EFEK ISOFLAVON FITOESTROGEN DARI EKSTRAK Pueraria lobata TERHADAP MEMORI DAN AKTIVITAS KOLINERGIK DI HIPPOKAMPUS CA1 PADA TIKUS HIPOESTROGEN Fathiyah Safithri*, Mulyohadi Ali"*, A. Hidajat‘*, Setyawati S* Abstract Data fom retapetve and sasecontrole showed that estrogen replacment therapy (ERT) cold prevet ang delayed aginst Alepimer Disses (AD). The mig of ERT is stl controesial becuse oftheir long-term ide fet Tflaon asa part of plytesirarn Das poenial efit ax om abernative sbsitate for ERT. The aie of this study is 0 examine the eect of pytesogen fom Puraria Iebate extra i iereaxing mewory’sfamcion end whtbe tocar bythe increased of chalnergic activity in CA bippocumpas. Exploration study perforoed by tre stp. First derived gone and daidzein concentration in Pnerarialbata extract as xi of dese demining Second, copborectomy performed to made a bpoctrgene rat model; ond third, determined method memory’ funtion in rats. This stay aed tventy fie female Ractns novergias strain Westar, 10 11 seks of oe five rats were normal rats (N) as fist grep cand toenty rat were bypottragnie vats fr 24, 3%, 2%, and S* grasp, AUl ofthe byposregenc rat were desided into 4 gromps, eth 5 rat Hypossrgonie rate romp milbentLlaton Geristin Daidein spplement (OVX), bpoutroene rate group with Lsflaven Genistein Daidgin nppamans (OVEIGD) dosage of 15, 30, ard 60 ma) Raweiht | dy each, The IGD ws gien for 21 days. The Mernis Water Morris (MIVM) tet wos performed in 178, 18%, 19, 20%, and 21° day, On 22% day rats were hile, Progen scion of the brain mes performed immediately. Choiegie air on CAT hippocampus were exanined with ACHE: staining. A sigifiantdifrenc mas found ‘x memory funtion and colnergeatvites on CAP hppacanpns between OVX and OVX-+IGD groyps at al does (p wale = 0,000 of tah), No significant dierne on IGD efi toward brain weight (90,936) and pyramidal cll number on CAT hippocampus 70,961), 1¢ mas agg that inrssed snemary function on OVR-IGD groups were ceased by the inroared of colinegis activites an CAt bippocanpas Key word : Laflaones; phyfocsiegem: Genstin: Daideeiy Pararia lata; Memory; cbolnergie: Abstrak Data epidemic! dar studi retopekti maupan earscontrs! telah mecunjukkan baba Teapi Suith Esiregen (TSE) dapat manctgob etanpun mnperlambat tanya penyokit Alzbeiner (PA), Pensahaian TSE slama ini marth benyak kantrovesi berkaitan lenges masala ef raping jangha panjang, Lnfloron yang merspakor begian dari fitestregen diketabui berptens sebagl atternatif pengganti TSE. Pevehtian int Blakukan wntuk mengetabi apaab iolaon ftecrgen dari cksrok Pueraria lobate dat meninghathan ung eri dan seks watuk mengetakni spakah peninghatan fant memoriterebut mclahi peninghatan abiifitas kolnek di ‘ippraopns, barons ela ink gongeuen tenor rig dbubngan dengan enurancn akties katmergibe Ponltian ii diva dengan stud pedabuvan yoy dln waa menencuca hadar genistein den didn dala esa, Pueraria bata, ha, tab ei wade tis bioestregen mae cferchtoni dan hrtiga, untuk renetvkan retode sa. yang akan dipakai untuk mesial fangs! meneri kas, Pond int menganaken 25 obar tikus bona strain Wistar sia 10-11 ming yang teri dari 1 keep. tka vormal (N) don 4 kelonpok ens bipasirgen. Keo tikus bpoestegen ni tei dari bnlonpok OVX, dar 3 belmpek OVX sag Abert Irelewon Gesistein Datdayin (IGD) ekstrak Puearialebata dengan doss masing 15, 30 dan 6Ome/ kgBB/ tr, Pemberian IGD hstak Prerarialbatadilakkan per soude lamb slemea 21 bar. Tes memri dengan mtade Merris Water Mage (MIM) dias pada bari