Bioquímica I

GUÍA DE LABORATORIO 2019 – 0
GUÍA DE LABORATORIO
CURSO: BIOQUÍMICA I
0 Autores: Salazar, J.; Salazar, Y.

GUÍA DE LABORATORIO 2019 - 0
GUÍA DE PRÁCTICAS DE QUÍMICA GENERAL

© Derechos Reservados 2018
© Área de Química
Tercera Edición
Segunda reimpresión
Diseño, Diagramación e Impresión

Universidad Científica del Sur
Panamericana Sur Km 19. Lima – Perú
Teléfono: 610 – 6400
Tiraje 1500 ejemplares

IMPRESO EN PERÚ
Dr. Manuel Efraín Rosemberg Barrón

Rector
Dr. Christian Jesús Mesías Montenegro

Vicerrector Académico
Dr. José Agustín Ortiz Elías

Director General Académico
Mg. Álvaro Rodrigo Pinillos Osnayo

Director de Formación Básica
Mg. Juan Alberto Salazar Sánchez

Coordinador de Área de Química y Física
Autores:
Mg. Juan Alberto Salazar Sánchez
Bach. Yojani Bereniz Salazar García
Reservados todos los derechos: ningún material de este manual puede ser
reproducido sin autorización expresa por escrita por los autores. La autorización
será en hoja aparte y firmada y adosada a este material. Todo compromiso suscrito
aparte, no se refiere a este manual. Queda exento del compromiso, el fotocopiado
interno en una cantidad no mayor de 100, solo para uso con fines educativos y sin
lucro.

CONTENIDO
Prologo 1
Instrucciones generales y medidas de bioseguridad 2
CAPÍTULO 1. Preparación de soluciones amortiguadoras 7
CAPÍTULO 2. Espectrofotometría 17
CAPÍTULO 3. Determinación de ácido úrico en suero sanguíneo 24
CAPÍTULO 4. Determinación de proteínas plasmáticas 28
CAPÍTULO 5. Factores que afectan la actividad enzimática 33
CAPÍTULO 6. Determinación de vitamina C en alimentos vegetales 40
CAPÍTULO 7. Digestión enzimática del almidón 45
CAPÍTULO 8. Determinación de glucemia– Efecto del glucógeno en ayuno 51
CAPÍTULO 9. Determinación de triglicéridos y colesterol en suero 59
CAPÍTULO 10. Hidrólisis de lípidos 66
CAPÍTULO 11. Cálculo del balance energético 71
CAPÍTULO 12. Determinación de hemoglobina y urea 81

PROLOGO
La química es una ciencia activa y en continuo movimiento; tiene una

importancia fundamental para nuestro mundo, tanto en el ámbito de la
naturaleza como de la sociedad. Sus orígenes son muy antiguos, pero como
se verá en este curso, es también una ciencia moderna y en continua
renovación.
La enseñanza de la Química equilibra el desarrollo teórico de sus

conocimientos con el trabajo experimental de Laboratorio como curso básico
que se imparte a los estudiantes de las diferentes Facultades de la
Universidad Científica del Sur, motivo por el cual la "GUIA DE
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA I" está orientada exclusivamente hacia el
desarrollo de prácticas experimentales, con la finalidad de que el alumno
complemente conocimientos, genere habilidades y destrezas en la
manipulación de materiales, equipos e instrumental de Laboratorio,
incentivando así la adquisición de los hábitos del método científico -
observando los fenómenos que ocurren en los ensayos respectivos y tomando
datos necesarios para obtener resultados y conclusiones confiables.
Al término de cada práctica se propone un cuestionario de preguntas teóricas

y problemas variados, con el objetivo de reforzar los conocimientos adquiridos
en el desarrollo de las prácticas de Laboratorio realizadas.
Los Autores

INSTRUCCIONES GENERALES Y MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD
1. LABORATORIO DE QUÍMICA 1, 2, 3 y 4 UCSUR
El Laboratorio es un ambiente físico estratégico donde se desarrolla

diferentes experimentos, con la finalidad que el alumno complemente
conocimientos, genere habilidades y destrezas en la manipulación de
materiales, equipos e instrumental de laboratorio, incentivando así la
adquisición de los hábitos del método científico- observando los fenómenos
que ocurren en los ensayos respectivos y tomando datos necesarios para
obtener resultados confiables.
2. INSTRUCCIONES PARA EL TRABAJO EN EL LABORATORIO

 Llegar puntual a las prácticas (tolerancia 5 minutos).
 Leer con anticipación la Práctica a realizar.
 Cada sesión de Laboratorio genera un Informe; el que será
entregado en la siguiente práctica en su respectivo horario. Es la
única fecha y la entrega es de carácter obligatorio. El informe se
debe desarrollar de acuerdo a formato que se encuentra en la Guía
de Práctica.
 La inasistencia injustificada a cualquier práctica impide al alumno
la presentación del informe correspondiente y por lo tanto tendrá
la nota mínima de cero.
 El alumno con inasistencia justificada deberá recuperar la
práctica durante la misma semana para lo que recabará de su
profesor de prácticas el formato de autorización correspondiente.

3. MEDIDAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO

a) Higiene personal
 Queda terminantemente prohibido fumar, comer y/o beber
durante las prácticas en el laboratorio. Así mismo el uso de
celulares y otros equipos electrónicos.
 Se debe lavar las manos al finalizar el trabajo de laboratorio y
cada vez que se sospecha que ha estado en contacto con algún
material contaminado.
 Al entrar en contacto la piel con ácidos o bases fuertes, lavarse
inmediatamente con abundante agua. Para el caso de ácidos
aplicarse una solución saturada de bicarbonato, para las bases
utilice una solución al 5% de ácido acético (vinagre).
 Para quemaduras leves el área afectada se debe aplicar
inmediatamente una crema de picrato de Butesín.
 Mantener limpio el área de trabajo. Al derramar alguna
sustancia limpiar inmediatamente. Al final de la práctica dejar
todo el material limpio y ordenado.
b) Comportamiento de los alumnos durante las prácticas

 Está terminantemente prohibido ingresar a l Laboratorio
mochilas, carteras o bolsos, teléfono celulares, animales
domésticos, etc.
 Una vez que el alumno haya ingresado al laboratorio no puede
salir por ningún motivo.
 El trabajo con sustancias volátiles se debe realizar haciendo
uso de la campana extractora.
 Para diluir ácidos, siempre se debe agregar los ácidos al
agua, y no en sentido contrario.
 Cuidar como propio todo bien que encuentre o utilice en el
laboratorio. El alumno es responsable de los materiales
asignados para el desarrollo de la práctica, el deterioro implica
su reposición obligatoria.
 El manejo de materiales, reactivos y el desarrollo de los

experimentos sólo se realizan con autorización del profesor.

Los experimentos no autorizados están prohibidos.
 Observar cuidadosamente que los frascos con reactivos estén
etiquetados indicando el contenido y la concentración
respectiva, antes de ser usados.
 Obtener las sustancias químicas de los frascos de reactivos,
en un vaso de precipitados o en un tubo de ensayos limpio,
cuidando de no usar cantidades mayores que las necesarias,
está terminantemente prohibido regresar sustancia alguna no
utilizada al frasco original.
 Al encender el mechero Bunsen, primero encender el fósforo
y luego abrir la llave de gas.
c) Eliminación de residuos
 Los desechos sólidos, líquidos y las sales solubles, deben ser
depositados en los recipientes indicados por el profesor para
su posterior tratamiento.
 Todo desperdicio de papel o residuo sólido debe dirigirse al
respectivo recipiente de basura situados en ambas
paredes laterales de cada Laboratorio
 No se debe arrojar residuos sólidos al
lavadero.
4. ELEMENTOS DE PROTECCIÓN PERSONAL Y DE LOS EQUIPOS

a) Mandil
 Para cada sesión de prácticas el estudiante debe llevar un
mandil (guardapolvo), el cual es de carácter obligatorio.
Cuando el experimento lo amerite, los estudiantes usarán
lentes de seguridad industrial tipo MERCK.
 Los estudiantes vestirán sus mandiles antes de ingresar al
Laboratorio y dejarán de vestirlos a la finalización de las
actividades correspondientes.

b) Lentes de seguridad y respiradores

 Se debe usar lentes de seguridad cuando sea necesario
proteger la cara de salpicaduras y/o sustancias corrosivas.
Igualmente se utilizará respiradores cuando sea necesario. En
ambos casos el estudiante tiene a su disposición estos
materiales y los solicitará al responsable del laboratorio.
 En la parte lateral central del Laboratorio se encuentra la ducha
española, la que será usada para casos de salpicaduras o
derrames en el cuerpo de la víctima con sustancias ácidas,
básicas o corrosivas. Así mismo a la entrada parte izquierda se
encuentra un kit lavador de ojos que se aplicará directamente
al ojo de la víctima en caso de salpicadura de alguna sustancia
dañina al ojo.
c) Extinguidores contraincendios
 El alumno debe conocer el uso y la ubicación de los extintores
contra incendios que en caso de emergencia se descolgará
de la pared con cuidado. El extintor, en la parte superior tiene
una palanca circular que se saca (se tira) para activar y se
presiona la manija con la mano derecha y con la mano
izquierda se coge la manguera la cual se orientará hacia la
fuente de peligro.
 En el caso de incendiarse la ropa de una persona, se deberá
pedir ayuda inmediatamente, se debe estirar en el piso y
rodar sobre sí mismo para apagar las llamas. No se
recomienda utilizar el extintor sobre el cuerpo o rostro de una
persona.

