做标准曲线的 12 个经典问题，做好标曲就靠它了

标 准 曲 线 的 制 作 中 ，会 有 这 样 那 样 的 问 题 ，比 如 ，常 有 人 问 ：一 定 要 做 5 个 点 ？

线性相关系数 R 值必须几个 9 才达标？标曲是每天都做还是每次都做？标曲是

否必须通过原点？。。。今天小析姐整理了标曲相关问题，一起来看看吧！

1 标准曲线的做法依据？

GB/T22554-2010《 基 于 标 准 样 品 的 线 性 校 准 》 中 ：

1、 标 准 曲 线 的 浓 度 范 围 应 覆 盖 正 常 操 作 条 件 下 的 被 测 量 范 围 ；

2、 标 准 样 品 的 组 分 尽 量 与 被 测 样 品 组 分 一 致 ；

3、 标 准 样 品 的 浓 度 值 应 等 距 离 的 分 布 在 被 测 量 范 围 ；

4、 标 准 样 品 的 个 数 至 少 应 有 3 个 浓 度 ；

5、 每 个 标 准 点 至 少 重 复 2 次 ， 这 个 重 复 是 指 从 稀 释 开 始 ；

如 果 国 家 标 准 有 相 应 的 浓 度 系 列 推 荐 ，尽 量 按 国 家 标 准 。工 作 中 我 们 经 常 采 用 线

性校准，因为线性方程最为简洁。

2 什么是校准曲线？

校 准 曲 线 包 括 标 准 曲 线 和 工 作 曲 线 ，前 者 用 标 准 溶 液 系 列 直 接 测 量 ，没 有 经 过 预

处 理 过 程 ，这 对 于 样 品 往 往 造 成 较 大 误 差 ；而 后 者 所 使 用 的 标 准 溶 液 经 过 了 与 样

品相同的消解、净化、测量等全过程。

3 首先标曲要做几个点？
标 准 曲 线 需 要 几 个 数 据 点 ，是 由 所 检 测 组 分 的 浓 度 范 围 、分 析 仪 响 应 特 性 、干 扰

因素、浓度与检测信号响应类型有关的。

3 个 点 ：对 于 一 些 低 浓 度 ，特 别 是 微 量 分 析 ，并 且 浓 度 范 围 不 是 很 大 的 ，检 测 器

响 应 可 靠 ，背 景 干 扰 非 常 小 的 ，则 可 以 选 用 较 少 的 工 作 点 就 行 ，一 般 有 3 个 浓 度

点就足够了，有些甚至可以只用一个浓度点就行，另一个点直接用坐标原点。

4~6 个 点 ：对 于 平 时 测 量 的 样 品 浓 度 范 围 较 宽 ，并 且 检 测 器 响 应 不 完 全 是 一 次 曲

线（ 直 线 ）的 ，可 以 采 用 二 次 曲 线 或 分 段 校 正 方 式 ，以 减 少 数 据 偏 差 ，这 种 情 况

就 需 要 多 用 几 个 数 据 点 ， 如 果 不 分 段 ， 数 据 点 有 4~6 个 就 够 用 。

至 少 两 个 点 ：但 如 果 是 分 段 校 正 ，则 每 段 需 要 至 少 两 个 数 据 点 。而 对 于 一 些 样 品

无 浓 度 范 围 规 律 的 ，特 别 是 一 些 检 测 机 构 ，如 果 分 析 仪 的 检 测 响 应 可 靠 ，环 境 因

素 影 响 少 的 ，可 以 做 校 正 曲 线 。若 是 环 境 因 素 影 响 大 的 ，则 不 必 做 校 正 曲 线 ，而

采 用 标 准 加 入 法 或 标 准 加 入 -一 次 稀 释 法 反 而 简 便 一 些 。

实 际 上 ， 我 们 一 般 是 做 五 个 点 （ 不 包 括 零 浓 度 ） ； 一 般 以 检 出 限 的 5~10 倍 为 第

一 个 点 ， 以 后 根 据 1 倍 递 增 ， 最 高 浓 度 是 最 低 浓 度 的 10~20 倍 为 宜 （ 理 化 分 析

实验为例）。当然，要根据仪器的灵敏度来调整。

4 标曲 R 值是几个 9 才合格？

实 验 室 应 按 检 测 标 准（ 方 法 ）的 要 求 使 用 标 准 溶 液 或 标 准 物 质 建 立 标 准 曲 线 。所

用 标 准 溶 液 或 标 准 物 质 应 覆 盖 被 测 样 品 的 浓 度 范 围 。检 测 标 准（ 方 法 ）如 无 具 体
的 要 求 ，至 少 使 用 5 个 标 样（ 除 空 白 外 ）建 立 线 性 标 准 曲 线 ，每 个 点 重 复 测 定 1-