ke-t?, 18, 19, 20 dan 21. Hari ke-22 tks dimattkan, diambilotaknya, komudlan dipoteng scarajrggn selon dat terakbir dilabuitan pengecatan ACHE. untuk mengukar akticites kalinegih hippocampus. Didspatkan jrongkatan fungi momar dan aktvtas elnergi ada kelorpok OVXAIGD pads tees dss dbcnding elope OVX (h masing-mering=0,000). Tidak diepathan perudasn pengarnb nate terbaap barat olak =0,936) dan juni sel piramidal bippokempus CA1 (P=0,961) antara kshnypok OVX dat ‘elanpok OVXIGD pada semua desis. Didege peninghatan fungsi memori abit peer IGD dark ekstra, Paeraia inate tejadh ali stuaya relat eninghatan abtivilas holiest di CA1 bippokanpas Kata kane: Lusflaon; Fitesirgens Gonitin; Dain; Puoraria bata; Momuri; Kolinegib. “Wahasiawe Program Studi Biome Pasca Sarjana Universitas Branijaya *Lthoratoriney Fartatnig| Fakltas Kedokteran Universitas Bravijaya ‘s*°Bagian Um Kebidanan dan Kandungan Rumab Sakit Saifil Anwar 29PENDAHULUAN Dengan bertambah majuaya pembangunan terutama pembangunan bidang keschatan, maka semakin smeningkat pula usia harapan hidup, Deagan mesingkataya usia harapan hidup, proporsi perempuan lanjut usia ‘ansia) juga mengalami peningkatan, Menueue data hasil Sengus Penducluk Indonesia oleh Badan Pusat Statistle tahun 1997 juumlah pendoduk wanita mencapai 100,9 jura ‘orang, termasub di dalamnya 14,3 uta wanita menopause, (BPS, 1997) sedangkan pada tahun 2000 jumlah wanita meningkat menjadi 1028 juta jiwa. dengan jamlah wanit menopause mencapai 15,5 jura, (BPS, 2000). Berbagai masalah fisik biologik, psikologil, dan sosial sakan muncel pada usia lanjur sebagai skibat dati proses ‘meaua dan are penyakie degeneradif yang muncol seiting dengan pertambahen usia teemasuk penyakit demensia tipe alzheimer (Kandel ER dl, 2000) trogen dapat melindung! otak dari proses degencrasi terscbut. Salah satu tempat Kerja estrogen di tak adalah di hippokampus, yaitu suary area di otak yang bertanggung jawab pada fungsi memori. (McEwen BS, 2001, Jellinger KA, 2001), Subtegio CA1 merupakan regio di hippokampus yang paling sering mengalami gangguan pada PA Data epidemiologi dari studi setospektif maupun case-control menunjukkan babwa ‘Terapi Sulih Estrogen (TSE) dapat meningkackan Sungei kognisi pada wanita postmenopause ( Asthana dk, 1999,2001; Henderson dk, 2000; Mulnaed RA, 2000) Dan pada saat cerapi tersebur dikentikan, kemampuan memori dan pethatian menurun (Asthana dkk, 1999). \Namun pemaiaian TSE ini mempunyal beberapa kendal, di samping harganya mahal, TSE juga meningkatkan resiko texjadinva karsinoma uterus maupun karsinoma mamse. Ketalatan tefhadap kanker ini menyebabken sebagian besar wanita_ menopause menolak untuk -menggunaksn TSE Rabin DS, 1998) Fitoestrogen adalah suatu molekul dari tanaman yang secsra suruktur mirip dengan estrogen endogen. Firoestrogen secara langsung dapat berikatan dengan reseptor estrogen (RE) dan beckompetsi dengan estrogen cendogen, schingga ia dapat memberikan efek estrogenik ‘maupun anti- estrogenik. Fitoestrogen yang mempunyai 2 sifar campuran rersebut dipandang menguntungkan ddan diharapkean dapat cipakai sebagai aleernaif penggsati ‘TSE (Adlercreutz H, 1998) Salah sat sumber utama Broestrogen yang telah Jama dikenal adalah kedele(coy) dengan komponen utamanya.isoflavon, Berbagai penelitian baik epidemiologi, Klinis maupun eksperimental laboratoris telah :meayimpulkan bala isoflavon dari kedele merpengaruhi engsi kognisi dan memori, Peneltian epidemiologis oleh Naga C, dkk, 1999, menyimpulkan bahwa kasus