UNIDAD DE EDUCACIÓN MEDIA SUPERIOR

TECNOLÓGICA INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS

CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO INDUSTRIAL
Y DE SERVICIOS NO. 134

MANUAL DE PRÁCTICAS DE HEMATOLOGÍA

Profesora: M.C. Blanca Azucena Maldonado Lemus

Chilpancingo Gro., Agosto de 2018

 ÍNDICE

● Práctica 1: Frotis de sangre periférica

● Práctica 2: Recuento diferencial de leucocitos.

● Práctica 3: Uso de la Cámara Neubauer

● Práctica 4: Recuento de leucocitos totales.

● Práctica 5: Fórmula leucocitaria

● Práctica 6: Tiempo de sangrado

● Práctica 7: Tiempo de coagulación de sangre total

● Práctica 8: Tiempo de tromboplastina parcial activada (PTTK)

● Práctica 9: Tiempo de protrombina

 NO. 1

“FROTIS DE SANGRE PERIFÈRICA”

INTRODUCCIÓN

Se define como frote, frotis o extendido, a la preparación microscópica delgada y

transparente, extendida entre dos cristales (porta o cubreobjetos), obtenida de un
líquido orgánico espeso o tejido semilíquido o pastoso (sangre, aspirados,
secreciones, exudados, etc.)

El frote periférico se utiliza para el estudio de las características citológicas de las

células de la sangre, lo cual permite valorar el funcionamiento general de la
médula ósea a través de sus componentes celulares, lo cual implica la evaluación
de las líneas eritrocíticas, leucocitaria y megacariocítica, determinando
anormalidades en forma, tamaño, color e inclusiones citoplasmáticas, dando una
medida cuantitativa y cualitativa de los elementos que lo conforman.

OBJETIVOS

Objetivo general:

● Evaluar la técnica para conocer a través de componentes celulares, las

líneas eritrociticas en una muestra sanguínea.

Objetivos específicos:

● Adquirir las habilidades necesarias para realizar un frotis sanguíneo

correcto de fácil visualización.
FUNDAMENTO
Técnica manual con dos portaobjetos en ángulo. Es la técnica más conveniente y
usada con mayor frecuencia para hacer extendidos de sangre periférica. Figura 1.
Extendido de sangre periférica por el método de portaobjetos.

MATERIAL:

Portaobjetos de vidrio
Palillos aplicadores de madera
Papel secante
Plumón sharpie
Contador celular
Cronometro
Aceite de inmersión

PROCEDIMIENTO

a) Colocar una gota de sangre (de alrededor de 2-3 mm de diámetro) en un

extremo del portaobjetos. El tamaño de la gota es importante: si es demasiado
grande crea un extendido muy largo o muy grueso y si es demasiado pequeña a
menudo forma un extendido corto o delgado.

b) Sostener el portaobjetos extensor (frotadora) con firmeza con la mano

dominante a un ángulo de 30-45º y llevar hacia atrás hasta tocar la gota de
sangre, dejando que ésta se esparza en todo el ancho del portaobjetos.
c) Empuja con rapidez y suavidad hacia delante hasta el final del portaobjetos para
crear el extendido. Es importante que toda la gota se incluya en el extendido. En la
figura 2 se muestra un extendido correcto y las formas inaceptables.

Consideraciones​:

a) El movimiento demasiado lento del portaobjetos extensor produce una mala

distribución de los leucocitos porque desplaza las células más grandes, como los
monocitos y los granulocitos, hacia el final y los lados del extendido.

b) Es esencial mantener una presión pareja y suave sobre el portaobjetos para

evitar la formación de gradas en el extendido. Es fundamental mantener el mismo
ángulo a lo largo de todo el extendido.

c) En el caso de hematocritos superiores a lo normal, como ocurre en los

pacientes con policitemia o en los recién nacidos, el ángulo debe reducirse (a
aproximadamente 25º), de forma que el extendido no sea demasiado corto y
grueso. En cambio, para los hematocrito muy bajos, como el que se presenta en
pacientes renales, puede ser necesario aumentar el ángulo.

