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Los avances en biotecnología

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documento de revisión de Investigación

Aplicaciones industriales de la biocatálisis enzima: estado actual y los futuros aspectos

Jung-Min Choi 1 , Sang-Soo Han 1 , Hak-Sung Kim •

Departamento de Ciencias Biológicas, Corea del Instituto Avanzado de Ciencia y Tecnología, 373-1, Gusung-dong, Yusung-gu, Daejeon 305-701, República de Corea

artículo info resumen

Historia del artículo: Las enzimas son la mayoría de los pro fi catalizadores cientes, ofreciendo mucho más competitivos procesos de comparación con los catalizadores químicos. El
Recibido el 20 de de agosto de 2014
número de aplicaciones industriales de las enzimas se ha disparado en los últimos años, debido principalmente a los avances en la tecnología de la ingeniería
Recibido en forma revisada 25 de de febrero de el año 2015 aceptado el 27
de proteínas y las necesidades ambientales y económicas. Aquí, se revisa el progreso reciente en la biocatálisis enzima, y ​se discuten las tendencias y
de de febrero de el año 2015 Disponible en línea xxxx
estrategias que están conduciendo a aplicaciones más amplias de enzimas industriales. También se discuten los desafíos y oportunidades en el desarrollo de
procesos de biocatálisis.

palabras clave:
© 2015 Elsevier Inc. Todos los derechos reservados.
Las enzimas

Aplicaciones industriales La
biocatálisis Bioprocesos

Contenido

1. Introducción . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .0

2. Biocatalizadores en la biotecnología industrial . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .0

2.1. industrias química fina y volumen. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .0

2.2. Industria farmacéutica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .0

2.3. Industria de alimentos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .0

2.4. industria cosmética. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .0

2.5. Industria textil . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .0

2.6. industrias de pasta y papel . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .0

3. Tendencia y estrategia en la ingeniería de enzimas para aplicaciones industriales. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .0

4. Conclusiones. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .0

Expresiones de gratitud . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .0

Referencias. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .0

1. Introducción
Las enzimas son la mayoría de los pro fi catalizadores cientes, ofreciendo mucho más
competitivos procesos de comparación con los catalizadores químicos. Un número de procesos
basados ​en enzimas han comercializado para la producción de varios productos valiosos desde la
biocatálisis era fi primero introducido
• El primer autor en: Departamento de Ciencias Biológicas, Corea del Instituto Avanzado de Ciencia y Tecnología,
373-1, Gusung-dong, Yusung-gu, Daejeon 305-701, República de Corea. Tel .: +82 042 350 2616.
Hace casi siglo ( Bruggink et al., 1998; Estell et al., 1985; Jensen y Rugh, 1987; Sedlaczek, 1988 ). A
pesar del gran potencial de enzimas, sin embargo, sus aplicaciones industriales se han visto
obstaculizados debido principalmente a la propiedad indeseable en términos de estabilidad, ef
catalítica fi eficiencia y especificidad fi ciudad. Para superar estas deficiencias, una variedad de
enfoques se han intentado, incluida la detección de enzimas de origen natural, las mutaciones al
azar, la inmovilización ( Dincer y Telefoncu, 2007; Elleuche et al., 2014 ). Durante 1980 y 1990, la
ingeniería de enzimas basa en la información estructural extensión permitida de sus rangos de
sustrato, lo que permite la síntesis de intermedios inusuales. Por consiguiente, el uso de enzimas se
ha ampliado para themanufacture de productos intermedios farmacéuticos y fi productos químicos ne ( Griengl
et al.,

Dirección de correo electrónico: hskim76@kaist.ac.kr (H.-S. Kim).

1 Igualmente contribuido. JBA-06909;

http://dx.doi.org/10.1016/j.biotechadv.2015.02.014
0734-9750 / © 2015 Elsevier Inc. Todos los derechos reservados.

Por favor citar este artículo como: Choi JM, et al, Aplicaciones industriales de la biocatálisis enzima: Estado actual y aspectos futuros, Biotechnol Adv (2015),
http://dx.doi.org/10.1016/j.biotechadv.2015.02.014
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2000; Hills, 2003; Nagasawa et al., 1990 ). Aunque las aplicaciones industriales de la biocatálisis se
han expandido a través del diseño racional basado en la estructura, la falta de conocimiento
estructural y mecánico sobre las enzimas ha limitado el uso generalizado de las enzimas.

Desde mediados de la década de 1990, in vitro versión de la evolución darwiniana, llamado

evolución dirigida, ha hecho una gran contribución al desarrollo de enzimas con un gran potencial ( Bornscheuer
et al., 2012 ). ciclos iterativos de mutagénesis aleatoria, seguido por selección de una biblioteca
habilitadas mejora rápida y extensa de diversas propiedades de la enzima, incluyendo estabilidad,
especificidad de sustrato fi ciudad, y enantioselectividad. por tanto, la evolución dirigida ha hecho
notables progresos en aplicaciones industriales de biocatálisis ( Kumar y Singh, 2013 ).
Recientemente, la evolución dirigida tiende a ser fusionado con el diseño racional y métodos
computacionales para mejorar la EF fi ciencyof enzymedesign mediante la creación de bibliotecas
enfocadas y más inteligentes ( Bornscheuer et al., 2012 ). Diseño racional y métodos computacionales
basados ​en las relaciones estructura-función están haciendo populares en ingeniería de enzimas. La
complejidad estructural de sustancias valiosas tales como fármacos y productos intermedios quirales
requiere biocatalizadores con alta estereo- y regio-específica fi ciudades en procesos industriales.
conocimiento acumulado sobre las relaciones estructura-función y la dinámica de función están
permitiendo de novo diseño de enzimas con nuevas funciones ( Rothlisberger et al., 2008; Siegel et
al., 2010 ), Ampliando el repertorio de enzimas.
Los altos precios del petróleo han llevado a las industrias a buscar fuentes alternativas de
materias primas, tales como biomasas. Por otra parte, la presión pública sobre las tecnologías verdes
debido a los problemas ambientales ha exigido firmemente la sustitución de procesos químicos con
limpio, más seguro y más procesos de biocatálisis ecológicos ( Benkovic y Hammes-Schiffer, 2003 ).
En estos aspectos, la biocatálisis enzima ha sustituido rápidamente procesos químicos tradicionales
en muchas áreas, y se espera que tal sustitución a BEMORE acelerado mediante el desarrollo de
nuevas tecnologías en la ingeniería de enzima. En esta revisión se describen los avances recientes
en la biocatálisis enzimas para aplicaciones industriales, y se discuten las tendencias y estrategias
en la ingeniería de enzimas industriales. También se discuten los desafíos y oportunidades de la
biocatálisis enzima en el futuro.
Esquema 1. La conversión del acrilonitrilo en acrilamida usando nitrilo hidratasa.
productividad, Cui et al. recientemente ingeniería nitrilo hidratasa de
Pseudomonas putida NRRL-18668, y mostró mejoras en la estabilidad térmica y la actividad catalítica
de 3.5- y 1.5 veces, respectivamente ( Cui et al., 2014 ). Kang et al. también informó de la
sobreexpresión de nitrilo hidratasa de Rhodococcus rhodochrous en Corynebacterium glutamicum, y
las células recombinantes resultaron en un rendimiento de conversión de 93% y fi concentración de
acrilamida nal de 42,5% en 6 h ( Kang et al., 2014 ).
El ácido glicólico es un bloque de construcción química C2 que ha encontrado una amplia gama
de aplicaciones en los cosméticos, la industria de alimentos y como un precursor para biopolímeros ( Koivistoinen
et al, 2013.; Panova et al., 2007 ). El ácido glicólico puede ser polimerizado en ácido poliglicólico
(PGA), que tiene una alta resistencia y termo-tolerancia, así como permeabilidad a los gases baja
adecuada como un material de embalaje ideal para alimentos y otros bienes. El acidmarket glicólico
en 2011was $ 93.3million, y la cantidad de producción total fue 40million kg. Se espera themarket
para llegar a $ 203million en 2018 ( Koivistoinen et al., 2013 ). El método convencional de producción
de ácido glicólico se basó en la reacción de formaldehído y monóxido de carbono a través de una
catálisis ácida a alta presión y temperatura ( Panova et al., 2007 ). Un método alternativo es el uso de
heteróloga huésped que expresa nitrilasa (CE 3.5.5.1), reductasa lactoaldehyde (CE 1.1.1.77), y
deshidrogenasa lactoaldehyde (CE 1.2.1.22) para la hidrólisis de glicolonitrilo y la oxidación de
etilenglicol, seguido de la conversión de ácido glicólico ( Chauhan et al., 2003 ). Sin embargo, los
métodos químicos y de biotransformación convencionales para el ácido glicólico tienen ciertos
inconvenientes tales como alta impureza. Para la producción de ácido glicólico de alta pureza,
Panova et al. intentado un proceso de quimio-enzimática utilizando E. coli células que sobreexpresan
nitrilasa de facilis Acidovorax

2. biocatalizadores en la biotecnología industrial

2.1. industrias química fina y granel
Aplicaciones de las enzimas y la biocatálisis de célula entera para la producción de diversos
tipos de sustancias químicas y biológicas se han convertido en una tecnología probada en las
industrias químicas y farmacéuticas porque los procesos basados ​en enzimas por lo general
conducen a una reducción en el tiempo de proceso, el número de etapas de reacción, y la cantidad
de residuos ( Wohlgemuth, 2010 ). En particular, las enzimas proporcionan una forma más potente de
producir enantiomérica pura quimioselectividad compoundsmainly throughhigh, regioselectividad y
streoselectivity ( Nestl et al., 2011 ). Algunos ejemplos que muestran la contribución de la biocatálisis a fi
químico ne y mayor fi campos se describen a continuación.
72 W ( Panova et al., 2007 ). Este proceso quimio-enzimática comprende la síntesis de glicolonitrilo a
partir de formaldehído y cianuro de hidrógeno usando NaOH, seguido de la conversión de
glicolonitrilo en glicolato de amonio por nitrilasa a temperatura ambiente, que se convierte después
en ácido glicólico por cromatografía de intercambio iónico (IEC) ( esquema 2 ). Este proceso permite la
productividad de más de 1 kg de ácido glicólico / g de peso celular seco. Además, para aumentar aún
más la actividad catalítica de nitrilasa, una evolución dirigida se intentó, resultando en un aumento de
125 veces ( Wu et al., 2008 ).

La acrilamida es un importante producto químico de los productos básicos para la síntesis de

poliacrilamida utilizado para la recuperación de petróleo, tratamiento de aguas residuales, fabricación
de papel, la formulación de plaguicidas, prevención de la erosión del suelo, y la electroforesis en gel ( Asano,
2002; Leonova et al., 2000 ). Tradicionalmente, la acrilamida puede producirse químicamente por
oxidación de acrilonitrilo utilizando cobre y ácido sulfúrico como catalizador a alta temperatura ( Padmakumar
y Oriel, 1999 ). Sin embargo, se sabe que ambos métodos para causar varios tipos de contaminación
ambiental. El descubrimiento de nitrilo hidratasa (CE 4.2.1.84) y su aplicación en la hidratación de
nitrilo ha ofrecido un nuevo procedimiento para la producción de acrilamida ( Asano et al., 1982;
Nagasawa et al., 2000 ). Rhodococcus rhodochrous J1 nitrilo hidratasa sobreexpresa ef fi cientemente
convierte acrilonitrilo en acrilamida en hasta un 45% (W / W) condiciones undermild ( Esquema 1 ).
Este proceso biotranformation produce más de 650.000 t anuales en Japón ( Ogawa y Shimizu, 2002;
Groger et al, 2012.; Reetz, 2013 ). Para aumentar aún más la

Esquema 2. Síntesis de ácido glicólico a partir de formaldehído y cianuro de hidrógeno usando nitrilasa.