3 次 ， 对 于 筛 选 方 法 ， 线 性 回 归 方 程 的 相 关 系 数 不 应 低 于 0.98， 对 于 确 证 方 法 ，

相 关 系 数 不 应 低 于 0.99。

其 实 ，大 于 0.99 是 判 断 是 否 为 线 性 相 关 的 一 个 标 准 ，实 际 应 用 中 线 性 大 于 0.999

才 是 比 较 理 想 的 。 线 性 在 0.99 到 0.999 之 间 的 监 测 结 果 只 用 接 近 最 高 浓 度 一 半

（ 中 间 浓 度 ）的 位 置 才 比 较 准 确 ，如 果 线 性 大 于 0.999 的 话 ，在 整 个 线 性 范 围 内

都会有一个比较满意的结果。

如 果 检 测 的 线 性 不 好 ，可 以 减 少 标 准 的 覆 盖 范 围 ，将 标 准 的 浓 度 调 整 到 待 测 样 品

浓 度 附 近 ，这 样 结 果 也 是 非 常 准 确 的 。例 如 ，样 品 的 浓 度 约 20ppb,但 在 0~50ppb

范 围 建 立 标 准 曲 线 ， 但 线 性 非 常 不 理 想 ， 这 时 可 以 将 标 准 范 围 调 整 到 15~25ppb

之间，作五个标准。

5 标准曲线的检验？

（ 1） 线 性 检 验 :

即 检 验 校 准 曲 线 的 精 密 度 。 对 于 以 4～ 6 个 浓 度 单 位 所 获 得 的 测 量 信 号 值 绘 制 的

校 准 曲 线 ，分 光 光 度 法 一 般 要 求 其 相 关 系 数 | r | ≥0.9990，否 则 应 找 出 原 因 并 加

以纠正，重新绘制合格的校准曲线。

（ 2） 截 距 检 验 ：

即 检 验 校 准 曲 线 的 准 确 度 ，在 线 性 检 验 合 格 的 基 础 上 ，对 其 进 行 线 性 回 归 ，得 出

回 归 方 程 y= a+bx ， 然 后 将 所 得 截 距 a 与 0 作 t 检 验 ， 当 取 95%置 信 水 平 ， 经
检 验 无 显 著 性 差 异 时 ，a 可 做 0 处 理 ，方 程 简 化 为 y= bx，移 项 得 x=y/b。在 线 性

范 围 内 ，可 代 替 查 阅 校 准 曲 线 ，直 接 将 样 品 测 量 信 号 值 经 空 白 校 正 后 ，计 算 出 试

样浓度。

当 a 与 0 有 显 著 性 差 异 时 ，表 示 校 准 曲 线 的 回 归 方 程 计 算 结 果 准 确 度 不 高 ，应 找

出 原 因 予 以 校 正 后 ，重 新 绘 制 校 准 曲 线 并 经 线 性 检 验 合 格 。在 计 算 回 归 方 程 ，经

截距检验合格后投入使用。

回 归 方 程 如 不 经 上 述 检 验 和 处 理 ，就 直 接 投 入 使 用 ，必 将 给 测 定 结 果 引 入 差 值 相

当于解决 a 的系统误差。

（ 3） 斜 率 检 验 :

即 检 验 分 析 方 法 的 灵 敏 度 ，方 法 灵 敏 度 是 随 实 验 条 件 的 变 化 而 改 变 的 。在 完 全 相

同 的 分 析 条 件 下 ，仅 由 于 操 作 中 的 随 机 误 差 导 致 的 斜 率 变 化 不 应 超 出 一 定 的 允 许

范 围 ，此 范 围 因 分 析 方 法 的 精 度 不 同 而 异 。例 如 ，一 般 而 言 ，分 子 吸 收 分 光 光 度

法 要 求 其 相 对 差 值 小 于 5%，而 原 子 吸 收 分 光 光 度 法 则 要 求 其 相 对 差 值 小 于 10%

等等。

6 标准曲线有效期的规定？

（ 1） 标 准 曲 线 属 于 实 验 室 质 量 控 制 的 范 围 ， 按 照 《 实 验 室 资 质 认 定 评 审 准 则 》

中 结 果 控 制 的 要 求 ：定 期 使 用 有 证 标 准 物 质（ 参 考 物 质 ）进 行 监 控 和 /或 使 用 次 级

标准物质（参考物质）开展内部质量控制。
（ 2）准 则 中 并 未 对 “定 期 ”进 行 规 定 ，所 以 如 果 “定 期 ”，就 根 据 实 验 室 的 实 际 情 况