d) Botiquín de primeros auxilios

 Existe un botiquín perfectamente identificado y de fácil acceso
cono los elementos necesarios para prestar primeros auxilios
en el laboratorio.
 Será responsabilidad de todos los usuarios del laboratorio
conocer la ubicación y el uso del botiquín y de los elementos
de protección personal.
5. TOMA DE DATOS
 Manipular con habilidad, criterio y en forma adecuada los
diferentes materiales de laboratorio.
 Desarrollar los experimentos en forma ordenada y con mucha
responsabilidad.
 Observar con mucho cuidado los fenómenos que ocurren durante
el desarrollo de los experimentos.
 Realizar las mediciones con precisión y efectuar las
anotaciones pertinentes, para obtener resultados satisfactorios
disminuyendo el margen de error. “un error mínimo al principio
puede ser máximo al final” (Aristóteles).
 Todo alumno deberá contar con una calculadora personal que
contenga como mínimo funciones de potencia y logaritmo. No se
permitirá usar celulares como calculadora personal.
6. SISTEMA DE EVALUACIÓN
Laboratorio: 27%
RUBRO %
Control de aprendizaje I 10
Control de aprendizaje II 10
Informes 5
Actitudinal 2

CAPÍTULO
1
PREPARACIÓN DE
SOLUCIONES
AMORTIGUADORAS

PRÁCTICA N°1
PREPARACIÓN DE SOLUCIONES AMORTIGUADORAS
Determinación el pH teórico y práctico de diferentes soluciones

Logro de Determinación la influencia del pH en la solubilidad de sustancias
aprendizaje: orgánicas
Identificación la naturaleza amortiguadora de la albúmina
MATERIALES
I. MATERIALES EN LA MESA DE LOS ESTUDIANTES
 01 gradilla
 04 tubos de ensayo 13x100mm
 05 beaker 100mL
 01 bagueta
 12 cintas indicadoras de pH (PANPEHA)
 01 piseta con agua destilada
 03 pipeta graduada 10mL
 01 probeta 25mL
II. REACTIVOS EN LA MESA DE LOS ESTUDIANTES
 03 micropipeta de 100 a 1000µL y/o 5 a 50µL

 01 hidróxido de sodio ~ NaOH 0.01M frasco 20mL
 01 ácido clorhídrico ~ HCl 0.01M frasco 20 mL
 01 hidróxido de sodio ~ NaOH 0.1M gotero 25mL
 01 ácido clorhídrico ~ HCl 0.1M gotero 25mL
 01 ácido acético ~ CH3COOH 0.1M frasco 20mL
 01 hidróxido de amonio ~ NH4OH 0.1M frasco 20mL
 01 cloruro de amonio ~ NH4Cl 0.1M frasco 20mL
 01 benzoato de sodio ~ NaC6H5CO2 sobre 10mg
 01 anaranjado de metilo gotero 25mL
 01 fenolftaleína gotero 25mL
III. MATERIALES EN LA MESA CENTRAL DEL PROFESOR
 01 ácido clorhídrico concentrado ~ HCl gotero 25 mL

 pH – metro
PROCEDIMIENTO

La preparación de todo reactivo expresado en Molaridad (M) se realiza utilizando

la siguiente fórmula:
 NaOH 0.01M
Pesar 0.4g de NaOH en la balanza analítica, luego agregar agua destilada hasta
completar un volumen de 1L. (¡PRECAUCION! la reacción es exotérmica, es
decir que desprende calor).
 HCL 0.01M
Medir un volumen de 0.32mL en una pipeta de 1mL, luego agregar agua destilada
hasta completar un volumen de 1L. (¡PRECAUCION! el reactivo es fumante, es
decir que desprende gases).
 NaOH 0.1M
Pesar 4g de NaOH en la balanza analítica, luego agregar agua destilada hasta
completar un volumen de 1L. (¡PRECAUCION! la reacción es exotérmica, es
decir que desprende calor).
 HCL 0.1M
hasta completar un volumen de 1L. (¡PRECAUCION! el reactivo es fumante, es
decir que desprende gases).
 CH3COOH 0.1M
hasta completar un volumen de 1L.
 NH4OH 0.1M
Medir un volumen de 3.98mL en una pipeta de 10mL, luego agregar agua
destilada hasta completar un volumen de 1L.
 NH4CL 0.1M
Pesar 5.35g en la balanza analítica, luego agregar agua destilada hasta completar
un volumen de 1L.
 Solución de albúmina (micela)
Prepare una solución de cloruro de sodio al 0,9% (solución salina fisiológica,
SSF). Agregue 100mL de clara de huevo sobre 900mL de SSF. Agite lentamente
(no debe formar espuma). El producto debe ser transparente, NO TURBIO u
OPACO.
 Anaranjado de metilo
En la balanza analítica pesar 0.1g de anaranjado de metilo. Mezclar el 0.1g de
anaranjado de metilo previamente pesados en 100mL de etanol al 20°. Agitar
hasta que se disuelva completamente.
 Fenolftaleína
Pesar 1.25gr de fenolftaleína y diluir con etanol al 95% hasta un volumen de
250mL.

INTRODUCCIÓN
El poder amortiguador de los cambios de pH en un determinado sistema; es

una expresión simple de reacciones fundamentales reversibles que se
establecen en el equilibrio y que se basan en la teoría ácido – base. Nuestro
organismo cuenta con sistemas amortiguadores tanto intracelular como
extracelular.
I. Objetivos
 Determinar el pH teórico y práctico de diferentes soluciones
 Determinar la influencia del pH en la solubilidad de sustancias
orgánicas
 Identificar la naturaleza amortiguadora de la albúmina
II. Fundamento teórico

El poder amortiguador de los cambios de pH en un determinado
sistema es una expresión simple de reacciones fundamentales
reversibles que se establecen en el equilibrio y que se basan en la
teoría ácido – base. Nuestro organismo cuenta con un sistema
amortiguador intracelular y un sistema amortiguador extracelular.
El sistema amortiguador dentro de las células es el fosfato, está

formado por el par de iones (H2PO4)1- y (HPO4)1- es la especie química
de este par que tiene mayor capacidad de neutralizar la base.
Cualquier adición de (OH)1- la neutraliza el (H2PO4)1- evitando que el
pH se incremente.
(𝐻2 𝑃𝑂4 )1− (𝑎𝑐) + (𝑂𝐻)1−. (𝑎𝑐) → (𝐻𝑃𝑂4 )2− (𝑎𝑐) + 𝐻2 𝑂
El receptor de protón o base en el fosfato es la base conjugada del

(H2PO4)1-, el ion (HPO4)1-. Este puede neutralizar (H)1+ y de este modo
evitar que el pH disminuya.

(𝐻𝑃𝑂4 )2− (𝑎𝑐) + (𝐻)1+ (𝑎𝑐) → (𝐻𝑃𝑂4 )1− (𝑎𝑐)
El sistema amortiguador extracelular es el carbonato, está formado por

el par conjugado, H2CO3 y (HCO3)1-, el ácido carbónico y el ion
bicarbonato. En realidad, el ácido carbónico en la sangre casi
enteramente en la forma de CO2 (ac). Pero cualquier demanda de
H2CO3 (ac) la satisface casi instantáneamente la capacidad de la
anhidrasa carbónica para desplazar el equilibrio; dicha enzima cataliza
las reacciones directa e inversa en el siguiente equilibrio:
𝐶𝑂2 (𝑎𝑐) + 𝐻2 𝑂 → 𝐻2 𝐶𝑂3 (𝑎𝑐)
El ácido carbónico del amortiguador carbonato de la sangre neutraliza

el (OH)1-, y así evita el incremento del pH. Si se tuviera algún problema
metabólico o respiratorio tendiente a aumentar el nivel de (OH)1- de la
sangre, el H2CO3 neutraliza el (OH)1- y así evitaría la alcalosis.
(𝐻𝐶𝑂3 )1− (𝑎𝑐) + (𝐻)1+ (𝑎𝑐) → 𝐻2 𝐶𝑂3 (𝑎𝑐)
Las soluciones amortiguadoras son muy importantes, se usan:

- Preparación de soluciones estándar (determinación
potenciométrica del pH).
- Mantenimiento una concentración de H+ necesaria para la
actividad óptima de una reacción química o bioquímica,
Esta función es importante en la acción de las enzimas,
tanto in vivo como in vitro.
 Ecuación de Henderson – Hasselbach

La ecuación de Henderson – Hasselbach, ha sido derivada de
la Ley de acción de masas de Gulberg y Waage, del concepto
de constante de equilibrio y de la ionización de ácidos y bases

débiles. Se utiliza para calcular el pH teórico de una mezcla de

ácidos débiles y sus sales.
Para el siguiente sistema en equilibrio:
Calculando Ka para el ácido débil, HA:
𝐻1 𝐴1
𝐾𝑎 =
𝐻𝐴
Despejando la concentración iones hidrógeno se tiene:
𝐻𝐴 𝑥 𝐾𝑎
𝐻1 =
𝐴1−
Aplicando logaritmo y multiplicando por (-1), se obtiene:
𝐻𝐴
𝑙𝑜𝑔𝐻1 = −𝑙𝑜𝑔𝐾𝑎 (−𝑙𝑜𝑔 )
𝐴1−
Reemplazando:
𝐴1
𝑝𝐻 = 𝑝𝐾𝑎 + log
𝐻𝐴
Expresión conocida como ecuación de Henderson –

Hasselbach para un ácido débil.
Las soluciones amortiguadoras son muy importantes, se usan:

- Preparación de soluciones estándar (determinación
potenciométrica del pH).
- Mantenimiento una concentración de H+ necesaria para la
actividad óptima de una reacción química o bioquímica,