Por favor citar este artículo como: Choi JM, et al, Aplicaciones industriales de la biocatálisis enzima: Estado actual y aspectos futuros, Biotechnol Adv (2015),
http://dx.doi.org/10.1016/j.biotechadv.2015.02.014
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1,3-propanodiol es un producto químico valioso como un edificio química C3
bloque, y se polimeriza con tereftalatos para la síntesis de tereftalatos de polimetileno utilizado en la
fabricación de textiles
fi ber, fi lm, y plástico ( Maervoet et al., 2011 ). El mercado de 1,3propanedol es más de 100 millones de
toneladas / año, y está creciendo rápidamente ( Zeng y Biebl, 2002 ). En la actualidad, la producción
de 1,3-propanodiol es producido a partir de glicerol por metabólicamente ingeniería Saccharomyces
cerevisiae y Klebsiella pneumoniae ( Nakamura y Whited, 2003; Sabra et al., 2010 ). Este proceso de
bioconversión fue mostrado para dar lugar a un rendimiento máximo de aproximadamente 50 - 60%
(mol / mol), pero que requieren un suministro de la coenzima B 12 como un cofactor para enzimas
implicadas en la biosíntesis de 1,3-propanodiol en el proceso de fermentación microbiana. Para la
producción económica y eco-amigo de 1,3-propanodiol, Rieckenberg et al. desarrollado un proceso
biosintético novela usando glicerol deshidratasa (EC
EC 4.2.1.30) y oxidorreductasa-isoenzima (1.1.1.202) ( esquema 3 ) ( Rieckenberg et al., 2014 ). En
este proceso, glicerol deshidratasa convierte el glicerol en 3-hidroxipropionaldehído (3-HPA), que se
transforma adicionalmente en 1,3-propanodiol por NADPH-dependiente propanodiol
oxidorreductasa-isoenzima de E. coli. Curiosamente, el rendimiento de conversión de glicerol en el
producto diana, 1,3-propanodiol, alcanzó õalmost 100%.
5-hidroximetilfurfural (HMF) se considera un bloque de construcción prometedor, ya que permite
diversos procesos de síntesis que conducen a diversos compuestos químicos tales como
dimetilfurano (biocombustible), 2,5-diformylfuran y ácido 2,5-furandicarboxyllic (monómeros de
polímeros), ácido levulínico, ácido adípico, caprolactama, y ​caprolactona, por encima y más allá de
muchas otras moléculas, incluyendo ingredientes farmacéuticos ( Rosatella et al., 2011 ).
Tradicionalmente, HMF se produce a través de la deshidratación catalizada por ácido de
monosacáridos tales como fructosa o glucosa ( Huang et al., 2010 ). Se informó de que el rendimiento
de producción de HMF a partir de fructosa en mayor que 70 - 100% (w / w) se puede lograr usando
clorhidrato y Amberlst-15 ( Roman-Leshkov et al., 2006; Shimizu et al., 2009 ). Sin embargo, la
fructosa es menos estable que la glucosa. Para Amore producción económica de HMF, los intentos
de utilizar la glucosa directamente o hidratos de carbono a base de glucosa han beenmade, lo que
lleva al desarrollo de un proceso para la producción de HMF a través de una combinación de glucosa -
isomerización fructosa usando glucosa isomerasa (EC 5.3.1.5), seguido por la deshidratación
fructosa en HMF por el ácido ( esquema 4 ). Este proceso da como resultado un rendimiento de
producción de alrededor de 63 - 87% (w / w) ( Huang et al., 2010 ). ( R), (S) - La epiclorhidrina es un
bloque de construcción quiral para la síntesis de productos farmacéuticos y agroquímicos ( Wu et al.,
2010 ). La epiclorhidrina se produce generalmente a partir de cloruro de alilo a través de un proceso
de dos pasos, comenzando con la adición de hipo-cloroso, que produce 1,3- y 2,3dichlorohydrin. En
la segunda etapa, esta mezcla se hace reaccionar con una base para generar epóxido ( Bell et al.,
2008 ). Una alternativemethod para la producción de ( R), (S) - epiclorhidrina es biotransformar el
sustrato de partida, 1,3dichloro-2-propanol, usinghalohydrindehalogenase (CE 4.5.1) y epóxido
hidrolasas (EC 3.3.2.3) ( esquema 5 ). Aunque este proceso se demostró que resultar en ef fi ciente
producción de epiclorhidrina enantiomérica pura, que dio lugar a graves problemas. La epiclorhidrina
insoluble en agua causó una mezcla de reacción no homogénea, y epiclorhidrina hidroliza
espontáneamente en medios acuosos. Para superar estas deficiencias, Lee et al. disolventes
orgánicos utilizados como medio de reacción para la producción de ( R) - epiclorhidrina con una ee de
99% y un rendimiento de 28,5%, a partir de 20 mM de un sustrato racémico usando epóxido
hidrolasas recombinantes ( Lee, 2007 ). Del mismo modo, Jin et al. epóxido hidrolasas empleadas de Aspergillus
tanto, la industria está buscando bajo costo, y los procesos de biocatálisis más verdes más seguros
niger para hidrolizar epiclorhidrina racémica en la concentración de sustrato de hasta 153,6 mM, y
producido ( S) - epiclorhidrina en el rendimiento de
Esquema 3. Síntesis de 1,3-propanodiol a partir de glicerol usando glicerol deshidratasa y oxidorreductasa-isoenzima.
Por favor citar este artículo como: Choi JM, et al, Aplicaciones industriales de la biocatálisis enzima: Estado actual y aspectos futuros, Biotechnol Adv (2015),
http://dx.doi.org/10.1016/j.biotechadv.2015.02.014
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Esquema 4. Síntesis de 5-hidroximetil-furfural a partir de glucosa utilizando glucosa isomerasa.
18,5% con ee del 98% en disolventes orgánicos ( Jin et al., 2012 ). Basándose en los resultados, el uso
de disolventes orgánicos apareció para resolver el problema de la inestabilidad y baja solubilidad de
epiclorhidrina. Sin embargo, estos procesos no son viables en la práctica en la escala de la industria
debido a un bajo rendimiento y ee valor debido a la inhibición de sustrato y producto. En un esfuerzo
por hacer frente a este problema, Jin et al. intentado una alimentación intermitente del sustrato en un
sistema de dos fases, la consecución de un rendimiento de 42,7% de ( R) - epiclorhidrina y una ee valor
de por encima de 99% ( Jin et al., 2013 ). Por otra parte, una gran cantidad de esfuerzo se ha hecho
para aumentar la productividad, la estabilidad y la enantioselectividad a través de la ingeniería y el
descubrimiento de la epóxido hidrolasa ( Karboune et al., 2006; Kotik y Kyslík, 2006; Kotik et al., 2011;
Reetz et al., 2009 ). Las ciclodextrinas son cíclico α- 1,4-glucanos que se utiliza principalmente como una
agente de mezcla para aumentar la solubilidad de compuestos insolubles en agua y la estabilidad
química de los ingredientes activos en el producto farmacéutico, cosméticos, alimentos, y las
industrias textiles ( Del Valle, 2004 ). Las ciclodextrinas son producidos a partir de almidón o derivados
de almidón usando glycosyltranferase ciclodextrina (EC 2.4.1.19) ( Capó et al., 2010 ). Aunque las
ciclodextrinas pueden ser fácilmente producidos por enzimas, este proceso presenta ciertos
inconvenientes tales como una baja productividad, especí fi ciudad, y la estabilidad ( Leemhuis et al.,
2010 ). Takada et al. identi fi ed una novela ciclodextrina glycosyltranferase de Bacillus clarkii 7364,
que se muestra para convertir almidón de patata en γ- ciclodextrina, con un rendimiento de 79% ( Takada
et al., 2003 ). Sin embargo, el rendimiento total de cylclodextrins de almidón era tan baja como 14%.
Como un enfoque alternativo para mejorar el rendimiento de la producción de ciclodextrina, el uso de
un sistema bi-enzima que comprende glycosyltranferase ciclodextrina y una enzima-de ramificación
tales como isoamilasa y pululanasa se ha intentado ( Wang et al., 2013 ). Durante el proceso de
reacción, una enzima-de ramificación era fi primer añadió para hidrolizar el α- amilopectina
1,6-vinculación que inhibe la reacción de ciclodextrina glycosyltranferase seguido de la adición de
ciclodextrina glycosyltranferase para catalizar la ciclación. Duan et al. reportaron un proceso
sincrónico basa en la isoamilasa y α- ciclodextrina glycosyltranferase juntos para catalizar la reacción.
Este proceso síncrono permite a un 84,6% (w / w) rendimiento de producción de ciclodextrina en 24 h
( Duan et al., 2013 ).
2.2. Industria farmacéutica
Durante las últimas décadas, las sustancias farmacéuticas se han vuelto cada vez más
complejo, y misiones públicas y ambientales para las tecnologías verdes se han incrementado. Por lo
como alternativas a la catálisis química tradicional ( Huisman y Collier, 2013; Tomsho et al., 2012 ).
Recientemente, los ChemicalManufacturingMethods para el proyecto Siglo 21 (CHEM21) puesto en
marcha en Europa, que está financiado tanto por el gobierno
Esquema 5. Síntesis de (R) -epiclorohidrina from1,3-dicloro-2-propanol usando halohidrina hidrolasa deshalogenasa y
epóxido.
4 J.-M. Choi et al. / Biotecnología Avances xxx (2015) xxx - xxx
y la industria de hasta € 26,4 (21,2 £) millones de dólares por cuatro años ( Aldridge, 2013 ). especí fi c
reacciones que pueden ser reemplazados con biocalaysis han identificado fi ed en la síntesis de
productos farmacéuticos, incluyendo amina quiral síntesis, estéreo y regio-específica fi c hidroxilación
de moléculas complejas, y otras reacciones redox ( Aldridge, 2013; Lutz et al., 2009 ). Algunos
avances recientes en biocatálisis para la industria farmacéutica se describen a continuación.
Uno de los ejemplos más exitosos en la aplicación práctica de las enzimas en la industria
farmacéutica es el compuesto anti-diabética, sitagliptina ( Desai, 2011; Savile et al., 2010 ). La
sitagliptina es un medicamento para la diabetes tipo II que se comercializa bajo el nombre comercial Januvia
por Merck ( Desai, 2011 ). Investigadores de Codexis y Merck ingeniería
R- transaminasa selectiva ( R- ATA, ATA-117) a partir de Arthrobacter sp. para la aminación asimétrica
de cetona prositagliptin. Mediante la aplicación de un sustrato caminar, modelado, y el enfoque de la
mutación, que fueron capaces de superar la limitación del tamaño del sustrato para la enzima. Una
combinación de la evolución de la enzima y proceso de ingeniería dirigida además produjo una
variante que convierte 200 g / L de cetona prositagliptin en sitagliptina a una enantiomérico pureza
mayor que 99,95%, incluso en la presencia de 1 M i-PrNH2, con 50% de DMSO a una temperatura
superior a 40 ° C ( Savile et al., 2010 ) ( esquema 6 ). Comparedwith el rodio (Rh) proceso catalizada, el
proceso biocatalítico no sólo reduce el total de residuos y elimina el requisito de un metal pesado rara
(Rh), también aumenta el rendimiento global en un 10% y la productividad (kg / L por día ) por 53% ( Desai, fenilefrina, la ezetimiba, y crizotinib basa en estéreo y regio-específica fi c hidroxilación usando
2011; Ghislieri y Turner, 2013 ). Inmovilización de ingeniería (R) selectivo-ATA permite el
mantenimiento de la actividad enzimática y la estabilidad en un disolvente orgánico, lo que simplifica
el tratamiento y permitiendo un uso repetitivo de la enzima ( Truppo et al., 2012 ). El uso de varios R- o S-
selectivos-ATA se han reportado en una síntesis a gran escala de fármacos potenciales, tales como
niraparib ( Chung et al., 2013 ), Un antagonista de receptor de orexina ( Girardin et al., 2012 ), Y Janus
quinasa 2 (JAK2) inhibidor ( Frodsham et al, 2013.; Meadows et al., 2013 ).
Otro ejemplo de una síntesis de amina quiral es boceprevir ( Li et al., 2012 ), Que es un fármaco
utilizado clínicamente para las infecciones de hepatitis C crónica con el nombre comercial Victrelis por
Merck. En la síntesis de boceprevir, un ef fi ciente y desimetrización enantiomérico puro de una prolina
bicíclico intermedio es muy necesario. Codexis y Merck han empleado la monoamino oxidasa (MAO)
a partir de Aspergillus niger para la oxidación amina asimétrica del compuesto intermedio ( esquema 7 ).
Aunque la actividad, solubilidad, y estabilidad térmica de la enzima se SUF fi cientemente mejorado
para sostener el proceso de fabricación a través de la ingeniería de proteínas, una inhibición
irreversible producto seguía siendo un problema. Sin embargo, este problemwas resuelto con éxito a
través de la captura de un producto de imina mediante la adición de bisulfito fi te, whichdemonstrates
la importancia de la ingeniería de procesos en la aplicación industrial de una biocatálisis. En
comparación con el método de resolución, el proceso biocatalítico no sólo aumenta el rendimiento del
producto en un 150%, sino que también reduce el uso de materias primas por 59.8%, el consumo de
agua por 60,7%, y los residuos proceso general (factor E) por 63,1 % ( Li et al., 2012 ). Aunque el
proceso aún no se ha reducido hasta la escala industrial, el mismo byMAO oxidación amina
asimétrica se utiliza actualmente en la síntesis de otro medicamento para la infección por hepatitis C,
es decir, telaprevir ( Znabet et al., 2010 ). Recientemente, el espectro de sustrato para la MAO se ha
expandido para acomodar sustratos de amina con sustituyentes arilo voluminosos a través de una
estructura de guiado de diseño racional y de alto rendimiento enfoques de cribado
Esquema 6. Síntesis de sitagliptina partir de la cetona prositagliptin utilizando ingeniería (R) ATA selectiva.
Por favor citar este artículo como: Choi JM, et al, Aplicaciones industriales de la biocatálisis enzima: Estado actual y aspectos futuros, Biotechnol Adv (2015),
http://dx.doi.org/10.1016/j.biotechadv.2015.02.014
Esquema 7. Enantiopuros desimetrización de prolina bicíclico intermedio utilizando MAO diseñada en la síntesis de
boceprevir.
( Ghislieri et al., 2013 ). Engineered MAO se aplicó en la síntesis de los fármacos solifenacina y
levocetirizina, así como productos naturales alcaloides incluyendo coniina, eleagnine, lepta Florida Orine,
y harmicine ( Ghislieri et al., 2013 ).
Codexis recientemente desarrolló un proceso biocatalítico para la producción de productos
intermedios para medicamentos de mayor éxito, tales como atorvastatina, montelukast, duloxetina, la
ceto-reductasa (KRED) a partir de
ke lactobacillus fi r ( Huisman y Collier, 2013; Huisman et al., 2010 ). El fármaco anti-asmático,
montelukast, fue desarrollado y comercializado bajo el nombre comercial Singulair por Merck ( Liang
et al., 2009 ). Un intermedio clave en la síntesis de montelukast se redujo asimétricamente usando
clorodiisopinocanfeilborano (DIP-Cl). Sobre la base de una variante previamente desarrollada de
KRED que mostró que la actividad de este voluminoso intermedio ( Bornscheuer et al, 2012.; Liang et
al., 2009 ), Codexis centra en la mejora de la actividad y la estabilidad de la enzima para la sustitución
del catalizador químico, DIP-Cl. Combinado con una evolución dirigida y optimización de procesos, la
ingeniería KRED exhibe una alta enantioselectividad ( norte 99,9%) y estabilidad incluso en presencia
de ~ 70% de disolventes orgánicos a 45 ° C ( esquema 8 ). El proceso biocatalítico está actualmente
operado en una norte 200 kg escalan sustrato, en sustitución de un catalizador DIP-Cl peligrosos. El
punto más intrigante en la ingeniería de KRED está aumentando la estabilidad de la enzima, incluso
a una alta concentración de disolvente orgánico y la temperatura. Debido a la lowsolubility de la
inwater sustrato, la alta concentración de disolvente orgánico y la temperatura son necesarios. Sobre
la base de la correlación entre la estabilidad termo y la tolerancia de disolvente ( Huisman et al., 2010 ),
Los investigadores en Codexis principalmente apantallados mutantes de enzimas con una mayor
estabilidad térmica seguido de un cribado de mutantes tolerantes de disolvente ( Huisman et al., 2010 ).
Otro ejemplo que implica KRED es la síntesis de hidroxinitrilo, que es un intermedio clave para la
atorvastatina, utilizando un proceso de multi-enzima ( Ma et al., 2010 ). La atorvastatina es un
miembro de la familia de las estatinas que reduce el colesterol bloqueando la síntesis del colesterol
en el hígado, y actualmente es comercializado por P fi ZER bajo el nombre comercial Lipitor
( Ma et al., 2010 ). El uso de enzimas pre-evolucionado, Codexis desarrolló en dos stepprocess
compuesto de tres pasos enzimáticos includinghalohydrin deshalogenasa (HHDH), glucosa
deshidrogenasa (GDH), y KRED ( esquema 9 ). En este proceso, KRED está implicado en el fi primer
paso de la reducción de etil-4-cloroacetoacetato junto con GDH para la regeneración de cofactor. Los
avances en la tecnología de la ingeniería de proteínas han permitido una síntesis a gran escala de
productos intermedios hidroxinitrilo. Este proceso multienzimático ha demostrado ser no sólo el
medio ambiente atractivo, sino también económicamente viable en comparación con un proceso
químico tradicional.
Con un número creciente de enzimas disponibles para la síntesis de compuestos farmacéuticos,
los intentos de desarrollar una “ one-pot ”
procesos basados ​en reacciones en cascada de múltiples enzimas también están aumentando ( Oroz-Guinea
y García-Junceda, 2013; Ricca et al., 2011; Shin et al, 2013.; Simon et al., 2013 ). En comparación
con un proceso químico tradicional y un proceso de una sola enzima, un proceso en un recipiente es
altamente enantioselectiva y ef fi ciente eludiendo la necesidad de múltiples pasos. Hay muchos tipos
de reacciones en cascada que implican ATA han sido
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Esquema 8. Regio-específica fi c hidroxilación de intermedio clave en la síntesis de montelukast utilizando KRED de ingeniería.

