Description

Organism: Mus musculus, mouse
Strain: NIH/Swiss
Product Sheet Tissue: embryo
Cell Type: fibroblast
NIH/3T3 (ATCC® CRL­1658™) Age: embryo
Morphology: fibroblast
Growth Properties: adherent
Please read this FIRST
Batch­Specific Information
Storage Temp.
  Refer to the Certificate of Analysis for batch­specific test results.
liquid nitrogen
vapor phase
SAFETY PRECAUTION

ATCC highly recommends that protective gloves and clothing always be used and a full face mask always be
Biosafety Level worn when handling frozen vials. It is important to note that some vials leak when submersed in liquid nitrogen
 
1 and will slowly fill with liquid nitrogen. Upon thawing, the conversion of the liquid nitrogen back to its gas
phase may result in the vessel exploding or blowing off its cap with dangerous force creating flying debris.

Unpacking & Storage Instructions
Intended Use
1.  Check all containers for leakage or breakage.
This product is intended for research use only. It is not
2.  Remove the frozen cells from the dry ice packaging and immediately place the cells at a temperature
intended for any animal or human therapeutic or
below ­130°C, preferably in liquid nitrogen vapor, until ready for use.
diagnostic use.

Handling Procedure for Frozen Cells
Complete Growth Medium

To insure the highest level of viability, thaw the vial and initiate the culture as soon as possible upon receipt. If
The base medium for this cell line is ATCC­formulated
upon arrival, continued storage of the frozen culture is necessary, it should be stored in liquid nitrogen vapor
Dulbecco's Modified Eagle's Medium, Catalog No. 30­
phase and not at ­70°C.  Storage at ­70°C will result in loss of viability.
2002. To make the complete growth medium, add the
following components to the base medium: bovine calf
1.  Thaw the vial by gentle agitation in a 37°C water bath. To reduce the possibility of contamination, keep
serum to a final concentration of 10%. the O­ring and cap out of the water.  Thawing should be rapid (approximately 2 minutes).
2.  Remove the vial from the water bath as soon as the contents are thawed, and decontaminate by
dipping in or spraying with 70% ethanol. All of the operations from this point on should be carried out
Citation of Strain
under strict aseptic conditions.
3.  Transfer the vial contents to a centrifuge tube containing  9.0 mL complete growth medium and spin at
If use of this culture results in a scientific publication, it
approximately 125 x g for 5 to 7 minutes.
should be cited in that manuscript in the following
4.  Resuspend cell pellet with the recommended complete growth medium (see the specific batch
manner: NIH/3T3 (ATCC® CRL­1658™)
information for the culture recommended dilution ratio) and dispense into a 25 cm2 or a 75 cm2 culture
flask.  It is important to avoid excessive alkalinity of the medium during recovery of the cells.  It is
suggested that, prior to the addition of the vial contents, the culture vessel containing the complete
growth medium be placed into the incubator for at least 15 minutes to allow the medium to reach its
normal pH (7.0 to 7.6).  
5.  Incubate the culture at 37°C in a suitable incubator.  A 5% CO2 in air atmosphere is recommended if
using the medium described on this product.
         

Handling Procedure for Flask Cultures

The flask was seeded with cells (see specific batch information) grown and completely filled with medium at
ATCC to prevent loss of cells during shipping.
1.  Upon receipt visually examine the culture for macroscopic evidence of any microbial contamination.
Using an inverted microscope (preferably equipped with phase­contrast optics), carefully check for
American Type Culture Collection any evidence of microbial contamination.  Also check to determine if the majority of cells are still
PO Box 1549
attached to the bottom of the flask; during shipping the cultures are sometimes handled roughly and
Manassas, VA 20108 USA
www.atcc.org
many of the cells often detach and become suspended in the culture medium (but are still viable).
2.  If the cells are still attached, aseptically remove all but 5 to 10 mL of the shipping medium.  The
800.638.6597 or 703.365.2700 shipping medium can be saved for reuse.  Incubate the cells at 37°C in a 5% CO2   in air atmosphere
Fax: 703.365.2750 until they are ready to be subcultured.
Email: Tech@atcc.org
 
3.  If the cells are not attached, aseptically remove the entire contents of the flask and centrifuge at
Or contact your local distributor 125 x g for 5 to 10 minutes.  Remove shipping medium and save.  Resuspend the pelleted cells in 10
mL of this medium and add to 25 cm2 flask.  Incubate at 37°C in a 5% CO2 in air atmosphere until cells
Page 1 of 3
 are ready to be subcultured.

