DIFERENTES TIPOS DE TÉCNICAS DE PCR Y SUS APLICACIONES

ABSTRACTO

La reacción en cadena de la polimerasa es una tecnología biológica para producir un gran número
de copias de ADN de una secuencia particular. Los tres pasos principales involucrados son la
desnaturalización, el recocido y la extensión. Las técnicas de PCR tienen muchas aplicaciones en
biología de plantas, diagnóstico de influenza, brucelosis, salmonelas, con fines de clonación, en el
campo de la odontología, microbiología, ciencia forense, etc. Existen muchos tipos de técnicas de
PCR como RT-PCR, PCR de toma de contacto, PCR en tiempo real, PCR anidada, PCR multiplexada,
PCR semicuantitativa, PCR de ensamblaje, PCR asimétrica, LATE-PCR, dial out-PCR, etc. Este
documento es un intento de dar una breve idea sobre los distintos tipos de técnicas de PCR.

INTRODUCCIÓN

La reacción en cadena de la polimerasa también llamada "Fototipia molecular" significa una técnica
utilizada para amplificar segmentos pequeños y específicos de ADN para producir millones de copias
de un fragmento de gen específico. Esta técnica fue desarrollada en 1983 por Kary Mullis, fue
galardonado con el Premio Nobel en 1993 por su trabajo en PCR junto con Michael Smith2,3.

Los requisitos comunes para un proceso de PCR son termocicladores, molde de ADN, dos cebadores,
polimerasa Taq, nucleótidos, tampones, etc. El proceso de PCR se realiza comúnmente en 10-200 l
en pequeños tubos de reacción en los que se utilizan los efectos de Peltier. Cada ciclo de PCR tiene
3 pasos importantes principales, como la desnaturalización, la alineación de cebadores específicos
(o) el recocido y la extensión final (5). Antes de profundizar en la PCR se deben entender los
conceptos básicos de la PCR. Este proceso de PCR dará como resultado 1—2—4 --- 8 --- 16 --- 32 y
así sucesivamente la duplicación de copias.

Para ese proceso son necesarias 4 bases de nucleótidos tales como adenina, timina, citosina y
guanina. Esta técnica de PCR da como resultado la amplificación de la buena calidad de los
fragmentos de ADN, aunque la fuente de ADN está disponible para el proceso de PCR. Muchos
agentes infecciosos y cepas de genes específicos pueden identificarse mediante la técnica de PCR.
Un solo proceso de PCR se puede completar en 30-35 ciclos, lo que consume 2 horas de tiempo para
amplificar y producir una cantidad utilizable de fragmentos de ADN. Se pueden utilizar muchos tipos
de procesos de PCR con ligeras modificaciones para producir mejores resultados, como PCR
multiplex, RT-PCR, PCR anidada, PCR inversa, PCR de colonias, PCR de helicasa de PCR asimétrica,
PCR mediada por ligadura, etc.

COMPONENTES ESENCIALES DE LA PCR

Los siguientes son los componentes esenciales de la PCR.

• Ciclistas Themal (termocicladores)

• ADN objetivo (plantilla de ADN)

• Dos primers (primers directos e inversos)

• Taq polimerasa (themus aquaticus)

• Buffers

• Trifosfatos de nucleótidos de desoxi (d NTP)

• Catión monovalente \ bivalente

• Nucleótidos (A \ T \ G \ C)

•Agua

Termocicladores

La reacción de PCR se lleva a cabo en termocicladores de 0,2-0,5 ml de volumen. Calienta y enfría

los tubos de reacción para alcanzar la temperatura requerida. Muchos termocicladores tienen tapas
de calentamiento para evitar la condensación en la parte superior del tubo de reacción. Los
termocicladores anteriores carecen de una tapa de calentamiento en lugar de la cual se colocó una
pequeña bola de cera dentro de los tubos previamente.

