Parasitos intestinales Helmintos Existen tres grupos de helmintos de importancia médica: nematodos (Ascaris), ces- todos (tenias) y trematodos (distomas). Las fases que normalmente aparecen con las técnicas de diagnéstico son los huevos y las larvas. Con menos frecuencia, pue- den verse gusanos adultos como en el caso de Ascaris y Enterobius y el diagndstico de algunos cestodos se basa en la observaci6n de los segmentos o proglotis, No obs. tante, en la mayoria de las infecciones por gusanos, la identificacién se basa en los huevos. Clave de identificacion de los huevos Las caracteristicas en que se basa la identificacién de especies de huevos son las siguientes: 1, Tamafo. Se miden la longitad y la anchura, que se encuentran por lo general denteo de limites especifices. 2. Forma. Cada especie tiene una forma particular. 3. Fase del decarvalioen las bees. En algunas especies, los huevos constan de una sola célula; en otros, pueden tener varias; y en otras especies ya estén embrionados (€s decir, contienen una larva) cuando se eliminan con las heces En ocasiones, si las muestras fecales tienen varias horas o uno o dos dias, los huevos pueden desarrollarse hasta fases més avanzadas. Los huevos de Ascaris suelen ser unicelulares cuando se eliminan con las heces; no obstante, la célula tinica puede dividirse y en las muestras eviejas» pueden verse huevos con dos © tres eélulas. Los huevos de anquilostomas que se observan en las muesteas (que tienen varias horas pueden contener 16, 32.0 mas células. Al cabo de 12-24 horas, puede desarrollatse el embridn en el huevo y, si pasa ain mas puede pro- ducirse la eclosién larvaria, Asi pues, cuando se observe Ia etapa de desarrollo de los huevos de helmintos, es preciso cerciorarse de que Ia muestra fecal es reciente, Si tiene varias horas o un dia, no seri de extrafiar que se observen cambios en la etapa de desarrollo de algunas especies. Lo ideal es que sélo se acepten muestras recientes para el diagnéstico, 4. Gros de la ubierta ded bua. Algunas especies, como Awan tienen una cubierta grue sa; otras, como los anquilostomas, la tienen mas fina. 5, Calor. Algunos huevos son incoloros (por ejemplo, los de anquilostomas 0 Ba- ‘robin, mientras que ott0s son amazillos o marrones (Ataris, Trichur) 6, Presencia de ciertas caracteristicas como opérculos (tapas), espiculas, tapones, ganchos 0 cubiertas exteriores mamiladas Sise encuentra un huevo o un objeto oviforme, deben observarse cuidadosamente las caracteristicas mencionadas para poder identificar Ia especie. Ocasionalmente, pueden observarse huevos atfpicos o deformes, en euyo caso serd necesario buscar formas més caracteristcas pata alcanzar un diagnéstico fiable. Téngase presente que en un solo paciente es posible encontrar més de wna especie de helminto, La siguiente clave (figura 3) y los diagramas de huevos de helmintos que aparecen cen Ia figura 4 ayudaran @ identificar las especies, | RECUERDE | Obsérvese el tamafio la forma, la etapa de desarrollo. | 1 grosor de la cubierta, el color y ia presencia de estructuras especiales como opérculos, espiculas , tapones,(ws 20-02» wt 09-08) ‘de pop evaure “10 9m ssmogison oe (omen suonuce) uunioade| neo20190 at 8 | (art gre «wi 09 = ) sosand sors co sepoouauny suesey ‘estes toons usar) “ds smBuonsoxeu un woo euoMt (wt 96» wt 09-99) nau suopie) scusueron sveuscoie tuasovouy | ___ 92 e200 senomis spetinrs seo0y ue 098 [woey 5 ua on ob. s9u voredse} (so20y se) uo wowesm)_ 0 6 unperaeny euosasnas ~opeeD (s2oas ‘Buoxou marzo unowiode swosoisns aot onan prion euwosojsn9s 9p Sonar, ‘tsvouliqnd eueyteg——onuao vo xuoumvaens onpey sume (wt 06-02 » wt opt-s2i) Hang seas (ws 02 x ur srt-oen) oad sOsses ur anupogoutig ‘pep neue opIKd| (wr 02-54» wt 06-92) (ewe60¥0% soueseiony — (oped wrt ai ‘owe axs oe oyendsd eon) Re ‘ofudoreny sohysorey — opepunuosd 2.0 9 - unt sps2) ‘suoue 94310000) 21 9p UE UateOUOONg 29madse us 6 u09? angus unpntag seyounsosd sovoen ‘equewe opsed "euy wpegro I0K0 vas [eaten Jeers 06-2 «wn 06-00) (wrt 06-08» wt gy-96) 8 Ubu Bue (ust 96-03 wt so-gy) seyounbid fou e900 tin 921 onan fp pry un > onan prior cononu jp sungus prauo%? operon sono Us © u99? soda wg sompd emote va Ls i, seed sould 0g? rate onetsag Cet Sojunwjey ep soreny seoynuap! cued anetg “¢ einBiSS ES turyjes.e3 suosassyas hBvo}ew BUDSAISKOS PLO LEN OS exam oxen Sol sete OF «SOLNINTSH 30 SOASNH S01 3G SOAILV 14 SONVWWL Sojujway :seeunsequ! sousesed ep ugiseoynUeP! py “BldWENTIICACION DE ESECES SSS Larvas de gusanos Las larvas que se observan en las muesteas fecales frescas suelen ser larvas sabditi- formes (= primera fase) de Strongyloides strvorali. No obstante, sila muestra fecal tie ne més de 12 horas, las larvas pueden convertirse en larvas filariformes (fase in- feetiva), que deben distinguirse de las larvas de anquilostomas que eclosionan en las heces a las 12-24 horas. La aparicién de larvas filariformes de Strngylides sero rais pueden indicar una hiperinfeccién sistémica. Las caracteristicas empleadas para distinguir las especies aparecen en la Sigura 5 y en el cuadro 4, En las preparaciones con yodo, el primordio genital resultard més visible. El yodo mata las larvas y faciita Ia observacién de sus carscteristicas. Es preciso utilizar una lente de gran aumento en seco para ver estas estructaras = Si se observa una larva con una cavidad bueal corta y un primordio genital pro- minente (Ficilmente visible), se trata de una larva de Strongyloides. — Sisse