Secado de los extendidos

Todos los extendidos de sangre deben secarse tan rápido como sea posible para
evitar los artefactos que produce el secado lento, que conlleva a resultados falsos
positivos. En algunos laboratorios se usa un ventilador pequeño para acelerar el
secado. Soplar sobre el portaobjetos es contraproducente, porque la humedad de
la respiración hace que los eritrocitos adquieran un aspecto equinocítico y
“apolillado”, con centros huecos. El artefacto de secado es difícil de evitar en los
extendidos de pacientes muy anémicos, debido a la relación muy alta entre
plasma y eritrocitos.

Tinción del frotis sanguíneo

a) Colocar el frotis secado al aire sobre una rejilla o cubeta de tinción con la
sangre hacia arriba.

b) Cubrir completamente el portaobjetos o cubreobjetos con el colorante de Wright

gota a gota. El colorante deberá cubrir completamente el portaobjetos, pero no
debe derramarse por los bordes. Deberá agregarse una cantidad adicional si éste
se comienza a evaporar. Dejarlo que permanezca en el frotis aproximadamente de
5- 8 minutos.

c) Agregar directamente al colorante un volumen igual de amortiguador de Wright,

para evitar la coloración débil. Esperar la formación de brillo metálico. Puede
usarse de igual manera agua desionizada. Dejar actuar de 10-15 minutos.

d) Lavar con agua en el chorro cuidadosamente hasta que la extensión presente

un aspecto rosado al examinarlo a simple vista.

e) Limpiar el dorso del portaobjetos con una gasa o algodón humedecido en

alcohol para eliminar cualquier resto de colorante.

f) Secar al aire y observar con el microscopio con el objetivo de inmersión.

Reporte de Laboratorio

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PRÁCTICA 2
“RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS”

INTRODUCCIÓN

El recuento diferencial de leucocitos es una parte rutinaria de la biométrica

hemática que puede ser útil en la valoración de una infección o inflamación, en la
determinación de los defectos de intoxicación posible por sustancias químicas o
drogas, en el monitoreo de trastornos sanguíneos como la leucemia, y en los
efectos secundarios de tratamientos como la quimioterapia. El procedimiento
consta de una toma de sangre, la misma se disemina en un portaobjetos de vidrio
y luego se tiñe. A continuación se determina el porcentaje de cada tipo de
leucocitos.

OBJETIVOS
Objetivo general
● Conocer el recuento diferencial de estas células para su utilidad clínica.
Objetivos específicos
● Conocer el fundamento y características del recuento diferencial de
leucocitos.

FUNDAMENTO

Los leucocitos son parte fundamental del tejido hemático y presentan las
siguientes características: son células que tienen un mayor diámetro que los
eritrocitos, presentan un núcleo de forma irregular, su citoplasma presenta algunas
granulaciones las cuales son teñidos con diferentes colorantes, y la cromatina del
núcleo puede ser de diferentes densidades. Pueden distinguirse 5 tipos de
leucocitos maduros (neutrófilos, eosinófilos, basófilos, monocitos y linfocitos)
basándose en general en las siguientes características:
● Tamaño de la célula
● Forma del núcleo
● Contenido de gránulos
● Consistencia de la cromatina nuclear
● Coloración de los gránulos

El 65% de leucocitos corresponde a los Granulocitos: Eosinófilos, Basófilos y

Neutrófilos.
El 35% corresponde a los Agranulocitos: Monocitos y Linfocitos.
Los leucocitos se desplazan por medio de movimientos amiboideos saliendo de
los vasos sanguíneos y llegando a los tejidos, por medio de la Diapedesis. Estas
células son importantes en las reacciones de defensa contra enfermedades y en
general en infecciones, puesto que pueden fagocitar cuerpos extraños y bacterias.
Tienen una importante función en las reacciones inmunológicas de nuestro
organismo favoreciendo la producción de anticuerpos.

MATERIAL:

