8.12.2018.

Dobrovoljno aktiviranje simpatičnog nervnog sistema i slabljenje urođenog imunskog odgovora kod ljudi

Dobrovoljno aktiviranje simpatičnog nervnog sistema i slabljenje urođenog imunskog odgovora kod ljudi
Matthijs Kox , a, b, c, 1 Lucas T. van Eijk , a, c Jelle Zwaag , a, cJoanne van den Wildenberg , a, c Fred CGJ Sweep , dJohannes G. van der Hoeven , a, c i Peter Pickkers a, c

Informacije o autoru Autorska prava i informacije o licencama Odricanje od odgovornosti

Ovaj članak navode drugi članovi u PMC-u.

Urođeni imuni sistem je presudan za naš opstanak, ali prekomerna ili uporna proinflamatorna proizvodnja citokina može dovesti do oštećenja tkiva i
povreda organa, kao što su autoimune bolesti. Biološke terapije koje antagonizuju proinflamatorne citokine ili njihove receptore su veoma efikasne i imaju
revolucionarni tretman autoimunih bolesti, kao što je reumatoidni artritis i inflamatorna bolest creva ( 1 , 2 ). Međutim, ovi lekovi su skupi i imaju ozbiljne
neželjene efekte ( 3 , 4 ). Stoga se garantuju inovativne terapije u cilju ograničavanja proizvodnje zapaljenog citokina na fiziološki način.
Akutna aktivacija simpatičkog nervnog sistema slabi upala preko aktivacije β2-adrenoreceptora po kateholamina, objašnjena činjenicom da (ni) epinefrin
slabi lipopolisaharidom (LPS) -induciranu TNF-α oslobađanje in vitro ( 5 , 6 ) i kratkoročne infuziju epinefrina ograničava proizvodnju proinflamatornih
citokina in vivo tokom eksperimentalne endotoksemije (iv primjena LPS kod zdravih volontera) ( 7 ). Osim toga, u sklopu odgovora na stres, povećani nivoi
kateholamina često su praćeni povećanjem poznatog imunosupresivnog hormona kortizola [putem aktivacije osovine hipotalamus-hipofizno-nadbubrežne
(HPA) osovine] ( 8 , 9).
Pored egzogene (tj. Farmakološke ili električne) modulacije autonomnog nervnog sistema (ANS), endogena stimulacija ANS aktivnosti može takođe
ograničiti upalni odgovor, ali ANS se generalno smatra sistemom na koji se ne može dobrovoljno uticati. Međutim, rezultat nedavno izvođene studije
slučajeva holandske osobe koja drži nekoliko svjetskih rekorda u pogledu izdržavanja ekstremne prehlade ukazuje na drugi način ( 10). Pokazalo se da je
ovaj pojedinac bio u stanju da dobrovoljno aktivira simpatički nervni sistem putem samorazvijene metode koja uključuje meditaciju, izlaganje hladnim i
tehnike disanja. Ovo je dovelo do povećanja izdvajanja kateholina i kortizola i izuzetno blagog urođenog imunološkog odgovora tokom eksperimentalne
endotoksemije u poređenju sa više od 100 ispitanika koji su prethodno bili podvrgnuti eksperimentalnoj endotoksemiji. U ovoj studiji istražili smo efekte
njegovog programa obuke (videti film S1 za utisak) na parametre simpatičnog nervnog sistema i urođeni imuni odgovor kod zdravih muških dobrovoljaca
tokom eksperimentalne endotoksemije na randomizovanom kontrolisanom načinu.

REZULTATI Idi:

Bazne karakteristike ispitanika koje su podvrgnute eksperimentalnoj endotoksemiji u obe grupe bile su slične ( Tabela 1 ).

Tabela 1.
Predmet demografske karakteristike

Parametar Obučena grupa, n= 12 Kontrolna grupa, n= 12 Pvrijednost

Starost, godina y 24 (19-27) 22 (19-27) 0.43
Visina, cm 181 (172-190) 185 (179-189) 0.30
Težina, kg 75 (58-92) 78 (65-91) 0.25
2
BMI, kg / m 23 (19-26) 23 (20-27) 0.98
HR, otkucaja / min 60 (41-80) 61 (40:75) 0.88
MAP, mmHg 92 (82-113) 94 (78-105) 0.89

Parametri su mereni prilikom pregleda pregleda. BMI, indeks telesne mase; HR, srčana frekvencija; MAP, srednji arterijski krvni pritisak. Podaci su prikazani kao srednji
(raspon). Vrednosti P su izračunate pomoću testa Mann-Whitney u .

Kardiorespiratorni parametri, temperatura i simptomi. U kontrolnoj grupi parametri arterijske krvi pCO 2 , pO 2 , pH, bikarbonat, laktat i zasićenje
kiseonika bili su normalni i nisu se bitno mijenjali tokom endotoksemije ( slika 1 A - F ). Nasuprot tome, kod obučenih pojedinaca, praktikovanje naučenih
tehnika disanja rezultiralo je neposrednom i dubokom smanjenju pCO 2 i bikarbonata, a povećanje pH (dostiže do 7,75 u pojedinačnim subjektima, Slika 2
i Film S2 ), što ukazuje na akutnu respiratornu alkalozu, koja se normalizovala brzo nakon prestanka tehnike disanja. Srednja pO 2ostali praktično
nespremenjeni kod obučenih subjekata, dok su nivoi laktata bili značajno povišeni, ali ne na klinički relevantnim nivoima. Značajan pad zasićenja
kiseonikom je primećen u obučenoj grupi tokom treninga tehnika disanja ( slika 1 F ). Minimalni nivo zasićenja kiseonika u svakom ciklusu hiper /
hipoventilacije (nakon prestanka disanja nekoliko minuta) obično se smanjuje na oko 50% kod obučenih osoba u kratkom periodu (~ 10 s, Slika 2 i Film
S2 ). Srčana frekvencija i srednji arterijski krvni pritisak (MAP) pokazali su uzorak tipičan za endotoksemiju u kontrolnoj grupi: postepeno smanjenje MAP-
a i kompenzatorni porast srčanog udara nakon primjene LPS-a ( slika 1 Gi H ). U obučenoj grupi, srčana frekvencija je porasla nakon započinjanja tehnika
disanja i normalizovana ranije u poređenju sa kontrolnom grupom, dok je MAP smanjen tokom tehnika disanja, a zatim je sledio isti obrazac kao u
kontrolnoj grupi. LPS administracija je rezultirala groznicom, sa maksimalnim povećanjem temperature u kontrolnoj grupi od 1.9 ± 0.2 ° C (srednja ±
SEM), dok je ovo povećanje manje izraženo i normalizovano ranije u obučenoj grupi (slika 1 I ). Simptomi simptoma (mučnina, glavobolja, drhtavost i bol
u mišićima i leđima na skali Likerta u šest tačaka) su dosegli 1,5 h nakon primene LPS u obe grupe, ali su bili umanjeni kod obučenih osoba u poređenju sa
kontrolnom grupom (smanjenje od 56 % u vršnim nivoima;Slika 1 J ).