observa una larva con una cavidad bucal larga y no se aprecia el primordio genital, se trata de una larva de anguilstoma, Fig. 5 Larvas de helmintos Anqullostoma ‘artorme rabesttorme Strongyloides rabeitiorme —tartomme Cuadro 4. Caracteristicas de las larvas de helmintos Anquilostoma Larvas flaritormes Tamafio 500 « 14-20 um Con vaina Extremo caudal puntiagudo El esofago ocupa un tercio de la longitus corporal sin engrosamiento Larvas rabdiformes ‘Tamatio 100-150 « 15-17 um Cavidas bucal larga (15 um) El esdtago ocupa un tercio de la longitud corporal, con dos engrosamientos Primordio genital pequefio (7 um) Poro anal a 80 ym del extramo posterior 72 Strongyloides Larvas flaritormes ‘Tamafio 600 * 14-20 um Sin vaina Extremo caudal bifurcado 0 romo El esétago ocupa la mitad de la longitud corporal ‘sin engrosamiento Larvas rabdititormes ‘Tamafio 200-300 » 15-18 wm Cavidad bucal corta (4 jm) El es6tago ocupa un tercio de la long ‘ud corporal, con dos engrosamientos Primordio genital grande (22 um) oro anal a 50 jm del extremo posteriorProtozoos Entre los protozoos intestinales figuran las amebas y los flagelados. Se reconocen dos fases en cl diagnéstico: la fase vegerativa o de trofozotto y la fase latente quis tica. Ambas pueden aparecer en las heces. Los trofozoltos suelen aparecer en las hheces diarreicas o sueltas; en las heces bien formadas aparecen habitualmente quis- tes. No obstante, ambas fases pueden estar presentes en la misma muestra fecal Los trofozoitos y los quistes pueden obseevarse en las preparaciones de heces fres- cas con solucién salina. En ocasiones es preciso tehir las preparaciones para iden- tificar las especies. Los tipos de preparacién que suelen usarse para detectar e iden- tificar protozoos y las caracteristicas que pueden observarse en cada tipo de prepa- racién figuean en el cuadeo 5, Trofozoitos amebianos Preparacién salina himeda En las preparaciones salinas de heces recientes pueden observarse trofozoltos ame- bianos méviles. Presentan un color ligeramente verdoso y son refringentes (brillan- tes). Con la lente de gran aumento y observacién en seco puede observarse el Cuadro 5. Caracteristicas de protozoos observados en distintos tipos de preparacion Tinciones temporale® Tincién permanente Salina AMA®—-Yodo? (tricromaticaye ‘Amebas Trofozoitos Motiidad + Citoplasma + + + Inclusiones + + + Nicleo : + . Quistes Niicloos S + + Organos cromatoides + “ + Glucdgeno a : s Fiagelados Trofozoitos Motiidad + : - Forma + + + Nacieo - + + Quistes Forma + + + Nucleo : + + Fibrilas ¥ + + «La tncién con AMA se usa solamante para tei trofozoites amebianos vivos. .# El yodo so usa para totir quistes, aungus también pueden terse los wofozoitoe de fagela- dos. © Las técnicas de tincién permanente no se usan de ordinario en ls laboratorios de diagnds- tico sino que estén reservadas para casos especiales que se detalan en el texto (por ejem- lo, clagndstico de la eriptosporidiosie) Los érganos cromatoides de los quistes amebianos se cbservan mejor en las preparacio- nes con solucisn salina que en las realizadas con yoo. La mejor forma da verlos es an trotis ‘con tincién permanente * El glucégeno se disuelve durante e! proceso de tincion y en os fats de thelén permanente s6lo se observa un espacio caro (vacvoia) Las fibrils (flamentos) pueden verse a veces en las preparaciones salinas, 73ETON OE ‘ipo de motilidad y las inclusione, como glébulos rjosy levadurasingeridas. No puede sere el nicks. (Los macr6fagos también pueden contener eritrocitos y movers). Si un trofozolto se mueve répidamente en una diteccién y forma pseudépodos con rapide, puede tratarse de Entamoeba bisteytica, Las demas especies amebianas no sue- len moverse del mismo modo. Si el trofozolto se mueve en la forma descrita y si se observan glébulos rojos en el citoplasma, puede suponerse que sc trata de E. Hi Jobtca. A veces es necesatio utilizar AMA para tefir el niicleo a fin de confirmar cesta observ Preparacién salina: MOTILIDAD DIRECCIONAL DEFINIDA + GLOBULOS ROJOS INGERIDOS = E. histolytica Preparacién himeda con AMA Si se sospecha Ia presencia de trofozo{tos amebianos, examinese una preparacién, con AMA (véase el cuadro 5). Los trofozottos pueden enroscarse y dejar de mo- verse pero ol mice y las incasoness tekirén de azul excara, snientas que €l citoplasma se tefl de azul claro, Bisquense grinulos de cromatina perinucleares (grinulos en la membrana que rodea al nicleo); si se observan, se trata de una especie de E- tameeha; de lo contrario, no se trata de ese género. Cuando se observa cromatina nu- clear periférica, debe identificarse la especie. Consiiltese la «Clave de identificacién de trofozoltes amebianos en preparaciones tefidas» (figura 6). Los trofozoitos de E. histolytica miden entre 12 y 40 jum de longitud. El nucleo apa- recerh como un cizculo de color azul oscuro con un punto més oscuro, el carioso- ma situado aproximadamente en el centro. Si los grinulos de cromatina perinu- cleares son finos y regulares y si existe un pequefio cariosoma central, probable- mente se trata de E. bistolyica, pero es preciso observar varios microorganismos para cerciorarse. La observacién de eritrocitos en el citoplasma contribuir a confirmar el diagnéstico, Las células sanguineas se tiflen de azul oscuro en las preparaciones coloreadas con AMA, Entamoeba cli tiene aproximadamente el mismo tamafo que F. hiselstia y también. tiene cromatina perinuclear. Su citoplasma es muy rugoso ya menudo