Paso 2. Análisis y discusión del problema.

1. Plan de muestreo

Problemática Seleccionada por Contaminación de la leche por Aflatoxina M1

el grupo colaborativo
Grupo colaborativo: 301102_24

Tipo Método de Cuantificación de AFM1, por técnica HPLC

de muestreo

Explicación del La muestra de leche es centrifugada para eliminar la grasa. La AFM1

plan de muestreo es extraída por la aplicación de la porción de prueba(50ml) a una
columna de inmuno-afinidad, la cual contiene anticuerpos
monoclonales específicos para la AFM1, ligados a un material de
soporte sólido. En el transcurso en que la muestra pasa a través de
la columna, la AFM1 se liga selectivamente a los anticuerpos
presentes para formar un complejo antígeno-anticuerpo. Los otros
componentes de la matriz de la muestra son eliminados de la
columna con agua destilada. La AFM1 es eluida de la columna con
acetonitrilo, concentrada y finalmente cuantificada por HPLC en fase
reversa con detección de fluorescencia (NOM-243-SSA1-2010).

Tamaño muestral Se miden por triplicado 50 ml de muestra en un tubo para centrifuga

y se centrifuga a 500 rpm durante 15 min para eliminar la grasa
sobrenadante. E filtra a través de papel filtro Whatman y se colecta
el filtrado en matraces Erlenmeyer de 250 ml.
Cuantificación por HPLC.
Se inyecta el estándar equivalente a 0,5 ng de AFM1 por
quintuplicado, para efectuar la prueba de educabilidad del sistema.
Se inyecta en secuencia volúmenes de 100 𝜇𝐿 de cada solución
patrón de trabajo, de menor a mayor concentración y se preparó una
curva de calibración graficando el área del pico contra la
concentración de AFM1 inyectada.
Se inyecta del mismo modo 100 𝜇𝐿 de cada una de las muestras
conforme a la siguiente secuencia.
 Para calcular la concentración de AFM1 en las muestras se usa la
siguiente formula:
𝑌 = 𝑚𝑥 + 𝑏
Donde:
Y: área del pico correspondiente a la AFM1 en las muestras
M: la pendiente
X: concentración en ng/ 𝜇𝐿 de AFM1 en las muestras
B: ordenada al origen
Despejando x de la ecuación se obtiene los valores de AFM1 en la
muestra expresados en ng/ 𝜇𝐿.

Se obtienen los nanogramos de AFM1 en las muestras de control

directamente de la curva de calibración y se aplica la formula para
calcular el paciente de recobro:
100
%𝑑𝑒 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑏𝑟𝑜 = 𝐶𝑀 − 𝐶 ∗
𝐶𝐴
Donde:
CM: ng AFM1 obtenidos en la muestra de control
C: ng de AFM1 obtenidos de la muestra control sin adicionar
Ca: ng de AFM1 añadidos a la amuestra control
Justificación En la cromatografía líquida, la fase móvil es un líquido que fluye a
través de una columna que contiene a la fase fija. La separación
cromatográfica en HPLC es el resultado de las interacciones
específicas entre las moléculas de la muestra en ambas fases, móvil
y estacionaria
La técnica de HPLC tiene la ventaja de ser más rápida y permite el
estudio de un mayor número de muestras, obteniendo resultados en
pocos minutos, permite analizar y cuantificar simultáneamente,
permite el estudio de numerosas muestras en un corto período de
tiempo manteniendo un alto nivel de reproducibilidad y precisión.
Referencias usadas Quevedo, P.A. (Bellaterra,2014). Ocurrencia y estimación de la
exposición humana a Afloxina M1 en muestra de leche de
para el plan
Monterrey (Mexico). Universidad Autonoma de Barcelona.
de muestreo Recuperado de:
https://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/286289/paqg1de1.pdf?s
equence=1&isAllowed=y
Norma oficial Mexicana NOM-243-SSA1-(2010), Productos y
servicios. Leche, formula láctea, producto lácteo combinado y
derivados lácteos. Disposiciones especificaciones sanitarias.
Métodos de prueba. Diario oficial de la Federación. Gobierno
constitucional de los Estados Unidos Mexicanos, México, D,F.
Bravo,M Arends, A; Montilla, S; Velasquez D. (2004). Ventajas de la
Técnica de Cromatografía Líquida de Alta Presión (HPLC-CE) en el
estudio de Hemoglobinopatías en Venezuela. Maracaibo.
Recuperado de:
http://ve.scielo.org/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0535-
51332004000400003