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4034215/ 1/9
8.12.2018. Dobrovoljno aktiviranje simpatičnog nervnog sistema i slabljenje urođenog imunskog odgovora kod ljudi

Otvori u zasebnom prozoru

Slika 1.

Kardiorespiratorni parametri, temperatura i simptomi tokom eksperimentalne endotoksemije kod kontrolnih i obučenih subjekata. ( A ) Parcijalni pritisak ugljen-
dioksida (pCO 2 ) u arterijskoj krvi. ( B ) parcijalni pritisak kiseonika (pO 2 ) u arterijskoj krvi. ( C ) pH u arterijskoj krvi. ( D ) bikarbonat (HCO3 - ) u arterijskoj
krvi. ( E ) Laktat u arterijskoj krvi. ( F ) Zasićenost kiseonikom merena pulznom oksimetrijom. ( G ) Srčana brzina (HR). ( H ) Srednji arterijski pritisak (MAP). ( I )
Temperatura. ( J) Ocena simptoma samog prijavljivanja. Podaci su izraženi kao srednja ± SEM od 12 ispitanika po grupi. Siva kutija označava period u kojem
obučeni subjekti praktikuju svoje naučene tehnike disanja. Vrednosti P između grupa su izračunate pomoću ponovljenih mera dvosmernih analiza varijanse
(ANOVA, izraz interakcije). AU, proizvoljne jedinice; bpm, otkucaja u minuti.

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4034215/ 2/9
8.12.2018. Dobrovoljno aktiviranje simpatičnog nervnog sistema i slabljenje urođenog imunskog odgovora kod ljudi

Otvori u zasebnom prozoru

Slika 2.

Kardiorespiratorne i biohemijske promene u toku ciklične hiperventilacije i zadržavanja udica u reprezentativnom predmetu obučene grupe. ( A ) Stopa disajnih
puteva se naizmenično povećava na oko 20 udisaja u minuti (bpm) nekoliko minuta, a zatim se smanjuje na nulu tokom dobrovoljnog zadržavanja zadaha. Ove
ciklične promene u respiratoru dovele su do dubokih promjena u ( B ) zasićenju kiseonikom, ( C ) srčane frekvence i ( D) srednjem arterijskom pritisku. Prikazani
podaci su uzorkovani sa monitora svakih 10 s. Na kraju svake faze hiperventilacije i faze zadržavanja zraka, uzorak arterijske krvi nacrtan je za analizu gasa arterijske
krvi, čiji su rezultati navedeni u tabeli ispod D. Ciklusi hiper / hipoventilacije u ovom predmetu mogu se videti u filmu S2.

Nivoi kateholamina i kortizola. Plazemski nivoi epinefrina ( slika 3 A ) su naglo porasli 1 h nakon LPS administracije i dosegli maksimum u T = 1,5 h u
kontrolnoj grupi. Kod obučenih subjekata, osnovni nivoi epinefrina bili su znatno viši u poređenju sa kontrolnom grupom (srednja ± SEM: 1.02 ± 0.22
naspram 0.35 ± 0.06 nmol / L, P = 0.007) (neupareni Student t test). Nakon započinjanja prakticiranja naučenih tehnika disanja, nivoi epinefrina su se
dodatno povećali u ovoj grupi i dostigli vrhunac neposredno pre primene LPS (srednja ± SEM: 2.08 ± 0.37 nmol / L na T= 0 h, pri pojedinačnim subjektima
dostižu do 5,3 nmol / L) i ostali su povišeni do prekida tehnike disanja. Za razliku od epinefrina, nivo norepinefrina i dopamina je ostao unutar referentnog
opsega tokom eksperimenta ( slika 3 B i C). Norepinefrinovi nivoi su slični grupi tokom perioda disanja, iako su obučeni subjekat pokazivali više nivoe na
početku i nakon prestanka tehnike disanja. Nasuprot tome, nivoi dopamina su bili malo niži u obučenim osobama tokom tehnike disanja, ali su bili slični
između grupa pre i posle. Nije bilo razlika u serumskim nivoima kortizola stresnog hormona između grupa pre ili tokom perioda u kojem je obučena grupa
praktikovala svoje tehnike; međutim, nivoi se normalizuju u obučenim osobama ( Slika 3 D ).

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4034215/ 3/9
8.12.2018. Dobrovoljno aktiviranje simpatičnog nervnog sistema i slabljenje urođenog imunskog odgovora kod ljudi

Otvori u zasebnom prozoru

Slika 3.

Koncentracije u koncentraciji katheholamina u plazmi i koncentracije kortizola u serumu tokom eksperimentalne endotoksemije kod kontrolisanih i obučenih
subjekata. ( A ) Plazma epinephrine. ( B ) Plazma norepinefrin. ( C ) Plazma dopamin. ( D ) Serum kortizol. Podaci su izraženi kao srednja ± SEM od 12 ispitanika po
grupi. Siva kutija označava period u kojem obučeni subjekti praktikuju svoje naučene tehnike disanja. Vrednosti P između grupa su izračunate pomoću ponovljenih
mera dvosmernih analiza varijanse (ANOVA, izraz interakcije).