contiene bac- tetias © mohos. La cromatina perinuclear es irregular y el cariosoma no se encuen- tea en el centro. Frotis con tincion tricromatica En los frotis tetidos, los teofozoltos pueden ser redondos, alargados o de forma irre- gular, Los trofozoitos amebianos suelen teAirse de verde © verde azulado con nit- cleos morados 0 rojos. Los niicleos de las especies de Entamoeba tienen grinulos pe- riféricos de cromatina (como se ha descrito en las preparaciones con AMA) que pueden estar dispuestos en citculo 0 en forma de rosario. El cariosoma aparece ‘como un punto fojo 0 morado dentro del niicleo. Aunque en E. histolytica el catio- soma sucle estar en el centro del niicleo, a veces puede ser excéntrico y hay que estudiar varios microorganismos para decidir si se trata de E. bistytica 0 B. ex ‘Ademis de los trofozoitos amebianos, pueden observarse otras células de aspecto parecido y que deben diferenciarse de las amebas. Compérense los elementos que se observan en las preparaciones tefidas con las figuras que aparecen en la clave 4PARASTOS ES y con los «Problemas de identificacién» de la pigina 81 para decidir si son trofo- zoltos amebianos, células tisulares w otras estructuras Los trofozoitos pueden identificarse como E. histolytica si se observ — cromatina perinuclear y — glébulos rojos en el citoplasma ° — cromatina perinuclear uniforme y — pequefio cariosoma central en el niicleo y — citoplasma con granulos finos y uniformes, y — longitud del trofozoito = 2 a 6 veces el diametro de un eritrocito Quistes amebianos Es imprescindible medir los quistes con exactitud para que la identificacién sea Preparacion salina himeda Cuando se examine la preparacién con el objetivo X40, enféquese hacia arriba y hacia abajo en busca de clementos redondos y brillantes con un diémetro aproxi- ‘madamente igual a 1-3 gldbulos rojos. Biisquense también los érganos cromatoides (cstructuras en forma de bastén), que se observan mejor con el objetivo de gran au- mento. Aparecen con més nitidez en las preparaciones salinas que en las tealzadas con yodo, Tienen un aspecto caracteristico y se observan en los quistes de E. his- tdlytca y B. eo. En. E. bisolptca, los orginulos en forma de bastén tienen los extre~ ‘mos romos y redondeados, 2 diferencia de los E. al, que son puntiagudos. Estas estructuras se observan con menos frecuencia en los quistes de E. cali que en los de E, bistytica. Los niicleos son dificiles de ver en las preparaciones salinas pero se ven bien en las tefiidas con yodo. El aspecto del niicleo es importante para diferenciar las es- ppecies de amebas. Asi pues, si se observan quistes (0 esteucturas similares) en la pre~ paracién salina, es preciso examinas la preparscidn con yodo. Midanse los quistes encontrados. Preparacion himeda con yodo Enféquese a preparacin con el objetivo x40 y bisquense los quistes. Si se en- cuentran quistes o estructuras de aspecto semejante, pisese al objetivo de gran au ‘mento y de observacién en seco a fin de apreciar los detalles necesarios para iden- tificar Ia especie. Midanse los quistes Consiltense la «Clave de identificacién de quistes de amebas y flagelados» en pre- paraciones con yodo y frotis tetidos (Figura 7) y la descripeién que figura a conti- rnuacién de Ia clave para identificar las especies de quistes encontrados. Los quistes de E. histelytca miden 10-15 jum de diémetro, Los quistes maduros de E. histolytica tienen cuatro nicleos con cromatina perinuclear homogénea y un ea 75NTN EE Fig. 6. Clave de identificacion de trofozoitos amebianos en preparaciones teflidas ‘Trlezlo can TTT ‘ernodear ernooear toplasmade _eteplasma de grérulcs cn nto an aoe oa ros en mks et ‘riaioe grnsos, tos, bl jor Ios woozotos "i dos voloratos ater y evadurs, alanis o presi, sin lel ros ‘snbacoras| rile con ocean yan masa de winuionprtoicas genus peices, eromatna anendosona, ——enespaci dao S Dientamoeba fragilis Tamanho 15 um hhartmanni histolytica riosoma central. Por lo general los miicleos no se encuentran en el mismo plano, de modo que es preciso enfocar varios planos para ver los cuatro. Muévase con eui- dado el objetivo hacia arriba hasta que el quiste quede sélo un poco desenfocado. Enfoquese cuidadosamente y sigise moviendo el objetivo despaco hacia abajo para vver todos los planos del quiste. Cuéntense los miicleos a medida que se vayan viendo, A veces se observan quistes inmaduros de E. hieytca. Pueden tener 1, 2, 6 4 nii- cleos. Cuando sélo hay un micleo, suele ser bastante grande. A menudo los quistes monocucleares tienen grandes masas de glucégeno y varias masas cromatoides pe- quefis. (Las masas cromatoides atin no han constituido las estructuras tipicas en forma de bastén.) Midase el quiste. Los quistes de E. ali suelen ser mayores que los de E, bsttice (15-30 jum). Los quis tes de E. cal tienen ocho niicleos con cromatina perifériea irregular y cariosomas 76myosin ‘eqeowepo} seunsowuy xnsewowg seuowevosey sopejeGey A seqowe ep sersinb ep ug|seoynuep! ep aneig “1 “Bld 7IDENTIFICACION DEESPECIES PARAST AS excéntricos, Por lo general se encuentran en planos distintos, de modo que es pr ciso enfocar hacia arriba y hacia abajo cuidadosamente para verlos y contarlos. Pueden observarse quistes inmaduros de E. col, que no deben confundirse con los de E. histolytica. La forma inmadura que se ve con més frecuencia es un quiste con dos niicleos (es raro encontrar quistes de E. ol con un solo niicleo), una gran masa de glucégeno y varias pequeflas