Portaobjetos de vidrio
Palillos aplicadores de madera
Papel secante
Plumón sharpie
Contador celular
Cronometro
Aceite de inmersión
Alcohol metanol fijador
Eosina bufferizada
Policromo
PROCEDIMIENTO
● Homogenizar la muestra sanguínea y ANTES de 3 hrs. realizar un frotis
● Empleando un aplicador de madera, depositar una pequeña gota de sangre
en el extremo de un portaobjetos totalmente limpio.
● Con el borde de otro portaobjetos a 20 o 30 grados, tocar la gota, esperar a
que la sangre se distribuya por capilaridad en el extremo del portaobjetos
extensor y deslizarlo suavemente sobre el otro portaobjetos, en sentido
longitudinal hasta que la gota quede bien extendida sobre la superficie del
primer portaobjetos (NOTA: revisar clase de leucopoyesis para recordar la
forma de hacer el frotis)
● Dejar secar el frotis.
Teñir el frotis con la tinción correspondiente de la siguiente manera:
a. fijar la extensión en metanol absoluto aproximadamente 30 segundos.
b. teñir con la solución de Eosina bufferizada por 20 segundos.
c. enjuagar con agua de la llave.
d. introducir la extensión en solución de azul de policromo durante 30 segundos.
e. enjuagar con agua de la llave, dejar escurrir el agua y dejar secar al aire libre.
● Colocar una gota de aceite de inmersión y leer al microscopio con el
objetivo de 100x.
● Se hará un recuento de 100 células blancas en total, diferenciando cada
una de ellas según sus características antes citadas.
● Evaluar la morfología de eritrocitos, leucocitos y plaquetas y reportar
anormalidades.

Reporte de Laboratorio

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RESULTADOS
DISCUSIÓN
CONCLUSIÓN

PRÁCTICA NO. 3:
“CÁMARA DE NEUBAUER”

INTRODUCCIÓN

La cámara de Neubauer es una cámara de contaje adaptada al microscopio de

campo claro o al de contraste de fases. Se trata de un portaobjetos con una
depresión en el centro, en el fondo de la cual se ha marcado con la ayuda de un
diamante una cuadrícula como la que se ve en la imagen. Es un cuadrado de 3 x 3
mm, con una separación entre dos líneas consecutivas de 0.25 mm. Así pues el
área sombreada y marcada L corresponde a 1 milímetro cuadrado. La depresión
central del cubreobjetos está hundida 0.1 mm respecto a la superficie, de forma
que cuando se cubre con un cubreobjetos éste dista de la superficie marcada 0.1
milímetro, y el volumen comprendido entre la superficie L y el cubreobjetos es de
0.1 milímetro cúbico, es decir 0.1microlitro.

OBJETIVOS

Objetivo general:

● Desarrollar la capacidad de enfocar la camara de Neubauer con el uso de

un microscopio compuesto, utilizandolos objetivos de 4x, 10x y 40x
Objetivos específicos:
 ● Seguir el procedimiento a dibujar lo observado e indicar las partes del
microscopio que se utilizo para realizar dicha actividad en la cámara de
neubauer

FUNDAMENTO
La cámara Neubauer consiste en una placa gruesa con forma de porta, cuya
porción central está dividida en tres bandas longitudinales perpendiculares a su
eje longitudinal. De ellas, las dos laterales se encuentra sobreelevadas con
respecto de la central en 0.1 mm, y en la central hay grabado un retículo
cuadrangular.

Existen más tipos de cámaras, nosotros disponemos de dos distintas, y cada una
tiene una relación distinta a la hora de calcular el número de células/ ml.

MATERIALES

Bata de laboratorio.
Guantes de látex.
Microscopio compuesto.
Cámara de Neubauer.

PROCEDIMIENTO

En teoría se deberían contar los 4 cuadrantes (64cuadros) marcados con L que

equivalen a un volumen de 4 x 0.1mm, ya que el volumen de cada cuadrante es:
1mm x 1mm x 0.1mm = 0.1mm3. De los cuadraditos pequeños, contamos las
células que caigan dentro de las líneas, en dos de ellas a libre elección, siempre y
cuando sean las mismas en todos los cuadrados.
1. Cálculo del nº de células totales por ml de suspensión: nº=R x 10000 RÆ
recuento en la cámara 10000 Æ para cambiar de unidades (de 0.1 mm3 a 1cm3 )
1ml = 1cm3 = 1000 mm3

2. Cálculo del nº de células totales en la suspensión: (nº células/ml) x nº ml de

suspensión

3. Cálculo del nº de células por ml de sangre: células totales en el medio / ml de

sangre iniciales

4. Cálculo del volumen que contenga, por ejemplo, 200000 células en suspensión:

V= 200000 células / resultado del cálculo 1º Estos datos sirven para la práctica de
citometría Como hemos dicho anteriormente disponemos de otro tipo de cámara
cuyo cuadrante tiene un volumen de 0.0125 mm3, así que en teoría, estas
cámaras contienen aproximadamente la mitad de células que la Neubauer.
Podemos contar de la misma manera que en la anterior, solo que al final
doblaremos el resultado, para saber lo que tenemos en un ml.

