EVALUACIÓN DE LA REMOCIÓN DE NUTRIENTES EN AGUAS

RESIDUALES DOMÉSTICAS DEL MUNICIPIO DE PAMPLONA, NORTE

DE SANTANDER UTILIZANDO LA MICROALGA CHLORELLA
VULGARIS
PATIÑO Leonela1*, RAMÓN Jacipt2, CAJIAO Angela3

1
Estudiante, Departamento de Ingeniería Química, Facultad de Ingenierías y Arquitectura, Universidad
de Pamplona.
2
Docente, Facultad de Ingenierías y Arquitectura, Universidad de Pamplona. Grupo de Investigación en
Biotecnología Ambiental.
3
Docente, Facultad de Ciencias Básicas, Universidad de Pamplona. Grupo de Investigación en
Microbiologia y Biotecnologia -GIMBIO-.
Km 1 vía Bucaramanga, Pamplona, Colombia
 II Congreso Internacional
19 - 24 de noviembre de 2018
*
Autor de correspondencia: leonelapc22@outlook.com

Eje temático en el cual se enmarca el trabajo (marque con una X)

Producción Energías Alternativas de Mitigación X Desarrollo
Más Limpia Renovables de Impactos Ambientales Sostenible
Nutrición Bienestar Biotecnología Animal Producción
Animal Animal Animal
Modalidad de Presentación: Ponencia Póster X
Nombre del Ponente o Ponentes Angie Leonela Patiño Condía
(Máximo 2):

RESUMEN
Objetivo. Actualmente se conoce el impacto ambiental generado en los ecosistemas de agua
naturales por el vertimiento de aguas residuales de los diferentes sectores, tales como agrícola,
industrial, pecuario y doméstico. Impactos ambientales como la eutrofización, que es el
crecimiento desmedido de algas debido a la presencia de altas concentraciones de sales. De este
modo, se propone evaluar la microalga Chlorella vulgaris en la remoción de nutrientes utilizando
aguas residuales del municipio de Pamplona, Norte de Santander. Metodología. Se cultivaron y
escalaron en medio basal bold inóculos de dos cepas de Chlorella vulgaris, una de ellas nativa y
la otra de colección; esto con el fin de hacer una comparación en la adaptación y en la remoción
de nutrientes en el nuevo sustrato (agua residual). Posteriormente, se caracterizó el agua residual
del municipio de Pamplona, para esto se tomaron muestras tres veces por semana durante un mes
en el horario de medio día, luego, las muestras se llevaron al laboratorio de control de calidad de
la Universidad de Pamplona y se hicieron mediciones de sólidos, alcalinidad, acidez, turbidez, pH,
color, dureza, oxígeno disuelto, demanda química de oxígeno DQO, sulfatos, fosfatos, y nitratos.
Por otra parte, se llevó a cabo la fase de adaptación de las cepas al nuevo sustrato, en esta etapa se
evaluó una concentración del 20% de microalga en un volumen total de cultivo de 3L, esta
adaptación se realizó por un mes. Posteriormente, se llevó a cabo la fase de evaluación preliminar
de remoción de cada cepa, este seguimiento se hizo para cada cultivo durante once días, tomando
diariamente pH, luz y conteo celular para verificar el crecimiento de cada cepa. Resultados. Una
vez se realizó la caracterización del agua residual del municipio de Pamplona, se encontró que las
concentraciones de nutrientes como nitratos y fosfatos era baja, estas oscilan en 5mg/L y
13,77mg/L respectivamente, entonces, lo que se hizo fue agregar las concentraciones de nitratos y
fosfatos especificadas para medio bold y con esto evaluar primero el crecimiento de las cepas en
el agua residual y por otra parte la disminución de la concentración de las sales en el nuevo sustrato.
Para los cultivos del 20% de cada cepa nativa y de colección de obtuvo remoción de fosfatos fue
de 57,88% y 52,52% y nitratos del 66,74% y 58,32% respectivamente. Conclusión. Los resultados
preliminares de remoción muestran que Chlorella vulgaris es prometedora para el uso de esta en
el tratamiento terciario de aguas residuales ya que con una concentración de microalga baja se
obtuvieron buenos resultados de remoción y por otra parte la microalga de adaptó al agua residual
sin ningún tipo de tratamiento.
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Palabras clave: Aguas residuales, tratamiento de aguas residuales, ficorremediación,

biotecnología, Chlorella vulgaris.