Leukocitni brojevi. Ukupna brojka leukocita u obe grupe pokazala je tipični bifazni uzorak izazvan endotoksemijom sa inicijalnom leukopenijom, nakon
čega sledi leukocitoza ( Slika S1 A ). Koncentracije leukocita su znatno veće kod obučenih osoba. 30 minuta nakon početka tehnike disanja ( T = 0 h), kod
obučenih pojedinaca je zabeleženo povećanje limfocita, što nije bilo u kontrolnoj grupi ( slika S1 B ). Koncentracije neutrofila i monocita su bile slične
među grupama u toj ranoj tački, ali su bile izrazito veće u obučenoj grupi na kasnijim vremenskim tačkama ( Slika S1 C i D ).
Plazma citokini. Plazemske koncentracije proinflamatornih citokina TNF-α, IL-6 i IL-8 i anti-inflamatorni IL-10 citokin sve su značajno povećane nakon
primene LPS u obe grupe ( Slika 4 ). Međutim, kod obučenih pojedinaca nivo TNF-α, IL-6 i IL-8 bio je značajno umanjen, dok je reakcija IL-10 značajno
povećana u poređenju sa kontrolnom grupom (TNF-α, IL-6 i IL-8 nivoima 53%, 57% i 51% nižim, IL-10 nivoi su za 194% veći). Pored toga, nivoi IL-10 u
obučenoj grupi su se naglo povećali rano nakon primene LPS (pri T = 1 h) i dosegli vrhuncu 1 h pre vrha koji je primećen u kontrolnoj grupi. U skladu sa
prethodnim izveštajima ( 11), nivoi plazme proinflamatornog citokina IL-1β jedva su bili detektivi tokom endotoksemije kod ljudi. Koncentracije su bile
ispod granice detekcije (3.9 pg / mL) kod svih osim četiri subjekata (po dve u svakoj grupi, pokazujući vrlo niske koncentracije (4-6 pg / mL) u jednom do
tri vremenske tačke bez ikakve kinetike tokom vremena). Koncentracije anti-inflamatornog citokina TGF-β nisu pokazale kinetiku nakon primene LPS i
nisu se razlikovale između grupa ( slika S2 A ). Takođe smo merili koncentraciju leptina u plazmi, adipokin koji vrši proinflamatornu aktivnost. Na
početnom nivou ( T = -1 h), u obučenoj grupi je došlo do trenda ka nižim nivoima leptina u poređenju sa kontrolnom grupom (srednja ± SEM: 3,36 ± 0,55
naspram 4,99 ± 0,74 ng / mL, P= 0.09, neupakovani Student t test), koji je ostao očigledan u svim narednim vremenskim tačkama ( slika S2 B ). Kepteti
Leptina pokazali su dvofazni uzorak sa inicijalnim skromnim smanjenjem, a zatim je postepeno povećavao obe grupe. Međutim, nije bilo razlika između
grupa tokom vremena.

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4034215/ 4/9
8.12.2018. Dobrovoljno aktiviranje simpatičnog nervnog sistema i slabljenje urođenog imunskog odgovora kod ljudi

Otvori u zasebnom prozoru

Slika 4.

Koncentracije plazma citokina tokom endotoksemije kod kontrolnih i obučenih subjekata. ( A , C , E i G ) Srednje vrednosti pro- (TNF-α, IL-6 i IL-8) i citokine
protiv anti-inflamatornog (IL-10) ( n = 12 po grupi). ( B , D , F i H ) Srednji ± međugradski opseg područja pod krivom (AUC) pro- (TNF-α, IL-6 i IL-8) i
antiinflamatornih (IL-10) citokina ( n = 12 po grupi, jedinica: × 10 4 pg / mL · h). Vrednosti P su izračunate pomoću testova Mann-Whitney u .

Korelacione analize. Kao što je prikazano na slici 5 A , postojala je jaka pozitivna korelacija ( r s = 0,82, P = 0,001) između nivoa epinefrina u obučenoj
grupi pri T = 0 h (30 min nakon početka tehnike disanja) i rano povećanje IL-10 nivoa na T = 1 h, koji nije bio prisutan u kontrolnoj grupi ( r s = 0,18, P =
0,571). Osim toga, postojale su značajne inverzne korelacije između nivoa anti-inflamatornog citokina IL-10 na T = 1 h i vršnih nivoa proinflamatornih
medijatora TNF-α (pri T = 1,5 h), IL-6 (pri T = 2 h ) i IL-8 (naT = 2 h) u obučenoj grupi ( slika 5 B - D ). U kontrolnoj grupi nisu primećene takve inverzne
korelacije između IL-10 i proinflamatornih citokina. U stvari, našli smo značajne pozitivne korelacije između prethodnih nivoa TNF-α i IL-6 s jedne strane i
nivoa IL-10 u kasnijim vremenskim tačkama (TNF-α T = 1naspram IL-10 T = 2 : r s = 0.59, P = 0.045 i IL-6 T = 1.5 naspram IL-10 T = 2 : r s = 0.60, P =
0.039).

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4034215/ 5/9
8.12.2018. Dobrovoljno aktiviranje simpatičnog nervnog sistema i slabljenje urođenog imunskog odgovora kod ljudi

Slika 5.

Korelacije u obučenim pojedincima. ( A ) Korelacija između najviših plazemskih nivoa epinefrina (pri T = 0 h) i nivoa plazme IL-10 protivnetnog citokina na T = 1
h. ( B ) Korelacija nivoa plazme anti-inflamatornog IL-10 citokina na T = 1 h i najviših plazemskih nivoa proinflamatornog citokina TNF-α (pri T = 1,5 h). ( C )
Korelacija nivoa plazme anti-inflamatornog IL-10 citokina na T = 1 h i vrha nivoa plazme proinflamatornog IL-6 citokina (pri T= 2 h). ( D) Korelacija nivoa plazme
anti-inflamatornog IL-10 citokina na T = 1 h i najviših plazma nivoa proinflamatornog IL-8 citokina (pri T = 2 h). Vrednosti R i P su izračunate pomoću
Spearmanove korelacije.