Esta función es importante en la acción de las enzimas,

tanto in vivo como in vitro.
 Tampones biológicos
Es un sistema endógeno (producido por un organismo vivo)
capaz de contrarrestar un cambio violento de en el pH corporal,
el cual está dado por la [H+] en los líquidos corporales pH = 7,3
unidades.
Como se mencionó, la potencia máxima de un tampón es

cuando el pH coincide con el pH del medio y la capacidad
amortiguadora se mantiene hasta +2 unidades de pH, después
de la cual el tampón pierde su capacidad.
1. Tipos de amortiguadores biológicos:

- Sistema amortiguador bicarbonato
𝐻𝐶𝑂3
𝑝𝐾𝑎 = 6,1
𝐻2 𝐶𝑂3
- Sistema amortiguador fosfato
𝐻𝑃𝑂4
𝑝𝐾𝑎 = 7,4
𝐻2 𝑃𝑂4
- Sistema amortiguador hemoglobina – proteínas

plasmáticas

III. Parte experimental

 Determinar el pH teórico y práctico de las siguientes
soluciones
Determinar el valor del pH teórico según la ecuación de
Henderson – Hasselbach. Tomar 10 mL de cada solución y
determinar el valor del pH práctico empleando el pH – metro y/o
las tiras de pH.
REACTIVO [] pH PRÁCTICO pH TEÓRICO
NaOH 0.01 M
HCl 0.01 M
CH3COOH 0.1 M
NH4OH 0.1 M
NH4Cl 0.1 M
 Influencia del PhpH en la solubilidad de sustancias

orgánicas – solubilidad del benzoato de sodio
En un vaso precipitado de 100 mL de capacidad disolver 10 mg
de benzoato de sodio con 10 mL de agua destilada,
inmediatamente medir su pH, luego adicionar 5 gotas de HCl
concentrado, agitar y observar.
Medir nuevamente el pH de la solución final.

 Naturaleza amortiguadora de la albúmina

Preparar 4 tubos de prueba con los siguientes reactivos:
TUBO REACTIVOS
1 gota de HCl 0.1M + 1 gota de

1
anaranjado de metilo + 2 mL de H2O
1 gota de HCl 0.1M + 1 gota de
2
anaranjado de metilo + 2 mL de H2O
1 gota de NaOH 0.1M + 1 gota de
3
fenolftaleína + 2 mL de H2O
1 gota de NaOH 0.1M + 1 gota de
4
fenolftaleína + 2 mL de H2O
A los tubos 1 y 3: Agregar 3 lmL de solución de albúmina, agitar y
observar.
A los tubos 2 y 4: Agregar 2 mL de H2O, agitar y observar.

PRÁCTICA 1
INFORME
PREPARACIÓN DE SOLUCIONES AMORTIGUADORAS
Apellidos Nombres N° Mesa Fecha
INTRODUCCIÓN
OBJETIVOS
RESULTADOS
DISCUSIÓN
CONCLUSIONES
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

CAPÍTULO
2
ESPECTROFOTOMETRÍA

PRÁCTICA N°2
ESPECTROFOTOMETRÍA
Conocimiento el uso y aplicación del espectrofotómetro.

Aplicación de la ley de Lambert – Beer en el empleo del
Logro de
espectrofotómetro.
aprendizaje:
Determinación de una curva de calibración con la solución de azul
de metileno.
MATERIALES
 01 gradilla
II. MATERIALES EN LA MESA CENTRAL DEL PROFESOR
 01 solución de azul de metileno 1mg/dL frasco 100mL

 01 espectrofotómetro
 01 micropipeta 100-1000 µL y/o de 5-50µL
 12 cubetas para espectrofotometría
 12 puntas descartables respectivas
PROCEDIMIENTO
 Solución azul de metileno 1mg/dL

Pesar en la balanza analítica 1mg de azul de metilo. Mezclar 1mg/dL de azul de
metileno previamente pesados en 100mL de agua destilada. Agitar hasta que se
disuelva completamente.

INTRODUCCIÓN
Entre los diversos métodos de análisis de tipo cuantitativo que se utilizan para
la determinación de moléculas o elementos constitutivos de los organismos se
encuentra la espectrofotometría, que utiliza la medición de la intensidad de la
luz transmitida y/o absorbida, a determinada longitud de onda, por compuestos
químicos en solución.
I. Objetivos
 Conocer el uso y aplicación del espectrofotómetro.
 Aplicar la Ley de Lambert – Beer en el empleo del
espectrofotómetro.
 Determinar una curva de calibración, usando la solución de azul de
metileno.

El paso de un haz de luz de una longitud de onda determinada a través
de una solución es reflejado en parte, mientras que la mayor fracción
de esta es absorbida por la sustancia disuelta. La absorción es
proporcional a la concentración del soluto.
La propiedad de una sustancia para absorber radiación de una

determinada longitud de onda es dependiente de su estructura
química. La ley de Lambert y Beer expresa las relaciones antes
mencionadas mediante la siguiente ecuación:
𝐼𝑜
𝐿𝑜𝑔 = 𝜀. 𝐼. 𝑐
𝐼𝑡

Io Luz incidente
It Luz transmitida
ɛ Coeficiente de extensión
Distancia recorrida por la luz a través de
I
la solución
c Concentración del absorbente
El log Io/It también se conoce como densidad óptica (D.O.) o

absorbancia de la solución y es directamente proporcional a la
concentración del soluto.
Para determinar la concentración de una determinada sustancia

puede hacerse uso del factor de calibración o de una curva de
calibración.
La preparación de una curva de calibración se realiza utilizando

concentraciones conocidas de la sustancia cuya concentración
deseamos conocer. Luego se determina la absorbancia de cada una
de dichas concentraciones y se procede a preparar un gráfico, donde
en el eje de abscisas se disponen las concentraciones de la sustancia
y en el eje de ordenadas la absorbancia.
 Factor de calibración
Se define como la relación que existe entre la concentración
del estándar y su respectiva absorbancia. Este factor puede
obtenerse de la siguiente manera:
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑒𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟
𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑐𝑎𝑙𝑖𝑏𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 =
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎

La concentración del estándar puede expresar como: mg/dL,

µg/dL, mEq/L, U/L, etc. Para encontrar la concentración de una
sustancia problema se multiplica el factor de calibración por la
absorbancia del problema, operación que se realiza de
acuerdo al siguiente procedimiento que se aplicará en el
desarrollo del experimento.

 Preparación de una curva de calibración
Para elaborar una curva de absorción se preparará el siguiente
sistema:
Solución de azul de metileno 1mg/dL 1mL

Agua destilada 4mL
Luego se procederá a realizar lecturas en el espectrofotómetro a

las siguientes longitudes de onda: 560, 580, 600, 620, 640, 660,
680 y 700 nm.
Graficar utilizando papel milimetrado las absorbancias en función
de las longitudes de onda y determinar el pico de máxima
absorción de azul de metileno, el cual corresponde al mayor valor
de la absorbancia.

Preparar el experimento de la siguiente manera:
1 2 3 4 5
mL Azul de metileno 0.5 1 2 3 4

mL Agua destilada 4.5 4 3 2 1
Llevar el espectrofotómetro a cero. Luego leer los tubos a una

longitud de onda de 660 nm.
Graficar en un papel milimetrado los resultados, disponiendo las
concentraciones en el eje de abscisas en el eje de las ordenadas,
luego trazar una recta a través de los puntos obtenidos
experimentalmente.
Utilizando la curva de calibración o el factor de calibración
determinará la concentración de la sustancia problema en la
presente práctica.

PRÁCTICA 2
INFORME
ESPECTROFOTOMETRÍA
INTRODUCCIÓN
OBJETIVOS
RESULTADOS
DISCUSIÓN
CONCLUSIONES

CAPÍTULO
3
DETERMINACIÓN DE
ÁCIDO ÚRICO EN SUERO
SANGUÍNEO

PRÁCTICA N°3
DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ÚRICO EN SUERO SANGUÍNEO
Logro de
Determinación del ácido úrico en suero sanguíneo.
aprendizaje:
MATERIALES
 01 gradilla
 04 tubos de ensayo 13 x 100mm
 01 piseta de agua destilada
 03 pipetas de 5mL
 03 propipetas
 01 suero sanguíneo tubo con tapa rosca 1mL

 01 estándar de ácido úrico frasco 1mL
 01 reactivo de trabajo de urea frasco 3mL
 01 baño maría 37°C
 01 vórtex
PROCEDIMIENTO
El personal técnico colocará en las mesas TODO el material requerido.

