Centro de Estudios Superiores Aloya CIFP

Laboratorio Clínico y Biomédico

Asignatura: Técnicas de análisis bioquímico

Práctica I
Barrido de longitud

Realizado por:
Stephanie Pernalete
Óscar Fernández
Aldara Rincón
Profesora:
Dayana Santos
Victoria Barbeito
Alexia Venegas
Agueda Soto

1
Vigo, Noviembre de 2019
Índice

Introducción 3
Obxetivos 4
Fundamento 4
Material e instrumentos 4
Mostra 5
Procedementos 5
Resultados 6
Interpretación dos resultados 7
1. ¿Cal é o resultado obtido como lonxitude de onda preferencial?. ¿Para qué
serve averiguar a lonxitude de onda preferencial dun determinado composto?. 7
2. ¿Por qué de todos os valores obtidos, seleccionaste este como lonxitude de
onda preferencial? 7
3. Facer unha táboa cos resultados obtidos por todos os membros do grupo de
traballo, así coma a súa representación gráfica. Comentar os resultados
(discrepancias/coincidencias). 7
4. ¿Para qué serve facer un barrido de lonxitude de ondas dun determinado
composto? 10
5. Explica a composición do branco, e para que serve 10

2
Introducción

Cando se pretende determinar espectrofotométricamente a concentración

dunha substancia disolta nun medio líquido, é imprescindible coñecer as lonxitudes
de onda as que ésta substancia é capaz de absorber enerxía. O ideal, é facer incidir
sobre a solución da substancia problema un haz luminoso de lonxitude de onda a
que ésta substancia absorbe un máximo de enerxía (lonxitude de onda preferencial).

En calquera caso, para descubrir a capacidade de absorción de enerxía

dunha substancia a distintas lonxitudes de ondea é preciso facer un barrido de
lonxitudes de onda. Esto consiste en elexir una única solución da substancia
problema a una determinada concentración e medir no espectrofotómetro a súa
absorbancia a distintas lonxitudes de onda.

Cada substancia ten una diferente capacidade de absorción de enerxía a

distintas lonxitudes de onda que constituén o espectro lumínico.

3
Obxetivos

- Realizar un barrido de lonxitudes de onda sobre unha mostra problema.

- Practicar o funcioamento do espectrofotómetro

- Realizar unha disolución de permanganato potásico
- Realizar unha gráfica cos resultados obtidos.

Fundamento

O barrido de lonxitude de ondas, pode facerse de dúas formas: manual o

automáticamente.
O barrido de lonxitudes de onda manual soe realizarse, mediante un
espectrofotómetro de haz simple, e lévase a cabo situando a solución da substancia
investigada, volcada previamente na cubeta do espectrofotómetro, na celda de
medida do aparato; para seguidamente, ir seleccionando lonxitudes de onda
sucesivas no espectrofotómetro e, a súa vez, ir midindo as absorbancias obtidas con
cada una das lonxitudes de onda selecionadas. Entre medidas, e distintas lonxitudes
de onda, hai que poner a cero, có branco.

O barrido de lonxitudes de onda autómatico realízase mediante un

espectrofotómetro de doble haz, no que se sitúa a cubeta co branco na súa celda de
medida, e a cubeta coa substancia problema na outra celda; tras o cual prográmase
o aparello para que vaia medindo automáticamente as absorbancias obtidas o facer
coincidir sucesivamente, sobre ambas cubetas, haces luminosos de todas as
lonxitudes de onda que componen a zona do espectro lumínico seleccionado.

Material e instrumentos
- Matraz aforado de 100 mL.

- Vaso de precipitados.

- Varilla de vidrio. - Vidrio de reloxo.

- Espátula.

- Pipetas Pasteur de plástico.

4
 - Cubetas do espectrofotómetro.

- Balanza.

- Espectrofotómetro

Mostra
Unha solución de permanganato potásico (KMnO4) a una concentración de 0,1 g/L.
Para preparala, pesar 0,01g de permanganato potásico e disolvelo en 100 mL de
auga destilada ou desionizada.