DISKUSIJA Idi:

Ovdje pokazujemo da kratkoročni program obuke i praktične tehnike disanja naučene tokom ovog programa obuke dovode do oslobađanja epinefrina,
indukcije rane antiinflamatorne IL-10 proizvodnje, a samim tim i slabljenja proinflamatornog urođenog imunskog odgovora tokom eksperimentalne
endotoksemije kod ljudi . Takođe, obučeni pojedinci su imali manje simptoma sličnih gripu povezanim sa endotoksemijom, kao i brzu normalizaciju nivoa
groznice i kortizola, što je vjerovatno rezultat atenuiranog proinflamatornog odgovora.
Ova studija pokazuje da in vivo urođeni imuni odgovor može dobrovoljno uticati na nefarmakološki način dobrovoljnim aktiviranjem simpatičnog nervnog
sistema. U skladu sa podacima naše kontrolne grupe, ljudska endotoksemija je po sebi ranije pokazana, što dovodi do povećanja nivoa epinefrina
( 12 ). Međutim, kod obučenih pojedinaca, nivoi epinefrina su već duboko povećani 30 minuta nakon početka treninga tehnike disanja, prije nego što je LPS
primijenjen. Nivoi epinefrina kod obučenih osoba bili su čak i veći od onih koji su prijavljeni u nedavnoj studiji u kojoj je utvrđeno da je akutni stres
izazvan skokom bungeja potisnuo proizvodnju citokina putem leukocita ex vivo stimulisanih sa LPS ( 13). Pošto nivoi norepinefrina, dopamina i kortizola
nisu povećani u grupi treninga, čini se da tehnike pretežno rezultiraju stimulacijom simpatičkog ulaza u nadbubrežnu medudru, jer je to najobičniji izvor
epinefrina u telu i proizvodnji epinefrina Hromafinske ćelije u nadlaktičnoj meduli su mnogo bogate od onih koje proizvode norepinefrin ( 14 ).
Utvrđeni potencijalni efekti na proizvodnju antiinflamatornog IL-10 kao i slabljenje proinflamatornih nivoa citokina su u saglasnosti sa ranije izvedenom
studijom, pri čemu je epinefrin primenjen prije LPS u zdravim dobrovoljcima i rezultirao ranom i povećanom produkcijom IL-10 ( 7 ), a studijama koje
pokazuju da pretreativni tretman sa IL-10 rezultira slabljenjem proinflamatornog odgovora kod zdravih volontera ( 15 , 16). U grupi treninga pronađene su
snažne inverzne korelacije između nivoa IL-10 u ranom vremenskom periodu i kasnijih najviših nivoa proinflamatornih medijatora, dok je u kontrolnoj
grupi pronađeno suprotno: pozitivne korelacije između prethodnih nivoa proinflamatornih medijatora sa kasniji nivoi nivoa IL-10. Ovi nalazi ukazuju na to
da proinflamatorni odgovor dovodi do proizvodnje IL-10 u kontrolnoj grupi, dok rano povećanje produkcije IL-10 izazvano epinefrinom sprečava
proinflamaciju u obučenoj grupi. Ranja povećanja limfocita i kasnije veće koncentracije cirkulacionih neutrofila u grupi za obuku u poređenju sa
kontrolnom grupom takođe se mogu pripisati povećanim nivoima epinefrina koji se nalaze kod obučenih osoba,17 ). Štaviše, slične promene u broju
leukocita ranije su zabeležene tokom dobrovoljne hiperventilacije ( 18 ). Naša studija ograničena je činjenicom da nismo merili specifične podvrste
leukocita, kao što su CD3, CD4 i CD8 brojevi, kao i B ćelije, dendritične ćelije i ćelije prirodnog ubice (NK), od kojih su neke pokazale da su specifično
izmenjeno kateholaminima i / ili stresom ( 19 , 20 ).
Izgleda da uglavnom tehnike disanja koje koriste obučeni pojedinci uzrokuju povećanje epinefrina i kasnije slabljenje upalnog odgovora. Ograničenje našeg
dizajna studije je da ne dozvoljava identifikaciju određene komponente vježbanih vežbi za disanje što dovodi do povećanja nivoa epinefrina. Štaviše, efekat
trajanja treninga i dužine sklonosti za izmenjene odgovore nakon obuke tek treba utvrditi. Međutim, efekti na epinefrin su verovatno posledica faze
hiperventilacije i hipoksije usled zadržavanja udisanja, pošto su oba dokazana da povećavaju nivoe epinefrina ( 18 , 21- 24 ). Pokazano je da povećanje
epinefrina izazvano hiperventilacijom zavisi od smanjenog nivoa bikarbonata, jer hiperventilacija kombinovana sa infuzijom bikarbonata (što rezultira
hipokapnijom i alkalozom, ali normalnim nivoom bikarbonata) smanjuje povećanje epinefrina ( 24 ). U saglasnosti, u ovoj studiji, nivoi bikarbonata su
znatno niži kod obučenih subjekata tokom treninga tehnika disanja u poređenju sa kontrolnim osobama. Atenuirani citokinski odgovor je malo verovatan da
bude direktan rezultat niske koncentracije pCO 2 i visokih pH-a zbog hipokapne alkaloze, za razliku od hiperkapničke acidoze ( 25), nije povezan sa
antiinflamatornim efektima. Prema tome, epinefrin je najverovatniji srednji faktor ( 7 ). Ipak, ne može se isključiti da su drugi elementi treninga, osim
vežbanja vežbi za disanje, na kraju uticali na urođeni imunski odgovor indukovan LPS-om. Na primer, ekspozicija ekstremnim hladnim i naknadnim
zagrevanjem tokom treninga može dovesti do ishemičnog predkondicioniranja i / ili oslobađanja molekularnih obrasca povezanih sa opasnostima (DAMP),
što bi moglo dovesti do tolerantnog stanja prema kasnijem LPS izazovu.
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4034215/ 6/9
8.12.2018. Dobrovoljno aktiviranje simpatičnog nervnog sistema i slabljenje urođenog imunskog odgovora kod ljudi
Ostaje da se utvrdi da li rezultati ovog istraživanja koristeći akutni model upale kod zdravih dobrovoljaca mogu biti ekstrapolirani na pacijente sa hroničnim
autoimunim bolestima. Na primjer, hronični stres može biti štetan u ovim uslovima zbog indukcije proinflamatornih medijatora ( 26 ), dok su napadi
kratkotrajnog stresa, slični efektima intervencije obuke opisani u ovoj studiji, mogli biti korisni zbog imunosupresivnih efekata ( 26 ). Od interesa, in vivo
antiinflamatorni potencijal kod ljudi biologije koji se trenutno koristi u lečenju reumatoidnog artritisa prvi put je ustanovljen u studijama dokaza o ljudskim
endotoksemijama ( 27 , 28), ilustrirajući relevantnost modela za istraživanje novih terapija za ovu vrstu bolesti.
U zaključku, sadašnja dokazna studija pokazuje da se simpatičnom nervnom sistemu i imunološkom sistemu može dobrovoljno uticati kroz tehnike
prakticiranja koje su relativno lako učiti u kratkom roku. Zbog toga može imati važne implikacije za liječenje različitih stanja povezanih sa prekomernom ili
upornom zapaljenjem, naročito auto-imunim bolestima.

