crecimiento de las
partes florales y la diferenciación de los tejidos vasculares

Citocininas: Son derivados de la adenina que promueven la división celular

incrementan la tasa de división celular, el transporte de solutos hacia las hojas,
semillas, flores y frutos y producen un retardo de la senescencia de las hojas
 Giberelinas: constituyen una familia de compuestos químicos tetracíclicos
diterpenoides que regulan varios procesos del crecimiento y desarrollo como la
germinación de semillas, la elongación de tallos, el desarrollo de raíces y la
floración.

Acido Abscísico: es un regulador de crecimiento cuya tasa de biosíntesis se

modifica significativamente frente al estrés fisiológico ocasionado por falta de
agua, salinidad del suelo, bajas o altas temperaturas.

Etileno: es un compuesto gaseoso reconocido como hormona de maduración de

los frutos pero que además regula diversos procesos fisiológicos como la
germinación de las semillas, la senescencia de hojas y flores, la abscisión de
hojas y frutos y la floración de algunas especies. El modo de acción del etileno
no es aún conocido aunque se han detectado cambios en la expresión genética de
algunas proteínas Es producido en cultivos in vitro de todo tipo y se acumula en
la fase gaseosa de los recipientes de cultivo en concentraciones variables según
la clase y peso del tejido, el volumen y la cubierta del recipiente y las
condiciones de cultivo

9. Que tipos de mejoramiento genético se pueden realizar en la multiplicación

invitro. Describa el proceso y que características da.

El mejoramiento genético de plantas es una de las hazañas más antiguas del

hombre, que inició con la domesticación de las mismas bajo condiciones
controladas y la selección de aquellas capaces de proporcionar una mejor fuente
de alimentos
  Polinización y Fertilización in vitro. Existen barreras sexuales entre

organismos de diferentes especies y géneros. El hombre puede atravesar estas

barreras a través de la polinización (traslado del polen que contiene las gametas

masculinas de la planta, hacia la estructura reproductiva femenina). Cuando el

hombre aprende a polinizar artificialmente estas plantas y se genera la unión de

los gametos, se pueden cultivar los embriones in vitro.

 Cultivo in vitro de células, tejidos y órganos vegetales. También se cultivan

células, tejidos u órganos en medios nutritivos en frascos. Esta técnica acompaña

otras técnicas de mejoramiento vegetal. El cultivo in vitro es posible debido a

que las plantas tienen una propiedad denominada totipotencialidad celular: toda

célula viva e íntegra de una planta, sin importar el grado de especialización

alcanzado, es capaz de regenerar una planta entera igual a la original

 Obtención de haploides Cultivo in vitro de estructuras sexuales haploides que

generan organismos haploides que pueden aportar caracteres agronómicos

importantes.

Variación somaclonal (cultivo in vitro a campo). Mediante cultivo de células

o tejidos in vitro se pueden generar variaciones.

 Ingeniería genética. Las técnicas tradicionales de hibridación mezclaron

durante varios años miles y miles de genes y muchas generaciones de plantas

con el fin de obtener una característica deseada. La biotecnología acelera este

proceso permitiendo a los científicos tomar solamente los genes deseados de una

planta, logrando de ese modo los resultados buscados en tan sólo una

generación. La ingeniería genética es una herramienta más segura y eficiente

 para el mejoramiento de especies respecto de las técnicas tradicionales, puesto

que elimina gran parte del azar presente en el mejoramiento tradicional.

10. Que aplicación tiene desde su punto de vista la multiplicación de plantas invitro.

Contribuye a complementar los trabajos de mejoramiento de nuestras plantas en

diferentes especies donde podremos modificar las condiciones optimas de nuestro
cultivo con el objetivo de disminuir muchos aspectos negativos, donde se realiza en
condiciones muy controladas y totalmente estériles todos los elementos utilizados en
dicho proceso teniendo una buena manipulación donde nos permite mantener la sanidad
y originalidad de la variedad de nuestras plantas.