EGF 等电点测定

1. 操作问题：制胶容易产生气泡，可在注入后将膜揭开再盖上，以排出气泡 ，
但应适当补充溶液；

2. 控制注入凝胶溶液的体积，保证胶的厚度，防止凝固后出现萎缩

3. 凝胶溶液注入后，可稍等几分钟，将模具转入 37℃培养箱时注意保持水平；

4. 按照工艺流程操作，出现的问题：样品无条带
推测原因：EGF 分子量过小（6 KDa 左右），无法固定在胶上，在洗涤过
程中丢失。
尝试改进方法：
a) 提高凝胶浓度：25%改为 30%
b) 提高固定液中三氯乙酸的浓度：12.5%改为 20%（W/V）

试剂配方的作用：
 三氯乙酸 TCA——固定蛋白（蛋白条带丢失或过淡，可能由于分子量
较低，或在固定中未被变性，增加 TCA 浓度或使用戊二醛固定）
 硫酸铜——利于脱色

5. 固定时间一定要保证；
染色时间可适当减少（1-2 小时可改为 1 小时）；
脱色时间不应太长，防止溶胶；
所有处理过程均尽量减少晃动，以免胶与膜脱落、变形。

6. 过硫酸铵（Ap）要新鲜配制。40%的过硫酸铵储存于冰箱中只能使用 2-3 天，
低浓度的过硫酸铵溶液只能当天使用。