INTRODUCCIÓN
El ácido úrico es un compuesto que se forma en el organismo como producto de

excreción de las purinas. Los niveles séricos se encuentran elevados en diversas
enfermedades tales como: insuficiencia cardiaca crónica, leucemia, gota,
síndrome de Lesch – Nyhan, etc.
I. Objetivos
 Determinar el nivel de ácido úrico en el suero sanguíneo,

La determinación de ácido úrico en suero se realiza utilizando dos
enzimas, la uricasa que transforma el ácido úrico en alantoína y la
enzima peroxidasa, que en presencia de 4 – aminofenazona forma
quinonimina de color rojo.
uricasa
Ácido úrico + 2H2O + O2 Alantoína + H2O2 + CO2
POD roja
2H2O2 + 4 – AF Quinonimina

Preparar los siguientes medios de ensayo:
B x St
Suero o plasma (µL) - 20 -

Estándar (µL) - - 20
Reactivo de trabajo (mL) 1.0 1.0 1.0
Mezclar suavemente e incubar durante 5 minutos en baño maría a

37°C. Enfriar y leer la densidad óptica en el espectrofotómetro a 505
nm.
VALORES DE REFERENCIA:
Hombres: 2.5 – 6.0 mg/dL
Mujeres: 2.0 – 5.0 mg/dL

PRÁCTICA 3
INFORME
DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ÚRICO EN SUERO SANGUÍNEO
INTRODUCCIÓN
OBJETIVOS
RESULTADOS
DISCUSIÓN
CONCLUSIONES

CAPÍTULO
4
DETERMINACIÓN DE
PROTEÍNAS PLASMÁTICA

PRÁCTICA N°4
DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS PLASMÁTICAS
Determinación el nivel de las proteínas plasmáticas total en el suero

Logro de sanguíneo.
aprendizaje:
Determinación el nivel de albúmina en el suero sanguíneo.
MATERIALES
 01 gradilla
 04 tubos de ensayo 13 x 100mm
 01 piseta de agua destilada
 03 pipetas de 5mL
 03 propipetas
 01 suero sanguíneo tubo con tapa rosca 1mL

 01 estándar de proteínas frasco 1mL
 01 reactivo BCF frasco 11mL
 01 reactivo EDTA/Cu frasco 11mL
 01 vórtex
PROCEDIMIENTO

INTRODUCCIÓN
Las proteínas plasmáticas cumplen diversas funciones que son muy importantes
para un apropiado funcionamiento de los diversos tejidos del organismo. Pueden
cumplir cuantitativa es muy útil para el diagnóstico de algunas patologías como:
desnutrición, deshidratación, cirrosis, etc.
I. Objetivos
 Determinar el nivel de las proteínas plasmáticas total en el suero
sanguíneo.
 Determinar el nivel de albúmina en el suero sanguíneo.
II. Parte experimental

 Determinación de proteínas plasmáticas total (Método de
Biuret)
La determinación de las proteínas totales se realiza utilizando iones
cúpricos que en medio alcalino reacciona con las proteínas
formando compuestos de coordinación de color violeta, cuyo pico
de máxima absorción es de 540 nm y su intensidad es proporcional
a la concentración de proteínas.
Preparar los siguientes medios de reacción:
B x St
Agua destilada (µL) 50 - -

Estándar de proteínas (µL) - - 50
Reactivo EDTA/Cu (mL) 3.5 3.5 3.5
Incubar durante 15 minutos a 37°C y leer en el espectrofotómetro

a 540 nm.
6.0 – 8.3 g/dL

 Determinación de albúmina
La albúmina reacciona con el bromo cresoldulfonftaleína a pH 3.8
formando un compuesto coloreado que absorbe a 625 nm.
Preparar el siguiente sistema:
B x St

Estándar de albúmina (µL) - - 10
Reactivo BCF (mL) 3.5 3.5 3.5
Colocar los tubos en una gradilla a temperatura ambiente durante

10 minutos y leer en el espectrofotómetro a 625 nm.
3.0 – 5.0 g/dL

PRÁCTICA 4
INFORME
DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS PLASMÁTICAS
INTRODUCCIÓN
OBJETIVOS
RESULTADOS
DISCUSIÓN
CONCLUSIONES

CAPÍTULO
5
FACTORES QUE AFECTAN
LA ACTIVIDAD
ENZIMÁTICA

PRÁCTICA N°5
FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

Determinación del efecto de la concentración del sustrato
Logro de Determinación del efecto de la concentración de la enzima
aprendizaje:
Determinación del efecto del pH sobre la actividad enzimática
MATERIALES
 01 gradilla
 01 hígado de pollo (enzima fosfatasa ácida del hígado)
 01 termómetro
 02 pipetas graduadas o volumétricas 10mL
 01 propipeta
 01 tampón citrato 0.1M pH 5.0 frasco 5mL

 01 p – nitrofenil fosfato 0.001M frasco 2mL
 01 p – nitrofenil fosfato 0.01M frasco 5mL
PROCEDIMIENTO
 Tampón citrato 0.1M pH 5.0
Para obtener soluciones de buffer citrato 0.1M de pH 5.0 se deberá pesar 0.7g de
ácido cítrico y 1.86g de citrato trisódico dihidratado. Colocar ambos en una fiola de
100lmL y aforar con agua destilada (es decir colocar 100mL de agua destilada).
 p – nitrofenil fosfato 0.001M
Pesar 74.22g de p – nitrofenil fosfato en la balanza analítica, luego agregar
agua destilada hasta completer un volume de 200mL.
 p – nitrofenil fosfato 0.01M
Pesar 742.20g de p – nitrofenil fosfato en la balanza analítica, luego
agregar agua destilada hasta completer un volume de 200mL.

INTRODUCCIÓN
Las enzimas son compuestos de naturaleza proteica que tienen la propiedad de

acelerar las reacciones químicas sin modificar la constante de equilibrio del
sistema. Su actividad es afectada por diversos factores: concentración de
sustrato, pH, concentración de enzima, temperatura, inhibidores, fuerza iónica,
constante dieléctrica, etc.
I. Objetivos
 Determinar el efecto de la concentración del sustrato
 Determinar el efecto de la concentración de la enzima
 Determinar el efecto del pH sobre la actividad enzimática

 Efecto de la concentración del sustrato
La velocidad de una reacción catalizada por enzimas es
dependiente de la concentración del sustrato. Esta dependencia es
lineal cuando la concentración de sustrato es menor que el valor
Km, perdiéndose esta relación cuando la concentración es muy
cercana a Km, para finalmente tomarse independiente de la
concentración del sustrato.
 Efecto de la concentración de la enzima

La velocidad de una reacción enzimática depende directamente de
la concentración de enzima. Los experimentos deben realizarse en
condiciones de velocidad inicial.
 Efecto del pH sobre la actividad enzimática

El pH del medio de reacción afecta la velocidad con que una enzima
cataliza una reacción. La variación en la velocidad de catálisis
ocurre debido a que el pH puede afectar la estabilidad de la enzima
los grupos ionizables del sustrato, etc.


 Efecto de la concentración del sustrato
El experimento se realizará utilizando la enzima fosfatasa ácida de
hígado de pollo, enzima que tiene la propiedad de hidrolizar el p –
nitrofenil fosfato en medio ácido formando como productos de la
reacción fosfato inorgánico y p – nitrofenol. Este último compuesto
absorbe a 405nm.
Con propósito se prepararán los siguientes medios de reacción:
B-1 1 B-2 2 B-3 3 B–4 4
Tampón citrato 0.1M pH 5.0 (mL) 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
p – nitrofenil fosfato 0.001M (mL) 0.2 0.2 0.4 0.4 - - - -
p – nitrofenil fosfato 0.01M (mL) - - - - 0.1 0.1 0.2 0.2
Agua destilada (mL) 0.8 0.7 0.6 0.5 0.9 0.8 0.8 0.7
Colocar los tubos en baño maría a 37°C durante 2 minutos, luego

adicionar la enzima conforme se indica a continuación:
B-1 1 B-2 2 B-3 3 B–4 4
Enzima (mL) - 0.1 - 0.1 - 0.1 - 0.1
Determinar la reacción exactamente a los 2 minutos, mediante la

adición de 1MlmL de NaOH 1n. Leer en el espetrofotómetro a
405nm.
Determinar la velocidad de reacción de cada uno de los tubos y

luego graficar:
a) Velocidad en función de la concentración de sustrato: B – 1/v vs
1/[S]
b) Calcular los valores de Vmáx y Km de la enzima
Determinar la velocidad máxima y el Km de la enzima utilizando

ambos gráficos.

 Efecto de la concentración de la enzima

Para este propósito se preparan los siguientes medios de reacción:
B 1 2 3
Tampón citrato 0.1M pH 5.0 (mL) 1.0 1.0 1.0 1.0

p – nitrofenil fosfato 0.01M (mL) 0.2 0.2 0.2 0.2
Agua destilada (mL) 0.8 0.75 0.7 0.65
Los tubos de ensayo se incubarán durante 2 minutos a 37°C a cuyo

término se adicionará la enzima, que dará inicio a la reacción.
B 1 2 3
Enzima (mL) - 0.05 0.1 0.15
Se colocarán nuevamente los tubos en el baño maría durante 2

minutos exactamente y se detendrá la reacción mediante la adición
de 1mL de NaOH 1N. Se leerán las densidades ópticas a 405nm.
Graficar la actividad enzimática o la velocidad de la reacción en

función de la concentración de enzima expresada como mL de
enzima.
 Efecto del pH sobre la actividad enzimática

Preparar los siguientes medios de reacción:
pH
3.0 4.0 5.0 6.0 7.0
Tampón citrato 0.1M pH 5.0 (mL) 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
p – nitrofenil fosfato 0.01M (mL) 0.2 0.2 0.2 0.2 -
Agua destilada (mL) 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7

Colocar los tubos en el baño maría a 37°C durante 2 minutos e

iniciar la reacción mediante la adición de la enzima:
pH
3.0 4.0 5.0 6.0 7.0
Enzima (mL) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
La reacción se detiene transcurrida exactamente 2 minutos,

mediante la adición de 1mL de NaOH 1N, luego leer en el
espectrofotómetro a 405 nm. Graficar la actividad enzimática en
función del pH.

PRÁCTICA 5
INFORME
FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
INTRODUCCIÓN
OBJETIVOS
RESULTADOS
DISCUSIÓN
CONCLUSIONES

CAPÍTULO
6
DETERMINACIÓN DE
VITAMINA C EN
ALIMENTOS VEGETALES

PRÁCTICA N°6
DETERMINACIÓN DE VITAMINA C EN ALIMENTOS VEGETALES

Determinación la cantidad de vitamina C en diversas frutas
Logro de
Determinación el efecto de la temperatura sobre la estabilidad de la
aprendizaje:
vitamina C en frutas
MATERIALES
 01 gradilla
 04 tubos de ensayo con tapa rosca 13x100mm
 02 propipetas
 02 beaker 50mL
 01 jugo de fruta diluido (puede emplearse “Tampico”)

 01 Folin – Ciocalteu 10% frasco 8mL
 01 ácido tricloroacético 10% frasco 200mL
 01 estándar de ácido ascórbico 0.1mg/mL
 01 micropipeta 10 – 100 µL y/o de 5 – 50 µL
 01 centrífuga
 01 baño maría a 100°C o planchas de calentamiento y termómetros
PROCEDIMIENTO
 Folin – Ciocalteu 10%
Pesar 20g de Folin – Ciocalteu. Luego mezclar con 200mL de agua destilada hasta
su total disolución.
 Ácido ascórbico 0.1mg/mL
Pesar 0.1g de ácido ascórbico en la balanza analítica. Luego mezclar con 100mL
de agua destilada hasta su total disolución.
 Ácido tricloroacético 10%
Pesar 20g de ácido trocloroacético. Luego mezclar con 200mL de agua destilada
hasta su total disolución.