ADN objetivo y nucleótidos

Consiste en el ADN a amplificar. El segmento representa una pequeña parte de una mezcla grande
y compleja de un ADN específico de un genoma3. La forma del ADN es una estructura helicoidal
doble que consiste en nucleótidos que se enrollan entre sí en forma helicoidal6. La PCR requiere
una molécula de plantilla (es decir, ADN \ ARN). Los 4 componentes de nucleótidos son como 4
ladrillos o bloques de construcción utilizados para construir moléculas del genoma. Las bases de
nucleótidos son adenina, timina, citosina y guanina, que también necesitan una pequeña cantidad
de cebador.

Dos primers

Son cebadores directos e inversos que suelen tener una longitud de 16-30 nucleótidos10. Los
cebadores limitan la secuencia de ADN a replicar y dan como resultado la amplificación de una
secuencia de ADN particular. Los cebadores son cadenas cortas y artificiales de ADN que no superan
los 50 nucleótidos, lo que determina el comienzo y el final de la región a amplificar, la polimerasa
sintetiza la secuencia complementaria de cada cebador. Si la plantilla contiene un nucleótido A, la
enzima agrega el nucleótido T al cebador y si la plantilla contiene nucleótido G, la enzima agrega el
nucleótido C al cebador8. Dos componentes que se consideran para un cebador son la longitud del
cebador y la secuencia real del cebador. Los cebadores dependen de

• Longitud de imprimación

•Punto de fusion

• Especificidad

• Secuencias de cebadores complementarios.

La longitud de la imprimación debe ser lo más corta posible. La temperatura de recocido debe ser
inferior a al menos 5 ° C que la temperatura del punto de fusión.

Taq polimerasa
Muchos microorganismos pueden vivir en condiciones inhóspitas o en presencia de concentraciones
salinas / ácidas. La banteria se sintetiza a una velocidad de 35-100 nucleótidos / seg. la ADN
polimerasa de Thermus Aquaticus es estable a 95'C, que es un termófilo. Tanto el gen clonado como
el Taq nativo obtenido de Thermus aquaticus están disponibles comercialmente para servir como
un reactivo estándar para la reacción de PCR (4). También crecen en los géiseres a más de 110 ºC y
pueden soportar el calentamiento a 94 ºC y la presencia de concentraciones extremas de sal / ácido
(9). Han contribuido enormemente a la estimulación, especificidad, automatización del proceso de
PCR. Las bacterias se sintetizan a una velocidad de 35-100 nucleótidos / seg.

Buffers

Está compuesto por cloruro de magnesio que suministra cationes divalentes de Mg necesarios
como cofactor. Es necesario en una concentración de 1 a 5 mM y el Mg se une a los nucleótidos para
ser reconocido por la enzima polimerasa. También actúa como un cofactor para la enzima. El
tampón más utilizado es Tris 10 mM a pH 8,3, km 50 mM, Mgcl 1,5-2,5 mM. los otros tampones de
PCR utilizados son DMSO, PEG 6000, glicerol formamida, etc.

D NTP’S

Estos trifosfatos de desoxi nucleótidos consisten en nucleótidos que flotan en un líquido y

suministran los nucleótidos a la enzima Taq polimerasa para sintetizar una nueva cadena de ADN.
Estos NTP consisten en \ Y fosfatos que sirven como fuente de energía para la reacción de PCR. La
concentración de d NTP debería ser de 20-200 m.

PROCESO IMPLICADO EN LA PCR

Hay 3 procesos principales naely

• Desnaturalización \ fusión

• Recocido

• Alargamiento \ paso de extensión

Desnaturalización \ fusión

El primer paso involucrado es calentar a una temperatura de 94-96 ‘C durante 10-20 minutos, lo que
hace que se separen 2 cadenas complementarias. Todo el tiempo consumido es de unos 5 min. La
enzima polimerasa Taq térmicamente estable se usa aquí.

Recocido (hibridación)

La temperatura de recocido debe elegirse de tal manera que, 2 ºC sea más baja que la temperatura
de fusión / desnaturalización. Este proceso tiene lugar en aproximadamente 1-2 minutos, la
temperatura se reduce, por lo que los cebadores se unen a las cadenas de ADN individuales. La
temperatura se reduce a 50-65 ° C. Cada hebra de molécula de ADN se hibrida con un cebador oligo-
nucleótido complementario de cualquiera de los dos y de la secuencia diana.