demensia di Asia lebih sedikit dibanding di Eropa dan diketahui bahwe masyarakar Asia banyak mengkonsumsi kedele (Nagata C, dkk, 1999), Suatu studi Klinik yang dilakukan Daffy dkk, 2001 menyimpelkanbshwa petmberian suplemen isoflavon dari kedele dapat ‘memperbaili memori wanita paska menopause. Penelitaan eksperimental oleh Land dik, 2001 menyienpulkan bata melalui tes memori Redial-Arm Maze terbukti kemampuan memos tikus betina yang diberi diee firoestrogen 600 ig/ge diee meningkat. Penclitian lain oleh Pan dk, 1999 meaystakan behwea pemberian diet soy bean selama 8 ming pads tikus paska ooforektomi dapat meningkatkan kadar ChAT, mRNA BDNF, dan mRNA NGF di kosteks frontal dan bippokampus ( Duffy dkk, 2001; Lund dk, 2001, Pan Y dk, 1999) Saat ini kelompok studi fitoestrogen PERML Malang tea berhasil mengidentifikasi dan mengisolai isoflavon dat} beberapa tanaman non kedele lokal yaita Prnaria lbate/ Kuda root, Nacang twoepak (Pmaria ‘Pbaseolid), dab buaya (ao wea) dan biji banga matahari (Gotcants) (Hidayat A, 2003). Khusus tentang, Praia ‘bbata, telah diketabei bahwa kandungen isoflavoonya ascbeser 197.600 ig/ 10 ge berat Puree bata king, lebih tinggi daripeds kedele yang mempunyai_ kanéunyen, jsoflavon sebesat 37.300-187,500 ug/100g¢ berat kedele ering (Mazer dk, 1998). Scjzuh ini belum banyak pencltian tentang Pueraria luca dlakukan, klusosnys tentang efek Puerra louie pada Fangsi memori. Sehingse layakdipertanyakan apaksh Pecraria fbata ini juga dapat smemperbaiki fungsi memori seperti alnya dengan kedele Uneuk membulttikan apakah pemberian isoflavon geniscein daidscin dari ckstak Preraria dobata dapat ‘meningkatkan memori Rettes wowergicar Wistar dalam kkondisi hipoestrogen melalui peningkstan aktivitas kkolinergik di CAI hippokampusi, maka kami melakukan sata peneliian eksperimental dengan hewan cobs tus Wistar yang diberi ckstrakePreraria nba. Pad penelitian i pengukuran fungsi memori dilakukan melalui tes memori Moris-uuttr Maze dan pengukutsn aktivitas kolinergik di CA1 hippokampus dilakukan dengan smenghitung jumlah sel piramidal CAL hippokampus yang mengekspresiasetilkolin esterase (ACHE). METODE PENELITIAN Strategi Pendekatan Penelitin ini bereujuan untuk mengetabui efek isoflavon genistein daidsein (IGD) dasi eksttak Pyeraria ‘ehata teshadap memori dan aktivitas kolinergik daerals CAI hippokampes pads keadaas hipoestrogen. Penelitian jini menggunakan pendekatan cksperimental yang dllakukan pada hewan coba, Alasan yang mendasari al tessebut adalah bahwa untuk membulikan [GD dari cekstrak Preraria bata mempunyal ativitas esteogenile Gan berefek pada _memori kus, perl dibuat suatsPenna ek eee ee ‘model tkus hipoestrogen melalui tindakan ooforcktomi (OVX) dan hal int hanya mungkin dilakukan dengan bhewan coba. Disamping itu dengan hewan cabs, faktor- faktor yang dapat menimbulkan bias lebi mudah dikendalikan, Hlewan coba yang dipakei pade penelitian ini adalah dbus, karena tikus mempunyai kelebihan yaitu profil bebwifexr dan ncurotransmitieraya hampic sama ena maausia, Disamping itu dibanding dengan mice stwupan mazat, tikus lebih tahan terhadap perlaknan, (ooforektom) sexta mempunyai ukuran tubuh sedang sehinggs memudahkan uneuk dilakukan ooforektom Pengukaran fangs! memos peda penelican ini dilakikan dengan metode Mortis-Water Maze karena merode ini cukup sensitif untuk melihar fungsi hippokampus. Latihan (bercnang) meningkatkan -neurogenesis di dentata gyrus hippokampus (Gage dks, 1998), Aktivtas sk yang disadariseperd beresang