Universidad de Santander

Programa: Medicina

Curso: Biociencias II

Docente: Anderson Ramírez Ayala

Número de la práctica: 2

Título de la práctica: soluciones químicas

INTRODUCCIÓN

Uno de los aspectos más importantes del trabajo en el laboratorio, es la preparación

de los reactivos con los cuales se tienen que desarrollar las prácticas, experimentos
o montajes de procedimientos, pues de la calidad de los reactivos y de la precisión
con la que se preparen los reactivos y soluciones, dependerá el éxito de los
resultados. A nivel de áreas como la biología celular, bioquímica, genética y
biología molecular, se suele trabajar con concentraciones más bajas que con las
que se trabajan en las industrias, así por ejemplo resulta bastante frecuente trabajar
en bioquímica y biología molecular con soluciones con concentraciones en partes
por millón, soluciones milimolares, micromolares, entre otras.

Dado que muchas veces resulta difícil pesar cantidades tan pequeñas, se hace
necesario preparar soluciones de concentraciones mayores a las que realmente se
van a emplear y posteriormente hacer los cálculos correspondientes para disminuir
la concentración en una solución que se prepara a partir de la solución madre o
stock.

Es importante tener muy en cuenta la magnitud de los valores que se obtienen en

los cálculos que se establecen, pues resulta incoherente pensar por ejemplo en
cantidades extremadamente altas de solutos en pequeñas cantidades de solventes,
sin embargo en algunos casos, cuando se van a preparar soluciones
sobresaturadas.
En los laboratorios de investigación en los campos de la genética, biología celular,
bioquímica y biología molecular es muy frecuente trabajar con concentraciones muy
bajas Milimolares (mM=milésima parte de una mol) y micromolares (uM=
millonésima parte de una mol). Finalmente es importante recordar la importancia
de las soluciones stock, madre o patrón. Estas soluciones se preparan con el fin de
tomarlas como punto de partida en la preparación de soluciones finales, cuando las
cantidades no se pueden medir o pesar, y se conocen como soluciones stock o
soluciones madres.

Las concentraciones milimolares y micromolares se emplean por ejemplo para

determinar los efectos celulares, genéticos y/o moleculares de un compuesto en
determinado tipo de células. Estos compuestos pueden ser fármacos, pesticidas,
metales pesados, sales, o cualquier tipo de sustancia.

Peso molecular de un compuesto.

El peso molecular de un compuesto corresponde a la suma de los pesos atómicos

de cada uno los elementos que hacen parte de la molécula, multiplicado por el
número de átomos que hacen parte de la estructura química. De acuerdo a lo
anterior podemos decir por ejemplo que el peso molecular del agua (H2O) es 18
g/mol, puesto que el Oxigeno pesa 16, y por haber solo un átomo en la molécula
se multiplica por 1, mientras que el Hidrógeno se multiplica por 2 porque la mole´cula
posee dos átomos de H. Al sumar estos valores obtenemos un total de 18 g/ mol.
Lo cual quiere que en 18g de H20 hay 6.02 X10 23 moléculas de H20.

La glucosa tiene como formula molecular C6 H12 O6. Teniendo en cuenta los pesos
atómicos:

C =12, H=1, O=16, y considerando también la cantidad de átomos en cada

molécula, debemos multiplicar el número de átomos por el peso molecular
correspondiente:
 Elemento Número Peso Total
de
atómico
átomos

O 6 16 96

H 12 1 12

C 6 12 72

total 180g/mol

Concepto de mol

Una mol es una unidad que se emplea normalmente para expresar cantidades muy
grandes de átomos o de moléculas, y equivale a 6.02 X10 23.

En una mol de moléculas de H2O hay 6.02 X10 23 moléculas, al igual que en una
mol de moléculas de C6 H12 O6.

Dado que en las células y en los sistemas biológicos las concentraciones que se
emplean son muy pequeñas, se han implementado medidas que se han originado
del concepto de mol. De esta manera, se emplea el término milimolar (mM) para
una unidad que equivale a 0.001 parte de un mol (1 mol= 1000 milimoles). Si estas
concentraciones aún son muy altas, entonces se emplea una concentración mucho
más pequeña conocidos como micromoles (µM).

Una mol = 1000 milimoles = 1 000 000 micromoles

MOLARIDAD (M). Corresponde al número de moles de soluto disueltos en un litro

de solución; sus unidades son moles%L. Se puede expresar como molaridad o
como molar.

Por ejemplo una solución de NaOH 2M significa que un litro de solución tiene
disueltos dos moles de NaOH, lo cual equivale a decir que un litro de solución tiene
80 g de NaOH. Recuerde que en una mol de NaOH pesa 40 g. Para el ejemplo en
mención, se lee una solución 2M o una solución de molaridad 2.

La fórmula para calcular la molaridad es.

M= n/v donde n equivale al número de moles, mientras que v equivale al volumen

en litros.

n= m/PM donde m es la masa molecular de la sustancia de interés expresada en

gramos, mientras que PM es el peso molecular de la sustancia química .

La molaridad corresponde a una de las formas más conocidas de expresar las

soluciones en áreas biológicas, especialmente en genética y biología molecular.
Dos formas de expresar concentraciones derivadas de la molaridad son la
milimolaridad (mM) y la micromalaridad (uM). Recuerde que la primera es la
milésima parte de una mol, mientras que la segunda hace referencia a la
millonésima parte de una mol.

Porcentaje en peso (%P): se reiere al peso de soluto expresado en gramos,

disuelto en 100 gramos de solución. La formula para determinarlo es:

%P = g soluto
X 100
g de solución

Una solución de NaOH al 10% significa que en 100 g de solución hay 10 g de

NaOH disueltos.