masas cromatoides. Como en el caso de E. Aiseytca, las masas ain no han constituido los érganos cromatoides tipicos. Para diferenciar los quistes de E- eli de los de E. bislytica es preciso medirlos con exacti- tad. Los quistes de E. bartmani son similares a los de E. histolytica, pero més pequefios (7-9 wm). En las preparaciones con yodo, los quistes de Iadamuche bitch’ presentan una ‘masa compacta de glucégeno, lo que les distingue de E. bisteytic, no tienen cuer- pos cromatoides y contienen un solo niicleo. Si al principio se observan quistes inmaduros, buisquense formas maduras. Los quis- tes maduros suelen ser ficiles de encontrar para identificar la especie. Si se obser- vvan quistes con cinco o mds niicleos, se trata de E. eal En los diltimos aftos, se han notificado en todo el mundo varios casos de menin- gocncefalitis amebiana primaria provocada por amebas de vida libre (Acanthamoe- tba spp y Naegeria spp). Se ha averiguado que la mayorfa de las infecciones se de- ben a aguas contaminadas. El diagnéstico en el laboratorio se realiza mediante el ‘examen microseépico del liquido cefalorraquideo purulento que contiene células polimorfonucleares pero no bacterias. Las amebas pueden observarse en Ia exten- sién tefida con el método Giemsa. Blastocystis bomins, un protoz00 que también se observa en las heces, puede dis- tinguirse de los quistes amebianos por que el centro se tifle de verde (o en ocasio- nes, de color claro) con grénulos refringentes alrededor del borde. 00 ‘Blastocystis hominis Flagelados Preparacién himeda con solucién salina para la detecci6n o identificacién de trofozoitos Los trofozoitos de flagelados (figura 8) se reconocen sobre todo por la forma en ‘que se mueven en las preparaciones htimedas. Por lo general, no se aprecian ni los, flagelos ni los auicleos. — Los trofozoitos de Giendia intestinalis (patégenos) se mueven como una hoja al ‘caer; dan pequefios tirones hacia delante y hacia atris. = Los trofozoites de Chilomastic memili (no pat6gens) tienen un movimiento de rotacién, — Los trofozoitos de Trichomonas bomins (raras veces patégenos) tienen un movie miento espastico NOTA EI AMA no tiefc los trofozoitos de flagelados, de modo que no tiene utilidad al- ‘guna para el diagnéstico. 8NE PAASTOS NETS Preparacién himeda con yodo para detectar e identificar quistes Las soluciones de yodo se utilizan principalmente pars tefir quistes a fin de ver la estructura de los niicleos. Consiltese la «Clave de identificacién de quistes de ame- bas y flagelados» (figura 7) para identificarlos Fig. 8. Clave de identificacién de trofozoitos flagelados en extensiones tefidas refer con 2o mas gees ‘agate, “A fogots So més gels “nite samato 43m rx tamato 8m, tanafo 6.20}, qe oS —— Stageos, woozoto en fora de pea, if "io, “pare de tags, membrana onduante "2 niceos Retortamonas ( (ars voces visible), érganos paraacales, rasta Yamato 8-20um " tamaf 1020 1m NOTA Trichamonas bominis no tiene fase de quiste, oe we Trofozoitos y quistes de Giardia intestinalis en extensiones tefiidas Los patisitos Giandia son caracteristicos y suelen coincidir con ilustraciones de los manuales y libros de texto. No son dificiles de identificar en extensiones teftidas. Las restantes especies de flagelados intestinales son rara vez patdgenas. Balantidium coli Es el nico ciliado que parasite al hombre y las infecciones son raras, por lo que no se estudia en ninguna otra parte de este manual (es principalmente un pardsito de los certs y los monos). Sin embargo, en ocasiones puede observarse en heces hhumanas, por lo que ineluimos aqui una breve descripeisn, Balantidium coi tiene fases de trofozoito y de quiste. Los troforoitos son grandes (50-200 jum de longitud por 40-70 um de anchura) y muy actives, y pueden verse 79WDENTINCACION DEESIECES PASS con facilidad en extensiones salinas mediante el objetivo de poco aumento (véase infra), Estin recubiertos de vellosidades cortas (cilios) que se agitan ripida- ‘mente y permiten al microorganismo desplazarse con rapidez. Mueren al poco tiem- po de estar fuera del microorganismo, de modo que las muestras fecales deben exa- ‘minarse durante la hora que sigue a la defecacién Los quistes tienen 45-75 [im de diémetro. Ni los troforoitos ni los quistes se tifien bien con yodo ni con tintes permanentes. La mejor técnica, por tanto, es Ia preps- racién hnimeda con soluci6n salina “rotozoto de Balantstm col usta de Balan cot Isospora belli y Cryptosporidium spp Lhoxpora belly Cryptesporidium spp son coccidios que parasitan el intestino. En el hom- bre, la infeecién por lispora bul es poco comin, raras veces grave y a menudo asin- tomética. La infeccién por Cryptuporidium es una causa importante de diarrea en ni- fos menores de 5 afos y resulta particularmente grave en pacientes inmunodefi- Diagnéstico en el laboratorio Los oocistos de Isxpora belli pueden detectarse en extensiones fecales directas. En caso necesario, los oocistos pueden concentrarse mediante la técnica de formalina- Gter (véase la Seccién 1, pp. 16-17) Mézclese una pequefia cantidad de heces en solucién salina puesta en el extremo de un portaobjetos con una pequefia cantidad de soluciéa de yodo depositada en el otro extreme. Los oocistos de Lespora bli son ovalados (aproximadamente 32 * 16 ym) y contienen tna masa central de protoplasma (véanse las ilustraciones a con- sinuacién). Cocist inmaduro de Isospora bel Cocisto maduro de Isospora bel NOTA Prepérese la solucién yodada