reportado ( Simon et al., 2013 ), Andmost de ellos son enzimas redox coupledwith que llevan a cabo (aldolasas Althoff et al, 2012.; Baker y Seah, 2011; Cheriyan et al, 2012.; Giger et al, 2013.; Zandvoort
un reciclaje de cofactores. Recientemente, se informó de un proceso en cascada de un solo et al., 2012 ). En consecuencia, la utilidad sintética de aldolasas también se incrementa
recipiente para la síntesis de quirales pirrolidinas 2,5-disustituidos con una combinación de ATA sustancialmente ( Windle et al., 2014 ).
existente y variantes de MAO ( O'Reilly et al., 2014 ) ( esquema 10 UNA). Otra ventaja de un solo
recipiente reactionwith amulti-enzima cascadewill ser el uso de moléculas aquirales de bajo costo
como materiales de partida. Un estudio reciente demostró la síntesis de nor-pseudoefedrina (NPE) y
norefedrina (NE) a partir de materiales simples, tales como benzaldehído y piruvato a través de una 2.3. Industria de alimentos

combinación de ATA y acetohidroxiácido sintasa I (AHAS I) ( Sehl et al., 2013 ) ( esquema 10 SEGUNDO).
El uso de (S) -ATA (R) o, los estereoisómeros de NPE y NE se sintetizaron con alta pureza
enantiomérica ( norte 99%). Por otra parte, piruvato, que es un subproducto de la reacción de ATA, se
recicló en una reacción de AHAS-I como sustrato. Además de una reacción en cascada, arti fi redes
de múltiples enzimas ciales conectados a través de redox-reciclaje se han reportado ( Tauber et al.,
2013 ) ( esquema 10 DO).
En la industria alimentaria, la biocatálisis se ha utilizado para producir y rawmaterials fi productos
finales desde hace mucho tiempo ( Fernandes, 2010 ). Sin embargo, la mayoría de los usos de la
biocatálisis se han centrado en las reacciones hidrolíticas para la desramificación, mejorar la solubilidad, y
clari fi catión. Con la creciente demanda de los aspectos nutricionales, signi fi cantidad de peralte se ha
prestado atención a la funcionalidad de los alimentos más allá de la función principal de suministro de
nutrientes. Una tendencia reciente en la industria alimentaria es el desarrollo de alimentos funcionales
tales como prebióticos, los edulcorantes bajos en calorías y azúcares raros ( Akoh et al., 2008 ).

Como la complejidad estructural de compuestos farmacéuticos aumenta, la demanda de

biocatalizadores en la formación de enlaces carbono-carbono, tales como aldolasa, también está
aumentando ( Windle et al., 2014 ). reacción aldólica son útiles porque pueden proporcionar
intermedios clave de los productos farmacéuticos fromsimple bloques de construcción. Como se
ejemplifica fi ed en la síntesis de un intermedio clave en las estatinas, (3R, 5S)
-6-cloro-2,4,6trideoxyhexapyranoside se puede producir a partir de moléculas simples, tales como
cloroacetaldehído (CAA) y acetaldehído usando ingeniería 2-desoxi-ribosa-5 aldolasa fosfato (DERA)
( Jennewein et al., 2006 ) ( esquema 11 ). La ingeniería de proteínas permite una gama más amplia de
sustrato, así como el aumento de la estabilidad, la actividad, y estereoselectividad de la
Los prebióticos son una sustancia dietética compuesta de polisacáridos y oligosacáridos no
amiláceos, incluyendo inulina, fructo-oligosacáridos (FOS), galacto-oligosacáridos (GOS), lactulosa, y
oligosacáridos de la leche materna. Sin embargo, la mayoría de ellos no se digieren bien por enzimas
humanas ( Figueroa-González et al., 2011 ), Y los ingredientes que promueven selectivamente el
crecimiento de microorganismos intestinales aún no se han dilucidado. De acuerdo con un informe de
análisis de la industria global (GIA), para el año 2015, el mercado prebiótico llegará a casi $ 225
millones y $ 1.12 mil millones en los EE.UU. y Europa en 2015, respectivamente ( Panesar et al.,
2013 ). Con la creciente demanda de los prebióticos, la industria alimentaria ha interesado en

Esquema 9. Síntesis de hidroxinitrilo intermedio de atorvastatina usando ingeniería KRED, GDH, y HHDH.

Por favor citar este artículo como: Choi JM, et al, Aplicaciones industriales de la biocatálisis enzima: Estado actual y aspectos futuros, Biotechnol Adv (2015),
http://dx.doi.org/10.1016/j.biotechadv.2015.02.014
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atorvastatina. 6

Esquema 10. “ Uno-pot ” procesos basados ​en reacciones multi-enzima. (A) Síntesis de quirales pirrolidinas 2,5-disustituidas utilizando ATA y MAO. (B) Síntesis de NPE y NE usando AHAS I y ATAs en combinación con el reciclaje de
subproducto. (C) Arti fi red multi-enzima cial para la aminación quiral de segundo- alcohol.

el uso de enzimas para los rendimientos de alta producción a bajo costo y usando procesos simples.
anhídrido difructosa (DFA) III es un edulcorante no cariogénico y disacárido no digerible que
promueve la absorción de calcio,
magnesio y otros minerales en el intestino ( Haraguchi et al., 2006 ). DFA III se produce a partir de
inulina por la inulina fructotrnasferase exo-actuando (CE 4.2.2.18) a partir de ureafaciencs
Arthrobacter
( esquema 12 UNA). Desde entonces, la inulina fructotrnasferase de Arthrobacter
sp. y otras bacterias se ha identificado fi ed ( Cuelgue et al., 2011; Kikuchi et al., 2009 ). Sin embargo, el
uso industrial de DFA III estaba limitada por una baja estabilidad térmica y la inulina caro ( Cuelgue et
al., 2013 ). Una gran cantidad de esfuerzo se ha hecho para aislar fructotrnasferase inulina estable al
calor de diversos microorganismos y para desarrollar un nuevo procedimiento utilizando un sustrato
barato. Informes recientes han demostrado una novela fructotrnasferase inulina pascens Arthrobacter T13-2,
Arthrobacter sp. L68-

1, y otra Nonomuraea especies, estables hasta el 70 - 80 ° C después de 1 h de tratamiento térmico ( Haraguchi

et al., 2006; Pudjiraharti et al., 2011 ). Los fructooligosacáridos (FOS) como prebiótico puede ser
sintetizado a partir de sacarosa usando fructosiltransferasa (EC 2.4.1.19). La inulina tiene un enlace
fructofuranosidic similar a FOS, que es el sustrato más pequeño para fructotransferase inulina. La
utilización de sacarosa como sustrato para producir DFA III, lo que resulta en alrededor de un 10% (w
/ w) de rendimiento, se intentó a través de una reacción enzimática acoplada como un enfoque
novedoso ( esquema 12 B) ( Cuelgue et al., 2013 ).