INTRODUCCIÓN
La vitamina C es un compuesto que el ser humano debe ingerir necesariamente

en su dieta habitual, debido a que no dispone de las enzimas esenciales para
sintetizarlo, como ocurre en las ratas.
I. Objetivos
 Determinar la cantidad de vitamina C en diversas frutas
 Determinar el efecto de la temperatura sobre la estabilidad de la vitamina
C en frutas

 Determinación de vitamina C en frutas cítricas
La vitamina C puede determinarse cuantitativamente utilizando el
reactivo de Folin – Ciocalteu, para cuyo propósito se procederá de
la siguiente manera:
a) Preparación de la muestra:
Se procederá a extraer jugo de una fruta cítrica como el limón
o la naranja y se procederá a diluir al medio con ácido
tricloroacético al 10%, luego se filtrará u centrifugará a 2500
rpm durante 10 minutos.
Para la determinación cuantitativa de vitamina C se procederá

de la siguiente manera:
B x St
Jugo de fruta diluido (mL) 0.1 0.1 -
Reactivo de Folin – Ciocalteu 10%

0.2 0.2 0.2
(mL)
Estándar de ácido ascórbico 0.1mg/dL
- - 0.1
(mL)
Agua destilada (mL) 1.7 1.7 1.7
Dejar en reposo durante 10 minutos y proceder a leer en el

espectrofotómetro a 750nm. Para realizar los cálculos, es
necesario considerar la dilución de la muestra problema.

 Efecto de la temperatura sobre la estabilidad de la vitamina C

En un tubo de cultivo con tapa rosca medir 2mL del jugo de fruta
diluido y luego colocarlo en un baño maría a 100°C. Determinar el
contenido de vitamina C de acuerdo a la técnica antes descrita a
los 20 minutos y luego a los 40 minutos de incubación, para cuyo
propósito se tomarán alícuotas de 0.1mL.
En un papel milimetrado, graficar el % del contenido de vitamina C

en función del tiempo o el logaritmo del porcentaje de vitamina C
remanente en función del tiempo.

PRÁCTICA 6
INFORME
DETERMINACIÓN DE VITAMINA C EN ALIMENTOS VEGETALES
INTRODUCCIÓN
OBJETIVOS
RESULTADOS
DISCUSIÓN
CONCLUSIONES

CAPÍTULO
7
DIGESTIÓN ENZIMÁTICA
DEL ALMIDÓN

PRÁCTICA N°7
DIGESTIÓN ENZIMÁTICA DEL ALMIDÓN
Logro de Identificar la digestión enzimática del almidón mediante la hidrólisis

aprendizaje: por efecto de la amilasa salival
MATERIALES
 01 gradilla
 01 propipeta
 01 tampón citrato 0.1M pH 6.5 frasco 3mL

 01 almidón 1% frasco 6mL
 01 ácido clorhídrico 0.5N 7.5mL
 01 gotero con solución de Lugol
PROCEDIMIENTO
 Tampón citrato 0.1M pH 6.5
Para obtener soluciones de buffer citrato 0.1M de pH 6.5, se deberá pesar mezclar
68.5mL de solución 1 y 31.5mL de la solución 2. Luego se completa a un volumen
total de 200mL con agua destilada
Solución 1: 0.2M de NaH2PO4
Disuelva 24g de NaH2PO4 y lleve a un volumen de 1L con agua destilada.
Solución 2: 0.2M de NaH2PO4*7H2O
Disuelva 53.6g de NaH2PO4*7H2O y lleve a un volumen de 1L con agua destilada.
 Almidón 1%
Colocar 1L de agua destilada en un plancha de calentamiento hasta llegar
a ebullición. Luego, añadir 10g de almidón hasta su disolución.
Conservación: Con el objetivo de que el almidón dure más tiempo, luego
de la ebullición se puede agregar 3g de NaCl por cada 10g de almidón.

Verificación: Colocar en un tubo de ensayo 1MlmL de almidón y agregar 2

– 3 gotas de Lugol. La reacción positive dará una coloración azul – violeta.
 HCl 0.05N
Medir un volume de 1.63mL en una probeta de HCl, luego llevar a un
recipiente y agregar agua destilada hasta completer un volume 1L.
(¡PRECAUCIÓN! el reactibo es fumante, es decir, desprende gases).
 Lugol
En la balanza analítico pesar 6.67g de yoduro de potásico y 3.33g de yodo.
Mezclar los 6.67g de yoduro potásico y 3.33g de yodo previamente pesados en 1L
de agua destilada. Agitar hasta que se disuelva completamente.

INTRODUCCIÓN
El almidón constituye un importante componente de la dieta de los seres

humanos. El proceso de digestión de este nutriente se inicia en la cavidad oral,
lugar en que actúa la α – amilasa salivar, enzima que tiene la propiedad de
hidrolizar los enlaces α 1.4 del almidón y forma polisacáridos de menor peso
molecular.
I. Objetivos
 Hidrolizar el almidón por efecto de la amilasa salival

 Hidrólisis del almidón por efecto de la amilasa salival
Para realizar el experimento se prepararán los siguientes medios
de reacción:
1 2 3
Tampón fosfato 0.1M pH 6.5 (mL) 1.0 1.0 1.0
Almidón 1% (mL) 2.0 2.0 2.0
Ácido clorhídrico 0.5N (mL) - - 1.5
Agua destilada (mL) 2.0 1.5 -
Colocar los tubos de ensayo en el baño maría a 37°C durante 2

minutos, luego adicionar:
1 2 3
Solución de saliva (mL) - 0.5 0.5
Colocar nuevamente los tubos en baño maría y sacar alícuotas de

0.5mL de cada uno de los tubos a los 5, 10, 15 y 20 minutos, y
adicionarlos a los tubos previamente preparados que contienen
2.0mL de ácido clorhídrico 0.05N, de acuerdo al siguiente
esquema:

1 2 3
Ácido clorhídrico 0.05N (mL) 2.0 2.0 2.0
Luego adicionar a cada tubo:
1 2 3
Solución de Lugol (gota) 1 1 1
Dejar en reposo durante 1 minuto y observar el color formado,

Durante el desarrollo del experimento se observarán
modificaciones del color inicial de los tubos como consecuencias
de la acción de la α – amilasa salival.
El experimento concluye cuando uno de los tubos muestre un color
pardo claro.

PRÁCTICA 7
INFORME
DIGESTIÓN ENZIMÁTICA DEL ALMIDÓN
INTRODUCCIÓN
OBJETIVOS
RESULTADOS
DISCUSIÓN
CONCLUSIONES

CAPÍTULO
8
DETERMINACIÓN DE
GLUCEMIA – EFECTO DEL
AYUNO SOBRE EL
CONTENIDO HEPÁTICO

PRÁCTICA N°8
DETERMINACIÓN DE GLUCEMIA
Logro de Determinar el nivel de glucemia en el suero sanguíneo

aprendizaje:
MATERIALES
 01 gradilla
 01 propipeta
 01 suero tubo con tapa rosca 2mL

 01 estándar de glucosa 100mg/dL
 01 reactivo de trabajo de glucosa frasco 6MmL
 01 baño maría a 37°C
PROCEDIMIENTO
 Estándar de glucosa 100mg/dL
En la balanza analítica pesar 0.1g de glucosa (se puede emplear azúcar).
Mezclar en 100mL de agua destilada. Agitar y calentar. Dejar que disuelva
completamente y enfríar.
NOTA: Se debe preparer con al menos 1 día de anticipación.

INTRODUCCIÓN
La glucosa es una sustancia cuyos niveles en la sangre pueden constituir un

indicio, que podría permitir diagnosticar diversas patologías: diabetes mellitus,
mixedema, hipopituarismo, etc.
I. Objetivos
 Determinar el nivel de glucosa en suero sanguíneo.

 Determinación enzimática de glucosa en sangre (Método de
Trinder)
La determinación enzimática de glucosa sanguínea se realiza
utilizando 2 enzimas: glucosa oxidasa y peroxidasa, cuyas acciones
catalíticas en presencia de apropiados reactivos químicos, permitirán
la formación de un compuesto coloreado que es directamente
proporcional a la glucosa existente en el medio de reacción.
Glucosa
oxidasa
Glucosa + H2O + O2 Ácido glucónico + H2O2
Peroxidasa
2H2O2 + 4 – AF + fenol Quinona coloreada + 4 H2O

Preparar los siguientes medios de ensayo:
B x St

Estándar de glucosa (µL) - - 20
Reactivo de trabajo (mL) 2.0 2.0 2.0
Incubar en baño maría a 37°C durante 10 minutos y leer en el

espectrofotómetro a 505nm.