Subculturing Procedure

Volumes are given for a 75 cm2 flask. Increase or decrease the amount of dissociation medium needed
Product Sheet proportionally for culture vessels of other sizes. Corning® T­75 flasks (catalog #430641) are recommended
for subculturing this product.
NIH/3T3 (ATCC® CRL­1658™) 1.  Remove and discard culture medium.
2.  Briefly rinse the cell layer with 0.25% (w/v) Trypsin ­ 0.53 mM EDTA solution to remove all traces of
serum which contains trypsin inhibitor.
Please read this FIRST 3.  Add 2.0 to 3.0 mL of Trypsin­EDTA solution to flask and observe cells under an inverted microscope
until cell layer is dispersed (usually within 5 to 15 minutes).
Note: To avoid clumping do not agitate the cells by hitting or shaking the flask while waiting for the
Storage Temp.
  cells to detach. Cells that are difficult to detach may be placed at 37°C to facilitate dispersal.
liquid nitrogen
4.  Add 6.0 to 8.0 mL of complete growth medium and aspirate cells by gently pipetting.
vapor phase 5.  Add appropriate aliquots of the cell suspension to new culture vessels.
6.  Incubate cultures at 37°C.

DO NOT ALLOW THE CELLS TO BECOME CONFLUENT Subculture at least twice per week at 80% confluence
 
Biosafety Level
or less.
1 Subcultivation Ratio: Inoculate 3 to 5 X 103 cells/cm2
Medium Renewal: Twice per week
Note: The serum used is important in culturing this line. Calf serum is recommended and not fetal bovine
Intended Use serum. The calf serum initially employed and found to be satisfactory was from the Colorado Serum Co.
Denver.
This product is intended for research use only. It is not
intended for any animal or human therapeutic or Cryopreservation Medium
diagnostic use.
Complete growth medium described above supplemented with 5% (v/v) DMSO. 
Complete Growth Medium Cell culture tested DMSO is available as ATCC Catalog No. 4­X.

The base medium for this cell line is ATCC­formulated Comments
Dulbecco's Modified Eagle's Medium, Catalog No. 30­
2002. To make the complete growth medium, add the Tested and found negative for ectromelia virus (mousepox).
following components to the base medium: bovine calf
serum to a final concentration of 10%.
References

Citation of Strain
References and other information relating to this product are available online at www.atcc.org.

If use of this culture results in a scientific publication, it
should be cited in that manuscript in the following
Biosafety Level: 1
manner: NIH/3T3 (ATCC® CRL­1658™)
Appropriate safety procedures should always be used with this material. Laboratory safety is discussed in
the current publication of the Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories from the U.S.
Department of Health and Human Services Centers for Disease Control and Prevention and National Institutes
for Health.

ATCC Warranty

ATCC® products are warranted for 30 days from the date of shipment, and this warranty is valid only if the
product is stored and handled according to the information included on this product information sheet. If the
ATCC® product is a living cell or microorganism, ATCC lists the media formulation that has been found to be
effective for this product. While other, unspecified media may also produce satisfactory results, a change in
media or the absence of an additive from the ATCC recommended media may affect recovery, growth and/or
function of this product. If an alternative medium formulation is used, the ATCC warranty for viability is no
longer valid.

American Type Culture Collection
Disclaimers
PO Box 1549
Manassas, VA 20108 USA
www.atcc.org This product is intended for laboratory research purposes only. It is not intended for use in humans.
While ATCC uses reasonable efforts to include accurate and up­to­date information on this product sheet,
800.638.6597 or 703.365.2700 ATCC makes no warranties or representations as to its accuracy. Citations from scientific literature and
Fax: 703.365.2750
patents are provided for informational purposes only. ATCC does not warrant that such information has been
Email: Tech@atcc.org
  confirmed to be accurate.
Or contact your local distributor This product is sent with the condition that you are responsible for its safe storage, handling, and use. ATCC
is not liable for any damages or injuries arising from receipt and/or use of this product. While reasonable effort
Page 2 of 3
 is made to insure authenticity and reliability of materials on deposit, ATCC is not liable for damages arising from
the misidentification or misrepresentation of such materials.
Please see the enclosed Material Transfer Agreement (MTA) for further details regarding the use of this
product. The MTA is also available on our Web site at www.atcc.org

Product Sheet Additional information on this culture is available on the ATCC web site at www.atcc.org.
© ATCC 2019. All rights reserved. ATCC is a registered trademark of the American Type Culture Collection. [06/19]

NIH/3T3 (ATCC® CRL­1658™)

Please read this FIRST

Storage Temp.
  liquid nitrogen
vapor phase

 
Biosafety Level
1

Intended Use

This product is intended for research use only. It is not
intended for any animal or human therapeutic or
diagnostic use.

Complete Growth Medium

The base medium for this cell line is ATCC­formulated
Dulbecco's Modified Eagle's Medium, Catalog No. 30­
2002. To make the complete growth medium, add the
following components to the base medium: bovine calf
serum to a final concentration of 10%.

Citation of Strain

If use of this culture results in a scientific publication, it
should be cited in that manuscript in the following
manner: NIH/3T3 (ATCC® CRL­1658™)

American Type Culture Collection
PO Box 1549
Manassas, VA 20108 USA
www.atcc.org

800.638.6597 or 703.365.2700
Fax: 703.365.2750
Email: Tech@atcc.org
 
Or contact your local distributor

Page 3 of 3