ABSTRACT
Objective. The environmental impact on water ecosystems by the dumping of sewage from
different sectors, such as agricultural, industrial, livestock and household is currently known.
Environmental impacts such as eutrophication, which is the excessive growth of algae due to the
presence of high concentrations of salts. In this way, intends to evaluate the microalgae Chlorella
vulgaris in the nutrient removal using sewage from the municipality of Pamplona, Norte de
Santander. Methodology. Were grown and climbed between basal bold inocula of two strains of
Chlorella vulgaris, one native and the other collection; in order to make a comparison in the
adaptation and the removal of nutrients in the new substrate (water residual). Subsequently,
residual water from the municipality of Pamplona was characterized, so samples were taken three
times a week during one month in the half-day schedule, then samples were carried to the
laboratory of quality control of the University of Pamplona and is they did measurements of solids,
alkalinity, acidity, turbidity, pH, color, hardness, dissolved oxygen, chemical demand of oxygen
cod, sulfates, phosphates and nitrates. On the other hand, the stage adaptation of strains to the new
substrate, was held at this stage be assessed a 20% concentration of microalgae in a total volume
of 3L, this adaptation was carried out for a month. Subsequently, the phase of preliminary
evaluation of removal of each strain was carried out, this track was made for each crop for eleven
days, taking daily pH, light and cell count to verify the growth of each strain. Results. Once was
the characterization of residual water from the municipality of Pamplona, it was found that the
concentrations of nutrients like nitrates and phosphates was low, these range in 5 mg/L and 13, 77
mg/L respectively, then, what was done was add the nitrates and phosphates concentrations
specified for half bold and with this first assess the growth of strains in the residual water and on
the other hand the decrease of the concentration of salts in the new substrate. 20% of each native
strain and collection crops of obtained removal of phosphates was 57.88% and 52,52% and nitrates
of 66,74% and 58,32% respectively. Conclusion. Once was the characterization of residual water
from the municipality of Pamplona, it was found that the concentrations of nutrients like nitrates
and phosphates was low, these range in 5 mg/L and 13, 77 mg/L respectively, then, what was done
was add the nitrates and phosphates concentrations specified for half bold and with this first assess
the growth of strains in the residual water and on the other hand the decrease of the concentration
of salts in the new substrate. 20% of each native strain and collection crops of obtained removal
of phosphates was 57.88% and 52,52% and nitrates of 66,74% and 58,32% respectively.
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Key words: Waste water, treatment of waste water, ficorremediacion, biotechnology, Chlorella
vulgaris.
1. INTRODUCCIÓN
El agua es un recurso natural limitado debido
al uso cotidiano en los diferentes sectores
doméstico, industrial, agrícola y pecuario y
también debido a la reducción de fuentes
hídricas, el agua que se genera después de
estas actividades en su mayoría son vertidas
a cuerpos de agua naturales causando gran
impacto ambiental debido a sus altas
concentraciones de materia orgánica,
productos químicos, bacterias y nutrientes,
provocando perdida de fauna y flora de estos
ecosistemas. La acumulación de nutrientes en
estos cuerpos de agua ocasiona una acelerada
eutrofización y en consecuencia se altera la
demanda biológica de oxígeno que afectan
las poblaciones acuáticas y salud humana
(García, 2012).
El tratamiento de aguas residuales
principalmente tiene como objetivo remover
sólidos totales, reducir la carga orgánica del
desagüe en función de la demanda química
de oxígeno (DQO), remover o reducir la
concentración de nitrógeno y fosforo con el
fin de evitar infiltración del subsuelo que
contamine aguas subterráneas o evitar la
eutrofización en aguas receptoras por
crecimiento acelerado de algas y remover
organismos patógenos, incluyendo las
formas parasitarias (Lazcano Carreño, 2016).
Actualmente el tratamiento de aguas
residuales presenta un desafío en la
diminución del exceso de nutrientes en el
agua residual. Se encuentras alternativas
costosas, no son muy efectivos y algunas
veces poco amigables con el ambiente (Avila
2015), debido a esto se ha impulsado al uso
de alternativas biotecnológicas como la
ficorremediación, esta técnica consiste en
utilizar consorcios o cultivos de microalgas
para remover o biotransformar los
contaminantes presentes en el agua (Olguín,
2003).
Las microalgas son autótrofos unicelulares,
varían en su fisiología y morfología y estas
habitan en ambientes acuáticos en todos los
ecosistemas del planeta. Las microalgas
representan un sistema eficiente en la
conversión de la energía lumínica, utilización
de nutrientes tales como nitrógeno, fósforo y
potasio y su producción de biomasa es
utilizada en diferentes áreas de la industria
(Acurio et al., 2015). Las microalgas que
están siendo cultivadas con fines comerciales
y por su potencial económico están definidas
por dos especies; Cyanobacterias y
Chlorophytas (Pérez, 2009).
El uso de microalgas es una buena alternativa
para mitigar el impacto ambiental generado
por la acumulación de nutrientes en los
cuerpos de agua naturales, dado que este tipo
de microorganismos tienen la alta capacidad
de remover nitrógeno y fosforo, por otro
lado, los costos de operación son
relativamente bajos ya que es accesible
mantener las condiciones de cultivo. Se han
realizados diversos estudios de aplicación de
microalgas en tratamiento de aguas
residuales (Beneman et al., 1980; De-Bashan
et al., 2002; Gantar et al., 1991; Queiroz et
al., 2007), sin embargo, en el 2011,
Hanumantha-Rao et al utilizaron la
ficorremediciación como tratamiento a agua
residuales que se resultan de una planta de
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fabricación de productos químicos para