Extensión
Aquí la ADN polimerasa llena las cadenas faltantes, la temperatura involucrada dependerá de la
estabilidad de la polimerasa Taq (polimerasa Thermus aquaticus). La temperatura involucrada es de
72 ° C durante 5-15 minutos y la polimerasa Taq comienza a llenar los nucleótidos faltantes en la
dirección de 3'5 'de cada uno de los cebadores. ADN polimerasa polimeriza 1000 de bases \ min. La
amplificación se realiza en una escala logarítmica y el producto amplificado del proceso de PCR se
denomina amplicón. Un ciclo toma de 1 a 3 minutos y todo el proceso se lleva a cabo
aproximadamente 45 minutos y generaría millones de copias.

ANALISIS DE PRODUCTO DE PCR

Hay muchas formas de analizar los productos de PCR. Son

a) Tinción del producto de ADN amplificado con un tinte químico como bromuro de etidio

b) Etiquetado de cebadores de PCR y nucleótidos con fluoróforos antes de la amplificación por PCR.
SYBR Green Imay también se puede usar en lugar de bromuro de etidio (1). Tiene la ventaja de que
se puede utilizar con varios pares de cebadores diferentes, y también cuesta menos que una sonda.

c) Electroforesis en gel de agarosa

El gel de agarosa consiste en agarosa al 0,9% en tris-base 40 mM pH-8.3, ácido acético 20 mM, 1
mM purificado a partir de geles de agarosa al 0,9% usando QIA (kit de extracción rápida de gel).
Después de la técnica de electroforesis en gel, el gel se empapa en un tampón que contiene un de
que tiñe específicamente el ADN. Después de la compilación de todos los 3 procesos, se visualiza
por UV transilluminatikon8. Si las bandas están presentes, indica la secuencia objetivo de la muestra
de ADN original y la ausencia de cualquier banda indica la ausencia de la muestra de ADN original.

DIFERENTES TIPOS DE TÉCNICAS DE PCR

1. PCR anidada -semestiada
2. PCR multiplex
3. RT-PCR
4. Touchdown PCR
5. PCR inversa
6. Alelo específico de PCR.
7. PCR asimétrica
8. PCR arbitraria
9. Muestra de núcleo de PCR
10. PCR degenerada
11. Ensamblaje de PCR
12. PCR de marcación de salida
13. PCR digital
14. PCR tradicional
15. PCR de arranque en caliente
16. In-silico PCR
17. Inter secuencia de PCR
18. PCR mediada por ligadura
19. PCR para metilación específica
20. Miniprimer PCR
21. Nano partícula PCR
22. PCR de superposición-extensión
23. PCR cuantitativa
24. PCR en fase sólida
25. Suicidio PCR
26. PCR entrelazada termo asimétrica
27. PCR semicuantitativa
28. PCR convencional
29. PCR de colonias
30. Después de la PCR exponencial.
31. PCR estándar
32. PCR cualitativa

Técnicas de PCR cuantitativa

También se hace referencia a la PCR en tiempo real. Da una idea de la cantidad de ADN presente en
la muestra.

Técnicas de PCR cualitativas

Cuando se utilizan técnicas de PCR para detectar un segmento de ADN específico, se denomina
método de PCR cuantitativo. Las técnicas de PCR se utilizan en la identificación de genes de bacterias
y virus (9). Sólo la técnica de PCR cualitativa puede detectar si el individuo ha sido reinfectado con
un patógeno diferente pero relacionado. Es una técnica rápida y sencilla, económica.

PCR convencional
Esto se define como un proceso de PCR normal. Aquí los cebadores se unen específicamente entre
sí con 2 cadenas de ADN. Los cebadores también limitan la secuencia a replicar y una secuencia de
ADN particular se amplifica con miles de millones de copias. Todo lo que se necesita para el proceso
de PCR son tubos de PCR compuestos de bloques de aluminio, ADN polimerasa, tampón y ADN
objetivo, cebadores. Todo el proceso se lleva a cabo dentro de los 35-40 minutos repetidamente y
se observa mediante la técnica de electroforesis en gel. El proceso de PCR se puede hacer usando
los kits Prime STAR HS (! 6). Normalmente, 50 microlitros de mezcla de reacción de PCR consisten
en 10 microlitros de contenido de ADN genómico. Se utiliza gel de agarosa al 2% con colorante de
bromuro de etidio para analizar las muestras.

