AÇÃO DA PEDRA PRETA (CARVÃO ANIMAL) SOBRE O EFEITO

LET AL DO VENENO DA SERPENTE Bothrops atrox

Venina Vale'
Jane Raquel Silva de Oliveira'
Maria Célia Pires Costa"
Marilene Oliveira da Rocha Borges'"
Antônio Carlos Romão Borges'"

RESUMO

A pedra preta, material obtido da carbonização de ossos bovinos, é

utilizada popularmente no tratamento de picadas por animais
peçonhentos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a ação da pedra
preta sobre o efeito letal do veneno da serpente Bothrops atrox
(jararaca) em camundongos. A pedra preta foi preparada a partir do
fêmur bovino cortado em pedaços de 2 a 4 em, limpos e expostos ao
sol por 30 dias. Em seguida foram carbonizados sob brasa, colocados
sob o solo e posteriormente lixados. Nos ensaios biológicos foram
utilizados camundongos C3H, machos e fêmeas (20 a 27 g). Os animais
foram divididos em dois grupos: controle (CT, n=1 O) e tratados com a
pedra preta (TPP, n= I O). Os camundongos foram injetados, por via
subcutânea na coxa direita, com a dose letal (40mg/kg) do veneno de
Bothrops atrox. No grupo TPP, a pedra preta foi imediatamente
colocada sobre o local de inoculação e removida após 1 hora. O tempo
de sobrevida dos animais CT foi de 180,3±12,6 minutos (3 horas) e do
grupo TPP foi de 395,4±64 minutos (6 horas e 35 min.). Houve,
portanto, um aumento (P<0,05, teste t de student) de 119% no tempo
de sobrevida dos animais tratados. Estes resultados indicam que a
pedra preta é capaz de reduzir o efeito letal do veneno de Bothrops
atrox, quando inoculado em camundongos.

Palavras-chave: pedra preta; acidentes ofidicos; dose letal; Bothrops

atrox; veneno .

• Alunas do Curso de Farmácia da Universidade Federal do Maranhão

•• Doutora I Professora do Departamento de Química e Biologia da Universidade Estadual do Maranhão
••• Doutor(a) I Professor(a) do Departamento de Ciências Fisiológicas da Universidade Federal do
Maranhão
 ABSTRACT
The black stone made from carbonized bovine bones, it is used for
treatment of snake bites. The objective ofthis study was to evaluate
the action ofthe black stone on lethal effect of Bothrops atrox snake
venom in mice. The black stone was made from cuted bovine femur
(2-4 em), cleaned and exposed to sun for 30 days. The bone pieces
were carbonized below the burning coal, put under earth and then
polished. It was used mice C3H, males and females (20-27 g). The
animais were separated in two groups: control (CT, n= 1O) and treated
with black stone (TPP, n=10). It was inoculated the lethaldose (40 mg/
Kg) of the Bothrops atrox snake venom in right thigh, by
subcutaneous way, ofthe animais. In the group TPP the black stone
was put on the local ofinoculation and the removed after one hour. It
was measured the survival time ofthe animais (CTand TPP groups).
The middle survival time ofthe group CT was 180.3±12.6minutes (3
hours) and the group TPP was 395.4±64 minutes (6 hours and 35
min.). There was a increase(P<O.05, Student t test) of 119 % of survival
time of treated animais. These findings support the hypothesis that
the black stone was capable to reduce the lethal effect of Bothrops
atrox venom inoculated in mice.
Keywords: black stone; snake bites; lethal dose; Bothrops atrox;
venom.