Podemos mirar la viabilidad celular diluyendo 10 µl de suspensión celular en 10 µl

de colorante azul Trypan o azul de Coomasie. Las células muertas se ven
completamente en azul muy oscuro.

Reporte de Laboratorio

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RESULTADOS
Resultados
 PRACTICA NO. 4

“RECUENTO DE LEUCOCITOS TOTALES”

INTRODUCCIÓN

Los leucocitos son las células de la serie blanca de la sangre y se conocen

también como glóbulos blancos. Circulan en sangre y se hallan también en el
sistema linfático y tejidos, constituyendo un pilar esencial de los mecanismos de
defensa del organismo. Protegen frente a infecciones y juegan un papel
importante en inflamaciones y en respuestas alérgicas, además de proteger frente
al cáncer. Con el recuento de leucocitos se contabiliza el número total de este tipo
de células en la muestra de sangre analizada. Se incluye sistemáticamente en un
hemograma, que es una prueba frecuentemente solicitada en cualquier análisis
rutinario.

En la sangre circulan distintos tipos de células suspendidas en un fluido conocido

como plasma. Además de leucocitos, en sangre circulan eritrocitos o hematíes y
plaquetas. Todos ellos se producen en la médula ósea y desde ahí se liberan
hacia la sangre. Se distinguen cinco tipos de leucocitos, cada uno de ellos con
funciones diferenciadas.

Tres tipos de leucocitos se clasifican dentro de la categoría de granulocitos debido

a que presentan gránulos en su citoplasma. En el curso de las reacciones
inmunitarias estos gránulos liberan compuestos diversos. Entre los granulocitos se
incluyen neutrófilos -que son los leucocitos que predominan en sangre-,
eosinófilos y basófilos. Los otros dos tipos restantes de granulocitos son los
monocitos y los linfocitos. A su vez los linfocitos se dividen en tres subtipos:
linfocitos B -que producen anticuerpos (conocidos como inmunoglobulinas)-,
linfocitos T y células asesinas o células NK (por sus siglas en inglés).

Cuando se produce una inflamación o infección, la médula ósea produce mayor

cantidad de leucocitos y los libera a la circulación sanguínea, y por un complejo
mecanismo, estos acuden al foco donde se ha producido la infección o
inflamación. Cuando la situación se resuelve, la producción de leucocitos en la
médula ósea disminuye de tal manera que el número de leucocitos en sangre
periférica va normalizándose progresivamente. Al efectuar el recuento total no
encontraremos diferenciación entre los 5 tipos de leucocitos normales (neutrófilos,
monocitos, linfocitos, basófilos y eosinófilos). En esta práctica nos limitaremos a
contar manualmente los leucocitos totales dados en mm3 o litros.

OBJETIVOS

Objetivo general:

● Conocer la estructura general de los leucocitos.

Objetivos específicos:

● Analizar el fundamento de la técnica de Turk para distinguir cuáles son sus

ventajas y desventajas utilizando este método.
● Determinar los valores normales que se utilizan para saber si el paciente
atraviesa un proceso infeccioso o no.
FUNDAMENTO:

En el método de Turk se utiliza un solución de acido acético al 2% que tiene como

función lisar los eritrocitos para evitar interferencias en el recuento.

MATERIAL UTILIZADO:
1. Pipeta de Thoma para LEUCOCITOS
2. Cámara de Neubauer
3. Microscopio
4. Contador celular
5. Boquilla

REACTIVO UTILIZADO:

Reactivo de Turk

PROCEDIMIENTOS

Se requiere de sangre total con EDTA

 ● Pipetear sangre con la pipeta de Thoma y la boquilla, hasta la marca de 0.5
evitando la formación de burbujas.
● Limpiar la pipeta para ELIMINAR el exceso de sangre
● Aspirar reactivo de Turk hasta la marca 11, EVITANDO las BURBUJAS.
● Se retira la boquilla de la pipeta y esta se agita vigorosamente por 3 min.
● Preparar la cámara de Neubauer.
● Se eliminan las 3 primeras gotas de la dilución.
● Colocar una gota en la cámara de Neubauer y dejar reposar por 3 min. para
que se asienten los leucocitos.
● Leer al microscopio con objetivo de 10X y el contador celular, SOLO EN
LOS 4 CUADROS GRANDES de la cámara de Neubauer, como se indica
en la figura.
● Realizar cálculos correspondientes.
CALCULOS: El total de células en estos 4 mm3 se multiplica por 50 (factor
obtenido entre la dilución de la sangre y la profundidad de la cámara).