来定了。

（ 3） 既 然 准 则 上 没 说 明 ， 那 根 据 一 般 的 分 析 教 材 ， 当 实 验 条 件 （ 包 括 药 剂 、 人

员 、仪 器 等 ）发 生 变 化 时 ，最 好 重 新 制 作 标 准 曲 线 。一 般 来 说 仪 器 如 果 长 期 使 用 ，

并 经 过 检 定 ，是 处 于 稳 定 状 态 ，而 人 员 药 剂 的 变 化 往 往 会 较 大 。如 果 说 每 次 换 个

人操作都要换曲线，那工作量就太大了。

7 每次开机都必须做标准曲线？

从药品检测的要求来说，因为：

1、 每 天 所 配 的 流 动 相 都 会 有 所 不 同 ， 导 致 出 峰 的 时 间 都 会 有 一 定 的 差 异 ， 峰 面

积相应都有所差异。

2、 检 测 器 光 能 也 在 不 断 的 衰 弱 ， 因 此 其 每 天 的 相 应 值 也 有 所 不 同 ， 其 峰 面 积 也

有差异。

基于以上原因，原则上应该是每天都要进行标准曲线校正的。

标 准 曲 线 不 要 每 次 都 做 ，但 是 每 次 必 须 进 标 准 品 样 品 ；因 为 每 次 你 的 流 动 相 和 原

来 的 不 可 能 完 全 一 样 ，同 时 仪 器 的 状 态 也 在 变 化 ，所 以 不 同 批 次 间 的 保 留 时 间 是

不一致的，所以你必须用随行标准品来定位与定量。

8 校准曲线能不能长期使用？
每 批 样 品 应 测 定 一 个 校 准 曲 线 中 间 点 浓 度 的 标 准 液 ，其 测 定 浓 度 与 校 准 曲 线 标 准

点 的 浓 度 相 对 误 差 不 得 超 过 规 定 范 围 ，如 果 超 过 规 定 相 对 误 差 ，需 重 新 绘 制 校 准

曲线。

也 可 以 这 样 说 ， 不 同 的 分 析 项 目 ,不 同 的 分 析 方 法 ,校 准 曲 线 斜 率 的 稳 定 性 不 同 。

如 校 准 曲 线 的 斜 率 较 为 稳 定 ,则 在 样 品 分 析 时 ,可 只 测 定 两 个 标 准 点 ,当 此 两 个 标

准 点 与 原 曲 线 相 应 点 的 相 对 偏 差 均 小 于 5%时 ,可 使 用 原 校 准 曲 线 。 因 此 ,样 品 分

析 前 ,需 根 据 斜 率 的 稳 定 性 来 确 定 是 否 需 同 时 制 作 校 准 曲 线 。

我 们 一 般 的 做 法 是 ，根 据 检 测 的 频 率 来 做 ，如 果 该 项 目 天 天 都 要 检 测 ，并 且 检 测

量较多时，要求至少每周做一次曲线。如果检测量上，一个月都没有几单的话，

就一个月做一次曲线。当然，仪器如果出现故障并大修后回来的，经过检定后，

需要重新做曲线。

9 标准曲线是否必须过原点？

标 准 曲 线 不 一 定 非 要 过 原 点 ，只 要 线 性 好 就 可 以 了 。因 为 做 空 白 的 话 基 本 上 不 会

过 原 点 。过 原 点 是 强 制 过 的 ，实 际 曲 线 可 能 不 过 ，就 会 造 成 误 差 。不 过 原 点 是 因

为有系统误差。

针 对 是 否 过 原 点 (0,0)问 题 ， 我 想 可 以 从 原 点 (0,0)代 表 的 意 义 来 考 虑 ：

即 所 测 组 分 浓 度 为 零 的 时 候 ，信 号 响 应 值（ 液 相 色 谱 也 就 是 峰 高 或 者 峰 面 积 ）是

否 也 为 零 。 通 常 来 说 色 谱 分 析 是 属 于 这 种 情 况 的 ， 因 而 可 以 把 （ 0,0） 点 作 为 一
个浓度水平计入标准曲线（甚至不需要真的去配一个浓度为零的标准溶液来进