Esquema 11. Síntesis de (3R, 5S) intermedia -6-cloro-2,4,6-trideoxyhexapyranoside usando DERA en la síntesis de

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Esquema 12. Síntesis de anhídrido di-fructosa (DFA) III de la inulina usando fructotransferase inulina (A), y una reacción enzimática acoplada (B).

Galactooligosacáridos son ingredientes que promueven la salud que muestran propiedades crecimiento de Bi fi dobacterium en el colon humano. Además, tiene un papel importante en la
prebióticas, pero son difíciles de digerir los azúcares ( Rastall, 2013 ). Además, muchos otros calciumandmagnesiumabsorption stimulationof, y una disminución de la colesterol, fosfolípido, y los
beneficios de salud fi ts se han reportado, incluyendo una mejora en la defecación, la estimulación de niveles de triglicéridos en el suero humano ( Moore et al., 2003; Sánchez et al., 2010 ). FOS se
la absorción de minerales, la prevención del cáncer de colon, y la protección contra ciertas produce a partir de sacarosa por las enzimas que muestran transfructosilación
infecciones bacterianas patógenas ( Barile y Rastall, 2013 ). La producción de galacto-oligosacáridos
se logra a través de una reacción enzimática de la lactosa con β- galactosidasas de diversos
microbianos, levaduras, y las fuentes de hongos, que conducen a la diversidad estructural de
galactooligosacáridos ( Rodríguez-Colinas et al., 2011; Vera et al., 2012 ). La estructura básica de
galacto-oligosacáridos contiene una lactosa (galactosa - glucosa) columna vertebral en el extremo
reductor, que se expande hasta seis residuos de galactosa ( esquema 13 ). En general, el rendimiento
de producción de galacto-oligosacáridos usando β- galactosidasa alcanzó alrededor de 30 - 35% (w / w)
( Parque y Oh, 2010 ). Para aumentar el rendimiento de la producción, una gran cantidad de esfuerzo
se ha centrado en el aislamiento y la aplicación de termoestable β- galactosidasa de microorganismos
termófilos, tales como Geobacillus stearothermophilus, Pyrococcus furiosus, S. solfataricus,

T. maritima, y Thermus sp. porque las enzimas termoestables conducen a una alta velocidad de
reacción, la contaminación más baja, y alta solubilidad a la lactosa a alta temperatura ( Bruins et al.,
2003; Placier et al., 2009 ). Como SMO, fructo-oligosacáridos (FOS) se utilizan como un arti fi edulcorante
cial y dietética fi ber con bajos niveles calóricos, la promoción de la
Esquema 13. Síntesis de galactooligosacárido a partir de lactosa usando β- galactosideas.