Procedementos
1. Facer a disolución de permanganato potásico de 0,1 g/L en 100 mL, seguindo
os seguintes pasos:
- Colocamos o vidro de reloxo sobre a balanza e taramos a balanza a
0.
- Despois vamos botando o permanganato potásico (KMnO4) coa
espátula ata alcanzar 0,01 g.

- Disolvemos o permanganato potásico en auga no vaso de

precipitados axitando cunha varilla de vidrio.
- Logo traspasamos a solución cun embudo de cristal ao matraz aforado
e enrasamos ata 100 mL coa auga destilada.
2. Verter o branco, composto por auga destilada ou desionizada, nunha cubeta
de espectrofotómetro.
3. Depositar a mostra do permanganato potásico
noutra cubeta de espectrofotómetro.

4. Programar o espectrofotómetro para que faga incidir sobre a celda de medida

un haz de luz de 500 nm.
5. Situar a cubeta que conten o branco na celda de medida do espectrofotómetro
e poner o aparello a “cero”.
a. Esta maniobra recibe o nome de “posta a cero de absorbancia do
espectrofotómetro”, e ten por obxeto o descontar, dos resultados finais
da absorbancia, a absorbancia xerada polo disolvente empregado

5
 para preparar a solución da substancia investigada (neste caso, auga
destilada ou desionizada).
6. Retirar a cubeta do branco da celda de medida do espectrofotómetro.

7. Ubicar a cubeta que conten a mostra na celda de medida do

espectrofotómetro.

8. Dar o espectrofotómetro as instruccións pertinentes para que mida a

absorbancia xenerada pola mostra.

9. Anotar o resultado obtido.

10. Repetir os pasos 5, 6, 7, 8 e 9, pero tras un axuste previo e sucesivo do haz

de luz do espectrofotómetro as lonxitudes de onda de: 505, 510, 515, 520,
525, 530, 535, 540, 545, e 550 nm.

Resultados
Vanse representar os resultados obtidos nunha taboa. Nela, relacionaremos os
valores da absorbancia obtidos en cada medición, coa sua lonxitude de onda
correspondente.

DISOLUCION PERMANGANATO POTASICO

Longitud de
500 505 510 515 520 525 530 535 540 545 550
onda
Alexia A 1,802 1,769 1,700 1,722 1,754 1,805 1,929 1,834 1,803 1,757 1,624
Dayana A 1,785 1,685 1,692 1,703 1,74 1,787 1,906 1,745 1,782 1,751 1,598
Agueda A 1,785 1,675 1,688 1,711 1,728 1,765 1,907 1,818 1,767 1,755 1,601
Aldara A 1,768 1,674 1,686 1,702 1,747 1,773 1,927 1,889 1,805 1,8 1,803
Stephanie A 1,83 1,702 1,731 1,74 1,776 1,807 1,949 1,855 1,805 1,791 1,669
Oscar A 1,789 1,666 1,658 1,699 1,728 1,729 1,898 1,812 1,743 1,745 1,601

6
 Interpretación dos resultados

1. ¿Cal é o resultado obtido como lonxitude de onda preferencial?. ¿Para

qué serve averiguar a lonxitude de onda preferencial dun determinado
composto?.

A lonxitude de onda preferencial é 530 nm.

Averiguar isto serve para coñecer a cantidade máxima de luz ou enerxía que é capaz
de absorber o composto ou substancia.

2. ¿Por qué de todos os valores obtidos, seleccionaste este como

lonxitude de onda preferencial?

A lonxitude de onda permítenos coñecer a absorbancia, e, polo tanto , a

concentración dunha determinada mostra. Sen embargo, unha mesma mostra, pode
presentar valores distintos en dúas lonxitudes de ondas, o que será determinante, é
que a mostra terá maior sensibilidade nunha lonxitude de onda ca outra ,porque é
onde absorbe maior cantidade de enerxía.