样 ），这 也 是 单 点 法 定 量 的 一 个 依 据 ；而 类 似 的 情 况 在 光 谱 法 测 定 时 就 讲 不 通 了 ，

浓 度 为 零 的 标 准 溶 液（ 本 底 ）响 应 信 号（ 吸 光 度 ）往 往 不 是 零 ，这 个 时 候 标 准 曲

线就不一定过原点了。

10 标准曲线的线性范围？

线 性 范 围 这 个 大 家 都 比 较 清 楚 ，主 要 从 相 关 系 数 r 看 ，一 般 要 求 r 大 于 等 于 三 个

九 。之 前 做 实 验 有 时 候 浓 度 高 时 ，线 性 不 好 ，高 浓 度 点 不 在 标 准 曲 线 上 ，而 是 在

标 准 曲 线 的 下 面 ，而 且 离 拟 合 的 标 准 曲 线 比 较 远 。遇 到 这 种 情 况 ，标 准 曲 线 的 线

性 相 关 系 数 就 很 差 ，有 时 候 才 一 个 九 ，最 后 我 终 于 想 明 白 了 ，如 果 自 己 用 手 动 拟

合 的 话 ，用 平 滑 的 曲 线 去 连 接 所 有 点 的 话 ，你 就 会 发 现 ，如 果 在 线 性 范 围 内 ，连

接起来就是直线，如果超出了线性范围，连接起来就是一条弯曲的曲线。

11 相关系数的有效数字？

GB5750.3-2006 8.2.7 项 有 如 下 规 定 ：校 准 曲 线 相 关 系 数 只 舍 不 入 ，保 留 到 小 数

点 后 出 现 非 9 的 一 位 ，如 0.99989→0.9998。如 果 小 数 点 后 都 是 9 时 ，最 多 保 留

小数点后 4 位。

12Y=bX 和二次曲线的选用？

标 准 曲 线 我 们 通 常 采 用 的 是 Y=a+bX，曲 线 拟 合 完 必 须 要 做 统 计 检 验 ，且 要 做 统

计完备的线性检验和失拟检验，然后再做 a 与 0 的差别检验，如果 a 与 0 的统

计 学 上 无 差 异 ，你 就 可 以 考 虑 用 Y=bX 的 拟 合 曲 线 ，拟 合 出 来 后 同 样 做 线 性 检 验
和 失 拟 检 验 ，如 果 线 性 检 验 合 格（ P<0.05）且 失 拟 检 验 合 格（ P>0.05）此 时 你 就

可 以 采 用 Y=bX。

二 次 曲 线 的 采 用 同 样 是 这 样 的 道 理 ，如 果 你 Y=a+bX 时 拟 合 不 合 格 ，你 就 考 虑 用

Y=a+bX+cX 2 ， 同 样 做 失 拟 检 验 ， 考 察 拟 合 的 符 合 情 况 。 如 果 Y=a+bX 和

Y=a+bX+cX 2 都 满 足 拟 合 检 验 和 失 拟 检 验 合 格 ，则 采 用 Y=a+bX 形 式 ，这 样 符 合

统计学上参数最少的统计简洁性原则。

标 准 曲 线 法 有 一 定 的 优 势 ，也 有 一 定 的 缺 陷 ，它 特 别 适 合 于 大 量 样 品 的 分 析 。但

由于每次样品分析的色谱条件（检测器的响应性能，柱温，流动相流速及组成，

进 样 量 ，柱 效 等 ）很 难 完 全 相 同 ，因 此 容 易 出 现 较 大 误 差 。此 外 ，标 准 工 作 曲 线

绘 制 时 ，一 般 使 用 欲 测 组 分 的 标 准 样 品（ 或 已 知 准 确 含 量 的 样 品 ），而 实 际 样 品

的组成却千差万别，因此必将给测量带来一定的误差。

了 解 各 个 分 析 项 目 校 准 曲 线 斜 率 的 稳 定 性 及 影 响 稳 定 性 的 主 要 因 素 ,可 决 定 是 否

能 采 用 带 标 点 检 验 原 校 准 曲 线 ,省 略 重 新 制 作 校 准 曲 线 ;从 校 准 曲 线 斜 率 的 变 化 ,

可 判 断 标 准 溶 液 的 稳 定 性 ,从 而 确 定 其 标 定 周 期 ;分 析 低 浓 度 样 品 时 ,应 使 用 高 纯

度 的 水 和 试 剂 ,以 减 少 空 白 值 ,降 低 样 品 的 分 析 误 差 。

科学地运用校准曲线,

对于降低分析成本、提高检测质量有着重要的意义。