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actividad. Tales enzimas son β- fructofuranosidasa (CE 3.2.1.26) y fructosiltransferasa (CE 2.4.1.9),
que se originan a partir de hongos y bacterias ( Cuelgue andWoodams, 1996; Silva et al., 2013 ). La
reacción de FOS por enzimas es una unidad de D-glucosa (G) y uno unidades de fructosa (F) en
gd - 1 L - 1 se logró por miristato de miristilo ( Hilterhaus et al., 2008 ).
cada una de sacarosa (GF) unidos por β ( 2 → 1) enlaces glicosídicos (GF + GF → GF _ - 1 + GF _ + 1) ( esquema
14 ). Se informó que el rendimiento de producción de FOS a una escala industrial para llegar a 55 - 60%
(w / w), basado en la concentración inicial de sacarosa ( Mussatto y Teixeira, 2010 ). Un aumento
adicional en el rendimiento ha demostrado ser dif fi culto porque un alto nivel de glucosa también fue
producido durante la reacción, la inhibición de la actividad transfructosilación. Para resolver este
problema, la glucosa adicional oxidasewas añadió a la mezcla de reacción en un intento de convertir
la glucosa en ácido glucónico, que resultó en un rendimiento de producción de hasta 90 - 98% (w / w) ( Lin procesos incluyendo re fi Ning, blanquear, teñir, y pulido ( Queiroga et al., 2007 ). Estos procesos
y Lee, 2008 ). Como un enfoque para eliminar la glucosa en una mezcla de reacción, glucosa
deshidrogenasa y carbonato de calcio se utilizan simultáneamente para precipitar el ácido glucónico ( Sheu residuos. Para el desarrollo de procesos más limpios, el uso de enzimas está creciendo rápidamente.
et al., 2013 ).
2.4. industria cosmética
Una variedad de los ingredientes utilizados en la industria cosmética se producen rawmaterials
basado en frompetrochemical ( Turner, 2012 ). Recientemente, sin embargo, la industria cosmética se
ha enfrentado a un desafío debido a la creciente demanda de los consumidores para los cosméticos
naturales y ecológicos ( Ansorge-Schumacher y Thum, 2013 ). En consecuencia, la industria
cosmética promueve la investigación básica y los procesos ecológicos que utilizan enzimas para la
elaboración de productos cosméticos más eficaces.
Arbutina es la piel-aclarador más común, y es conocida para inhibir la melanogénesis sin causar
melano-citotoxicidad ( Hori et al., 2004 ). Como un enfoque enzimático para la producción de arbutina,
diversas enzimas se han utilizado, incluyendo α- amilasa, α- glucosidasa, transglucosidasa, sacarosa
fosforilasa, y dextransucrase ( Wang et al., 2006 ). La mayoría de los procesos enzimáticos, sin
embargo, tienen ciertos inconvenientes tales como un alto costo sustrato y rendimiento de conversión
baja ( Seo et al., 2009 ). Recientemente, un alto rendimiento de producción se consiguió usando
amilosacarasa (CE 2.4.1.4), que pertenece a la familia de glicósido hidrolasa 13 que cataliza la
síntesis de glucanos de amilosa-como a partir de sacarosa ( Seo et al., 2012 ). amilosacarasa de geothermalis
Deinococcus fue mostrado para catalizar una reacción de glicosiltransferasa usando sacarosa e
hidroquinona como un donante y un aceptor, respectivamente. El rendimiento máximo de conversión
de α- arbutina fue mayor que 90% en presencia de ácido ascórbico 0,2 mM.
ésteres emolientes son productos oleoquímicos multi-funcionales que se utilizan ampliamente en
productos cosméticos debido a sus propiedades hidratantes. ésteres emolientes tales como miristato de
miristilo fueron producidos convencionalmente usando oxalato de estaño como catalizador a una
temperatura elevada a través de trans-
Esquema 14. Síntesis de fructooligosacáridos de la inulina y la sacarosa por fructosyltranferase. 8
Por favor citar este artículo como: Choi JM, et al, Aplicaciones industriales de la biocatálisis enzima: Estado actual y aspectos futuros, Biotechnol Adv (2015),
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esterificación fi cación de aceites vegetales y alcoholes ( Veit, 2004; Paravidino y Hanefeld de 2011 ).
un esterificación fi reacción de cationes se llevó a cabo sin un disolvente en presencia de cantidades
iguales de reactivos a 75 ° C usando Novozym 435 lipasa, y un rendimiento espacio-tiempo de 6731
2.5. Industria textil
En la industria textil, antes de la conversión en el tejido y el hilo, algodón se somete a varios
consumen grandes cantidades de energía, agua y recursos, la descarga de grandes cantidades de
Los ejemplos típicos incluyen la tinción de los pantalones vaqueros usando celulasa de Trichoderma
viride, y un proceso de bio-carbonización en el caso de la lana ( Yachmenev et al., 2002 ). La celulasa
y proteasa se utilizan en la etapa de pulido para el tinte claro, la mejora del color y la intensidad de la
superficie, y la resistencia a las arrugas ( Dincer y Telefoncu, 2007; Silva et al., 2005 ).
2.6. industrias de pasta y papel
En las industrias de pasta y papel, xilanasa y ligninasa se utilizan para mejorar la calidad de la
pulpa mediante la eliminación de lignina y hemicelulosas, que son impurezas típicas ( Maijala et al.,
2008 ). Inpulp producción, también se emplea la lipasa para degradar el terreno de juego en la
madera, la presencia de lo que provoca un grave problema en el proceso de fabricación. El reciclaje
de papeles impresos tales como periódicos utilizando celulasa también se desarrolló ( Patrick, 2004 ).
En el proceso de fabricación de papel, la lignina produce un color oscuro, y se requiere la eliminación
de la lignina para la fabricación de papel brillante. El proceso de fabricación de pasta química
requiere la adición de una gran cantidad de productos químicos alcalinos y cloro ( Fu et al., 2005 ). El
uso de lacasa fue mostrado para evitar cloro elemental, y signi fi cativamente reduce la cantidad de
residuos que causa el agotamiento del ozono y acidifica fi catiónico, así como un alto consumo de
energía.
3. Tendencia y la estrategia de ingeniería de enzimas para aplicaciones industriales
Para ampliar aún más el uso industrial de enzimas, propiedades catalíticas y biofísicas de
enzimas, tales como ef catalítica fi eficiencia, especificidad de sustrato fi ciudad, y la estabilidad, debe
ser satisfecho fi ed. A pesar de que sería discutible, la estabilidad de las enzimas contra disolventes
orgánicos de calor y por lo general se considera más crítico debido al proceso industrial áspero.
Thermo-estabilidad es a menudo la tolerancia relatedwith contra disolventes orgánicos y mutaciones
desestabilizantes ( Huisman et al., 2010; Reetz et al., 2010; Vázquez-Figueroa et al., 2008 ), Y la
mejora de termo-estabilidad es un requisito previo para aplicaciones industriales ( Bloom et al., 2006 ).
La tendencia actual en la ingeniería termo-estabilidad es combinar el diseño racional basado en la
estructura y métodos computacionales en conjunción con la evolución dirigida. La evolución dirigida
centrada disminuye el tamaño de la biblioteca, pero el aumento de la tasa de éxito en comparación
con randommutagenesis. Por ejemplo, evolución dirigida de Bacillus subtilis lipasa guiado por un valor
de temperatura (B-FIT) enfoque fue demostrado resultar en aumento de casi 500 veces en la vida
media de la enzima a 55 ° C ( Reetz et al., 2006a ). objetivos B-FIT los aminoácidos con alto factor de
temperatura (B-factor de) en la estructura cristalina, lo que indica alta térmica Florida flexibilidad ( Reetz
et al, 2006a.; Reetz y Carballeira, 2007 ). shuf DNA Florida ing través esquema generado
efectivamente una clase de hongos termoestable II celobiohidrolasas (CBH II) a través de la
proyección de sólo 48 variantes ( Heinzelman et al., 2009 ). Esquema es un método de cálculo que
estima la disrupción estructural de la enzima después de la recombinación de ADN ( Silberg et al.,
2004 ). Los extremófilos se han considerado fuentes útiles de enzimas industriales con alta
estabilidad contra el calor, sales y pH ( Elleuche et al, 2014.; Illanes et al, 2012.; Kazlauskas y
Bornscheuer, 2009 ). Las enzimas de organismos extremófilos han revelado tener una estructura
compacta y un número
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de carga interacciones en comparación con homólogos mesófilas, y tales análisis estructurales y
funcionales de extremos-enzimas han proporcionado alguna información sobre el diseño de las
enzimas con alta estabilidad. A pesar de que la expresión funcional de dichas enzimas sigue siendo
un reto ( van den Burg, 2003 ), Que pueden ser utilizados como productos de partida plantillas para la
ingeniería de la estabilidad de las enzimas.
En cuanto a la propiedad catalítica de las enzimas, la evolución dirigida-centrado se ha aplicado
pérdida de compuestos intermedios, por consiguiente reduciendo la cantidad de enzimas en el
ampliamente para aumentar la actividad catalítica o para alterar el sustrato y el producto específico fi (ciudades
Evran et al, 2012.; Kumar y Singh, 2013; Sterner, 2011 ). La evolución dirigida basada en el
mecanismo de la fenilalanina amonio liasa (PAL) de reacción dio como resultado un 15 veces mayor
actividad y la disminución de la inhibición de sustrato en comparación con la enzima de tipo salvaje ( Bartschmoléculas de andamio para inducir la unión de enzimas, incluyendo ADN, ARN y proteínas, ha
y Bornscheuer de 2010 ). Enantioselectividad de la epóxido hidrolasa se mejoró por evolución dirigida
alongwith colada iterativo ( Reetz et al., 2006b ). Casting (sitio activo Combinatoria Prueba de
Saturación) ha demostrado ser eficaz para el diseño sistemático y análisis de una biblioteca centrada
alrededor de la bolsa de unión de enzimas ( Reetz et al., 2006b ). PROSAR es un método de cálculo
estratégico que estadísticamente analiza las relaciones secuencia-actividad de proteínas ( Fox et al.,
2007 ). La evolución dirigida conjuntamente con PROSAR, se utilizó con éxito en el desarrollo de
cetorreductasa (KRED) y R- transaminasa selectiva (ATA-117) para mejorar la actividad catalítica y
enantioselectividad hacia sustratos industrialmente relevantes ( Savile et al., 2010; Liang et al., 2009;
Huisman et al., 2010 ). Para utilizar la evolución, la selección dirigida centrado-alto rendimiento (HTS)
systemwith alta sensibilidad y ef fi ciencia es crucial ( Acker y Auld, 2014; Kazlauskas, 2008 ). En este
sentido, el circuito genética sería uno de los métodos de selección prominentes. Recientemente,
varios circuitos genéticos se han desarrollado para medir directamente la actividad de variantes de la
enzima en base a los niveles de expresión de genes informadores, y efectivamente utilizado para la
evolución dirigida de enzimas ( Choi et al, 2014A, 2014b.; Jeong et al, 2012.; Kim et al., 2010 ).
En un intento de explorar el uso de enzimas en reacciones no naturales, mucho esfuerzo se
beenmade para crear enzimas con nuevas funciones catalíticas basadas en el diseño racional y
métodos computacionales en conjunción con la evolución dirigida ( Lee et al., 2009; Park et al., 2006;
Song y Tezcan, 2014; Sterner et al., 2008 ). Al mismo tiempo, los enfoques de modelización
computacional, como el cálculo de la perturbación de energía libre, simulación sustrato de
acoplamiento, dinámica molecular (MD) y cálculo de la energía de enlace de hidrógeno, se han
empleado en un diseño racional ( Krieger et al., 2002; Schwab et al., 2008; Bommarius et al., 2006;
Illanes et al, 2012.; Kazlauskas y Lutz, 2009; Khare et al., 2012 ). En particular, simulaciones MD
pueden predecir los residuos inestables útil para alterar ya sea la actividad o termo-estabilidad. Por
ejemplo, la termoestabilidad de la xilanasa fue signi fi cativamente mejorado sin el gasto de la
actividad de la enzima a través de la optimización de los residuos inestables predichos por
simulaciones MD ( Bhabha et al., 2011; Joo et al., 2011; Lee et al., 2010 ). Choi et al. informado de un
diseño racional de ornitina descarboxilasa con actividad catalítica mejorada usando acoplamiento