PRÁCTICA 8
INFORME
DETERMINACIÓN DE GLUCEMIA
INTRODUCCIÓN
OBJETIVOS
RESULTADOS
DISCUSIÓN
CONCLUSIONES

PRÁCTICA N°8
EFECTO DEL AYUNO SOBRE EL CONTENIDO DE GLUCÓGENO HEPÁTICO
Logro de Identificación del glucógeno en un hígado en ayunas vs con comida.

aprendizaje:
MATERIALES
 01 gradilla
 04 embudos para tubos de ensayo
 01 plancha de calentamiento
 01 beaker 250mL
 03 pipetas graduadas o volumétricas de 5mL
 03 propipetas
 01 estándar de glucosa frasco 1mL

 01 alcohol etílico 5mL
 01 hidróxido de potasio ̴ KOH 30% 15mL

 01 beaker con hielo 250mL (colocar cuando sea solicitado por el docente)
 01 hígado de roedor en ayunas por 24h 3g
 01 hígado de roedor alimentado Ad libitum 3g
 01 kit de quirúrgico
 01 estándar de glucosa frasco 6mL

PROCEDIMIENTO
 Hígado de roedor
Se deberán solicitar los roedores con 3 días de anticipación a los
colaboradores de veterinaria.
 Estándar de glucosa 5mg/dL
En la balanza analítica pesar 0.005g de glucosa (se puede emplear azúcar)
y luego agregar 100mL de agua destilada. Agitar y calentar. Dejar que
disuelva completamente y enfriar.
NOTA: Se debe preparer con al menos 1 día de anticipación.
 KOH 30%
En un beaker de 250mL colocar 75g de KOH y luego agregar agua
destilada hasta llenar los 250mL. Agitar hasta lograr una mezcla completa.

INTRODUCCIÓN
El hígado es el órgano que almacena glucógeno como un elemento de particular

importancia energética, que le permite al organismo mantener la glicemia
durante los periodos en que no se ingiere alimentos. A diferencia del tejido
muscular, el hígado puede degradar el glucógeno y liberar glucosa a la sangre.
I. Objetivos
 Identificar el glucógeno en un hígado en ayunas versus con comida.

 Preparación de los animales de experimentación
Se dispondrá de 2 ratas en jaulas diferentes, una de las cuales
recibirá su dieta habitual, mientras que la otra será sometida a
un ayuno de 24 horas. A ambas se les proporcionará agua “ad
libitum”.
 Extracción del glucógeno

Se sacrificarán ambos animales previamente anestesiados con
cloroformo y se procederá a extraerles el hígado. Luego, se
realizará una observación del tamaño y color del mencionado
órgano.
Se pesará 0.5g de hígado de cada animal y se colocarán en
tubos de boca ancha, luego se les adicionará 1mL de KOH 30%.
Se colocará en la boca de cada tubo un embudo pequeño y se
le someterá a la ebullición por 30 minutos.
Después de enfriar, se les adicionará 3mL de agua destilada y
5mL de alcohol etílico.
NOTA: Se formará precipitado en aquel hígado que contenga

glucógeno.
1 2 3 4
Disolución de hígado en
1.0 - - -
ayunas (mL)
Disolución de hígado normal
- 1.0 - -
(mL)
Estándar de glucose 5mg/dL
- - 1.0 -
(mL)
Agua destilada (mL) - - - 1.0

PRÁCTICA 8
INFORME
EFECTO DEL AYUNO SOBRE EL CONTENIDO DEL GLUCÓGENO
HEPÁTICO
INTRODUCCIÓN
OBJETIVOS
RESULTADOS
DISCUSIÓN
CONCLUSIONES

CAPÍTULO
9
DETERMINACIÓN DE
TRIGLICÉRIDOS Y
COLESTEROL EN SUERO

PRÁCTICA N°9
DETERMINACIÓN DE TRIGLICÉRIDOS Y COLESTEROL EN SUERO

Determinación del nivel de triglicéridos en suero sanguíneo.
Logro de
aprendizaje: Determinación del nivel de colesterol en suero sanguíneo.
MATERIALES
 01 gradilla
 03 pipetas graduadas o volumétricas de 5mL
 03 propipetas
 01 suero tubo de tapa rosca 2mL

 01 estándar de triglicéridos frasco 2mL
 01 reactivo de trabajo para triglicéridos frasco 36mL
 01 estándar de colesterol frasco 2mL
 01 reactivo de trabajo para colesterol frasco 36mL
 01 vórtex
PROCEDIMIENTO

INTRODUCCIÓN
La determinación de triglicéridos en plasma constituye un dato muy importante

en el manejo de ciertas dislipidemias. Su incremento en el plasma constituye un
factor de riesgo positivo para aterosclerosis.
I. Objetivos
 Determinar el nivel de triglicéridos en suero sanguíneo.

Los triglicéridos del plasma son hidrolizados por una lipoproteína
lipasa (LPL) que forma como productos glicerol y ácidos grasos. El
glicerol en presencia de ATP por acción del glicerol quinasa es
convertido en glicerol – 1 – fosfato, compuesto que es convertido por
el glicerol fosfato oxidasa (GPO) en dihidroxiacetona fosfato y peróxido
de hidrógeno, este compuesto en presencia de 4 – aminofenazona (4
– AF), clorofenol y peroxidasa (POD) es transformado en una
quinonimina de color rojo.
LPL
Triglicérido Ácido graso + Glicerol
Glicerol quinasa
Glicerol + ATP ADP + Glicerol – 1 – fosfato
GPO
Glicerol – 1 – fosfato + O2 Dihidroxiacetona fosfato + H2O2
POD
2H2O2 + 4 – AF + clorofenol Quinonimia roja

B x St

Estándar de TGC (µL) - - 20
Reactivo de trabajo (mL) 2 2 2
Mezclar e incubar durante 5 minutos en baño maría a 37°C, luego leer

en el espectrofotómetro a 505 nm.
< 150 mg/dL

PRÁCTICA 9
INFORME
DETERMINACIÓN DE TRIGLICÉRIDOS
INTRODUCCIÓN
OBJETIVOS
RESULTADOS
DISCUSIÓN
CONCLUSIONES

INTRODUCCIÓN
.
El colesterol es una sustancia cuyos niveles en la sangre mantienen una
estrecha relación con diversas patologías, por cuyo motivo su determinación
puede contribuir al diagnóstico de: aterosclerosis, mixedema, diabetes mellitus,
nefrosis, hipertiroidismo, etc.
I. Objetivos
 Determinar el nivel de colesterol en suero sanguíneo

La técnica utilizada para la determinación se fundamenta en la
hidrólisis previa de los ésteres de colesterol por la colesterol esterasa,
la posterior acción de la enzima colesterol oxidasa que formará
peróxido de hidrógeno en cantidades estequiométricas y finalmente la
participación de la peroxidasa que en presencia de reactivos químicos
formará un compuesto coloreado proporcional a la cantidad de
colesterol existente en la muestra de sangre.
Colesterol esterasa
Esteres de colesterol + H2O Colesterol + AGNE
Colesterol oxidasa
Colesterol + O2 Colesten – 3 – ona + H2O
Peroxidasa
2H2O2 + 4 – AF + fenol Quinonimia coloreada + 4 H2O
B x St

Estándar de colesterol (µL) - - 20
Reactivo de trabajo (mL) 2 2 2
Incubar durante 5 minutos en baño maría a 37°C y leer en el

espectrofotómetro a 505 nm.

PRÁCTICA 9
INFORME
DETERMINACIÓN DE COLESTEROL
INTRODUCCIÓN
OBJETIVOS
RESULTADOS
DISCUSIÓN
CONCLUSIONES

CAPÍTULO
10
HIDRÓLISIS ENZIMÁTICA
DE LOS LÍPIDOS -
CÁLCULO DEL BALANCE
ENERGÉTICO

PRÁCTICA N°10
HIDRÓLISIS ENZIMÁTICA DE LOS LÍPIDOS
Logro de Comprender la acción hidrolítica de las enzimas sobre los lípidos.

aprendizaje:
MATERIALES
 01 gradilla
 01 bureta de 25Ml
 01 soporte universal con pinza mariposa
 01 fenolftaleína gotero 25mL

 01 hidróxido de sodio ̴ NaOH 0.05N gotero 25mL
 01 solución de pancreatina 1% frasco 100 mL

 01 sales biliares 1% frasco 50 mL
 01 aceite vegetal 30 mL
 01 tampón fosfato 0.1M pH 7.8 frasco 5 0mL
PROCEDIMIENTO
 Fenolftaleína
Pesar 1.25gr de fenolftaleína y diluir con etanol al 95% hasta un volumen
de 250mL.
 Hidróxido de sodio NaOH 0.05N
Pesar 1.9g de NaOH en la balanza analítica, luego agregar agua destilada
hasta completar un volumen de 1L. (¡PRECAUCION!, la reacción es
exotérmica, es decir que desprende calor).
Es recomendable almacenar en envases de plástico para mayor duración
del reactivo.
 Pancreatina al 1%
En un beaker de 1L colocar 10gr de Pancreatina y luego agregar agua
destilada hasta llenar 1L. Agitar hasta lograr una mezcla completa.
 Sales biliares al 1%
En un beaker de 1L colocar 10gr de Sales Biliares y luego agregar agua
destilada hasta llenar 1L. Agitar hasta lograr una mezcla completa.

 Tampón fosfato 0.1M pH 7.8

Para obtener las soluciones buffer fosfato 0.1M a pH de 7.8, se mezcla 8.7mL
de Solución 1 y 91.3mL de la Solución 2. Luego se completa a un volumen
total de 200mL con agua destilada.
Solución 1: 0.2M de NaH2PO4

Disuelva 24g de NaH2PO4 y lleve a un volumen de 1Litro con agua destilada.
Solución 2: 0.2M de Na2HPO4Disuelva 53.6g de Na2HPO4*7H2O y lleve a

un volumen de 1Litro con agua destilada.