cuero, donde aislaron la microalga Chlorella
vulgaris del propio efluente, realizaron Tabla 1. Componentes medio Basal Bold
pruebas de remoción en campo, escala piloto (BBM). (Fuente autor)
y estudio en laboratorio y determinaron que
la microalga obtuvo mejores resultados de Cantidad
remoción de nutrientes en campo lo que Componentes por litro
resulta beneficioso ya que no se necesita de (mg)
condiciones controlables para su desempeño
KH2PO4 175
óptimo.
CaCl2*2H2O 25
Con este proyecto se quiere impulsar a el uso
de alternativas biotecnológicas que resultan MgSO4*7H2O 75
siendo muy ventajosas ya que aparte de NaNO3 250
disminuir la contaminación y el deterioro de
K2HPO4 75
los ecosistemas acuáticos, generar gran
cantidad de biomasa microalgal resulta ser NaCl 25
provechosa para la producción de H3BO3 11,42
biocombustibles o productos alimenticios.
Solución stock
2. METODOLOGÍA 1 mL
microelementos
Obtención y cultivo de la microalga Solución 1 1 mL
Para este estudio se utilizaron dos cepas de Solución 2 1 mL
Chlorella vulgaris; una de ellas es nativa, fue
extraída de la Laguna Comagüeta que se Cantidad
encuentra ubicada en el municipio de Solución stock
por litro
Chitagá-Norte de Santander, la otra cepa microelementos
(g)
(Chlorella vulgaris UTEX 1803) fue
ZnSO4*7H2O 8,82
obtenida por el Laboratorio GAIA de la
Universidad de Santander. Se van a MnCl2*4H2O 1,44
estudiaron las dos cepas con el fin de MoO3 0,71
comparar su adaptación y eficiencia en el CuSO4*5H2O 1,51
tratamiento terciario de aguas residuales. Co(NO3)2*6H2O 0,49
Para el inóculo se utilizó medio Basal Bold
(los componentes se muestran en la tabla 1).
Cantidad
Solución 1 por litro
(g)
Na2EDTA 50
KOH 3,1
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Cantidad
Solución 2 por litro
(g)
FeSO4 4,98
H2SO4
1mL
concentrado
Se establecieron las condiciones de cultivo,
teniendo en cuenta la bibliografía el pH,
iluminación y agitación para el cultivo de las
cepas. Los inóculos se hicieron en
Erlenmeyer de 500mL, luego, utilizando una
relación 1:2 de microalga y BBM se escaló
hasta llegar a un volumen de 6L de cada cepa
fotobiorreactor se estableció la cinética de
crecimiento de cada cepa teniendo en cuenta
que la microalga llega a su fase estacionaria
en dos semanas (Cartagena et al., 2017). El
crecimiento celular se determinó por conteo
en cámara neubauer 40X.
Caracterización del agua residual
Se realizaron muestreos de aguas residuales,
tres veces a la semana durante un mes en
horario de medio día. Después de cada
muestreo se caracterizó el lixiviado y se
estudió la variación en la composición del
agua residual, comparando la caracterización
actual con caracterizaciones realizadas con
anterioridad. Como lo establece las normas
estándar para el análisis de aguas y aguas
residuales (APHA, 2012), para el posterior
análisis de los siguientes parámetros físicos y
químicos.
Adaptación de las cepas en el agua
residual urbana
Después de la caracterización fisicoquímica
del agua residual a tratar se procedió a la
adaptación de las cepas a este nuevo sustrato,
para esto, se hicieron cultivos de 1.5L y el
20% fue microalga se hizo seguimiento
diario de pH, luz y conteo celular y con ello
se determinó la cinética de crecimiento de la
microalga en este medio.
Evaluación de la remoción de NO3 y PO4
Luego de la etapa de adaptación se procedió
a realizar los experimentos de remoción de
sales en el agua residual, se evaluó una
concentración del 20% de cada cepa adaptada
en el sustrato con el fin de determinar la
eficiencia de la microalga en bajas
concentraciones. Cada ensayo se evaluó por
once días. Se tomaron muestras iniciales y
finales.
3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Los resultados de las cinéticas de crecimiento
de la cepa nativa (Cepa 1) y la de colección
(Cepa 2) se muestran en la figura 1.
Cepas 1 y 2 en BBM
2500000
Densidad celular (Cel/mL)
2000000
1500000
1000000
500000
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
Tiempo (Días)
20% de Cepa 1 en BBM 20% de Cepa 2 en BBM
Figura 1. Cinéticas de crecimiento de la
microalga Chlorella vulgaris.
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Caracterización del agua residual