PCR multiplex
La técnica Multiplex Pcr detecta diferentes patógenos en una sola muestra, utilizada para identificar
la secuencia exónica / intrónica5 en genes específicos. El diseño de los cebadores es diferente
porque están diseñados para adherirse a una secuencia de ADN específica. Aquí, en la PCR multiplex,
las longitudes de los pares de bases deben ser diferentes para formar bandas distintas, ya que los
distintos tamaños de diferentes genes de ADN se enfocan en una sola reacción para evitar mayores
gastos, consumo de tiempo y reconoce muchos patógenos a la vez.
Esta técnica se utiliza para detectar virus / bacterias y otros agentes infecciosos. La presencia de uno
o más pares de cebadores aumenta el riesgo de amplificación del dímero del cebador y la
discriminación de los fragmentos de ADN del láser. Además de los tampones, el Plex multiplex
contiene aditivo de polimerasa Taq, lo que disminuye la competencia entre los amplicones.
Algunos ejemplos de técnicas de PCR multiplex que se emplean en el campo de la medicina son los
diagnósticos de Brucella basados en el gen de la perosamina sintetasa.

 Aplicación de la técnica de PCR utilizando dos conjuntos de cebadores B4 / B5-JPF / JPR para
el diagnóstico de brucelosis humana activa en Egipto. También se utiliza en la identificación
de las principales especies de genes que se centran en Brucella bcsp 31, omp 2b, omp2a,
omp 31.
 Un PCr múltiplex de 19 cebadores identificó específicamente a B.neotomae, B.ceti,
B.microti.
 Se han descrito varios PCR multiplex para la detección simultánea de especies de M.
tuberculosis y Brucella.

PCR anidada-anidada
Aquí se utilizan dos conjuntos de cebadores para un único punto de ubicación. El primer conjunto
es una secuencia amplificada y el segundo conjunto es complementario a la primera secuencia, que
será más corta que el primer producto amplificado. La PCR anidada se utiliza porque pretende
reducir las contaminaciones en los productos debido a la amplificación de los sitios de unión a
cebadores inesperados.

Tiene inconvenientes como el riesgo de contaminación y necesita mucho cuidado mientras se

realiza. Estas contaminaciones se pueden controlar agregando aceite ultrapuro de dos mezclas y
usando cebadores diseñados para recocer a diferentes temperaturas.
Se utilizaron PCR anidadas / seminestadas para identificar Brucella en muestras de sangre humana.
Este método es más específico pero tiene desventajas como la reacción cruzada de "cebado y
dimerización". Ninguna especie específica individual aún reacciona de forma cruzada con los
productos de PCR.

PCR estándar
Esta es una técnica sencilla y eficiente y sensible. Este método se lleva a cabo con un par de
cebadores que amplifican la secuencia genómica dirigida de las especies de Brucella. También ayuda
en el diagnóstico precoz de Brucella. La técnica de PCR estándar se utiliza para determinar el número
de leucocitos ADN / heamo compuestos.

PCR cuantitativa / semicuantitativa en tiempo real

Los tintes fluorescentes como la mezcla maestra SYER Green se utilizan para la identificación de
muestras y las sondas para medir la cantidad de producto amplificado en tiempo real. El ADNc se
obtiene mediante RT-PCR para una muestra de ARN. ApoA1 / Bactin se utilizan como marcadores
seguidos de un proceso de electroforesis en gel con un procedimiento de tinción con colorante de
bromuro de etidio. Aquí la principal desventaja es la generación de hibridación no específica. Todas
las reacciones se realizaron por cuadruplicado utilizando las reservas de ADN.