INTRODUCCIÓN
Los lípidos de la dieta son hidrolizados a nivel del yeyuno por acción de la lipasa
pancreática. En este proceso juegan un papel muy importante las sales biliares,
compuestos que tienen la propiedad de emulsionar los lípidos para una eficiente
acción de la lipasa pancreática.
I. Objetivos
 Hidrolizar a los lípidos por la lipasa pancreática.

Para la demostración experimental de la acción hidrolítica de esta
enzima, se prepararán los siguientes medios de reacción;
B 1 2 3
Tampón fosfato 0.1M (mL) 2.0 2.0 2.0 -

Aceite (mL) 1.0 1.0 1.0 1.0
Sales biliares 1% (mL) 2.0 2.0 - 2.0
Agua destilada (mL) 5.0 - 2.0 2.0
Añadir 2 gotas de fenolftaleína a cada uno de los tubos, luego

adicionar gota a gota una solución de NaOH 0.05N hasta que aparezca
una coloración débilmente grosella estable, luego adicionar:
B 1 2 3
Pancreatina 1% (mL) - 5.0 5.0 5.0
Volver a incubar los tubos a la misma temperatura durante 1 hora,

agitándolos cada 5 minutos.
Al finalizar el tiempo de incubación, adicionar nuevamente a cada tubo

2 gotas de fenolftaleína y proceder a titular, utilizando una bureta, con
una solución de NaOH 0.05N hasta que aparezca nuevamente la
coloración ligeramente grosella.
Los resultados se expresarán como miliequivalentes de ácido

esteárico liberado por acción de la lipasa pancreática.

PRÁCTICA 10
INFORME
HIDRÓLISIS ENZIMÁTICA DE LOS LÍPIDOS
INTRODUCCIÓN
OBJETIVOS
RESULTADOS
DISCUSIÓN
CONCLUSIONES

CAPÍTULO
11
CÁLCULO DEL
BALANCE ENERGÉTICO

PRÁCTICA N°11
CÁLCULO DEL BALANCE ENERGÉTICO
Calculo de las propias necesidades energéticas (gasto energético)

del alumno
Logro de Calculo de la ingesta energética del alumno
aprendizaje:
Determinación del balance energético del alumno
Determinación del % de adecuación de la dieta del alumno
Esta práctica no requerirá de materiales ni reactivos de Laboratorio.

Únicamente del Manual de laboratorio de Bioquímica I.
El docente podrá solicitar materiales adicionales, previo requerimiento

anticipado.

INTRODUCCIÓN
Los lípidos de la dieta son hidrolizados a nivel del yeyuno por acción de la lipasa
pancreática. En este proceso juegan un papel muy importante las sales biliares,
compuestos que tienen la propiedad de emulsionar los lípidos para una eficiente
acción de la lipasa pancreática.
El Balance Energético es el equilibrio que debe existir entre el gasto energético
y diario de un individuo, de acuerdo a su metabolismo basal, edad, sexo,
actividad física y la ingesta energética diaria a través de los macronutrientes de
los alimentos consumidos.
Si predomina el gasto energético sobre la ingesta energética, en un tiempo
prolongado, el individuo tiende a perder sus reservas, y como consecuencia se
adelgaza. Por otro lado, si predomina la ingesta, el exceso de energía se
acumulará en el cuerpo, en forma de triglicéridos, en el tejido adiposo,
observándose un aumento de peso.
Para realizar este balance, es necesario, calcular, en forma independiente, el
gasto energético en las 24 horas de cualquier día rutinario, de acuerdo a la tasa
metabólica basal (TMB) y la actividad física realizada, luego compararlo con la
ingesta energética que proporcionaron los alimentos consumidos el mismo día,
utilizando la Tabla de composición química de los alimentos peruanos y Tabla
auxiliar de alimentos peruanos.
I. Objetivos
 Calcular las propias necesidades energéticas (gasto energético)
del alumno
 Calcular la ingesta energética del alumno
 Determinar el balance energético del alumno
 Determinar el % de adecuación de la dieta del alumno

 Calcular la ingesta energética, utilizando:
- Tabla de trabajo
- Listado de alimentos consumidos en 24 horas
- Tabla de composición química de alimentos peruana
- Tabla auxiliar de alimentos peruana
DISPONIBLE EN:
-Tablas Auxiliares para la Formulación y Evaluación de Regímenes Alimentarios (CENAN)
http://www.ins.gob.pe/repositorioaps/0/5/jer/doc_tec_norm/TAFERA_1_compressed.
pdf
- Tablas Peruanas de Composición de Alimentos (CENAN)
http://www.ins.gob.pe/insvirtual/images/otrpubs/pdf/Tabla%20de%20Alimentos.pdf

“CÁLCULO DE LA INGESTA ENERGÉTICA”
a) En la lista de consumo de alimentos, desglosar las preparaciones de

todo el día en cada uno de sus constituyentes. En columnas ordenadas
calcular mediante regla de tres el contenido de proteínas, grasas y
carbohidratos de cada alimento respectivamente, según la cantidad que
se haya consumido.
Ejemplo 1:
 Ingesta de leche fluida de vaca = 250 mL
 Leche fluida de vaca en 100 mL contiene 3.1gr de proteínas
Para calcular la cantidad de proteína que existe en 250 mL de leche
fluida de vaca:
Leche fluida de vaca en 250 mL “x”
Leche fluida de vaca en 100 mL 3.1gr de proteínas
X = 7.75gr de proteínas
Ejemplo 2:
 Ingesta de pulpa de carne vacuno = 90gr
 Pulpa de carne vacuno en 100gr contiene 21.3gr de proteínas
 Para calcular la cantidad de proteína que existe en 90gr de pulpa
de carne de vacuno:
Pulpa de carne de vacuno en 90gr “x”
Pulpa de carne de vacuno en 100gr 21.3gr de proteínas
X = 19.17gr de proteínas
La tabla de Composición química de los alimentos

indica los valores en 100 g de porción comestible
cruda (a menos que indique los valores en cocido).

b) Totalizar luego de cada una de las tres columnas, y el valor obtenido

en gramos de cada macronutriente se multiplica por el factor
respectivo.
Proteína x 4.0 Kcal
Grasa x 9.0 Kcal
Carbohidratos x 4.0 Kcal
c) Sumar los totales, y el resultado obtenido corresponde a la cantidad de

energía (Kilocalorías) que aportan los alimentos consumidos ese día.
TABLA DE TRABAJO
Cantidad Proteína Grasa CHO

Cantidad Energía
ALIMENTO en medida (gr) (gr) (gr)
(gr) (Kcal)
casera
Desayuno
SUB – TOTAL
ALMUERZO
SUB – TOTAL
CENA
SUB – TOTAL
MERIENDAS
SUB – TOTAL
FACTOR x4 x9 x4
TOTAL (Kcal)
Ingesta Energética = Ʃ (kcal)/d

 Calcular el gasto energético, utilizando:

- Ecuaciones para calcular la tasa metabólica basal (TMB)
- Tabla de categorías y factores de la actividad física
“CÁLCULO DEL GASTO ENERGÉTICO”
G.E. = TMB x FACTOR DE ACTIVIDAD
a) Se calcula la tasa metabólica basal (TMB) o gasto en reposo, aplicando

la fórmula de la siguiente tabla:
Ecuaciones para calcular la tasa metabólica basal (TMB) a partir del

peso corporal (P).
RANGO DE EDAD (años) Kcal/día

HOMBRES
0–3 60.9 (P) – 54
3 – 10 22.7 (P) + 495
10 – 18 17.5 (P) + 651
18 – 30 15.3 (P) + 679
30 – 60 11.6 (P) + 879
> 60 13.5 (P) + 487
MUJERES
0–3 61.0 (P) – 51
3 – 10 22.5 (P) + 499
10 – 18 12.2 (P) + 746
18 – 30 14.7 (P) + 496
30 – 60 8.7 (P) + 829
> 60 10.5 (P) + 596
Fuente: Organización Mundial de la Salud (OMS). 1985.

Ejemplo 1:
La TMB para una estudiante de 19 años de edad, con 55 kg. de peso,

será:
TMB = 14.7 (P) + 496

TMB = 14.7 (55) + 496
TMB = 1305 Kcal/d
b) Con la lista de actividades, se agrupan éstas por categorías, tomando

en cuenta el tiempo empleado (en minutos) y multiplicándolas por el
múltiplo de la TMB o factor de actividad (o gasto de energía promedio
por actividad). Las categorías de actividad física son las siguientes:
ACTIVIDAD FÍSICA CATEGORÍA MÚLTIPLO DE LA TMB o

FACTOR DE ACTIVIDAD
Dormir, descansar Reposo 1.0
Manejando automóvil,
escribiendo a máquina,
atendiendo a clase, trabajando Muy ligera 1.5
en laboratorio, viendo TV,
cocinando, planchando, jugando
cartas, tocando un instrumento
musical
Caminando a 4 – 5km/h,
atendiendo al público, limpieza Ligera 2.5
de la casa, cuidando niños,
trabajo de carpintería y
electricidad, jugar tenis de mesa
Caminando a 5.5 – 6.5km/h,
manejando bicicleta, bailando, Moderada 5.0
trabajando en jardinería,
cargando bultos pesados
Jugando fútbol, vóley, básquet,
caminando con carga pesada Pesada 7.0
cuesta arriba, cortando árboles,
trabajo de excavación manual
* Asignar 1/3 de hora para el mantenimiento cardiovascular y

muscular. Recomendación FAO/OMS 1985.