pH
7.2 Cepa
1
Los resultados de los parámetros medidos se
7
BBM encuentran en la tabla 2.
pH

6.8 pH
Cepa
6.6 2 Tabla 2. Resultados de la caracterización del
6.4 BBM agua residual.
0 5 10 15 Desviación
Tiempo (días) Parámetro Valor
estandar
Figura 2. Comportamiento del pH durante el pH 7,355 0,533
tiempo de cultivo. Turbidez (NTU) 233,833 25,456
En la figura 1 se muestra las cinéticas de Color (PtCo) 2106,500 313,248
crecimiento de las cepas de la microalga OD (mg/L) 1,205 1,060
Chlorella vulgaris, podemos observar que DQO (mg/L) 771,800 211,895
tienen un comportamiento similar, sin Solidos totales(mg ST/L) 0,581 0,057
embargo, la cepa 2 (colección) tiene mejor Solidos suspendidos totales
0,165 0,062
crecimiento en este medio, esto puede ser (mg SST/L)
debido a que como es una cepa de colección
su medio de cultivo siempre ha sido BBM y Solidos suspendidos
0,274 0,129
volátiles (mg SSV/L)
la cepa nativa tuvo que adaptarse a ese nuevo
medio, por otra parte, en el día 9 las cepas Solidos sedimentables
2,638 1,377
llegan a su crecimiento máximo y justo ahí (mL/L)
alcanza su estado estacionario. Las variables
de control de cultivo que se tomaron fue Dureza (PPM) 177,857 142,649

temperatura y el promedio de esta es de Alcalinidad (mg CaCO3/L) 186,429 74,146

18,8°C, también se tomó medida de pH diaria Acidez (mg CaCO3/L) 93,571 59,141
y el comportamiento se muestra en la figura Sulfatos (mg/L) 54,600 22,974
2, aquí observamos que durante todo el Fosfatos (mg/L) 15,883 4,261
tiempo de cultivo el pH fue aumentando Nitratos (mg/L) 4,120 1,365
significativamente, pero según la literatura el
valor de pH óptimo está entre 7 y 8 por lo que El agua residual urbana que se caracterizó se
se puede decir que el cambio de pH de los tuvo en cuenta el tiempo de Pamplona, hubo
cultivos puede ser debido a que las cepas se algunas lloviznas, lo que puede alterar los
desarrollaron de manera satisfactoria en el resultados, sin embargo, los resultados de
medio BBM. caracterización están en el rango de los
valores permisibles en Colombia según la
resolución 0631 del 17 de marzo 2015.