LEUCOCITOS TOTALES/ mm3 = células contadas X 50

VALORES DE REFERENCIA:

5,000 – 10,000/mm3 5.00 – 10.00 X109 /L

SIGNIFICADO DE LOS RESULTADOS ANORMALES:

Un bajo número de glóbulos blancos se denomina leucopenia y puede deberse a:

 ● Insuficiencia de la médula ósea (por ejemplo: debido a infección, tumor o
cicatrización anormal)
● Enfermedades vasculares del colágeno (como el lupus eritematoso)
● Enfermedad del hígado o el bazo
● Radioterapia o exposición a la radiación
Un alto número de glóbulos blancos se denomina leucocitosis y puede deberse a:

● Anemia
● Enfermedades infecciosas
● Enfermedad inflamatoria (como artritis reumatoidea o alergia)
● Leucemia
● Estrés emocional o físico severos
● Daño tisular (como, por ejemplo, quemaduras), entre otros

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RESULTADOS
 PRÁCTICA NO. 5:
“FÓRMULA LEUCOCITARIA”

INTRODUCCIÓN

Los leucocitos son los elementos nucleados de la sangre. Son morfológica y

funcionalmente heterogéneos, y ofrecen una enorme cantidad de información
clínica. Para ello, la sangre debe someterse a una serie de procesos de
distorsiones, fijaciones, tintes y lavados, que dan como resultado algunas de las
imágenes más vistosas de la medicina.

Los leucocitos tienen su origen en la médula ósea, se encuentran en tránsito por la

sangre y ejercen su función en los espacios tisulares. Se dividen en dos
categorías fundamentales, según actúen como defensa específica con función
inmunitaria (linfocitos) o con una función de endocitosis inespecífica (monocitos y
granulocitos). Estos últimos se diferencian por sus apetencias tintoriales en
neutrófilos, eosinófilos y basófilos. Los distintos tipos de leucocitos se encuentran
en la sangre periférica en concentraciones diferentes y sólo relativamente
constantes, por equilibrio dinámico entre los que llegan, se incorporan y
abandonan la circulación. Tanto en situaciones fisiológicas como patológicas,
pueden experimentar importantes variaciones en número y categoría.

Existen cuatro compartimentos fisiológicos donde localizar los granulocitos y, en

general, las células con actividad macrofágica. El primero es el medular, donde se
generan y maduran, antes de pasar al compartimento marginal, en capilares y
sinusoides esplénicos, donde termina la maduración y quedan dispuestos para
ejercer su función. El tercero es el espacio circulante, el observado en el
hemograma, y el cuarto es el tisular, donde ejercen realmente su función y son
destruidos.
OBJETIVOS

Objetivo general:

Determinar los porcentajes de las distintas clases de leucocitos normales y

anormales en la sangre

Objetivos específicos:

● Adquirir las habilidades necesarias para realizar a partir de los porcentajes,

el número real de cada clase de leucocitos por mm3 de sangre (valor
absoluto), conociéndose el total de leucocitos.

FUNDAMENTO
Los valores relativos sólo nos sirven cuando los valores totales de leucocitos se
encuentran dentro del valor normal. En caso contrario (leucocitosis o leucopenia)
se debe emplear la fórmula para obtener el valor real, y así determinar que
elemento celular se encuentra fuera del rango normal, sea elevado o disminuido.

Por acuerdo se denomina leucocitosis a unos valores superiores a 11 ×10​9​/L, y

leucopenia a unos valores inferiores a 4 × 10​9​/L. La cifra de leucocitos viene dada
por la suma total de los elementos nucleados circulantes, excluyendo eritroblastos,
si estuvieran presentes. Para evaluar su importancia es imprescindible diferenciar
la cifra total de cada uno de sus componentes; valorar sólo el porcentaje es un
error frecuentísimo. Según la función de los leucocitos, cabe distinguir entre los
macrófagos y sus distintas categorías (neutrófilos, eosinófilos, basófilos y
monocitos) y los linfocitos. Ante una leucocitosis siempre debe valorarse el tipo de
célula predominante. Las leucocitosis neutrofílicas casi siempre son indicativas de
proceso infeccioso o inflamatorio, mientras que una leucocitosis linfoide sin
manifestaciones clínicas, en un adulto, obliga a descartar un síndrome
linfoproliferativo. El proceso más exagerado que puede observarse sin que se trate
de una leucemia es la reacción leucemoide, que puede ser granulocitaria, linfoide
o monocitaria, y siempre está relacionada con alguna noxa importante, como
infecciones, inflamaciones, hemorragias, hemólisis, intoxicaciones, grandes
quemaduras, neoplasias de mama, gástricas o renales, síndrome hipereosinofílico,
etc.