1) Ordenar las actividades de acuerdo al tiempo empleado:
HORA ACTIVIDAD TIEMPO

6:00 – 6:15 a.m. Aseo personal 15´
6:15 – 6:45 a.m. Tomar desayuno 30´
Caminar para tomar el
6:45 – 7:00 a.m. 15´
bus
7:00 – 8:00 a.m. Viajar en bus 60´
8:00 – 10:00 a.m. Asistir a clase 120´
etc. (Debe completar 1440 minutos).
2) Agrupar por categoría de actividad:
TIEMPO MÚLTIPLO DE FACTOR DE

CATEGORÍA EMPLEADO LA TMB O TMB
DE ACTIVIDAD (HORA) FACTOR DE PONDERADO
ACTIVIDAD
En reposo 8 1.0 8.0

Muy ligera 14 1.5 21.0
Ligera 2 2.5 5.0
TOTAL 34.0
Promedio / hora 1.417
(Factor TMB/24h)
Gasto energético 1850.0
(1.417 x TMB)
Gasto Energético = 1850 Kcal/d
 Calcular el balance energético:
Balance Energético = Ingesta Energética – Gasto Energético
Obtener la respuesta respetando el signo (+) (exceso) ó (-)

(déficit)
EQUILIBRIO Ingesta energética = Gasto energético
BALANCE (+) Ingesta energética > Gasto energético
BALANCE (-) Ingesta energética < Gasto energético

 Calcular el porcentaje de adecuación de la dieta
𝐸𝑛𝑒𝑟𝑔í𝑎 𝑖𝑛𝑔𝑒𝑟𝑖𝑑𝑎
% 𝑑𝑒 𝑎𝑑𝑒𝑐𝑢𝑎𝑐𝑖ó𝑛 = 𝑥 100
𝐸𝑛𝑒𝑟𝑔í𝑎 𝑟𝑒𝑞𝑢𝑒𝑟𝑖𝑑𝑎
Energía ingerida = Ingesta de alimentos

Energía requerida = Gasto energético
Analizar el % de adecuación de la dieta obtenido, según los

siguientes parámetros:
VALORES NORMALES 90 – 110%

DÉFICIT < 90%
EXCESO > 110%

PRÁCTICA 11
INFORME
CÁLCULO DEL BALANCE ENERGÉTICO
INTRODUCCIÓN
OBJETIVOS
RESULTADOS
DISCUSIÓN
CONCLUSIONES

CAPÍTULO
12
DETERMINACIÓN DE
HEMOGLOBINA –
DETERMINACIÓN DE UREA

PRÁCTICA N°12
DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA Y UREA

Determinación de hemoglobina en sangre.
Logro de
aprendizaje: Determinación de urea en suero sanguíneo.
MATERIALES
 01 gradilla
 01 pipeta volumétrica o graduada 5 mL
 01 pipera volumétrica o graduada 10 mL
 02 propipetas
 01 sangre tubo tapa rosca 2mL

 01 estándar de hemoglobina frasco 1mL
 01 reactivo de trabajo para hemoglobina frasco 11 mL
 01 suero tubo de tapa rosca 2mL
 01 estándar de urea (0.60g/L) frasco 1mL
 01 ureasa frasco 1 mL
 01 reactivo de trabajo 1 frasco 12 mL
 01 reactivo de trabajo 2 frasco 12 mL
 01 vórtex
PROCEDIMIENTO

INTRODUCCIÓN
La hemoglobina es una proteína que tiene un papel muy importante en el

transporte de gases en todo el organismo. Sus niveles en sangre mantienen una
estrecha relación con la anemia, policitemia o deshidratación.
I. Objetivos
 Determinar el nivel de hemoglobina en sangre.
II. Fundamento teórico (Método de Drabkin)

La determinación de hemoglobina se realiza utilizando el reactivo de
Drabkin, en cuya composición se encuentra el ferricianuro de potasio,
cianuro de potasio y bicarbonato de sodio. El ferricianuro transforma
las hemoglobinas en metahemoglobina, compuesto que luego
reacciona con el cianuro de potasio para formar
cianometahemoglobina, que tiene la propiedad de absorber a 540 nm.
B x St
Sangre (µL) - 20 -
Estándar de hemoglobina
(µL) - - 20
Reactivo de trabajo (mL) - 5 5
Agua destilada (mL) 5 - -
Mezclar y después de 3 minutos leer en el espectrofotómetro a 540

nm.

PRÁCTICA 12
INFORME
DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA
INTRODUCCIÓN
OBJETIVOS
RESULTADOS
DISCUSIÓN
CONCLUSIONES

INTRODUCCIÓN
La urea es un compuesto nitrogenado que se sintetiza en el hígado a partir del

ion amonio, bicarbonato y ATP. La enzima que cataliza esta primera reacción es
la carbamoil fosfato sintetasa I, cuya actividad es regulada por el N – acetil
glutamato. La excreción de urea por la orina depende fundamentalmente de la
ingesta proteica. Un incremento de urea en sangre puede ocurrir a causa de una
probable disfunción renal.
I. Objetivos
 Determinar el nivel de urea en suero.

La determinación de urea en orina se fundamenta en la acción que
ejerce la enzima ureasa sobre la urea, descomponiéndola en anhídrido
carbónico y amoniaco. Este amoniaco reacciona con hipoclorito y fenol
en medio alcalino, formando un compuesto coloreado denominada
azul de indofenol, cuya intensidad es proporcional a la concentración
de urea.

Preparar el siguiente sistema:
B x St
Estándar de urea (µL) - - 20

Suero (µL) - 20 -
Ureasa (gota) 1 1 1
Mezclar mediante agitación e incubar a 37°C por 5 minutos.
B x St
Reactivo 1 (mL) 1 1 1
Reactivo 2 (mL) 1 1 1
Mezclar e incubar 37°C por 5 minutos y leer en el espectrofotómetro a

540 nm.

PRÁCTICA 12
INFORME
DETERMINACIÓN DE UREA
INTRODUCCIÓN
OBJETIVOS
RESULTADOS
DISCUSIÓN
CONCLUSIONES

Bioquímica I

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GUÍA DE LABORATORIO 2019 – 0

0 Autores: Salazar, J.; Salazar, Y.

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Instrucciones generales y medidas de bioseguridad 2

CAPÍTULO 1. Preparación de soluciones amortiguadoras 7

CAPÍTULO 3. Determinación de ácido úrico en suero sanguíneo 24

CAPÍTULO 4. Determinación de proteínas plasmáticas 28

CAPÍTULO 5. Factores que afectan la actividad enzimática 33

CAPÍTULO 6. Determinación de vitamina C en alimentos vegetales 40

CAPÍTULO 7. Digestión enzimática del almidón 45

CAPÍTULO 8. Determinación de glucemia– Efecto del glucógeno en ayuno 51

CAPÍTULO 9. Determinación de triglicéridos y colesterol en suero 59

CAPÍTULO 10. Hidrólisis de lípidos 66

CAPÍTULO 11. Cálculo del balance energético 71

CAPÍTULO 12. Determinación de hemoglobina y urea 81

0 Autores: Salazar, J.; Salazar, Y.

La química es una ciencia activa y en continuo movimiento; tiene una

La enseñanza de la Química equilibra el desarrollo teórico de sus

Al término de cada práctica se propone un cuestionario de preguntas teóricas

1 Autores: Salazar, J.; Salazar, Y.

INSTRUCCIONES GENERALES Y MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD

1. LABORATORIO DE QUÍMICA 1, 2, 3 y 4 UCSUR

El Laboratorio es un ambiente físico estratégico donde se desarrolla

2. INSTRUCCIONES PARA EL TRABAJO EN EL LABORATORIO

2 Autores: Salazar, J.; Salazar, Y.

3. MEDIDAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO

b) Comportamiento de los alumnos durante las prácticas

3 Autores: Salazar, J.; Salazar, Y.

experimentos sólo se realizan con autorización del profesor.

4. ELEMENTOS DE PROTECCIÓN PERSONAL Y DE LOS EQUIPOS

4 Autores: Salazar, J.; Salazar, Y.

b) Lentes de seguridad y respiradores

5 Autores: Salazar, J.; Salazar, Y.

d) Botiquín de primeros auxilios

6 Autores: Salazar, J.; Salazar, Y.

7 Autores: Salazar, J.; Salazar, Y.

PREPARACIÓN DE SOLUCIONES AMORTIGUADORAS

Determinación el pH teórico y práctico de diferentes soluciones

I. MATERIALES EN LA MESA DE LOS ESTUDIANTES

II. REACTIVOS EN LA MESA DE LOS ESTUDIANTES

 03 micropipeta de 100 a 1000µL y/o 5 a 50µL

III. MATERIALES EN LA MESA CENTRAL DEL PROFESOR

 01 ácido clorhídrico concentrado ~ HCl gotero 25 mL

8 Autores: Salazar, J.; Salazar, Y.

La preparación de todo reactivo expresado en Molaridad (M) se realiza utilizando

9 Autores: Salazar, J.; Salazar, Y.

El poder amortiguador de los cambios de pH en un determinado sistema; es

II. Fundamento teórico

El sistema amortiguador dentro de las células es el fosfato, está

(𝐻2 𝑃𝑂4 )1− (𝑎𝑐) + (𝑂𝐻)1−. (𝑎𝑐) → (𝐻𝑃𝑂4 )2− (𝑎𝑐) + 𝐻2 𝑂

El receptor de protón o base en el fosfato es la base conjugada del

10 Autores: Salazar, J.; Salazar, Y.

(𝐻𝑃𝑂4 )2− (𝑎𝑐) + (𝐻)1+ (𝑎𝑐) → (𝐻𝑃𝑂4 )1− (𝑎𝑐)

El sistema amortiguador extracelular es el carbonato, está formado por

𝐶𝑂2 (𝑎𝑐) + 𝐻2 𝑂 → 𝐻2 𝐶𝑂3 (𝑎𝑐)

El ácido carbónico del amortiguador carbonato de la sangre neutraliza