Adaptación de las cepas al nuevo sustrato

En la figura 3 se muestra la cinética de

crecimiento de las cepas en el agua residual

Cinética de crecimiento en agua residual
3000000
Densidad celular (Cel/mL)
2500000
2000000
1500000
1000000
500000
0
0 1
Figura 3. Crecimiento de las cepas en el agua
residual.
Ambas cepas lograron adaptarse al agua
residual, se observa que aproximadamente en
el día 3 las cepas se mantienen en estado
estacionario, no hay crecimiento y esto puede
deberse a que como el agua residual que se
usó en el tratamiento sólo se le removieron
los sólidos grandes, es decir no tiene ningún
tratamiento, las cepas van a competir en su
crecimiento con otro tipo de
microorganismos, sin embargo, podemos
notar la capacidad que tiene la microalga
Chlorella vulgaris en poder coexistir en
medios contaminados.
Resultados preliminares de remoción
En la caracterización del agua residual se
evidencia que las concentraciones de
nutrientes en el agua residual son pequeñas,
debido a esto, se optó por agregar fosfatos y
nitratos como KH2PO4, K2HPO4, NaNO3, esto
con el fin de ver la eficiencia de las cepas en
la de remoción de nutrientes en aguas
residuales. Se tomaron muestras iniciales y
después de los 11 días de tratamiento, se
centrifugaron y se evaluó el sobrenadante en
el espectrofotómetro.
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Tabla 3. Concentraciones de nitratos y
fosfatos antes y después del tratamiento
[] de NO3 (mg/L) [] de PO4 (mg/L)
Cepa
Inicial Final Inicial Final
1 525,3 174,7 615,2 259,1
2 528,9 220,4 613,4 291,2
2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Se observa en la tabla 3 la disminución de
Tiempo (Días)
20% de Cepa 1 (experimentación 2) concentraciones de los nutrientes, se puede
20% de Cepa 2 (experimentación 2) apreciar que la microalga remueve nitratos en
mayor proporción con 66, 74 y 58, 32% para
la cepa 1 y cepa 2 respectivamente, estos
resultados eran de esperarse ya que según la
literatura las microalgas del genero Chlorella
consumen nitratos en mayor cantidad. Por
otra parte, la disminución de fosfatos para la
cepa 1 y 2 fue de 57,88 y 52,52%
respectivamente. Los resultados de remoción
son satisfactorios, la microalga nativa tiene
mayores porcentajes de remoción, esto tiene
una gran ventaja ya que se impulsa a el
aislamiento de estas microalgas y
profundizar en investigaciones de dichos
microorganismos.
4. CONCLUSIONES
El tratamiento terciario de aguas residuales
con la microalga Chlorella vulgaris es
prometedor, ya que la microalga cuenta con
la capacidad de fácil adaptación a medios que
estén contaminados, se evidenció que las
microalgas nativas tienen mayor
productividad. Actualmente se están
evaluando las cepas en otro sistema de
cultivo para así comparar resultados de
productividad en un diseño “artesanal” y en
un fotobiorreactor air-lift.
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5. AGRADECIMIENTOS
Los autores expresan sus agradecimientos al
Grupo de Investigación de Biotecnología
Ambiental, al Grupo de Investigación en
Microbiología y Biotecnología, al
Laboratorio de control de calidad y al
Cepario de la Universidad de Pamplona.
6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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(2015). Evaluación de la remoción de
nitritos y nitratos en muestras de agua
del río de San Pedro Cantón
Rumiñahui por microalgas clorofitas.
Universidad Politécnica Salesiana,
Quito, Ecuador.
 APHA, AWWA, WEF. (2012).
Standard Methods for the
Examination of Water and
Wastewater. 22th Edition.
Washington.
 AVILA PELTROCHE, J. G. J.
Evaluación de la remoción de nitratos
y fosfatos a nivel laboratorio por
microalgas libres e inmovilizadas
para el Tratamiento Terciario de
Aguas Residuales Municipales.
Lima, Perú, 2015. Universidad
Ricardo Palma.
 GARCIA TRUJILLO, Z. M.
Comparación y evaluación de tres
plantas acuáticas para determinar la
eficiencia de remoción de nutrientes
en el tratamiento de aguas residuales
domésticas. Lima, Perú. 2012.
Universidad Nacional de Ingeniería.
 LAZCANO CARREÑO, C. (2016).
Biotecnología ambiental de aguas y
aguas residuales, Bogotá Colombia,
Ecoe Ediciones.
 OLGUÍN, E. (2003).
Phycoremediation: key issues for
cost-effective nutrient removal
processes. Elsevier, 22, 81-91.
 PEREZ GARCÍA, O. (2009).
Eliminación de nutrientes para el
tratamiento biológico de agua
residual usando un sistema
inmovilizado microalga-bacteria en
crecimiento autotrófico, heterotrófico
y mixotrófico. Centro de
Investigaciones Biológicas del
Noreste, S.C, La Paz, México.
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