MATERIJALI I METODE Idi:

Predmeti. Ova paralelna randomizirana kontrolisana studija registrovana je na ClinicalTrials.gov kao NCT01835457. Nakon odobrenja od strane lokalnog
odbora za etike Univerziteta Radboud Nijmegen Medical Center (CMO 2012/455), u suđenje je uvršteno 30 zdravih volontera koji vole i ne puše, holandski
muškarci. Svi subjekti su dali saglasnost i eksperimente u pisanoj saglasnosti u skladu sa Helsinškoj deklaracijom, uključujući tekuće revizije i smernice
dobre kliničke prakse. Predmeti su pregledani pre početka eksperimenta i imali su normalan fizički pregled, elektrokardiografiju i rutinske laboratorijske
vrednosti. Kriteriji isključivanja bili su: febrilna bolest tokom 2 nedelje prije eksotimuma endotoksemije, uzimanje lekova na recept, istorija spontanog
vagalnog kolapsa, praktikovanje ili iskustvo sa bilo kojom vrstom meditacije, ili učešće u prethodnom ispitivanju gde je LPS primenjen.n = 18) ili kontrolne
grupe ( n = 12) otvaranjem zapečaćenog omotača pripremljenog od strane istraživačke sestre koja nije uključena u studiju. Nakon što je završio program
obuke, 12 od 18 obučenih subjekata su slučajno dodijeljene da učestvuju u eksperimentalnim eksperimentima sa endotoksemijom (dalje u nastavku opisano
u Design Study and Training Procedure ).
Tri subjekta u kontrolnoj grupi koja su podvrgnuta endotoksemiji istog dana i primila LPS iz iste ampule su isključena iz suđenja i zamijenjena. Njihovi
simptomi, porast temperature, hemodinamski odziv i odgovor na citokin nisu bili u skladu sa primenom adekvatne doze od 2 ng / kg LPS. Određivanje
nivoa citokina pokazalo je izuzetno niske nivoe kod svih tri subjekata: Njihov maksimalni citokinski odziv (TNF-α i IL-6) bio je manji od polovine od
najniže zabeleženih u grupi od 112 zdravih muških subjekata koji su prethodno bili podvrgnuti eksperimentalnoj endotoksemiji ( 10) i vrhuncu na atipičnim
vremenskim tačkama (predmet 1, TNF-α = 39 pg / mL na 4 sata posle primene LPS i IL-6 = 27 pg / mL na 4 h nakon primene LPS-a, predmet 2, TNF-α =
32 pg / mL na 3 h posle primene LPS i IL-6 = 31 pg / mL na 3 h nakon primene LPS, i predmet 3, TNF-α = 9 pg / mL na 2 h nakon primene LPS i IL-6 = 7
pg / mL na 3 h nakon primene LPS-a). Zbog toga je pretpostavljena greška u doziranju endotoksina, a subjekti su zamijenjeni.
Projekat izrade studije i obuke. Studija je sekvencijalno sprovedena u dva identična bloka, od kojih je svaki obuhvatao devet ispitanika u obučenoj grupi
(od kojih su šest konačno učestvovale u eksperimentima sa endotoksemijom, dalje objašnjeno u nastavku) i šest ispitanika u kontrolnoj grupi. Ovaj dizajn
izabran je da minimizira pristrasnost zbog razlika u intervalu između kraja perioda treninga i eksperimenata endotoksemije. Kako je cilj naše studije bio
istraživanje efekata intervencije obuke na urođeni imunološki odgovor u standardizovanom modelu sistemskog upala, nismo procijenili efekte intervencije
obuke na parametre imunog sistema u odsustvu endotoksemije. Šematski pregled dizajna studije (jedan blok) prikazan je na slici S3. Obučenu grupu
obučava holandski pojedinac Wim Hof i tri trenera koji su ranije dobili instruktor od Wim Hof-a da postanu trener. Doktori studijskog tima (LTvE) i glavni
istraživač (MK) prisustvovali su tokom svih treninga (u Poljskoj i Holandiji) i tokom eksperimentalnih eksperimenata endotoksemije. Prvi 4 d programa
obuke održani su u Poljskoj i bili su najintenzivniji. Program se sastojao od tri glavna elementa: meditacija, izlaganje hladnim i tehnika disanja
(pogledajte film S1 za utisak programa obuke).