sustrato y simulaciones MD ( Choi et al., 2014A, 2014b ). Teniendo en cuenta la importancia de la
dinámica de las reacciones enzimáticas, MD simulación proporcionará información valiosa sobre el Florida
flexibilidad - relación función de las enzimas, que no ha sido posible por las estructuras enzimáticas
cristal. Un nuevo experimento de RMN en conjunción con mutagénesis se ha aplicado al estudio de
la catálisis enzimática ( Doucet, 2011 ). Al igual MD, este enfoque proporcionará una idea de la Florida flexibilidad
- función de relación para entender el efecto de las redes globales de Florida residuos flexibles sobre
la actividad y la estabilidad de enzimas ( Kim et al, 2013.; Seo et al., 2014 ). objetivo último en el
diseño racional de enzimas industriales es generar enzimas con nuevas y sólidas funciones
catalíticas para procesos industriales.
de novo el diseño de las enzimas industriales en esta etapa sigue siendo difícil de alcanzar, pero
algunos estudios han demostrado éxitos notables por el método Rosetta ( Rothlisberger et al., 2008;
Siegel et al., 2010 ). Rosetta es el enfoque computacional más avanzado que se aplica a la mecánica
cuántica diseño computacional de enzimas novedosas basadas en andamios actual ( Das y Baker,
2008 ).
Por favor citar este artículo como: Choi JM, et al, Aplicaciones industriales de la biocatálisis enzima: Estado actual y aspectos futuros, Biotechnol Adv (2015),
http://dx.doi.org/10.1016/j.biotechadv.2015.02.014
9
proceso Multi-enzima ofrece algunas ventajas, tales como fácil andmonitoring control de
procesos, una alta velocidad de reacción, fácil ampliación y bajo subproductos tóxicos ( Rollin et al.,
2013 ). Sin embargo, proceso de múltiples enzimas tiene ciertos obstáculos aún que superar para la
aplicación industrial, tales como el requisito de una gran cantidad de enzimas y baja concentración
intermedia. Para mejorar el rendimiento de velocidad de reacción y conversión, el concepto de
canalización sustrato se ha intentado ( Zhang, 2011 ). La canalización de los intermedios en las
enzimas de próxima etapa puede permitir el diseño de un ef fi sintético ciente pathwaywithout la
sistema de reacción. Típicamente, se intentó la co-localización de las enzimas relevantes en
proximidad de las proteínas utilizando aminoácidos no naturales ( Seo et al., 2011 ). El uso de
llevado a un mayor rendimiento de producto ( Fu et al., 2014 ).
4. Conclusiones
Durante las últimas décadas, los procesos basados ​en enzimas han sustituido de forma continua los
procesos químicos tradicionales en muchas áreas, especialmente
fi industrias químicas andpharmaceutical Ne. Debido a thedevelopment de nuevas tecnologías en
ingeniería de enzimas, así como la presión económica y la preocupación pública por la
contaminación ambiental, dicha sustitución será más acelerado. Por lo tanto, sería una gran
oportunidad para los investigadores a explorar nuevas aplicaciones y tecnologías de ingeniería de
enzimas. tendencia actual en la ingeniería de enzimas sobre la base de la evolución-centrado dirigido
en conjunctionwith métodos computacionales continuará e incluso se acelerará. algoritmos
computacionales para el enfoque sistemático, como PROSAR, serán más optimizados para
aplicaciones sencillas. Newalgorithms análisis de la secuencia de la función relationshipwill ser
exploradas para las bibliotecas sistemáticas y diversas generatingmore. Una de las más difíciles
problemas en ingeniería de enzimas es la falta de normas generales en priorizar propiedades de las
enzimas que se mejore y la selección de métodos apropiados. elección equivocada en cierta etapa
de ingeniería podría poner en peligro todo el proyecto. La acumulación de casos de éxito en la
ingeniería de enzimas proporcionará reglas adecuadas en la elección. Para desafiar el diseño
racional de de novo enzima con propiedad deseada, el conocimiento mecanicista sobre las relaciones
estructura-función y dynamicsfunction debería estar más avanzada para mejorar el algoritmo
computacional para el diseño de la enzima. Con las tecnologías desarrolladas, las enzimas de diseño
serán más fácilmente creados e industrialmente aplicado.
Expresiones de gratitud
Este trabajo fue apoyado por el Programa de Biología y Medicina Tecnología para el Desarrollo (desde
2.013 hasta 076.530) y del investigador del programa a mitad de carrera (2.014 hasta 004.198) de la
Fundación Nacional de Investigación (NRF), financiado por el Ministerio de Ciencia, las TIC y la planificación
futura.
referencias
Acker MG, Auld DS. Consideraciones para el diseño y la notificación de los ensayos enzimáticos en alto
aplicaciones de cribado de rendimiento. Perspect Sci 2014; 1: 56 - 73.
Akoh CC, Chang SW, Lee GC, Shaw JF. Biocatálisis para la producción de productos industriales
y alimentos funcionales de arroz y otros productos agrícolas. J Agric Food Chem 2008; 56: 10445 - 51.
Aldridge S. Industria respalda la biocatálisis para la fabricación más verde. Nat Biotechnol 2013;
31:95 - 6.
Althoff EA, Wang L, Jiang L, Giger L, Lassila JK, Wang Z, et al. Diseño robusto y optimización
ción de enzimas retroaldólica. Prot Sci 2012; 21: 717 - 26.
Ansorge Schumacher-MB, Thum O. lipasas inmovilizadas en la industria cosmética. Chem
Soc Rev 2013; 42: 6475 - 90.
Asano Y. Descripción general de la detección de nuevos catalizadores microbianos y sus usos en orgánica
síntesis - selección y optimización de biocatalizadores. J Biotechnol 2002; 94: 65 - 72.
Asano Y, Yasuda T, Tani Y, Yamada H. Microbial-degradación de compuestos de nitrilo. 7.
Un nuevo método enzimático de la producción de acrilamida. Agric Biol Chem Tokyo 1982; 46: 1183 - 9.
Baker, P, Seah SYK. Diseño racional de estereoselectividad en la aldolasa piruvato clase II
BphI. J Am Chem Soc 2011; 134: 507 - 13.
10 J.-M. Choi et al. / Biotecnología Avances xxx (2015) xxx - xxx
Barile D, Rastall AR. La leche humana y oligosacáridos relacionados como prebióticos. Curr Opin
Biotechnol 2013; 24: 214 - 9.
Bartsch S, Bornscheuer UT. El análisis mutacional de fenilalanina amonio liasa a
mejorar las tasas de reacciones para diferentes sustratos. Protein Eng Des Sel 2010; 23: 929 - 33.
Campana BM, Briggs JR, Campbell RM, Chambers SM, Gaarenstroom PD, Hippler JG, et al. Glyc-
Erin como materia prima renovable para la producción de epiclorhidrina. El proceso GTE Limpio 2008; 36: 657 - 61.
SJ Benkovic, Hammes-Schiffer S. Una perspectiva sobre la catálisis enzimática. Ciencia 2003; 301:
1196 - 202.
Bhabha G, Lee J, Ekiert DC, Gam J, Wilson IA, Dyson HJ, et al. A knockout dinámico revela
que conformacional Florida fluctuaciones en Florida influir en la etapa química de la catálisis enzimática. Ciencia 2011; 332:
234 - 8.
Bloom JD, Labthavikul ST, Otey CR, Arnold FH. estabilidad de la proteína promueve la capacidad de evolución. proc
Natl Acad Sci 2006; 103: 5869 - 74.
Bommarius AS, Broering JM, Chaparro-Riggers JF, Polizzi KM. Proyección de alto impacto
para la estabilidad de proteínas mejorada. Curr Opin Biotech 2006; 17: 606 - 10.
Capó V, Gervaise C, Favrelle A, Sarazin C, Djedaini-Pilard F. la catálisis enzimática in
presencia de ciclodextrinas. Curr Org Chem 2010; 14: 1323 - 36.
Bornscheuer UT, Huisman GW, Kazlauskas RJ, Lutz S, Moore JC, Robins K. la ingeniería de la
tercera ola de la biocatálisis. Naturaleza 2012; 485: 185 - 94.
Un Bruggink, Roos CE, de Vroom E. acilasa de penicilina en la producción industrial de
β- lactámicos. Proceso Org Res Dev 1998; 2: 128 - 33.
BruinsME, Strubel M, van Lieshout JFT, Janssen AEM, BoomRM. síntesis de oligosacáridos
por el hipertermoestable beta-glucosidasa de Pyrococcus furiosus: cinética y el modelado. Enzym Microb
Technol 2003; 33: 3 - 11.
Chauhan S, Wu S, Blumerman S, Fallon RD, Gavagan JE, DiCosimo R, et al. Puri fi catión,
la clonación, la secuenciación y la sobreexpresión en Escherichia coli de una nitrilasa alifático regioselectiva de facilis
Acidovorax 72 W. Appl Microbiol Biotechnol 2003; 61: 118 - 22.
CheriyanM, Toone EJ, Fierke CA. La mejora en la naturaleza: la remodelación del sitio activo produce
altamente ef fi actividad ciente aldolasa hacia sustratos electrófilos hidrófobos. Bioquímica 2012; 51: 1658 - 68.
Choi H, Kyeong HH, Choi JM, Kim SA. Diseño racional de la ornitina descarboxilasa con
alta actividad catalítica para la producción de putrescina. Appl Microbiol Biotechnol 2014A; 1 - 8.
Choi SL, Rha E, Lee SJ, Kim H, K Kwon, Jeong YS, et al. Hacia un generalizado y alto
sistema de cribado enzima rendimiento basado en arti fi circuitos genéticos CIAL. ACS Synth Biol 2014b; 3: 163 - 71.
Chung CK, Bulger PG, Kosjek B, Belyk KM, Rivera N, Scott ME, et al. Proceso de desarrollo
De c - N cruzada de acoplamiento y reacciones biocatalíticas enantioselectivas para la síntesis asimétrica de
niraparib. Proceso Org Res Dev 2013; 18: 215 - 27.
Cui Y, Cui W, Liu Z, Zhou L, Kobayashi M, Zhou Z. Mejora de la estabilidad del nitrilo
hidratasa a través de intercambio de fragmento de proteína. Biochem Biophys Res Commun 2014; 450 (1): 401 - 8.
Das R, Baker D. modelado macromolecular con Rosetta. Annu Rev Biochem 2008; 77:
363 - 82.
Del Valle EMM. Ciclodextrinas y sus usos: una revisión. Proceso Biochem 2004; 39:
1033 - 46.
AA Desai. fabricación Sitagliptina: una historia convincente de la química verde, proceso de intensificación
fi de cationes, y la catálisis asimétrica industrial. Chem Angew 2011; 50: 1974 - 6.
Dincer A, Telefoncu A. La mejora de la estabilidad de la celulasa por inmovilización sobre modi fi ed
alcohol de polivinilo recubierto bolas de quitosano. J Mol Catal B Enzym 2007; 45: 10 - 4.
Doucet N. Puede enzima bene ingeniería fi t de la modulación de los movimientos de proteínas?
Las lecciones aprendidas a partir de experimentos de dispersión de relajación de RMN. Protein Pept Lett 2011; 18: 336 - 43.
Duan XG, Chen S, Chen J, Wu J. Aumento de la producción de ciclodextrina por síncrona
utilización de isoamilasa y alfa-CGTasa. Appl Microbiol Biotechnol 2013; 97: 3467 - 74.
Elleuche S, Schroder C, Sahm K, Antranikian G. Extremozymes-biocatalizadores con singular
inmuebles de microorganismos extremófilos. Curr Opin Biotechnol 2014; 29C: 116 - 23.
Estell DA, Graycar TP, Wells JA. La Construcción de un enzima por el sitio-directedmutagenesis sea
resistente a la oxidación química. J Biol Chem 1985; 260: 6518 - 21.
Evran S, Telefoncu A, Sterner R. evolución dirigida de ( βα) ( 8) enzimas-barril: establecer la actividad de isomerización
phosphoribosylanthranilate en el andamio de la triptófano sintasa de la subunidad. Protein Eng Des Sel 2012;
25: 285 - 93.
P. Fernandes Las enzimas en el procesamiento de alimentos: una visión general condensada sobre las estrategias para una mejor
biocatalizadores. Enzym Res 2010; 2010: 862.537.
Figueroa-González I, Quijano G, Ramírez G, Cruz-Guerrero A. Los probióticos y
prebióticos - perspectivas y desafíos. J Agric Food Sci 2011; 91: 1341 - 8.
Fox RJ, Davis SC, Mundorff CE, Newman LM, Gavrilovic V, Ma SK, et al. Mejorar catalítica
función por la evolución de la enzima impulsado por PROSAR. Nat Biotechnol 2007; 25: 338 - 44.
Frodsham L, Golden M, Hard S, Kenworthy MN, Klauber DJ, Leslie K, et al. Uso de
ω- química enzima transaminasa en la síntesis de un inhibidor de JAK2 quinasa. Proceso Org Res Dev 2013; 17:
1123 - 30.
Fu GZ, Chan AW, Minns DE. Evaluación preliminar del beneficio ambiental fi ct de
blanqueo enzimático para pasta y papel. Ciclo de Vida Evaluar Int J 2005; 10: 136 - 42.
Fu J, Yang YR, Johnson-Buck A, Lium, Liu Y, Walter GN, et al. complejos de múltiples enzimas en
andamios de ADN capaces de canalización sustrato con una arti fi basculante cial. Nat Nanotechnol 2014; 9: 531 - 6.
Ghislieri D, Turner NJ. Biocatalıtica se acerca a la síntesis de los enantiómeros puros
aminas quirales. Top Catal 2013; 57: 284 - 300.
Ghislieri D, Verde AP, Pontini M, Willies SC, Rowles I, Frank A, et al. la Construcción de un