Diluciones: las diluciones son soluciones que se preparan a partir de otras

soluciones que reciben el nombre de stock, madre o patrón.
Las diluciones se pueden trabajar con la formula: V1C1 = V2C2 En donde V1 es el
volumen de la solución stock, y V2 el volumen de la solución final, C1 es
concentración de la solución stock y C2 la concentración de la solución final.

Recuerde que cada vez que se le adiciona solvente a una solución usted, reduce la
concentración, mientras que si le adiciona soluto, la concentración aumenta.

Con cierta frecuencia, muchos reactivos que se usan en genética, biología celular,
biología molecular, y /o bioquímica, entre otras, vienen en una concentración X.
Cuando el reactivo dice concentración 5X, quiere decir que está cinco veces
concentrado, mientras que si dice 50X quiere decir que está 50 veces concentrado,
por lo tanto la solución que se vaya a preparar se debe diluir 50 veces.

Cuando se van a trabajar cantidades muy pequeñas de peso, se trabaja miligramos

y microgramos.

1 g= 1000 mg = 1 000 000 µg

Para el caso de los volúmenes, se debe tener en cuenta que también se emplean
volúmenes muy pequeños.

1 ml = 1 000 µl

OBJETIVOS

Adquirir destreza en la preparación de soluciones químicas, aplicando las formulas

necesarias para su obtención.

Preparar diluciones a partir de las soluciones stock en concentraciones

frecuentemente utilizadas en los laboratorios de genética y biología molecular.

Determinar el peso molecular de cualquier compuesto a partir de su formula

química.

Conocer las unidades empleadas en ciencias biomédicas para la investigación en

sistemas biológicos.
MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS

Micropipetas
Puntas amarillas y azules
NaCl
Agua destilada
azul de metileno
Tubos de ensayo
Tubos de PCR
Balanza
Tubos ependorf

Metodología

1. Manejo de las micropipetas.

Teniendo en cuenta las recomendaciones dadas por el docente, adicione
los volúmenes asignados en cada uno de los tubos correspondientes:
10 microlitros
50 microlitros
100 microlitros
0.5 ml
1000 µl
2. Preparación de una solución sobresaturada de Na Cl
Teniendo en cuenta el peso molecular del NaCl, determine los gramos de
este compuesto que debe adicionar para preparar 5 ml de NaCl de
concentración 5M.

Una vez haya determinado cuánto de Na Cl, y cuánto de H2O debe

adicionar, prepare la solución y agite diez veces por inversión. Describa los
resultados observados, Compare con los otros grupos.
 3. Preparación de una dilución.

A partir la solución stock suministrada por el docente, la cual tiene una

concentración 1M, prepare una solución diluida de 1000 microlitros de
concentración 0.2 M.

En otro recipiente, prepare una dilución de 5 ml de concentración 0.5 M.

Anexos:
Llene la siguiente tabla, consultando los datos faltantes.

compuesto formula Uso Peso molecular

comercial
Amoxicilina C16H19N3O5 S antibiótico 365.4g/mol

Clavulanato

Penicilina C16 H 18 N2 O4 S

Cloranfenicol

Na OH

2. Considerando los siguientes datos, conteste las siguientes preguntas.

LOS DATOS DEL CUADRO SIGUIENTE CORRESPONDEN A LA SOLUCIÓN
STOCK O PATRÓN.

1.
NaCl Bromuro lisozima Proteinasa Citrato KCl SDS EDTA Lisostafina PHA colcemid
de K de
Etidio sodio
1M 100 mg/ 1000 50 mg/2 1% 1M 1% 1M 20mg /ml 200 100
ml mg/ 2ml ml mg/ml mg/ml
2.1. Se requiere adicionar 100 ul de NaCl 0.1 M, a cada muestra de
concentración. Cómo prepararía la cantidad necesaria a partir de la
solución patrón?

2.2. La cámara de electroforesis que dispone, requiere 2400 ml de

Buffer TBE, y por cada 100 ml de este buffer TBE se requieren 10 uL
de Bromuro de etidio de concentración 10 mg/ml. A). Cómo
prepararía el bromuro de etidio que se requiere, B). cuánto debe
adicionar al buffer de la cámara?

2.3. Para extraer el ADN bacteriano se requiere adicionar 20 ug de

lisozima. Se tienen 20 muestras de bacterias Mycobacterium
tuberculosis obtenidas a partir de muestras de esputo. Cuántos
microgramos gastaría para estas muestras? B) Cuántos microlitros
le debe adicionar a cada muestra?

2.4. Prepare una solución de 1000 uL de proteinasa K de concentración

25 mg/ mL

2.5. Se requiere preparar una solución hipotónica de citrato de sodio al

0.7%, cómo debe preparar 50.000 uL de esta solución?

2.6. Se requiere preparar una solución de KCl de concentración 0.082M a

partir de la solución madre. A cada muestra se le adicionan 7 ml, y
se dispone de 40 muestras. Cuánto y cómo debe preparar esta
solución?

2.7. Prepare una solución de 0,5 L de EDTA de concentración 500 mM.

2.8. Se tienen 10 muestras de staphylococcus aureus que se deben tratar
con 100 ul de lisostafina, de concentración 2 ug/ml. Cómo
prepararía la solución que requiere para tratar estas muestras?

2.9. Se necesita adicionar 300 ul de fitohemaglutinina (PHA) de

concentración 25mg/ml a cada muestra de sangre para cultivar
linfocitos humanos, y se tienen 40 muestras. Cómo prepararía la
solución que se requiere?

2.10. Se requiere emplear 100 uL de concentración 25 mg de colcemid a

40 muestras de linfocitos. Cómo prepararía la solución que se
requiere?