1 INTRODUÇÃO países da América Latina, exceto Chi-

No Brasil, as serpentes
peçonhentas pertencem aos gêneros
Bothrops, Crotalus, Lachesis e
Micrurus, os quais são responsáveis
por mais de 20.000 acidentes notifica-
dos anualmente ao Ministério da Saú-
de. As serpentes do gênero Bothrops
estão distribuídas por todo o território
nacional, sendo responsáveis por apro-
ximadamente 90% dos acidentes
ofidicos registrados no país (AMARAL
et al., 1991).
A serpente Bothrops atrox
Linnaeus, 1758, conhecida popularmen-
te como jararaca-do-rabo-branco, está
amplamente distribuída por to: Ia Região
amazônica, atingindo quase todos os
le, Paraguai, Uruguai e Argentina
(CAMPBELL e LAMAR, 1989). Esta
serpente é também bastante comum
nas áreas de floresta úmida do Pará e
Maranhão, bem como nos cerrados,
babaçuais e campos maranhenses, so-
bretudo nos locais de cultura agrícola
(CUNHA e NASCIMENTO, 1982).
A maioria dos acidentes ofídicos
ocorrem com pessoas do sexo mascu-
lino, em idade adulta, exercendo, sobre-
tudo, atividades agrícolas, e atingem
principalmente os membros inferiores
das vítimas (CAIFFA et aI., 1997;
FEITOSA et a!., 1997; NASCIMEN-
TO, 2000). Acontecem predominante-
mente na zona rural, embora sejam
também problemas freqüentes na peri-