MATERIALES

Portaobjetos de vidrio
Palillos aplicadores de madera
Papel secante
Plumón sharpie
Contador celular
Cronometro
Aceite de inmersión

PROCEDIMIENTOS

● Se examina la lámina a pequeño aumento para comprobar si los elementos

celulares están bien distribuidos.
● Si es favorable se examina con el objetivo de inmersión.
● La parte ideal para visualizar células para la fórmula leucocitaria es en la
parte final del cuerpo y comienzos de la cola, recorriendo la lámina de
izquierda a derecha o de arriba hacia abajo hasta contar 100 leucocitos
incluidos los agranulocitos y granulocitos. Aquí no se incluyen los
elementos inmaduros de sangre roja.
● A medida que se va contando, se va anotando el número de cada una de
las clases de glóbulos blancos observados.
● Se determina luego los porcentajes de cada uno de ellos para luego
comparar con los porcentajes normales.
● Si se tiene en el recuento de leucocitos valores por encima de 10 000 y por
debajo de 5000 se debe repetir el recuento
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RESULTADOS

Cálculos:
 Práctica No. 6
“TIEMPO DE SANGRADO”

INTRODUCCIÓN

El tiempo de sangrado es una medida de Integridad vascular y plaquetaria. Las

plaquetas se adhieren a la colágena expuesta (subendotelial) y después entre
ellas, para formar un agregado que obtura la herida. Para la agregación
plaquetaria, también es necesario un factor del plasma: el factor de Von
Willebrand.
OBJETIVOS

Objetivo general:

● Evaluar la formación del tapón plaquetario que se forma como resultado de

la adhesión de las plaquetas a la pared de los vasos sanguíneos.

FUNDAMENTO
Mediante esta prueba se estudia la adhesión de las plaquetas al endotelio
vascular y su capacidad para formar el trombo plaquetario que detiene la
hemorragia a nivel de un vaso de pequeño calibre. Consiste, por tanto, en realizar
una pequeña herida y medir el tiempo que tarde en dejar de sangrar.

MATERIALES

Lanceta (dispositivo descartable estandarizado para tiempo de sangría).

Cronómetro.
Papel Wathman Nº 1, cortado en círculos.
Vendita compresiva.
Algodón y alcohol.

PROCEDIMIENTO
 ● Exponer el antebrazo del paciente y escojer una zona libre de vénulas,
hematomas, heridas y otros. Si el paciente tiene marcada cantidad de
vellos, afeite la zona.
● Limpie con alcohol la zona escogida.
● Coloque el tensiómetro en el brazo del paciente y regúlelo a 40 mm Hg.
● Se extrae la lanceta de su reservorio estéril y se quita el seguro.
● No deben pasar más de 30 a 60 segundos entre la inflada del tensiómetro y
la producción de la incisión.
● Se presiona el disparador al mismo tiempo que el cronómetro y un segundo
después retire el dispositivo.
● Cada 30 segundos secar con el papel de filtro, no tocar los bordes de la
incisión para no interferir con el tapón plaquetario. Se anota el tiempo que
tarda en cesar la hemorragia, lo que corresponde al tiempo de sangría.

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 PRÁCTICA NO. 7:
“TIEMPO DE COAGULACION DE SANGRE TOTAL”

INTRODUCCIÓN

El sistema de coagulación de la sangre comprende una serie de reacciones

enzimáticas que llevan finalmente a la formación de trombina, la cual convierte al
fibrinógeno en fibrina e inicia la estabilización de la red de fibrina. En la
homeostasis normal que sigue a la injuria vascular esta red de fibrina se forma
alrededor del tapón de plaquetas hemostático primario, impidiendo así su arrastre
por el torrente circulatorio. Este proceso medido por la coagulación se ha llamado
homeostasis secundaria. Si la formación de fibrina está deteriorada por una o más
anomalías del proceso de coagulación sanguínea pueden renovarse la
extravasación de sangre después del paro inicial de la hemorragia mediado por las
plaquetas.