amino oxidasa enantioselectiva para la síntesis de bloques de construcción farmacéuticas y productos naturales
alcaloides. J Am Chem Soc 2013; 135: 10863 - 9.
Giger L, Caner S, Obexer R, Kast P, Baker D, Ban N, et al. Evolución de una retro-diseñada
aldolasa conduce a la completa remodelación del sitio activo. Nat Chem Biol 2013; 9: 494 - 8.
Por favor citar este artículo como: Choi JM, et al, Aplicaciones industriales de la biocatálisis enzima: Estado actual y aspectos futuros, Biotechnol Adv (2015),
http://dx.doi.org/10.1016/j.biotechadv.2015.02.014
Girardin M, Ouellet SG, Gauvreau D, Moore JC, Hughes G, Devine PN, et al. Convergente
síntesis kilogramo escala de antagonista dual del receptor de orexina. Proceso Org Res Dev 2012; 17: 61 - 8.
Griengl H, Schwab H, Fechter M. La síntesis de cianhidrinas quirales por oxynitrilases.
Trends Biotechnol 2000; 18: 252 - 6.
Groger H, Asano Y, Bornscheuer UT, Ogawa J. Desarrollo de procesos de biocatálisis en
Japón y Alemania: las sinergias de investigación a aplicaciones industriales. Chem Asian J 2012; 7: 1138 - 53.
Cuelgue YD, Woodams EE. Optimización de la producción enzimática de los fructooligosacáridos
a partir de sacarosa. Food Sci Technol Leb 1996; 29: 578 - 80.
Cuelgue H, MuWM, Jiang B, ZhaoM, Zhou LML, Zhang T, et al. Los avances recientes en biológica
anhídrido difructosa producción III usando inulasa II de inulina. Appl Microbiol Biotechnol 2011; 92: 457 - sesenta
y cinco.
Cuelgue H, Miao M, Li YG, Jiang B, Mu WM, Zhang T. Difructosan anhídridos preparación III
a partir de sacarosa por reacción de enzimas acopladas. Carbohydr Polym 2013; 92: 1608 - 11.
Haraguchi K, Yoshida M, Ohtsubo K. fructotransferase inulina (DFA III productoras) a partir de
Leifsonia sp T88-4. Carbohydr Polym 2006; 66: 75 - 80.
Heinzelman P, CD Nieve, Wu I, Nguyen C, Villalobos A, Govindarajan S, et al. Una familia de
celulasas fúngicas termoestables creados por la estructura guiada por recombinación. Proc Natl Acad Sci 2009;
106: 5610 - 5.
G. Hills Uso industrial de lipasas para producir ésteres de ácidos grasos. Eur J Lipid Sci Technol 2003;
105: 601 - 7.
Hilterhaus L, Thum O, Liese A. concepto de reactor para la conversión libre de disolventes catalizada por lipasa
sion de reactivos altamente viscosos que forman sistemas de dos fases. Proceso Org Res Dev 2008; 12: 618 - 25.
Hori I, Nihei Ki, Kubo I. criterios estructurales para la despigmentación mecanismo de arbutina.
Phytother Res 2004; 18: 475 - 9.
Huang RL, QIW, Su RX, El ZM. La integración de la catálisis enzimática y ácido para convertir la glucosa
en 5-hidroximetil-furfural. Chem Commun 2010; 46: 1115 - 7.
Huisman GW, Collier SJ. En el desarrollo de nuevos procesos para biocatalıticos práctica
síntesis farmacéutica. Curr Opin Chem Biol 2013; 17: 284 - 92.
Huisman GW, Liang J, Krebber A. Práctica fabricación de alcohol quiral usando
ketoreductases. Curr Opin Chem Biol 2010; 14: 122 - 9.
Un Illanes, Cauerhff A, L Wilson, Castro GR. Las tendencias recientes en la ingeniería de la biocatálisis.
Biorecursos Technol 2012; 115: 48 - 57.
Jennewein S, Schürmann M, Wolberg M, Hilker I, Luiten R, Wubbolts M, et al. dirigida
evolución de un biocatalizador industrial: 2-desoxi- RE- ribosa aldolasa 5-fosfato. Biotechnol J 2006; 1: 537 - 48.
Jensen VJ, Rugh S. [33] producción y aplicación de glucosa inmovilizada a escala industrial
isomerasa. En: Klaus M, editor. Methods in Enzymology. Academic Press; 1987. p. 356 - 70.
Jeong YS, Choi SL, Kyeong HH, Kim JH, Kim EJ, Pan JG, et al. pantalla- de alto rendimiento
ING sistema basado en activador de la transcripción fenólicos sensible para la evolución dirigida de enzimas que
degradan organofosforados. Protein Eng Des Sel 2012; 25: 725 - 31.
Jin HX, Hu ZC, Zheng YG. hidrólisis enantioselectiva de epiclorhidrina usando toda
Aspergillus niger ZJB-09173 células en disolventes orgánicos. J Biosci 2012; 37: 695 - 702.
Jin HX, Liu ZQ, Hu ZC, Zheng YG. Biosíntesis de (R) -epiclorohidrina a alta sustrato
concentración por resolución cinética de epiclorhidrina racémica con un epóxido hidrolasa recombinante. Eng
Life Sci 2013; 13: 385 - 92.
Joo JC, Paquete SP, KimYH, Yoo YJ. termoestabilización de Bacillus circulans xilanasa: Compu
tational optimización de residuos inestables basado en térmica Florida análisis fluctuación. J Biotechnol 2011; 151: 56 - sesenta
y cinco.
Kang MS, Han SS, Kim MY, Kim BY, Huh JP, Kim SA, et al. Una expresión de alto nivel en
Corynebacterium glutamicum de nitrilo hidratasa de Rhodococcus rhodochrous para la producción de acrilamida.
Appl Microbiol Biotechnol 2014; 98: 4379 - 87.
Karboune S, Archelas A, Baratti J. Propiedades de la epóxido hidrolasa de Aspergillus niger para
la resolución cinética hidrolítica de epóxidos en medio orgánico puro. Enzyme Microb Technol 2006; 39: 318 - 24.
Kazlauskas RJ. Ensayo cuantitativo de hidrolasas para la actividad y selectividad usando el color
cambios. Protein Science Encyclopedia. Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA; 2008.
Kazlauskas RJ, Bornscheuer UT. La búsqueda de mejores estrategias de ingeniería de proteínas. Nat Chem
Biol 2009; 5: 526 - 9.
Kazlauskas R, Lutz S. La ingeniería de enzimas por ' inteligente ' diseño. Curr Opin Chem Biol
2009; 13: 1 - 2.
Khare SD, Kipnis Y, Greisen PJ, Takeuchi R, Ashani Y, Goldsmith M, et al. computacional
rediseño de una metaloenzima mononuclear zinc para la hidrólisis de organofosfato. Nat Chem Biol 2012; 8: 294 -
300.
Kikuchi H, Inoue M, Saito H, Sakurai H, Aritsuka T, Tomita F, et al. productividad industrial
ción de anhídrido de difructosa III (DFA III) a partir de inulina bruta extrae de las raíces de achicoria utilizando Arthrobacter
transfructosilasa sp H65-7. J Biosci Bioeng 2009; 107: 262 - 5.
Kim JH, Lee SC, Kyeong HH, Kim SA. Un sistema de circuito genético basado en la detección de quórum
señalización para la evolución dirigida de enzimas de extinción de quórum. Chembiochem 2010; 11: 1748 - 53.
Kim E, Lee S, Jeon A, Choi JM, SA Lee, Hohng S, et al. Una disección de una sola molécula de ligando
la unión a una proteína con dinámica intrínseca. Nat Chem Biol 2013; 9. [313- +].
Koivistoinen OM, Kuivanen J, Barth D, Turkia H, Pitkanen JP, Penttila M, et al. Ácido glicólico
la producción en las levaduras de ingeniería Saccharomyces cerevisiae y Kluyveromyces lactis. Microbial Cell Fact
2013; 12.
Kotik M, Kyslík P. Puri fi cationes y caracterización de un nuevo epóxido enantioselectiva
hidrolasa de Aspergillus niger M200. Biochim Biophys Acta Gen Suj 2006; 1760: 245 - 52.
Kotik M, Archelas A, Famerova V, Oubrechtova P, Kren V. la evolución de un laboratorio
epóxido hidrolasa - hacia un biocatalizador enantioconvergent. J Biotechnol 2011; 156: 1 - 10.
 J.-M. Choi et al. / Biotecnología Avances xxx (2015) xxx - xxx
Krieger E, Koraimann G, G. Vriend El aumento de la precisión de los modelos comparativos con
YASARA NOVA - una fuerza de auto-parametrización fi vejez. Las proteínas 2002; 47: 393 - 402.
Un Kumar, S. Singh La evolución dirigida: sastrería biocatalizadores para aplicaciones industriales.
Crit Rev Biotechnol 2013; 33: 365 - 78.
Lee EY. hidrólisis enantioselectiva de epiclorhidrina en disolventes orgánicos con recombi-
Nant epóxido hidrolasa. J Ind Eng Chem 2007; 13: 159 - 62.
Lee SC, Chang YJ, Shin DM, Han J, Seo MH, Fazelinia H, et al. Diseñar el sustrato
especí fi ciudad de RE- hidantoinasa usando un enfoque racional. Enzyme Microb Technol 2009; 44: 170 - 5.
Lee SC, Kim JH, Kim SA. Diseño y evolución de los biocatalizadores. Curr Org Chem 2010; 14:
1894 - 901.
Leemhuis H, Kelly RM, Dijkhuizen L. Ingeniería de glucanotransferasas de ciclodextrina y
el impacto de las aplicaciones biotecnológicas. Appl Microbiol Biotechnol 2010; 85: 823 - 35.
Leonova TE, Astaurova OB, Ryabchenko LE, Yanenko AS. Nitrilo hidratasa de Rhodococcus
- la optimización de la síntesis en las células y aplicaciones industriales para la producción de acrilamida. Appl
Biochem Biotech 2000; 88: 231 - 41.
Li T, Liang J, Ambrogelly A, Brennan T, Gloor G, Huisman G, et al. ef fi ciente, chemoenzymatic
proceso para la fabricación del bicíclico boceprevir [3.1.0] prolina intermedio basado en amina desimetrización
oxidasa catalizada. J Am Chem Soc 2012; 134: 6467 - 72.
Liang J, Lalonde J, Borup B, Mitchell V, Mundorff E, Trinh N, et al. Desarrollo de un Biocat-
proceso alytic como una alternativa a la ( -) - DIP-Cl-mediada reducción asimétrica de un intermedio clave de
montelukast. Proceso org Res Dev 2009; 14: 193 - 8.
Lin TJ, Lee YC. De alto contenido de producción fructooligosacáridos utilizando dos inmovilizado
microorganismos en un biorreactor de transporte aéreo-bucle interno. J Chin Inst Chem Eng 2008; 39: 211 - 7.
Lutz S, Liu LF, Liu YC. Ingeniería quinasas fosforilan a los análogos de nucleósidos para antivi-
terapia ral y el cáncer. Chimia 2009; 63: 737 - 44.
Ma SK, Gruber J, Davis C, Newman L, Gray D, Wang A, et al. Un biocatalıtica-por-diseño verde
proceso para atorvastatina intermedio. Chem Verde 2010; 12: 81.
Maervoet VET, De Mey M, Beauprez J, De Maeseneire S, Soetaert WK. la mejora de la
conversión microbiana de glicerol en 1,3-propanodiol usando ingeniería metabólica. Proceso org Res Dev 2011;
15: 189 - 202.
Maijala P, KleenM, Westin C, Poppius-Levlin K, Herranen K, Lehto JH, et al. biomecánico
la fabricación de pasta de madera blanda con enzimas y hongos de podredumbre blanca rivulosus Physisporinus.
EnzymMicrob Technol 2008; 43: 169 - 77.
Meadows RE, Mulholland KR, Schürmann M, Golden M, Kierkels H, Meulenbroeks E,
et al. ef fi síntesis ciente de (S) -1- (5- Florida uoropyrimidin-2-il) etilamina utilizando un
ω- biocatalizador transaminasa en un sistema de dos fases. Proceso Org Res Dev 2013; 17: 1117 - 22.
Moore N, Chao CW, Yang LP, Tormenta H, Oliva-Hemker M, Saavedra JM. Efectos de fructo
oligosacáridos suplementada cereal infantil: un estudio doble ciego, aleatorizado. Br J Nutr 2003; 90: 581 - 7.
Mussatto SI, JA Teixeira. Aumento de los fructooligosacáridos el rendimiento y la productividad
fermentación en estado sólido con Aspergillus japonicus el uso de residuos agroindustriales como apoyo y fuente de
nutrientes. Biochem Eng J 2010; 53: 154 - 7.
Nagasawa T, Nakamura T, Yamada H. Producción de ácido acrílico y ácido metacrílico
utilizando Rhodococcus rhodochrous nitrilasa J1. Appl Microbiol Biotechnol 1990; 34: 322 - 4.
Nagasawa T, Wieser M, Nakamura T, Iwahara H, Yoshida T, Gekko K. nitrilasa de
Rhodococcus rhodochrous J1. La conversión en la forma activa por la asociación de la subunidad. Eur J Biochem 2000;
267: 138 - 44.
Nakamura CE, Whited GM. La ingeniería metabólica para la producción microbiana de 1,3-
propanodiol. Curr Opin Biotechnol 2003; 14: 454 - 9.
Nestlé BM, Nebel BA, Hauer B. Los recientes progresos en la biocatálisis industrial. Curr Opin Chem
Biol 2011; 15: 187 - 93.
Ogawa J, Shimizu S. enzimas microbianas industriales: su descubrimiento por el cribado y uso en
la producción a gran escala de productos químicos útiles en Japón. Curr Opin Biotechnol 2002; 13: 367 - 75.
O'Reilly E, Iglesias C, Ghislieri D, Hopwood J, Galman JL, Lloyd RC, et al. Un regio- y
estereoselectiva ω- transaminasa / monoamina oxidasa cascada para la síntesis de quirales pirrolidinas
2,5-disustituidos. Chem Angew 2014; 53: 2447 - 50.
Oroz-Guinea I, García-Junceda E. Enzima cataliza reacciones tándem. Curr Opin Chem
Biol 2013; 17: 236 - 49.
Padmakumar R, Oriel P. La bioconversión de acrilonitrilo a la acrilamida usando un termoestable
nitrilo hidratasa. Appl Biochem Biotechnol 1999; 77 - 79: 671 - 9.
Panesar PS, Kumari S, panesar R. Biotecnológica se acerca para la producción de prebi-
otics y sus aplicaciones potenciales. Crit Rev Biotechnol 2013; 33: 345 - 64.
Panova A, Mersingera LI, Liu Q, Foo T, Roe DC, Spillan WL, et al. sintetizan chemoenzymatic
sis de ácido glicólico. Adv Synth Catal 2007; 349: 1462 - 74.
Paravidino M, Hanefeld U. acilación enzimática: evaluar el verdor de diferentes acilo