PCR en tiempo real

También se conoce como PCR cuantitativa (q PCR) 5, técnica altamente reproducible, rápida,
sensible y específica para automatizar datos. La especie Brucella ha sido desarrollada para apuntar
genea 16S23S por medio de esta técnica. Tiene menor riesgo de contaminación. Dispone de 2
técnicas para la detección.

1. SYBER Tinte verde (o) fluorocromos (o) agentes que calculan entre sí
2. Taq man sondas (o) fluroprobes.

Otras formas de sondas incluyen

a) Sondas de ligadura de ADN de surco menor
b) Sondas de hibridación
c) sondas de amanecer
d) sondas de escorpión
e) Balizas moleculares
f) FRET (transferencias de energía de resonancia fluorescente)

Estos fluorobrosos son más complejos y caros que los agentes de intercalculación. El aumento en el
ADN en cada ciclo refleja un aumento de la propensión a la fluorescencia emitida y también a la
hibridación de las sondas.
Todas las sondas, excepto las balizas moleculares, utilizan características de rendimiento idénticas.
La PCR en tiempo real tiene muchas ventajas como
1. Control de calidad cuantitativo del ADN objetivo de entrada.
2. PCR en tiempo real rápida / eficiente en placas de 96/384 pocillos, lo que lleva a un corto tiempo
de giro.
3. Eliminación de los pasos posteriores a la aplicación.
4. Protocolos de PCR estandarizados con especificaciones de amplificación uniformes que conducen
a una alta reproducibilidad.
5. Disponibilidad de reactivos de PCR estables y de calidad controlada que contribuyen a una alta
confiabilidad.

APLICACIONES DE PCR
PCR puede aplicarse en muchos campos
• En terapia de diagnóstico.
• En ensayos de detección de ácidos nucleicos.
• en el campo médico
• En ciencias agrícolas.
• En micología-parasitología.
• en odontologia
• En diagnóstico virológico.
• En el análisis de inserción
• En la evolución sistemática molecular.
• En terapia del cáncer.
• En terapia de evaluación resistente.
• PCR-como biomarcador
• en medicina forense
• en virología
• en bacteriología
• En fitopatología.
• En PCR-huellas dactilares
• En la detección de gen microbiológico.
APLICACIONES DIAGNÓSTICAS

La determinación cuantitativa de la carga viral del VIH es el parámetro más importante para el
resultado de las enfermedades y se utiliza para el diagnóstico de las enfermedades.

Como bio-marcador para procesos de enfermedades.

Los bio-marcadores son los genes especialmente inducidos o regulados por disminución durante las
enfermedades. Se denominan como sigmaturas de genes que identifican una serie de procesos de
enfermedades neoplásicas. Ejemplo: los receptores de citoquinas-quimiocinas se inducen
selectivamente y se usan para detectar enfermedades infecciosas sin la presencia de patógenos.

En medicina

La microbiología clínica es una subdivisión de la biología molecular en la que los microorganismos

son difíciles de identificar y cultivar. Muchos problemas como la dificultad en el cultivo y la
identificación se reducen mediante el uso de la técnica de PCR. El uso del proceso de PCR ha llevado
a la selección y la garantía de buenas muestras de sangre en los bancos de sangre. La técnica de PCR
también se utiliza en la caracterización de muchos virus, incluida la gripe, que beneficia a los
pacientes por su rapidez y sensibilidad. Así, la biología molecular permite la identificación de
mutaciones, portadoras de enfermedades como diabetes, obesidad, trastornos neurológicos,
enfermedades cardíacas, metabólicas y congénitas.

En ciencia forense

Las bases genéticas de las enfermedades con muerte súbita se pueden investigar con métodos
moleculares, la patología molecular forense implica las aplicaciones de la biología molecular en la
ciencia médica para investigar las bases genéticas de la fisiopatología de las enfermedades. Perfil
genético de alelos identificados en diferentes regiones del ADN marcados por el marcador genético
STR (repetición corta en tándem).

En la investigacion de plantas

En la investigación de plantas se puede utilizar en los siguientes métodos, son

a. Insertar análisis b. Fitopatología

do. Sistema molecular y evolución.