dalam ‘kolsm meningkatkan jumlah sel bars di bippokampus (Wan Praag dkk, 1999. Pada penelitisn ini untuk ‘menilai aktivitas koliaetgik di hippokempus dilakukan pengukuran kadar asetilkolin (ACh) dt hippokampus tikes secaza tidak Langsung, yaicu melalui pengecatan asetfkolinesterase (ACHE). Alasan yarug mendasaci hal rersebut adalah karena ACAE merupakan enzim pemecah [ACh yang terdapat oi sinap. Begita ACh dilepas ke sinap, maka AChE dalam wake milidetik akan langsung memecabnya. Jika ACh yang dilepaskan di sinap ‘meningkat, akuvitas ACHE juga akan meningkat. Telah dlibukeikan balwa pada saat aktivitas ChAT, yaitu enzim pembentale ACh meningkat, ddaparkan aktivitas ACHE ‘meningkat dan densitas ACHE pada pengecatan histokimia juga meningkat. Jadi pengecs HASIL PENELITIAN Hasil Studi Pendahuluan Pembuatan Tikus Hipoestrogen melalui Metode Ooforektomi. Dara studi eksplorasi dapat diihat pada tabel 1 ‘abel 1. Bfek Ooforektomi tethadap Kadar Estradiol, FSH, Gumbaran Papsmear, Berat Uterus dan Resata cebal endometrium. ‘nt ‘Tes Memori Morris Water Maze (MWM) ‘Hasil pengukurzn teshadap waktu yang éburabissa tks uuntakt mencapai iden platform tarpals pada Tabel 2 dan Gambar 1 ‘abel 2, Efek Isoflavon Fitoestrogen dari Ekstrak Prereria libata pac wakin yang diburubkan tikus ustul: mencapai ides platform Ta sg Rar oi Weil ie or i Fae Progen fae tas | z an ¥ z Tin) T+o|f:0l¥eou|Tew co a sre 3. at 74022381998 6.07 | Ben» amt histokimia fessor a elie iss amen ei ACHE menupaksn macker yang baik untuk mena Fangs kolinesgik (Guela & Mesulam, 1996) Desain Penelitian Peneltian in dilsksanakan secara eksperimental dengan mctode rancangan acak lengkap. Pedlaluan 1). Hal ini benti makin sexing bedauh malea wale sang diburublean unrak mencapa bide plarorms semakin. sect Gambar, 1 menanjulékan babwa grak yang, dibentuk imasing-masing kelompole mempunyai kelandsian yang. berbedabeda, Uji statis MANOVA antar 5 kelompolk perlakean teshadap waktu yang dibutuhken unmuk mencapal Liddle Dlatforw pada keselurahan asl ses menunjukkan perbedian beumalne dengan p value 0.030 (Pilla), p-walne = MN (Wilks) dan p vale = 0.000) (Horeling dan Trace). Uji srtslcr ANOVA meaajakan ads pehedoan ying becmakna rechadup wake yang. dibaetikan untuk mencapal hidden plum pada tes havi TIT (p=0,032), TV (90,001), dan V (p=0,000). Thi erbandéagen hergsnda LSD menunjukean ada perbedoan Dermakns sntara kelompole OVN+IGD semua dosis dengan kelompok OVX (p muasing-masing 0,000) Anulisa sre (gumbae 2) tara asi denen waka yaag dipedulan untuk mencapai hidden plafrm pada ‘essing acing Iclompoe pedaluan menuojokiean baba Iasi tes beepengaruh egatif vedhadao wakes yang cibuubkan untuk meneapal hdécsplafom, yang berart ‘bahwa makin banyak hari tes maka makin sedikst wakta yang dibuinhlan wattle mencepas ide farm. Koen ‘eet barmakna pa emu ieorpok jit klk (023, RI=85,4%), kelompoke 2. (p=0,008, esa, eompok 3 00RD, RZCBT 3 koopa 4 (p=0045, R2=78,6%%), dan kelompoke § (90,028, RO=84,4%). Berdasarkan gambar 2, dapac disimpullan ‘aivva bertmbalunya har lashan akan meagutanel wake: yang diperiukan una meneapal bidéor lapiom baie pada kelompok Normal, OVX, OVE+IGD 15, 3, dao 50 mg/kgBB/ne, Model tegresi uacek kelompok OVKSIGD 0aug/ly(BB/he memberihaa nea-ata wakto yang dipeluean untuk encceapai Bien plronm terendal jike hari lauban ditambab stu hati dibandingkan Keelompol yang Ia, 7” ci 0 a” Zn Ba ‘0 0 (0 — tert rao etrah eGo inaahe —— pOK OSC epi er ncbenrarate Gb 2. Amalisa Regtesi Hasi teehadap Waktu yang