3. Facer unha táboa cos resultados obtidos por todos os membros do

grupo de traballo, así coma a súa representación gráfica. Comentar os
resultados (discrepancias/coincidencias).

Agueda Soto:

Longitud de onda 500 505 510 515 520 525 530 535 540 545 550
Agueda A 1,785 1,675 1,688 1,711 1,728 1,765 1,907 1,818 1,767 1,755 1,601

A
1,95
1,9
1,85
1,8
1,75
1,7
1,65
1,6
1,55
490 500 510 520 530 540 550 560
Longitud de onda (nm)

7
Stephanie Pernalete:
Longitud de onda 500 505 510 515 520 525 530 535 540 545 550
Stephanie A 1,83 1,702 1,731 1,74 1,776 1,807 1,949 1,855 1,805 1,791 1,669

A
2
1,95
1,9
1,85
1,8
1,75

1,7

1,65
490 500 510 520 530 540 550 560
Longitud de onda (nm)

Aldara Rincon:
Longitud de onda 500 505 510 515 520 525 530 535 540 545 550
Aldara A 1,768 1,674 1,686 1,702 1,747 1,773 1,927 1,889 1,805 1,8 1,803

A
1,95

1,9

1,85

1,8

1,75

1,7

1,65
490 500 510 520 530 540 550 560
Longitud de onda (nm)

Alexia Venegas:
Longitud de onda 500 505 510 515 520 525 530 535 540 545 550
Alexia A 1,802 1,769 1,700 1,722 1,754 1,805 1,929 1,834 1,803 1,757 1,624

A
1,95

1,9

1,85

1,8

1,75

1,7

1,65

1,6
490 500 510 520 530 540 550 560
Longitud de onda (nm)

8
Oscar Fernández:
Longitud de onda 500 505 510 515 520 525 530 535 540 545 550
Óscar A 1,789 1,666 1,658 1,699 1,728 1,729 1,898 1,812 1,743 1,745 1,601

A
1,95
1,9
1,85
1,8
1,75
1,7
1,65
1,6
1,55
490 500 510 520 530 540 550 560
Longitud de onda (nm)

Dayana Santos:
Longitud de onda 500 505 510 515 520 525 530 535 540 545 550
Dayana A 1,785 1,685 1,692 1,703 1,74 1,787 1,906 1,745 1,781 1,751 1,598

A
1,95
1,9
1,85
1,8
1,75
1,7
1,65
1,6
1,55
490 500 510 520 530 540 550 560
Longitud de onda (nm)

Tras as gráficas antes expostas, conclúese, que o barrido de lonxitude servíu para
identificar a lonxitude de onda preferencial, que nos seis casos (mostra) coincidíu en
530 nm de permanganato potásico.

Cabe destacar que 5 de 6 mostras, seguiron o protocolo de traballo,que consiste na

homoxenización previa da mostra en cada medición, utilización do branco para tarar
en cada toma e a concentración do analito, a mostra restante que presentaba a
mesma concentración non foi homoxenizada, aínda así o resultado obtido , foi similar
a das outras medición. Con este resultado, podemos deducir que non deu tempo a

9
que a mostra precipitase, polo que as moléculas mantivéronse en suspensión, sen
modificar o resultado da medición.

4. ¿Para qué serve facer un barrido de lonxitude de ondas dun

determinado composto?

Para coñecer a lonxitude de onda preferencial, e así, poder diferencialos doutros, xa

que a lonxitude de onda que cada substanca absorbe son características da molécula
,e , en consecuencia , pódese usar para identificar a mostra.

5. Explica a composición do branco, e para que serve.

Defínese como a solución que contén todos-os compostos da disolución problema

,excepto aquel analito que se desexa medir.

O valor obtido aquí, réstaselle despois a medición da disolución sometida a estudo,

de maneira que o resultado é o correspondente ao analito que se queira medir nun
principio.

10