10 Cad. Pesq., São Luís, Y. 13. n. 2, p. 9-15, jul./dez. 2002.

feria dos grandes centros urbanos
(CARVALHO e NOGUEIRA, 1998).
Em países de grandes dimensões
territoriais, como o Brasil, no qual os
acidentes ofídicos ocorrem principal-
mente na zona rural e, portanto, dis-
tantes dos postos de saúde, a vítima
demora muito até receber atendimen-
to médico. Em algumas regiões, as ví-
timas só são atendidas em média,
cerca de 6 horas após a picada
(BORGES et al., 1999). Geralmente,
o longo intervalo de tempo entre a pi-
cada e a aplicação do tratamento es-
pecífico causa agravamento do estado
lesivo do paciente, o que pode levá-lo
até mesmo ao óbito.
A medida terapêutica mais efi-
caz disponível contra as ações do ve-
neno é a administração de soro
antiofídico, obtido de cavalos
hiperimunizados, possuindo, por isso,
custo elevado, estoques controlados e
possíveis reações adversas como
hipersensibilidade imediata,
broncoespasmo, choque anafilático,
dentre outras. Além disso, o soro
antiofídico a ser aplicado deve ser es-
pecífico para o gênero ao qual a ser-
pente pertence e administrado o mais
precocemente possível e por via
endovenosa (BARRA VIEIRA, 1999).
Para que seja dado o diagnóstico
dos acidentes ofídicos e, conseqüen-
temente, a aplicação do tratamento
adequado, as características clínicas
apresentadas pelo paciente e/ou reco-
nhecimento da serpente agressora são
bastante importantes. No entanto, a
captura do animal para identificação
do gênero nem sempre é possível
(BARROSO et al., 1993). Além dis-
Cad. Pesq., São Luís, v. /3, n. 2, p. 9-/5, jul./dez. 2002.
so, alguns gêneros provocam sinais e
sintomas similares, como os de
Bothrops e Lachesis, dificultando que
a vítima receba o soro específico, o
qual é mais eficaz que o soro
polivalente (BORGES et aI., 1999).
Em nosso país como os aciden-
tes ofídicos ocorrem principalmente na
zona rural ou nas periferias dos gran-
des centros urbanos, as vítimas levam
muito tempo até receberem tratamen-
to médico. Além disso, existem rela-
tos de alguns casos em que o soro
antiofídico é aplicado por outras vias
que não a endovenosa, como a
intramuscular e a subcutânea
(BORGES et aI., 1999).
A "pedra preta", material obtido
a partir da carbonização de ossos bo-
vinos, é utilizada popularmente na Ín-
dia e na África no tratamento de
picadas por animais peçonhentos. Nes-
tes locais, o material é vendido em es-
tabelecimentos farmacêuticos
acompanhado de prospecto que infor-
ma quanto à indicação clínica, modo
de usar, processo para reutilização e
confecção do mesmo. Freiras
missionárias vindas destes países trou-
xeram a "pedra preta" para o interior
do Estado do Maranhão e doada a la-
vradores (MORElRA et aI., 2001 e
PEREIRA et al., 2001).
Considerando as dificuldades
para aplicação de um tratamento rápi-
do e específico em casos de picadas
por animais peçonhentos, este traba-
lho foi realizado com o objetivo de ava-
liar a eficácia da pedra preta no
tratamento de acidentes ofídicos, atra-
vés da avaliação de sua ação sobre o
efeito letal do veneno de Bothrops
atrox.
Il
2 MATERIAL E MÉTODOS
2.1 Preparo da pedra preta
O preparo das amostras de pedra
preta foi realizado segundo o método
artesanal utilizado na África, descrito a
seguir. O fêrnur bovino foi adquirido em
frigorífico de São Luís e cortado em
pedaços de 2 a 4 em. Toda a gordura
depositada na superfície foi retirada e
os ossos colocados em água sob fervura
por aproximadamente 7 minutos. De-
pois de limpos, foram expostos ao sol e
ao vento por 30 dias e então colocados
diretamente sob a brasa até que estes
ficassem incandescentes. O tempo de
carbonização foi de aproximadamente
15 minutos.
Após a carbonização as amostras
foram colocadas imediatamente sob o
solo arenoso, numa profundidade de
cerca do 40 em e por um tempo de 1
hora. A temperatura do solo estava a
26°C.
As amostras inteiras foram poli-
das com lixa grossa n. 60 para que fi-
cassem com a superfície plana, e
posteriormente com lixa fina n. 220.
Os testes de aderência e de
borbulhamento foram realizados para
o controle de qualidade das amostras
produzidas, de acordo com o prospecto
que. acompanha a "pedra preta" vendi-
da na África.
As amostras de pedra preta, após
utilização, foram descontaminadas para
reutilização. As pedras foram lavadas
em água limpa, fervidas por 30 minutos
e em seguida removidas da água, colo-
cadas em leite até não formar bolhas e
então fervidas novamente em água. As
12 Cad. Pesq., São Luís, v. 13, n. 2, p. 9-15,jul./dez. 2002.
pedras foram posteriormente levadas
à estufa a 110°C por 20 minutos e
mantidas em dessecador até a realiza-
ção do experimento.
2.2 Veneno
Para a estudo foi utilizado veneno
da serpente Bothrops atrox obtido sob
a forma cristalina proveniente do Mu-
seu Paraense Emílio Goeldi da Univer-
sidade Federal do Pará. Uma solução
de veneno foi preparada na concentra-
ção de 16 mg/mL em solução salina
(NaCI 0,15 M), a qual foi dividida em
alíquotas e estocadas em congelador.
Cada alíquota foi resfriada à tempera-
tura ambiente, minutos antes de cada
experimento.
2.3 Animais
Os animais utilizados neste traba-
lho foram camundongos C3H
(isogênicos), machos e fêmeas, com
peso variando entre 20 a 27 g. Todos
os animais foram provenientes do
Biotério Central da Universidade Fe-
deral do Maranhão.
2.4 Ensaios biológicos
Todos os camundongos foram
imobilizados em tábuas de cortiça du-
rante o experimento. Foram utilizados
20 animais divididos em dois grupos:
controle (CT, n=lO) e tratados com a
pedra preta (TPP, n=10).
Todos os animais receberam na
coxa direita, por via subcutânea, dose
letal do veneno de Bothrops atrox de
40 mglKg de peso de animal (BAR-
ROS et al.,1998 e PAUMGARTTEN
et aI., 1989). Nos animais do grupo TPP,
a pedra preta foi imediatamente colo-
cada, com auxílio de esparadrapo, so-
bre o local de inoculação. Após 1 hora,
a pedra preta foi removida. Os animais
do grupo CT não tiveram contato com
a pedra preta.
O tempo de sobrevivência
(sobrevida) dos animais controle (CT)
e dos animais tratados com a pedra pre-
ta (TPP) foi medido em minutos.
2.5 Análise estatística
minutos, o que corresponde a cerca de
3 horas. Nos animais do grupo TPP, o
tempo de sobrevida foi de 395,4 ± 64
minutos, o que corresponde a 6 horas e
35 minutos (Figura 1), havendo assim,
um aumento na sobrevida dos animais
tratados com a pedra preta em cerca
de 119 %. Portanto, o tratamento com
a pedra preta foi significativamente efi-
caz em aumentar a sobrevida dos ani-
mais.
I