Insertar Análisis

Es un procedimiento de rutina en biología molecular para la detección y el análisis de clones en un

grupo de ADN complementario. También implica el cultivo de bacterias seguido del aislamiento de
vectores e inserciones de ADN para una purificación adicional.

Fitopatología

Ayuda a detectar y controlar la infección de las plantas por virus, bacterias, hongos. Las secuencias
de nucleótidos están limitadas solamente a muy pocos patógenos de plantas tales como
pseudomonas, xanthomonas, micoplasmas. RAPD es también uno de los métodos para identificar y
Sistemática Molecular-evolución

Sistemática Molecular-evolución

Los caracteres morfológicos pueden basarse en la relación fitogenética y durante las últimas
décadas las técnicas moleculares se han vuelto cada vez más populares para el análisis de genes de
plantas18. La sistemática molecular se puede utilizar de las siguientes maneras:

1. Análisis-comparaciones de aloenzimas.
2. Aislamiento-secuenciación de proteínas.
3. Análisis de huellas digitales de RAPD.
4. Análisis de patrones de restricción.
5. Comparaciones de secuencia de genes marcadores.

En ciencias agricolas
La identificación de múltiples enfermedades infecciosas es la aplicación más útil de la técnica de
PCR. Los siguientes son los logros más importantes en los campos agrícolas.
a. Identificación de un gen mutado EDA con displasia ectodérmica en ganado Holstein
b. Identificación del polimorfismo en el gen ABCB1 en la epiléptica idiopática resistente a la
respuesta al fenobarbitol.
c. Eliminación del gen Meq (que disminuye la inmunosupresión en pollos).
d. MTM / gen mutado con miopatía miotubular ligada al X en especies de perros. mi
e. Mutación de inserción en ABCD4 con formación de mucocele de vesícula biliar en perros
f. Las técnicas agrícolas también pueden usarse para la identificación y caracterización de
patógenos específicos de animales.
g. Virus de enfermedades bursales-Muestras aviares
h. virus sincitial respiratorio bovino
i. Muestras de Actinobacillus pleuropneumoniae-pgs.
j. Muestras de perros de virus parvo virus de tipo 2 fecales.
k. virus de la inmunodeficiencia felina
l. Virus de la leucemia felina (FeLV).

En virologia
La técnica de PCR se utiliza para controlar la terapia antiviral en VIH-1, VHB, VHS-1, VHS-2. RT-PCR
utilizada en el estudio de enfermedades infecciosas. El diagnóstico fue un gran problema debido al
alto costo del laboratorio y la baja sensibilidad de los resultados. La tecnología de PCR facilitó y
mejoró la detección, diagnóstico de cierto número de genes.

En microbiología
La PCR convencional es la técnica más utilizada. Las siguientes especies tienen técnicas de PCR
convencionales ya desarrolladas, como Bacillus anthracis, Variola major, especies de Anthrax. Tiene
alta sensibilidad, fácil uso y menos tiempo. 50-75% de las bacterias anaeróbicas pueden identificarse
y clasificarse mediante PCR convencional. También se puede utilizar para la detección de
Lactobacillus, Gadnarella vaginalis, Mycoplasmas horminis, especies de bacterias Fuso. Muchos
ensayos comerciales están disponibles para diferentes especies como M. tuberculosis, M. avium
complex, C. trochomatis, N. gonorrhea. Por lo tanto, la detección molecular es un método de
invasión que consume menos tiempo y es más rápido.
En odontologia
Pueden ser útiles en las siguientes condiciones tales como
1. Enfermedades periodontales
2. Caries dental.
3. cáncer oral
4. Infecciones endodónticas.

Enfermedades periodontales
Los siguientes virus pueden detectarse mediante técnicas de PCR en enfermedades periodontales,
como HCMV, EBV, HSV, HPV. QRT-PCR utilizado para examinar la expresión génica in vivo en la
cavidad oral. Muchos científicos han comparado la PCR convencional y la RT-PCR para la detección
y cuantificación de bacterias patógenas peridonto tales como A. actinomycete, M comitans, P.
gingivalis, T. dentioola, T. socranskci, etc.