OBJETIVOS

Objetivo general:

● Medir en unidades de tiempo, lo que tarda en generarse un coágulo en una

muestra de sangre no anticoagulada, que se pone en contacto con una
superficie de vidrio.

FUNDAMENTO
De modo que tiempo de coagulación se denomina al tiempo que transcurre hasta
la formación de fibrina en cantidad suficiente para que una masa de sangre
extraída y puesta en condiciones determinadas, pase del estado fluido al del gel.
Se fundamenta en la medición del tiempo aproximado de la participación y eficacia
global del mecanismo intrínseco de coagulación sanguínea. Para la realización de
la práctica, utilizaremos el baño de agua, para poder hacer una medición del
tiempo en el que se forma el coágulo semejante a la temperatura corporal.

MATERIALES

Gradilla
Tubo de hemólisis
Lanceta
Alcohol
Algodón
Baño de agua maría
Cronómetro
Portaobjetos

PROCEDIMIENTO
● Se prepara el baño de agua a 37ºC y se introducen los tubos de hemólisis
en él para que se mantengan a una temperatura semejante a la corporal.
● Desinfectar la zona de punción con ayuda de algodón impregnado de
alcohol.
● Pinchamos con la lanceta y se recoge la sangre que brota, apoyando la
boca del tubo de hemólisis debajo de la punción.
● Una vez obtenida una cantidad suficiente, se introduce el tubo de nuevo en
el baño de agua y se observa el cambio macroscópico de la sangre cada 3o
segundos, hasta que visualizar que se ha formado completamente un
coágulo de sangre que no se deforma.

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 PRÁCTICA NO. 8:
“TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA (PTTK​)​”

INTRODUCCIÓN

El tiempo de tromboplastina parcial activada (APTT), es una prueba sensible a la

deficiencia de factores procoagulantes del plasma así como a la presencia de
ciertos inhibidores de la coagulación. Sirve para detectar anormalidades en la vía
intrínseca de la coagulación, como son los factores necesarios para la formación
del activador intrínseco de la protrombina, o sea los factores VIII, IX, XI y XII.
También detecta deficiencias severas de los factores II, V, X y fibrinógeno, no
siendo así con los trastornos plaquetarios, las deficiencias de los factores VII y XIII
ni los problemas vasculares. La rapidez, sencillez y reproducibilidad de la prueba
la hacen muy adecuada para el control de la terapéutica anticoagulante por
heparina. También permite la identificación rápida de hemofílicos en potencia, a fin
de poder someterlos a tratamientos preventivos prequirúrgicos y evitar problemas
hemorrágicos.

OBJETIVOS

Objetivo general:

● Medir el tiempo que tarda en coagular un Plasma deficiente en Plaquetas.

FUNDAMENTO
El ensayo se basa en la medida del tiempo que tarda en coagular un plasma
descalcificado, colocado en un baño a 37o C y en presencia de un exceso de
cefalina, activador y calcio.

MATERIALES

● Tubos de hemólisis.
● Pipetas y micropipetas para medir los volúmenes indicados.
● Baño de agua a 37°C.
● Cronómetro.
● Fuente luminosa, para la observación del coágulo
● Reactivo A: viales conteniendo cefalina con tierra de diatomeas como
activador particulado.
● Reactivo B: solución de cloruro de calcio 0,025 mol/l.
● REACTIVOS NO PROVISTOS
● Agua bidestilada o desionizada

PROCEDIMIENTO
● Precalentar el Reactivo B antes de realizar la prueba en baño de agua a
37o C.
● En un tubo de hemólisis colocar:
● Muestra (plasma desconocido o control) 100 ul Reactivo A
(homogeneizado) 100 ul Mezclar e incubar 3 minutos a 37o C, luego
agregar:Reactivo B (a 37o C) 100 ul
● Disparar simultáneamente un cronómetro.
● Agitar brevemente para homogeneizar el contenido, mantener en el baño
unos 25 segundos. Luego sacar el tubo del baño, inclinar suavemente una
vez por segundo y detener el cronómetro en el momento de la formación
del coágulo.
● Tomar nota del tiempo de coagulación.
 VALORES DE REFERENCIA
● El intervalo de valores observados en individuos normales oscila entre
33-48 segundos.
● Se considera fuera de lo normal valores que difieran en más de 6 segundos
de un plasma control.
● Es recomendable que cada laboratorio procese un plasma control con cada
lote de reactivos empleado y que correlacione los valores obtenidos para
los pacientes con el de dicho plasma, haciendo constar estos resultados en
el informe.
Reporte de Laboratorio