los donantes. Chem Verde 2011; 13: 2651 - 7.
Parque AR, Oh DK. la producción de galacto-oligosacárido utilizando microbiana beta-galactosidasa:
Estado actual y perspectivas. Appl Microbiol Biotechnol 2010; 85: 1279 - 86.
Parque SA, NamSH, Lee JK, Yoon CN, Mannervik B, Benkovic SJ, et al. Diseño y evolución de
nueva actividad catalítica con un armazón de proteína existente. Ciencia 2006; 311: 535 - 8.
Patrick K. La tecnología enzimática mejora ef fi eficiencia, costo, seguridad de la eliminación de adherencias pro-
gramo. Papel Edad 2004; 120: 22 - 5.
Placier G, Watzlawick H, Rabiller C, Mattes R. Evolucionadas beta-galactosidasas de
Geobacillus stearothermophilus con rendimiento transgalactosylation mejorado para la producción de
galacto-oligosacárido. Appl Environ Microbiol 2009; 75: 6312 - 21.
Pudjiraharti S, Takesue N, Katayama T, Lisdiyanti P, Hana fi M, Tanaka M, et al. Actinomy-
cete Nonomuraea sp aislado del suelo de Indonesia es un nuevo productor de fructotransferase inulina. J Biosci
Bioeng 2011; 111: 671 - 4.
Queiroga AC, Pintado AM, Malcata FX. modi Novel microbianas mediada fi cationes de lana.
EnzymMicrob Technol 2007; 40: 1491 - 5.
Por favor citar este artículo como: Choi JM, et al, Aplicaciones industriales de la biocatálisis enzima: Estado actual y aspectos futuros, Biotechnol Adv (2015),
http://dx.doi.org/10.1016/j.biotechadv.2015.02.014
11
Rastall AR. Gluco y galactooligosacáridos en los alimentos: actualización sobre efectos en la salud y perti-
Vance en la nutrición saludable. Curr Opin Clin Nutr Metab Care 2013; 16: 675 - 8.
Reetz MT. La biocatálisis en la química orgánica y la biotecnología: pasado, presente y futuro. J
Am Chem Soc 2013; 135: 12480 - 96.
Reetz MT, Carballeira JD. Iterativo mutagénesis de saturación (ISM) para la rápida dirigida evolu-
ción de enzimas funcionales. Nat protoc 2007; 2: 891 - 903.
ReetzMT, Carballeira JD, Vogel A. saturationmutagenesis iterativa sobre la base de factores B
como una estrategia para aumentar la termoestabilidad de la proteína. Angew Chem Int Ed 2006a; 45: 7745 - 51.
Reetz MT, Wang LW, BocolaM. La evolución dirigida de enzimas enantioselectivas: iterativa
ciclos de fundición para sondear espacio proteína-secuencia. Angew Chem Int Ed 2006b; 45: 1236 - 41.
Reetz MT, Bocola M, Wang LW, Sanchis J, Cronin A, Arand M, et al. evolución dirigida de
un epóxido hidrolasa enantioselectiva: descubrir la fuente de enantioselectividad en cada etapa evolutiva. J Am
Chem Soc 2009; 131: 7334 - 43.
Reetz MT, Soni P, Fernández L, Gumulya Y, Carballeira JD. El aumento de la estabilidad de una
enzimática hacia disolventes orgánicos hostiles de evolución dirigida basados ​en mutagénesis de saturación
iterativo utilizando el método B-FIT. Chem Commun 2010; 46: 8657 - 8.
Ricca E, B Brucher, Schrittwieser JH. Multi-enzimáticas reacciones en cascada: visión general y
perspectivas. Adv Synth Catal 2011; 353: 2239 - 62.
Rieckenberg F, Ardao I, Rujananon R, Zeng AP. -Cell libre de la síntesis de 1,3-propanodiol
a partir de glicerol con un alto rendimiento. Eng Life Sci 2014; 14: 380 - 6.
Rodríguez-Colinas B, de Abreu MA, Fernández-Arrojo L, de Beer R, Poveda A, Jimenez-
Barbero J, et al. Producción de galactooligosacáridos por la beta-galactosidasa de Kluyveromyces lactis: análisis
comparativo de células permeabilizadas frente a la enzima soluble. J Agric Food Chem 2011; 59: 10477 - 84.
Rollin JA, Tam TK, Zhang YHP. Nuevo paradigma de la biotecnología: biosistemas libres de células para
bioproducción. Chem Verde 2013; 15: 1708 - 19.
Roman-Leshkov Y, Chheda JN, Dumesic JA. modi fase fi ERS promueven ef fi la producción ciente
de hidroximetilfurfural de la fructosa. Ciencia 2006; 312: 1933 - 7.
Rosatella AA, Simeonov SP, Frade RFM, Afonso CAM. 5-hidroximetil-furfural (HMF) como una
plataforma bloque de construcción: propiedades biológicas, la síntesis y aplicaciones sintéticas. Chem Verde 2011;
13: 754 - 93.
Rothlisberger D, Khersonsky O, Wollacott AM, Jiang L, DeChancie J, Betker J, et al. Kemp
catalizadores de eliminación por diseño enzima computacional. Naturaleza 2008; 453: 190 - 5.
Sabra W, D Dietz, Tjahjasari D, Zeng AP. análisis Biosystems y la ingeniería de microbiana
consorcios para la biotecnología industrial. Eng Life Sci 2010; 10: 407 - 21.
Sánchez, de, Rodríguez AM, Silva E, Caicedo LA. biotransformación sacarosa a fructooligo-
sacáridos por Aspergilo células libres sp N74. Food Tech Bioprocesos 2010; 3: 662 - 73.
Savile CK, Janey JM, Mundorff CE, Moore JC, Tam S, JarvisWR, et al. asymmet- biocatalıtica
síntesis ric de aminas quirales a partir de cetonas aplica a la fabricación de sitagliptina. Ciencia 2010; 329: 305 - 9.
Schwab T, Škegro D, mayas O, Sterner R. Una variante monomérica diseñado racionalmente de
fosforribosiltransferasa antranilato de Sulfolobus solfataricus es tan activa como la enzima de tipo salvaje
dimérica pero menos termoestable. J Mol Biol 2008; 376: 506 - dieciséis.
Sedlaczek L. Las biotransformaciones de esteroides. Crit Rev Biotech 1988; 7: 187 - 236.
Sehl T, Hailes HC, Ward, JM, Wardenga R, von Lieres E, Offermann H, et al. Dos pasos
one pot: cascada enzimática para la síntesis de ni efedrina (pseudo) a partir de materiales de partida
económicos. Chem Angew 2013; 52: 6772 - 5.
Seo ES, Kang J, Lee JH, Kin GE, Kim GJ, Kim D. Síntesis y caracterización de hydroqui-
ninguno glucósido utilizando Leuconostoc mesenteroides dextransucrase. Enzym Microbial Technol 2009; 45: 355 - 60.
Seo MH, Han J, Z Jin, Lee DW, Parque SA, KimHS. Controlada y orientada a la inmovilización de
proteínas por sitio-específica fi c incorporación de aminoácido no natural. Chem Anal 2011; 83: 2841 - 5.
Seo DH, JH Jung, Ha SJ, Cho HK, Jung DH, KimTJ, et al. De alto rendimiento de bioconversión enzimática
de hidroquinona a la alfa-arbutina, un potente agente de aclaramiento de la piel, por amilosacarasa. Appl Microbiol
Biotechnol 2012; 94: 1189 - 97.
Seo MH, Parque J, Kim E, Hohng S, Kim SA. Dinámica de conformación de proteínas dictan la
af vinculante fi nidad para un ligando. Nat Commun 2014; 5.
Sheu DC, Chang JY, Wang CY, Wu CT, Huang CJ. La producción continua de alta pureza
fructooligosacáridos y etanol por inmovilizada Aspergillus japonicus y heimii Pichia. Bioprocesos Biosyst Esp
2013; 36: 1745 - 51.
Shimizu K, Uozumi R, Satsuma A. la producción mejorada de hidroximetilfurfural de
fructosa con catalizadores ácidos sólidos por métodos de eliminación de agua simples. Catal Commun 2009; 10: 1849 - 53.
Shin G, Mathew S, Shon M, Kim BG, Yun H. En un solo recipiente de un solo paso desracemización de aminas
usando omega-transaminasas. Chem Commun (Camb) 2013; 49: 8629 - 31.
Siegel JB, Zanghellini A, Lovick HM, beso G, Lambert AR, St.Clair JL, et al. computacional
diseño de un catalizador enzimático para una Diels bimolecular estereoselectiva - Alder. Ciencia 2010; 329: 309 - 13.
Silberg JJ, Endelman JB, Arnold FH. ESQUEMA guiada por recombinación de proteínas. En: Dan ER,
José PN, editores. Methods in Enzymology. Academic Press; 2004. p. 35 - 42.
Silva CJSM, Prabaharan M, Gubitz G, Cavaco-Paulo A. El tratamiento de la lana fi bras con
subtilisina y subtilisina-PEG. EnzymMicrob Technol 2005; 36: 917 - 22.
Silva MF, Rigo D, Mossi V, Golunski S, Kuhn GD, Di Luccio M, et al. enzimática
síntesis de fructooligosacáridos por inulinasas de Aspergillus niger y
Kluyveromyces marxianus NRRL Y-7571 en medio acuoso-orgánico. Food Chem 2013; 138: 148 - 53.
Simon RC, Richter N, E Busto, Kroutil W. El reciente desarrollo de reacciones en cascada
que implica ω- transaminasas. ACS Catal 2013; 4: 129 - 43.
SongWJ, Tezcan FA. Un conjunto de proteína supramolecular diseñado con enzimática in vivo
actividad. Ciencia 2014; 346: 1525 - 8.
Sterner R. La evolución dirigida: un enfoque poderoso para la optimización y la comprensión
enzimas. Chembiochem 2011; 12: 1439 - 40.
12 J.-M. Choi et al. / Biotecnología Avances xxx (2015) xxx - xxx
Sterner R, R Merkl, Raushel FM. diseño computacional de enzimas. Chem Biol 2008; 15:
421 - 3.
Takada M, Nakagawa Y, Yamamoto M. Los análisis bioquímicos y genéticos de una novela
y-ciclodextrina alcalofılica glucanotransferasa froman Bacillus clarkii 7364. J Biochem 2003; 133: 317 - 24.
Tauber K, Fuchs M, Sattler JH, Pitzer J, Pressnitz D, Koszelewski D, et al. arti fi cial múltiples
redes de enzimas para la aminación asimétrica de SEC-alcoholes. Chem Eur J 2013; 19: 4030 - 5.
Tomsho JW, Pal A, Hall DG, Benkovic SJ. estructura de anillo y efectos sustituyente aromático en
el pK (a) de la farmacóforo benzoxaborole. ACS Med Chem Lett 2012; 3: 48 - 52.
Truppo MD, Strotman H, Hughes G. Desarrollo de una transaminasa inmovilizada
capaz de operar en disolvente orgánico. ChemCatChem 2012; 4: 1071 - 4.
Turner NJ. Biocatálisis. Catal Sci Technol 2012; 2 (8): 1523 - 1523.
van den Burg B. Los extremófilos como fuente de nuevas enzimas. Curr Opin Microbiol 2003;
6: 213 - 8.
Vázquez-Figueroa E, Yeh V, Broering JM, Chaparro-Riggers JF, Bommarius AS. Thermosta-
variantes ble construidas a través del método de consenso estructura guiada también muestran una mayor
estabilidad en soluciones de sales y medios acuosos-orgánicos homogéneos. Protein Eng Des Sel 2008; 21: 673 - 80.
Veit T. La biocatálisis para la producción de ingredientes cosméticos. Eng Life Sci 2004; 4: 508 - 11.
Vera C, Guerrero C, Conejeros R, Illanes A. Síntesis de galacto-oligosacáridos por beta-
galactosidasa de Aspergillus oryzae utilizando parcialmente disuelto y la solución sobresaturada de lactosa.
Enzym Microbial Technol 2012; 50: 188 - 94.
Wang ZX, Shi XX, Chen GR, Ren ZH, Luo L, Yan J. Una nueva síntesis de alfa-arbutina través de Lewis
catalizada por ácido glicosilación selectiva de tetra-O-bencil-alfa RE- tricloroacetimidato glucopiranosil con
hidroquinona. Carbohydr Res 2006; 341: 1945 - 7.
Por favor citar este artículo como: Choi JM, et al, Aplicaciones industriales de la biocatálisis enzima: Estado actual y aspectos futuros, Biotechnol Adv (2015),
http://dx.doi.org/10.1016/j.biotechadv.2015.02.014
Wang L, Wu D, Chen J, Wu J. Aumento de la producción de gamma-ciclodextrina por optimización
ción de la reacción de glicosiltransferasa-gamma ciclodextrina así como el uso síncrono de isoamilasa. Food
Chem 2013; 141: 3072 - 6.
Windle CL, Müller M, Nelson A, Berry A. Ingeniería aldolasas como biocatalizadores. Curr Opin
Chem Biol 2014; 19: 25 - 33.
Wohlgemuth R. biocatálisis - clave para la química industrial sostenible. Curr Opin
Biotechnol 2010; 21: 713 - 24.
Wu S, Fogiel AJ, Petrillo KL, Jackson RE, Parker KN, DiCosimo R, et al. La ingeniería de proteínas
de nitrilasa para la producción chemoenzymatic de ácido glicólico. Biotechnol Bioeng 2008; 99: 717 - 20.
Wu JY, Liu C, Jiang YC, Hu MC, Li SN, Zhai QG. Síntesis de epiclorhidrina quiral por
cloroperoxidasa catalizada por epoxidación de 3-cloropropeno en presencia de un líquido iónico como
co-disolvente. Catal Commun 2010; 11: 727 - 31.
Yachmenev VG, Bertoniere NR, Blanchard EJ. intensi fi catión de la bio-procesamiento de cot-
textiles toneladas por tratamiento enzimático / ultrasonido combinado. J Chem Technol Biot 2002; 77: 559 - 67.
Zandvoort E, Geertsema EM, Quax WJ, Poelarends GJ. Mejora de la promiscua
actividades de aldolasa y deshidratación de tautomerasa 4-oxalocrotonate por ingeniería de proteínas.
Chembiochem 2012; 13: 1274 - 7.
Zeng AP, Biebl H. productos químicos a granel frombiotechnology: el caso de 1,3-propanodiol produc-
ción y las nuevas tendencias. Adv Biochem Eng Biotechnol 2002; 74: 239 - 59.
Zhang YH. canalización de sustratos y complejos de enzimas para aplicaciones biotecnológicas.
Adv Biotechnology, 2011; 29: 715 - 25.
Znabet A, Polak MM, Janssen E, de Kanter FJ, Turner NJ, Orru RV, et al. A altamente ef fi ciente
síntesis de telaprevir por el uso estratégico de la biocatálisis y las reacciones multicomponente. Chem Commun
(Camb) 2010; 46: 7918 - 20.