mezclando 10 ml de yodo de Lugol (reactivo n° 16) con 10 mil de Acido acético al 25 % v/v. Con esta solucién se tiften bien los niileos. Los oocistos de Crplesporidivm se examinan en frotis fecales tefdos (véase la Sec- cidn 1, pp. 17-18). Toxoplasma gondii Tosoplama gondii es un parisito animal que provoca la toxoplasmosis. La toxoplas- ‘mosis humana a menudo cursa sin s{ntomas. Puede provocar fiebre, erupciones, hi-PARASITOS NTESTNALCS pertrofia de los ganglios linféticos y linfocitosis. La forma més grave de infeccién en cl hombre es la toxoplasmosis congénita, que a menudo causa graves lesiones cerebrales en el feto. La infeccién durante los primeros meses de] embarazo puede provocar el aborto, mientras que si se produce en los dltimos meses puede dar lugar 4 sintomas de infeccidn en el lactante a los 2-3 meses del nacimiento, Las mani festaciones clinicas de la infeccién por Toxsplasma apatecen a menudo en pacien- tes con el sindrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA). El diagnéstico en el laboratorio de la toxoplasmosis se realiza mediante: 1. Pruebas serolégicas, entre ellas la prueba con coloracién de Sabin-Feldman, le prueba indirecta de anticuerpos fuorescentes (PIAF), la prueba indirecta de he- ‘maglutinacién (PTH), una prucba de Sjacién del complemento (PFC) y, més 2e- ‘cientemente, [a prucba de inmunosorciéa enzimatica (ELISA), que se consi- dera més especifica, Los pormenores de estas pruebas rebasan el aleance del pre- sente manual 2. En ocasiones, el estudio microscdpico resulta stil para el diagnéstico de una ingeccién aguda, utilizando preparaciones tefidas con colorante de Giemsa 0 Field de material aspirado de los ganglios linféticos o la médula ésea, liquide cefalorraquideo, o liquidos peritoneales o pleural, ‘Los parisitos tienen forma semilunar y son de pequesio tamafio (3 * 7 4m). Uno de los extremos es redondeado y el otto pantiagudo, Fl citoplasma se tie de azul, y €l niicleo de color rojo oscuro; éste se sitia en el extremo redondeado. A veces los microorganismos presentan una forma redondeada y pueden confundirse con amastigotes de Leishmania en cortes de tejidos. Problemas de identificacion En las muestras fecales aparecen muchas estructuras que tienen aspecto de parisi- tos pero no lo son. Las células epitéliales y los macrSfagos pueden confundirse con trofozoites ame- bianos, especialmente los macz6fagos, que presentan un ligero movimiento ame- biano y pueden contener eritrocitos, Los niicleos, que pueden observarse en pre- pparaciones teflidas con AMA, son mucho mayores que los miicleos de las amebas ¥, por lo general, contienen varios grinulos o particulas de czomatina (véase la ilus- tracién) (Céulaseptetaies Macrétage ‘Las células de pus pueden confundisse con quistes amebianos, Los niicleos apare- cen dispuestos en forma de 3 6 4 anillos y, por lo general, se tien intensamente. El cixoplasmna aparece desflecado y 2 menudo no se aprecia la membrana celular. ‘Los quistes amebianos tienen una pared celular bien definida Los pelos y las fibras pueden confundirse con lavas. No obstante, aquéllos no tie- nen la misma estructura interna que éstas a1WWENTIICACION DE ESPECKS PARAS. Las células vegetales (por ejemplo, mohos o levaduras) pueden confundirse con quistes o huevos. Las células vegetales suelen tener una pared gruesa mientras que, Ia de los quistes es fina, Las levaduras y los mohos suelen ser mas pequefios que los quistes amebianos y no tienen niicleos como los que se observan en éstos NOTA Los trofozoites y quistes de E. istalytia a menudo no son tipicos; deben observarse varios microorganismos distintos para asegurarse de qué especie se trata LA IDENTIFICACION PUEDE EXIGIR EL ESTUDIO CUIDADOSO DE VARIOS QUISTES 0 TROFOZOITOS. ES INDISPENSABLE MEDIRLOSParasitos sanguineos Paludismo Identificacion de parasitos paludicos en extensiones sanguineas finas. ‘Cuando se examinen extensiones sanguineas finas para estudiar el paludismo, debe prestarse atencién a los exitrocitos infectados y los pa las células 10s que hay dentro de Eritrocitos infectados — Obsérvese el tamafio de los eritrocitos infectados. — éAparecen puntos de Schiiffner? Tamafio aumentado: —> Puede ser P. vinax 0 P. ole Globulos | Moteado de Obsérvense los pardsitos ojos Schiffer presente infectados Normal: —> P. malariae 0 P.fakiparum No hay moteado de Schiiffner (las células infectadas pueden ser mas pequefias de lo normal en las infecciones or P. maleriae) Parasitos Los anillos de las cuatzo especies principales pueden ser similares. Si se observan, anillos, bisquense las fases mds avanzadas. En pacientes con P.faliparum s6lo sue- len observarse anillos; las fases més avanzadas s6lo se encuentran en las infeccio. nes graves, Nora, Si se observa Plasmodium fakiparum, debe notificarse la parasitemia porcentual (nv: mero de gldbulos rojos infectados por cien). Constiltense los cuadros 6 y 7, y las figuras 9, 10, 11 y 12, para saber qué caracte- risticas hay que buscar para el diagnéstico en extensiones sanguineas finas o en pre-~ paraciones de gota gruesa.* \dentificacién de parasitos paltidicos en preparaciones de sangre en gota gruesa. En las preparaciones tefiidas de gota gruesa, los eritrocitos quedan lisados, de modo ue el diagnéstico se basa en el aspecto del parisito. Los mircroorganismos suelen set més compactos y densos que en las extensiones finas. 