Lugar y fecha:​_____________________________________________________

Paciente:_________________________________________________________

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 PRÁCTICA NO. 9

“TIEMPO DE PROTROMBINA (TP)”

INTRODUCCIÓN

La protrombina es una proteína estable del tipo de globulinas alfa que contiene
unos 18 aminoácidos. Su concentración normal es la sangre es de
aproximadamente de 20 Mg. Por 100 ml. En presencia de iones de calcio, se
transforma en trombina por la acción enzimática de las tromboplastinas extrínseca
e intrínseca. Es producida por el hígado bajo la influencia de la vitamina
liposoluble. La protrombina está relacionada con el factor VII, también producida
por el hígado. La trombina se transforma en trombina en la etapa segunda de la
coagulación.

OBJETIVOS

Al término de la práctica, el alumno será capaz de:

1. Describir y comprender el fundamento del método

2. Ejecutar correctamente la prueba y la calibración.

3. Identificar la utilidad clínica de la medición del tiempo de protrombina.

FUNDAMENTO

Cuando el calcio y un extracto de tejido de cerebro (Factor III, fosfolípidos y

proteínas que constituyen una tromboplastina completa) son añadidos al plasma,
inmediatamente al factor VII reacciona con el factor tisular para formar un
complejo el cual transforma al factor X en su forma activada Xa; este reacciona
con el factor V, calcio y fosfolípidos presentes en el extracto de tejido para dar
origen a la protrombina extrínseca, la cual transforma a la protrombina en
trombina; esta convierte el fibrinógeno en fibrina.
La velocidad de formación de la fibrina depende de la concentración de los
factores V, VII y X, protrombina, fibrinógeno, por lo tanto, la prueba valora la
actividad de la totalidad de estos factores, es decir, que participan en la vía
extrínseca, excepto el factor XIII, que tiene que ver con el proceso de la
estabilización del trombo de fibrina adicionando enlaces covalentes.

MATERIALES Y MÉTODOS

● Tubos de ensayo tapón azul de 10x75mm

● Pipetas automáticas de volumen variable 100-1000µL
● Puntas amarillas y azules
● Gradilla para tubos
MATERIAL BIOLÓGICO

Plasma citratado (sangre venosa adicionada de citrato de sodio al 3.8% en una

proporción de 9 partes de sangre y una de anticoagulante, la cual es centrifugada
a 3000rpm durante 10 minutos).

EQUIPO

● Centrifuga
● Baño de incubación a 37°C
● Cronómetro
● Coagulómetro automatizado o semiautomatizado
REACTIVOS

● Citrato de sodio al 3.8%

● Tromboplastina liquida activada
● Cloruro de calcio 0.02M

PROCEDIMIENTO

1. Mantener el plasma en baño de hielo hasta el momento de la determinación.

2. Homogenizar adecuadamente el reactivo de tromboplastina.

3. Transferir a un tubo de 10x75 mm de la cantidad de CaCl2 suficiente de 37°C

en el baño de incubación.

4. Adicionar 100µL de plasma a un tubo e incubar durante 2 minutos.

5. Posteriormente agregar 100 µL de tromboplastina activada (previamente

incubada durante 10 minutos) y colocar la mezcla en el baño de incubación a
37°C.

6. Agregar 100 µL de CaCl2 0.02M a la mezcla de plasma y tromboplastina, y

simultáneamente poner en marcha el cronometro.

7. Agitar inmediatamente la mezcla y mantenerla en el baño de incubación a 37°C.

Es necesario revisar constantemente la apariencia de la mezcla y para ello se
debe contar con una buena iluminación para observar oportunamente la aparición
de los primeros filamentos de fibrina; este es el momento final de la prueba y se
detiene la marcha del cronómetro.

VALORES DE REFERENCIA

- Tiempo de protrombina 10-15 segundos

- % de actividad mayor al 60%

Reporte de Laboratorio

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