i ) Meditacija, takozvana "treća meditacija oka", oblik meditacije uključujući vizuelizaciju usmjerenu na potpunu relaksaciju.
ii ) Tokom treninga, predmeti se dobrovoljno izložili hladno na nekoliko načina: stojeći u snijegu bosonog do 30 min i ležati gusti u snijegu 20
min; dnevno brisanje / plivanje u ledeno hladnoj vodi (0-1 ° C) do nekoliko minuta (uključujući potpune potopnje); i planinarenje do snežne planine
(visina: 1.590 m) golih šarana, nošenih samo na šortsama i obućama na temperaturama od -5 do -12 ° C (vetra: -12 do -27 ° C).
iii ) Tehnike disanja, koje se sastoje od dve vežbe. U prvim vežbanjima je zatraženo da se hiperventilišu u proseku od 30 udisaja. Nakon toga, subjekti su
izdahnuli i zadržali dah za ~ 2-3 min ("faza zadržavanja"). Trajanje zadržavanja vazduha bilo je u potpunosti po osnovu diskrecije
subjekta. Zadržavanje dima je praćeno dubokim inhalacijskim udisom, koji se držao 10 s. Zatim je započet novi ciklus hiper / hipoventilacije. Druga
vežba se sastojala od dubokih inhalacija i izdiha u kojima je svako udisanje i izdahnjenje pratilo zadržavanje zraka za 10 s, tokom kojeg je subjekt
zaoštravao sve svoje telesne mišiće. Ova dva vežbanja za disanje su takođe obavljena tokom eksperimenata endotoksemije. Dodatni element
programa obuke sastojao se od vežbanja snage (npr.

Poslije povratka iz Poljske, subjekti su praktikovali tehnike koje su sami naučili samostalno kod kuće (2-3 h / d, hladno izlaganje postignuto je uzimanjem
hladnih tuševa) do dana eksperimenta endotoksemije (5-9 d kasnije). Pored toga, održana je obuka za završne grupe i na kraju dana, šest od devet obučenih
subjekata (u svakom bloku) su slučajno odabrani za učešće u eksperimentima sa endotoksemijom, koristeći zapečaćen metod koverte. Ovaj izbor je obavljen
kako bi se omogućila zamjena subjekta u slučaju neželjenih događaja ili bolesti kod jednog od obučenih subjekata odabranih za eksperimente
endotoksemije. Izabrani predmeti praktikovali su na završnoj obuci koju je predvodio Wim Hof dan pre eksperimentalnog dana endotoksemije. Wim Hof je
bio prisutan da obučava subjekte tokom dana eksperimenta endotoxemije u toku 3 sata da su subjekti u obučenoj grupi praktikovali naučene
tehnike. Kontrolna grupa nije prošla bilo kakvu proceduru obuke u toku studijskog perioda.
Eksperimentalna ljudska endotoksemija. Predmeti su se povraćali od supstanci koje sadrže kofein ili alkohol 24 sata pre početka eksperimenta, a hrana
10 h pre početka endotoksemijskog eksperimenta. Eksperimenti su izvedeni u istraživačkoj jedinici odeljenja intenzivne nege. Postupci na dan eksperimenta
endotoksemije prikazani su na Slici S4 . Prečišćeni lipopolisaharid (LPS, američki standardni referentni endotoksin Escherichia coliO: 113) dobijen od
Odseka farmaceutskog razvoja Nacionalnog instituta za zdravlje , isporučen kao liofilizovani prah, rekonstituisan je u 5 mL fiziološkim rastvorom 0.9% za
injekciju i najmanje 20 min nakon rekonstitucije. LPS rastvor je primenjen kao ubrizgavanje iv bolusa u dozi od 2 ng / kg telesne težine u toku 1 minT = 0
h. Kanula je postavljena u antecubitalnu venu koja omogućava infuziju 0,9% NaCl rastvora; ispitanici su primili 1,5 L 0,9% NaCl tokom 1 h počevši od 1 h
pre nego što su infundiranje endotoksina (prehode) kao deo našeg standardnog protokola endotoksemije ( 29), nakon čega sledi 150 mL / h do 6 sati nakon
infundiranja endotoksina i 75 mL / h do kraja eksperimenta. Radijalna arterija se kanulirala pomoću arterijskog katetera sa 20 kalibara (Angiocath, Becton
Dickinson) i povezan je sa setom nadzora nad arterijskim pritiskom (Edwards Lifesciences) kako bi se omogućilo kontinuirano praćenje krvnog pritiska i
uzorkovanja krvi. Podaci o srčanoj stopi (trokutni elektrokardiogram), krvni pritisak, brzina disanja i zasićenje kiseonika (pulsna oksimetrija) snimljeni su
od Philips MP50 pacijentovog monitora svakih 30 sekundi pomoću prilagođenog sistema za snimanje podataka u kući, počevši od 1 h pre davanje LPS do
ispusta iz jedinice za intenzivnu negu 8 h nakon administracije LPS-a. Temperatura tela merena je pomoću infracrvenog termoparskog termometra
(FirstTemp Genius 2, Sherwood Medical). LPS-indukovani simptomi poput gripa (glavobolja,
Trideset minuta pre administracije LPS-a ( T = -0,5 h), subjekti u obučenoj grupi su započeli prvu tehniku disanja (ciklusi hiper / hipoventilacije, videti film
S2 ) do T = 1 h, nakon čega sledi druga tehnika disanja (duboka inhalacija i izdahavanje u kombinaciji sa stezanjem mišića) do T = 2,5 h. Posle toga,
subjekti su prestali da praktikuju sve tehnike. Kontrolna grupa nije praktikovala nikakve tehnike tokom dana eksperimenta endotoksemije.
Parametri krvnog plina. Parametri krvnog gasa su analizirani u arterijskoj krvi hepatinske antikoagulacije pomoću CG4 + patrona i analizatora plinskog
analizatora i-STAT (Abbott).
Kateholamini. Krv se sakuplja u ohlađene litijum-heparinske cevi i odmah se stavlja na led i centrifugira na 2.000 × g tokom 10 min na 4 ° C, nakon čega
se plazma skladišti na -80 ° C do analize. Plazma norepinefrin, epinefrin i dopaminske koncentracije su merene metodama rutinske analize koje se takođe
koriste za uzorke pacijenata (HPLC s fluorometrijskom detekcijom, kao što je prethodno opisano) ( 30 ).
Kortizol. Krv se sakuplja u cevima za separaciju u serumu i dozvoljeno je zgrušavanje na sobnoj temperaturi najmanje 30 minuta. Posle toga, uzorci su
centrifugirani na 2.000 × g tokom 10 min na 4 ° C, nakon čega se serum čuva na -80 ° C do analize. Nivoi kortizola određeni su metodom rutinske analize
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4034215/ 7/9
8.12.2018. Dobrovoljno aktiviranje simpatičnog nervnog sistema i slabljenje urođenog imunskog odgovora kod ljudi
koja se takođe koristi za uzorke pacijenata (elektrohemiluminescentni imunoassay na modularnoj analitici E170 (Roche Diagnostics).
Leukocitni brojevi i diferencijacija. Analiza broja leukocita i diferencijacija izvršena je u antikoagulisani krvi EDTA koristeći metode rutinske analize koje
se takođe koriste za uzorke pacijenata (protočna citometrijska analiza na Sysmex XE-5000.
Plazma citokini. EDTA antikoagulisana krv je centrifugirana odmah na 2.000 × g tokom 10 min na 4 ° C, nakon čega se plazma čuvala na -80 ° C do
analize. Koncentracije TNF-α, IL-6, IL-8 i IL-10 su merene primenom istovremenog Luminex testa prema uputstvima proizvođača (Milliplex,
Millipore). IL-1β, TGF-β i leptin su mereni pomoću ELISA-a prema instrukcijama proizvođača (IL-1β i TGF-β, Quantikine i leptin, Duoset, oba R & D
sistema).
Obračun i statistička analiza. Podaci su predstavljeni kao srednji i interkartilni opseg / opseg ili srednje i SEM zasnovane na njihovoj distribuciji
(izračunato testom Shapiro-Wilk). Korišćeni statistički testi su naznačeni u legendama ili tekstu slike / tabele. Upotrebljena je Spearmanova
korelacija. A P vrijednost <0.05 je smatrana statistički značajna. Statističke kalkulacije izvršene su pomoću Graphpad Prism verzije 5.0 (GraphPad
Software).