Os resultados foram expressos 500

•.....
como médias ± erro padrão das médias. c *
A comparação entre as médias foi rea- I 400
ra
lizada por meio do teste t de student não "C
.:;
pareado, utilizando o software Graph Pad ~ 300
.o
PRISM V3. As diferenças foram con- o
VI
sideradas significativas quando P<0,05. CIl 200
"C
o
a.
3 RESULTADOS E E 100
CIl
DISCUSSÃO I-
o
CT
3.1 Amostras de pedra preta
Fig. 1: Tempo de sobrevida (minutos) de
Durante o preparo, as amostras
camundongos. em condição
de pedra preta que apresentaram leves controle (CT) e tratados com a pedra
fraturas ou estavam bastante quebra- preta (TPP) após inoculação de
diças foram descartadas. dose letal do veneno de Botrops
As demais amostras, durante os atrox. * significa P<O,05 vursus CT.
testes de aderência e borbulhamento
mostraram que estavam aptas ao uso. Como a pedra preta demonstrou,
Foi observado ainda que quanto maior neste trabalho, ser capaz de reduzir o
o tempo de carbonização das amostras, efeito letal da peçonha quando inocula-
maior o poder de aderência da "pedra". da em camundongos, pode, assim, ser
3.2 Ensaios biológicos uma importante alternativa para o tra-
tamento de picada por animais
De acordo com os resultados ob- peçonhentos até que a vítima possa re-
tidos nos ensaios biológicos foi obser- ceber atendimento ambulatorial.
vado que o tempo de sobrevida dos Embora a pedra preta não substi-
animais do grupo CT foi de 180,3 ± 12,6 tua o tratamento específico com o soro

Cad. Pesq., São Luís, v. 13, n. 2, p. 9-15,jul.ldez. 2002. 13

antiofidico, ela apresenta algumas van- cada, o que consequentemente reduz a
tagens: não tem ação específica com- intensidade das seqüelas produzidas
provada para alguns tipos de venenos, pela secreção ofídica.
podendo ser utilizada em acidente
ofídico causado por serpentes de qual-
quer gênero; não apresenta reações 4 CONCLUSÃO
adversas comprovadas; seu transporte
e uso são fáceis, o que permite que a
A pedra preta demonstrou, neste
própria vítima a aplique sobre o local
trabalho, ser capaz de reduzir o efeito
da picada imediatamente após o aci-
letal do veneno de Bothrops atrox, ino-
dente; e seu processo de confecção é
culado em camundongos, por aumen-
fácil e barato.
tar a sobrevida destes animais. Desta
O mecanismo de ação da pedra
forma, a pedra preta pode ser uma im-
preta ainda está sendo estudado. A
portante alternativa terapêutica, sobre-
pedra preta é obtida através de um pro-
tudo nos casos em que a vítima demora
cesso de carbonização de ossos bovi-
a receber atendimento médico, permi-
nos, que possuem altaporosidade e
tindo que o paciente tenha mais chances
podem fornecer, assim, alta área super-
de sobrevivência.
ficial. Em trabalhos paralelos a este
estudo, tem sido demonstrado que a
pedra preta tem alto poder adsorvente
AGRADECIMENTOS
(MOREIRA et aI., 2001 e PEREIRA
et al., 2001). Desta forma ao adsorver
várias substâncias contidas no veneno, Os autores agradecem ao Banco
a pedra preta reduz a concentração de da Amazônia S. A. (BASA) pelo fi-
componentes do veneno no local da pi- nanciamento desta pesquisa.

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