7 En las preparaciones mal tefidas, es posible que no se aprecien puntos de Schitnr, ‘modo que es indispensable utitzar métodos correctos de uncon, También cabe la posi {dad de que no se observen puntos de Schittner en los anilos precoces de P. vivax oP. ovale. 2 cuadro 7 y las figuras $-13 se han tomado de Bonch aids forthe dlagnosis of malaria, Lax minas 1-8, Ginebra, Organizacion Mundial de ia Salud, 1988. 83Cuadro 6. Caracteristicas morfolégicas de los parasi tos paliidicos en extensiones sanguit Fase P. vivax P. ovale iparum Globulo rojo infectado Tamafto aumentado; Tamatio aumentado; Tamafo normal Tamafio normal puntos de Schiliner puede ser oval con menor de lo normal pueden observarse presentes fimbrias; puntos de hhendiduras de Maurer Schintfer presentes Fase de anillo Bastante grande Gompacto; dos anillos Compacto: dos anilos Pequefto y delicado: a (trofozoito precoz) 0 dos puntos de por ertrocit; aro por eritrocite; aro. menudo dos puntos, ‘cromatina; puede de cromatina; a haber dos anilos opr ‘menudo dos 0 més ceritrocito anillos por ertrocito; formas adheridas frecuentes Trofozoite tardia. «Grande; ameboide;Pequefio: no Pequetio; compacto; a Tamatio moderado; ppigmento en forma de ameboide: pigmento menudo en forma de generalmente bastones finos ‘granuloso banda; pigmento __compacto; pigmento granulaso fen grénulos Esquizonte maduro Grande; merozoltos. Mas pequetio que P. Pequefio pero Faro en la sangre grandes (12-24), vivax; 6-12 merozoites (6-12) _peritica; merozottos pigmento coalescente merozoites; pigmento grandes; aspecto de (8-26) pequefios; mas oscuro que en P. «margaritas ‘masa inica de vivax ccaracteristico; pigmento pigmento granuloso Gametocitos Esféricos; compactos; Patecido a P. vivax, Parecidos a. vivex En forma semiluner, Adeleo Unico: ero més pequerio. pero més pequefios, nucleo nico pigmento difuso y ‘menos numerosos y dgranuloso sin puntos de Schiitfner Métodos de recuento de parasitos paliidicos en las preparaciones de gota gruesa Parasitos por microlitro ‘A continuacién se describe un método prictico de precisién suficiente. Se basa en. el niimero de parisitos por ll de sangre en una preparacién de gota gruesa; los pa- risitos se cuentan en relacién con un niimero de leucocitos previamente determi- nado, Se toma como nivel normal un promedio de 8000 leucocitos por pl. A pesar de las imprecisiones debidas a las variaciones del niimero de leucocitos de unos in- dividuos sanos a ottos, y las variaciones atin mayores en caso de enfermedad, esta norma permite realizar comparaciones razonables, Antes de proceder al recuento, debe examinarse en la gota gruesa el equivalente a 0,25 pil de sangre (unos 100 cam: os, utilizando un ocular x7 y un objetivo de inmersi6n x100), con el fin de de- terminar la especie del parisito y las fases de desarrollo presentes. Una vez hecho esto, debe seguirse el métado de recuento que se describe a continuacién para las cextensiones sanguineas positivas. 1, Se necesitan dos totalizadores para el recuento de parésitos y leucocitos por se- parado. 2 a) Si, una ver contados 200 leucocitos, se han identificado 10 0 mas parisi- tos, anétense los resultados en el impreso de registro indicando el némero de parisitos por 200 leucocitos. b)_ Si, una vez contados 200 leucotitos, se han encontrado 9 0 menos parési. 105, debe proseguir el recuento hasta llegar a 500 leucocitos; anétese el ni- mero de parisitos por 500 leucocitos. (ont e231)TS Cuadro 7. Identificacion de especies de parasites paliidicos en preparaciones de sangre de gota gruesa teflidas con Giemsa Fase de pardsto onl sangre pontrica Troozote Eequzente Gametosto coeur Pees { none) v ’ coed wm at Jyece ematana dscn, son ructas tr. | oman nmr puniaguin 509 sorters oe roctes sa | [eran as meaner se ears remnant pate | Satan estes maine tan, core, mare eters, ees: | Gun soba: aie Sona Se ee meee ect | Simrgn srrouon de erat Con Se reese eveyone mars | gr se snrinen dtr eg Co ee eral ra loa [eseeas ee nn eae oe eae aera epee pene Plasmodium falciparum ‘men couarrse votoatcn frees on cel ete » ee @ Oz @@ Bt P. vivax Tame: grande: nimero;ecaso.amose- | Formas inmacures diicies do dtingut ‘ado formas maduras. 12-24 morezotos, | go os rotozates maduros, Formas edu (Gonoramonte 16,n congomorado ie: | fo: regendas, grandes, cronatina: Unies, iisrplgmeno: masa suet, then ot a aerate ea tl eeve at el erences Ee eae i ‘edondeeds, formas compacas. cma i ‘tina: Unica, prominente: cltoplesme: bas ape cere rece coopera tgs Pes eet eshte sear 3 ae ce Oe, ure coos eeor sid = eles eee EN eae es ee cee (ot ceca opera : Toms poate emir || Set erpeo. cement | Sears bemare Leen Seicieaneseic che, | Meuse Neca Songs: | Set trat mara eons eer ee cee see eel cee vpees Se one 3 | seameiemmacreesperene cee | etn sgtt coeoanas™” "| Sanwa Sapriges ste po Eger Soran coerence hi Srteareu uo amconmey raeESQUIZONTES GameTociTosCRON OF ESE OASIS Fig. 11. Plasmodium malariae Tee tag ef ® 3 ~p@ *,2 @ . & nee 2 9 RO OMS. Q sro? 8a e * @ <6 e "0a , @ @ .@°%. 6s eo @2'9@) Preparacién de gota gruesa 08 66 68 ed 08 68 ©@ @@ 88PARASITOS SANGUNEOS Fig. 12. Plasmodium ovale 029 .