DOPUNSKI MATERIJAL Idi:

ZAHVALE Idi:

Autori zahvaljuju K. Mostardu, K. Pijperu, D. Bernardu i E. Hofu za pomoć tokom treninga; Univerzitet Radboud Nijmegen za pružanje prostora za
treninge u Holandiji; i istraživačke sestre Jedinice za intenzivnu negu Univerziteta u Radboudu za pomoć tokom eksperimenata endotoksemije. Ova studija
je podržala Serendipity Grant iz Reumafonds ( www.reumafonds.nl ).

FUSNOTE Idi:

Autori ne objavljuju sukob interesa.

Ovaj članak je PNAS Direct Submission. TLH je urednik gosta koji je pozvao Uredništvo.

Ovaj članak sadrži dodatne informacije online na adresi www.pnas.org/lookup/suppl/doi:10.1073/pnas.1322174111/-/DCSupplemental .

REFERENCE Idi:

1. Buch MH, Emery P. Nove terapije u lečenju reumatoidnog artritisa. Curr Opin Rheumatol. 2011; 23 (3): 245-251. [ PubMed ]
2. Cheifetz AS. Upravljanje aktivnom Crohnovom bolešću. JAMA. 2013; 309 (20): 2150-2158. [ PMC besplatni članak ] [ PubMed ]
3. Hansel TT, Kropshofer H, Singer T, Mitchell JA, George AJ. Bezbednost i neželjeni efekti monoklonskih antitela. Nat Rev Drug Discov. 2010; 9 (4):
325-338. [ PubMed ]
4. Marra CA, Bansback N, Anis AH, Shojania K. Uvod u ekonomsko modeliranje kliničkih reumatologa: Primena na biološke agense kod reumatoidnog
artritisa. Clin Rheumatol. 2011; 30 (Suppl 1): S9-S18. [ PubMed ]
5. Siegmund B, Eigler A, Hartmann G, Hacker U, Endres S. Adrenalin poboljšava sintezu IL-10 indukovanu LPS-om: Dokazi za proteinu kinazu A-
posredovanog puta. Int J Imunopharmacol. 1998; 20 (1-3): 57-69. [ PubMed ]
6. van der Poll T, Jansen J, Endert E, Sauerwein HP, van Deventer SJ. Noradrenalin inhibira faktor tumorske nekroze izazvane lipopolisaharidom i
proizvodnju interleukina 6 u cijeloj krvi ljudi. Infect Immun. 1994; 62 (5): 2046-2050. [ PMC besplatni članak ] [ PubMed ]
7. van der Poll T, Coyle SM, Barbosa K, Braxton CC, Lowry SF. Epinefrin inhibira faktor nekroze tumora-alfa i pojačava proizvodnju interleukina 10
tokom endotoksemije kod ljudi. J Clin Invest. 1996; 97 (3): 713-719. [ PMC besplatni članak ] [ PubMed ]
8. Alvarez SM, et al. Steroidi sa niskom dozom menja sistemske zapaljenost in vivo izazvan endotoksinom, ali ne utiče na autonomnu disfunkciju. J
Endotoksin Res. 2007; 13 (6): 358-368. [ PubMed ]
9. van der Poll T, Barber AE, Coyle SM, Lowry SF. Hiperkortizolemija povećava koncentraciju interleukina-10 u plazmi tokom endotoksemije kod ljudi -
istraživanje kliničkog istraživačkog centra. J Clin Endocrinol Metab. 1996; 81 (10): 3604-3606. [ PubMed ]
10. Kox M, et al. Uticaj koncentracije / meditacije na aktivnost autonomnog nervnog sistema i urođeni imuni odgovor: Studija slučaja. Psychosom
Med. 2012; 74 (5): 489-494. [ PubMed ]
11. van Eijk LT, et al. Rodne razlike u urođenom imunološkom odgovoru i vaskularna reaktivnost nakon primene endotoksina na ljudske volontere. Crit
Care Med. 2007; 35 (6): 1464-1469. [ PubMed ]
12. Sayk F, et al. Endotoksemija uzrokuje centralno smanjenje simpatičnog vazomotornog tona kod zdravih ljudi. Am J Physiol Regul Integr Comp
Physiol. 2008; 295 (3): R891-R898. [ PubMed ]
13. van Westerloo DJ, et al. Akutni stres koji izaziva bungee skakanje potiskuje ljudski urođeni imunitet. Mol Med. 2011; 17 (3-4): 180-
188. [ PMC besplatni članak ] [ PubMed ]
14. Wong DL. Zašto je nadbubrežno naduvavanje adrenergično? Endocr Pathol. 2003; 14 (1): 25-36. [ PubMed ]