Caries dental
Bacterias destructoras de la salud dental como S. cricettus, S. ratti, S. mutans, S. sobrinus, S. downei,
S. ferus, S. macacae, de las cuales se pueden aislar fácilmente genes mutantes de S. mutans / S.
sobrinus de la cavidad oral humana. Esta técnica de PCR permitió resultados rápidos y eficientes y
una rápida terminación de la reacción.
Infecciones endodónticas
Los patógenos endodónticos importantes incluyen T. denticola, D. pseudomosintes, F. alocis, T.
forsythia, T. malthopilum, T. socranskii y P. tannearae. utilizando técnicas de PCR, estas cepas se
pueden detectar e identificar fácilmente. Las técnicas de PCR han elevado el campo de la
microbiología médica a otra posición alta por su método.

Cáncer oral
Por RT-PCR, S. anginosus se puede detectar, diagnosticar y tratar fácilmente. El pronóstico de los
cánceres orales se puede hacer mediante la técnica de RT-PCR. En el carcinoma de cabeza y cuello,
la técnica de PCR se utiliza para detectar el virus del VEB en el cáncer de nasofaringe y el carcinoma
de células escamosas en los ganglios linfáticos. La técnica de PCR también se puede usar para
detectar cáncer de mama, linfoma folicular, cáncer de estómago, cáncer de próstata, sarcoma de
Ewling.

En Micología Parasitología.
La PCR convencional es una técnica cualitativa, la PCR fluroscente utiliza cebadores / sondas
marcados para detectar hongos en muestras ambientales. Pneumocystis jiroveci causa neumonía
grave en pacientes infectados con VIH, su detección se realiza mediante una técnica de
inmunofluorescencia1. Las especies de Aspergillus también pueden detectarse mediante una
técnica inmune = fluorescente. Otras especies que pueden detectarse son Plasmodium y especies
histopatológicas.

En el campo de las enfermedades infecciosas.

El virus de la hepatitis C causa inflamación del hígado que causa cirrohis / cáncer de hígado. PCR
utilizada para la detección de la infección por VHC.

En VIH-SIDA
La PCR cuantitativa se utiliza para detectar el VIH-SIDA. Mediante la técnica de PCR se pueden
realizar tres combinaciones de medicamentos utilizados contra el VIH y el control regular de estos
3 niveles de fármacos en el cuerpo.

En terapia de cáncer

Se pueden usar técnicas de PCR tanto cualitativas como cuantitativas para detectar cepas enfermas.
El gen p53 es útil para el monitoreo en divisiones celulares, que puede ser detectado por
PCRtechnique, sin importar que fuera de control lleve a la producción de células cancerosas. Técnica
de PCR utilizada para controlar las enfermedades del cáncer mediante un proceso llamado
Metilación del promotor (9). Las divisiones celulares no se pueden cambiar, pero se pueden
desactivar. En la región del ADN, la célula une pequeñas moléculas (grupos -CH3) a los bloques de
construcción del ADN. Por lo tanto, las polimerasas que normalmente leen los genes y producen
copias de trabajo ya no pueden encerrarse y comenzar en otra región. Por eso permanece en silencio
y no se forma ninguna nueva célula.

CONCLUSIÓN
La PCR es una técnica simple, ampliamente utilizada en minutos para producir grandes no
amplificados. de copias. La PCR funcionaría en fragmentos cada vez más grandes de ADN plasmídico
producidos. Además, la PCR es una técnica sofisticada con alta sensibilidad y especificidad, requiere
soporte de infraestructura pero es costoso. La técnica de PCR también se utiliza para actividades
inhibitorias de iones metálicos. Las técnicas de PCR también pueden usarse en la detección de
microorganismos como las especies de Salmonella. Las aplicaciones de las técnicas de PCR de
biología molecular han transformado el diagnóstico, el tratamiento y el diagnóstico de muchas
enfermedades. Se utiliza para la creación de clones recombinantes y se puede caracterizar mediante
la técnica de PCR de colonias. La técnica RTPCR es también una de las técnicas más precisas y que
requieren menos tiempo para la detección de microorganismos.