-: ent ae ie gin gut, ORD. Sad s as ‘TROFOZOr eeenre @etGeex ESQUIZONTES GamerociTosee ENTIFCACION OE SPECIE A Fig. 13. Aspecto de los elementos celulares en extensiones sanguineas y preparacione: de gota gruesa teflidas con Giemsa: efecto del pH en la tincién de los parasitos paliidicos con Giemsa Leuoocios Extonsién sanguinea fina Preparacién de gota grussa N=Neutréfios, e = Eosindfilos, M = Monocites, L= Linfoctos, P = Plaquetas Extensién sanguinea --ERTROCITOS ——preparacion de gota grussa = Normocitos, MC= Microcitos, PM = Macrocitos policromaticos, Pe = Poiquilocitos, PB = Bacofita puntuada, CR = Anilo de Cabot, HJ = Cuerpos de HoweilJolly, AC = «eNubess Tolloulares y 6rganos cromatoides on anemia eguda pH 64 68 72 76 06080 TTINGION PALUDICA Y pHTS 3. En cada caso, el recuento de parisitos en relacién con el de leucocitos puede convertitse en patisitos por jul mediante una sencilla fSrmula matemstica: N* de pardsivos * 8000 AE parisitos * $000 n° de parisitos por ul N° de leucocitos aaa Esto significa que si se cuentan 200 leucocitos, el mimero de parisitos conta- dos se multiplica por 40; si se han contado 500 leucoeitos, el aimero de pa- risitos se multiplica por 16 4. La prdetica normal consiste en contar todas las especies presentes ¢ incluit las fases sexuales y asexuales, En ocasiones, cuentan por separado los gametocitos de Plasmodium fakiparum, pero incluso en ese caso conviene incluitlos en el re: ccuento general de parisitos. Raras veces se pueden separar los gametocitos de P. vitae 0 P. malariae de los parisitos asexuales con suficiente precisién como para que esté justificado realizar un recuento de gametocitos. El sistema del «+» Un método més sencillo de enumerar los parisitos en las preparaciones de gota ‘gruesa es utilizar el sistema del «t». Este indica el recuento relative de parisitos y centrafia el uso de un cédigo de 1 a 4 signos et», como sigue: -10 parisitos por 100 campos de gota gruesa ++ = 11-100 parisitos por 100 campos de gota grucsa -10 parisitos por campo de gota graesa és de 10 parisitos por campo de gota gruesa Este sistema sélo debe usarse cuando no es posible realizar el recuento de parisitos por il de sangre, que es més aceptable. Elementos que pueden confundirse con parasitos paluidicos En las preparaciones sangufneas, las siguientes estructuras pueden confundirse con parisitos palidicos (véase también la figuea 13): — plaguetas adhetidas a los eritrocitos en las extensiones sanguiness, — conglomerados de plaquetas, — fragmentos de leucocitos en les preparaciones de gota gruesa, — colorante precipitado en los eritrocitos, — restos de la piel del paciente, polvo, bacterias, levaduras, esporas y otros mi- croorganismos que caen en la preparacién mientras se esté secando, — algas y otros organismos procedentes de soluciones de tincién contaminadas, Todos estos elementos pueden parecer parisitos palidicos en las preparaciones san- guineas tefidas y pueden hacer que se diagnostique paludismo por error. En ge- neral, no obstante, carecen de alguno de los tres componentes de un microorga- rnismo paliidico: citoplasma tenido de azul, cromatina teaida de rojo o morado y igmento marron o negro. A excepcién de los aaillos (que carecen de pigmento), es necesario ver las tres caracteristcas antes de decidir que una estructura es un pa- risito. Si ello no puede afirmarse con seguridad, es necesario buscar microorgaai mos mis tipicos. Cuando no se encuentre nada que sea claramente un parisito pa- Iidico, debe anotarse en la preparacién «Parisitos palidicos no halladoss, preferi- blemente después de preparar, tehir y examinar otra extensi6n. En la figura 13 apa- recen diagramas de algunos elementos que pueden confundirse con parisitos palidi- 1OENTICACION DE ESPECES Es preciso mantener las preparaciones sanguineas protegidas mientras se secan para evitar que el polvo y microorganismos como esporas o bacterias las contaminen, Asimismo, deben mantenerse las soluciones de colorantes (colorante concentrado y agua amoztiguada) bien cerradas para que el polvo y los microorganismos del aire zo las contaminen y pasen después a las preparaciones durante Ia tincién. Tripanosomas Los tripanosomas pueden aparecer deformados en las preparaciones de gota grue- sa. Cuando no se pueden reconocer en estas preparaciones, es preciso buscarlos cen las partes més gruesas de las extensiones sanguineas; se encuentran entre los critrocitos. Obsérvese la longitud, la forma y el tamaao del cinetoplasto de los parisitos. Flagel artrior CGioatolato grande Membranaondlte Nleo Cincopiasto Importante 1, En Africa, las dos subespecies de tripanosoma que infectan al hombre son idén- ticas. No se puede determinar la subespecie a partir del aspecto de las prepa taciones tefidas. 2, En América del sur y central es preciso distinguir entee T. envai y T. range T. rangeli es: mas largo que T. engi 4, T. ened tiene un cinetoplasto muy largo y prominente y a menudo adopta for- ma de C, U 0 S en las preparaciones tefiidas. Microfilarias ‘La identificacién de microfilarias se basa en las siguientes caracteristicas (véase la figura 14); — presencia o ausencia de cubierta — presencia o ausencia de nticleos en el extremo caudal, — cuerpo interior (puede verse 0 no), = tamaao de la microfilaia, ‘A.veces deben observarse otras caracteristicas para identificar las especies. Por des gracia no todas las caracteristicas de diagnéstico pueden observarse en las prepara ciones tefidas con Giemsa, de modo que a veces es preciso utilizar colorantes es- peciales como Ia hematoxilina de Delafield para ponerlas de manifiesto, Importante 1, Usilicese un objetivo x10 paca localizar las microfilarias. 2, Recérrase sisteméticamente la preparacién sanguinea, 3. Utilicense objetivos de gran aumento, en seco (x40) 0 de inmersién para exa ‘minar las microfilarias a fin de identificar Ias especies. 