15. Kumar A, et al. Interleukin-10 smanjuje ljudski inflamatorni odgovor na lipopolisaharid bez uticaja na kardiovaskularni odgovor. Crit Care
Med. 2005; 33 (2): 331-340. [ PubMed ]
16. Pajkrt D, et al. Umanjenje proinflamatornog odgovora rekombinantnim humanim IL-10 kod endoksezije kod ljudi: Efekat vremena za rekombinantnu
primenu humanog IL-10. J Immunol. 1997; 158 (8): 3971-3977. [ PubMed ]
17. Benschop RJ, Rodriguez-Feuerhahn M, Schedlowski M. Leukocitoza izazvana kateholaminom: rane opservacije, tekuće istraživanje i budući
pravci. Brain Behav Immun. 1996; 10 (2): 77-91. [ PubMed ]
18. Staubli M, Vogel F, Bartsch P, Fluckiger G, Ziegler WH. Promene broja krvnih ćelija izazvane hiperventilacijom zavise od hipokapnije. Eur J Appl
Physiol Occup Physiol. 1994; 69 (5): 402-407. [ PubMed ]
19. Huang CJ, Webb HE, Garten RS, Kamimori GH, Acevedo EO. Psihološki stres tokom vježbe: Redistribucija podskupa limfocita kod
vatrogasaca. Physiol Behav. 2010; 101 (3): 320-326. [ PubMed ]
20. Schedlowski M, et al. Kateholamini indukuju promenu raspodele i aktivnosti ćelija ljudskog prirodnog ubica (NK). J Clin Immunol. 1993; 13 (5): 344-
351. [ PubMed ]
21. Laderach H, Straub W. Efekti dobrovoljne hiperventilacije na glukozu, slobodne masne kiseline i nekoliko glukokostatskih hormona. Swiss Med
Wkly. 2001; 131 (1-2): 19-22. [ PubMed ]
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4034215/ 8/9
8.12.2018. Dobrovoljno aktiviranje simpatičnog nervnog sistema i slabljenje urođenog imunskog odgovora kod ljudi
22. Mantysaari M, et al. Nepromenjena krvna koagulacija i funkcija trombocita kod zdravih osoba izloženih akutnoj hipoksiji. Aviat Space Environ
Med. 2011; 82 (7): 699-703. [ PubMed ]
23. Oltmanns KM, et al. Akutna hipoksija smanjuje koncentraciju VEGF u plazmi kod zdravih ljudi. Am J Physiol Endocrinol Metab. 2006; 290 (3): E434-
E439. [ PubMed ]
24. Krapf R, Caduff P, Wagdi P, Staubli M, Hulter HN. Odgovor kalijuma na plazmu na akutnu respiratornu alkalozu. Bubrezi Int. 1995; 47 (1): 217-
224. [ PubMed ]
25. Ijland MM, Heunks LM, van der Hoeven JG. Pregled klupe prema krevetu: Hiperkapnicna acidoza kod povreda pluća - od 'dozvoljenog' do
'terapeutskog'. Crit Care. 2010; 14 (6): 237. [ PMC besplatni članak ] [ PubMed ]
26. Cutolo M, et al. Hipotalamično-hipofizno-nadbubrežne i gonadalne ose u reumatoidnom artritisu. Ann NY Pronađeno 1 knjiga, stranica 1 od 1 Acad
Sci. 2000; 917 : 835-843. [ PubMed ]
27. Granowitz EV, et al. Hematološki i imunomodulatorni efekti koinfuzije antagonista interleukina-1 receptora tokom niskih doza endotoksemije kod
zdravih ljudi. Krv. 1993; 82 (10): 2985-2990. [ PubMed ]
28. Suffredini AF, i sar. Efekti rekombinantnog dimernog TNF receptora na humanu inflamatornu reakciju nakon intravenozne primene endotoksina. J
Immunol. 1995; 155 (10): 5038-5045. [ PubMed ]
29. Dorresteijn MJ, et al. Iso-osmolarna prehlada premješta citokin odgovor na više antiinflamatorne ravnoteže u endotoksemiji kod ljudi. J Endotoksin
Res. 2005; 11 (5): 287-293. [ PubMed ]
30. Willemsen JJ, et al. Visoko osetljiva i specifična HPLC sa fluorometrijskom detekcijom za određivanje plazme epinefrina i norepinefrina primenjenih na
kinetičke studije kod ljudi. Clin Chem. 1995; 41 (10): 1455-1460. [ PubMed ]

Članci iz Zbornika Nacionalne akademije nauka Sjedinjenih Američkih Država nalaze se ovde u prilogu Nacionalne akademije nauka

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4034215/ 9/9