92PASS EN a122042u0 wareooidens syouosuEy jpezz0 ‘jeuosuey ‘susjsiod eyouosuen ouewny 498 |9 ue uesaiede enb seueIyosoIN “p} “Bid 93A. Wcbereria banrofi (Asia, Africa, América central y del sur, Antillas). La cubierta puede tefirse con el colorante de Giemsa 0 no; se tifte con los co- lorantes de hematoxilina. Nicleos discretos. Espacio vacio entre los niicleos y Ia pared del cuerpo. Sin aiicleos en el extremo candal. ‘Cuerpo interior raras veces visible con el colorante de Giemsa. No se tifle con hematoxilina, Espacio cefilico tan largo como ancho. El extremo caudal puede estar doblado hacia atris por debajo del cuerpo. Aps- rece en la sangre. B. Brugia malayi (Asia sudoriental, India) Microfilarias ensortijadas, La cubierta se tite de rosa oscuro con el colorante de Giemsa. Se tie también con los colorantes de hematoxilina Los nicieos estin hacinados, y rellenan todo el cuerpo. Se observa un espacio vvacfo entre los nicleosy Ia pared del euerpo. El espacio cefélico es dos veces més largo que ancho. El cuerpo interno puede terse 0 n0; cuando lo hace, resulta prominente. Apa- rece en la sangre. C. Lea dn (560 en Africa) Microfilarias ensortjadas y dotadas de cubierta, La cubierta no se tife con el colorante de Giemsa; se tife con los colorantes de hematoxilina. Los niicleos estin hacinados y llegan hasta el extremo caudal; Ia cola es pun- tiaguda. El espacio cefilico ¢s tan largo como ancho. El cuerpo interno no sue- le tefirse. Se encuentra en la sangre. 1D. Mantonlla perstans (Aftica y Sudamérica) “Microfilarias pequefias y finas. No tiene cubierta Los niicleos Megan al extremo caudal; el tltimo nicleo es més grande; el ex tremo caudal es achatado, Los niicleos se tien intensamente y se mueven a la vez. Se encuentra en la sangre. FE, Manonela vzzardi (América central y del sur) Microfilarias pequeftas y finas. No tiene cubierta Los micleos no legan al extremo caudal; la cola es puntiaguda. Se tifle muy ligeramente; el extremo caudal es dificil de observar. Se encuentra en la sangre y In piel F. Mansnellasrptocrea (Africa occidental y central) Microfilarias pequefias y finas. No tiene cubierta Los micleos llegan al extremo caudal. La cola es ganchuda; la punta esté redondeada o bifurcada, Sélo se encuentra cn la piel. G. Onchoersa vabalus Microfilarias gruesa, No tiene cubierta, Cabeza a menudo espatulada, Los miicleos no legan al extremo caudal. ‘Sélo aparece en la piel.Bibliografia 1, AGHA, PLN. y S2VERES, B. Zaonartyenermedade rami comune al bombrey 2 ln srimales, 2* ed., Washington, D.C., Organizacién Panamericana de la Salud, 1986 (Publicacion cieatfiea N° 503), 2. CHIRESBROUGH, M. Medical Laboratory manual fir tropical cunts Vol. 1, 2 ed. Londres, Butterworths, 1987, 3. Diagn cbniguet far intatinelpaaciti nttons (TPT) applica primary bath care (PHC) amin Ginebra, Organizacién Mundial de la Salud, 1985 (documento inédito WHO/PDP/85.2). 4. Diaguatic wlnigues ix bisssiais cntrel Ginedea, Oxgaoizacién Mundial dela Salud, 1983 (documento inédito WHO/SCHISTO/83.65)" Enalution de tos miles de pines 3 clertamie pour le diggs quantita de ifeation ‘ntande par Onchserca tou. Ginebra, Orgaaizacién Mundial de Ia Salud (documento inédito WHO/ONCHO/75.117). 6. Guidelines for hisomaniacs contre at regional and subregional programme. Ginebra, Organizacién Mundial de la Salud, 1988 (documento inédito WHO /LEISH/88.28)" La luca corral filariasis lnfitien Manoal paca persoral ée salud. Ginebra, COrginizacién Mundial de la Salud, 1988. 8, LEVENTHAL, Ry CHRADLE, R. F. ed. Medical parasitology. A affnsrution text. 28 ed Filadelfia, FA. Davis Company, 1985. 9, Malaria dager Ginebra, Organizacién Mundial de In Salud, 1988 (documenta inédito WHO/MAL/88.1045). 10, Menu for labirtory sstiatons of acute entre infections. Ginebra, Organizacion Mundial e la Salud, 1987 (documento inédito WHO/CDD/83.3 Rev. 1) 11, Manuel de tence baie pare um laberaterio de alu. Washington D.C., Organizacion Pana. ‘mezicana de la Salud, 1983 (Publicacién Cientfica N° 439), 12, MELVIN, D. M. y BROOKE, M. M, ed. Laboratory pratdars forthe diagno of inttinal pax rasite. Atlanta, Departamento de Servicios de Salud y Humanos de los Estados Unidos, 1982 (HHS Publication N° (CDC) 82-8282), 13. OMG, Serie de Informes Técnicos, N° 793, 1990 (Lucha cor la shmanass informe de uun Comité de Expertos de la OMS). 14. OMS, Serie de Informes Técnicos, N° 739, 1986 (Epidemiology canta de a tripasoia- ‘ir africana: informe de wm Cat de Exgerter dela OMS 15. OMS, Serie de Informes Técnicos, N° 752, 1987 (Comité de Expertos de Ia OMS en ‘Oncocescosis tercer informe 16, Sosa N Hon ham goat 3 Tye, Ac Jpont de Lach ‘contra los Parksitos y Orgenizacién Japonesa de Cooperacién Internacional en Plani- cacién Familiar, 1981, 95 pp. 17, THIBNPONT, D. ETT AL. Diagerngbelminthit by coproeialecaminatioy, 2 ed Beert, Ba ‘ge Janzen Reusch Foundation, 1986 18 Toppansomia: entra manual. Ginebea, Organiza sn Mundial de Ia Salud, 1983. + Pusde solcitarse a la Division de Lucha contra las Enfermedades Tropicales, Organizacién Munda! de la Salus, 1211 Ginebra 27, Suiza Puede solitarse & Luchs contra ias Enfermedades Di Salud, 1211 Ginebra 27, Suz. (eas, Organizactén Mundial de 95ANEXO 1 Equipo y material para el diagndostico parasitoldgico en laboratorios de centros de salud y hospitales de distrito Equipo Microscopios con iluminacién adecuada, de preferencia con fuentes luminosas in- corporadas. Se necesitarin microscopios con espejos ajustables si Ia fuente lurminosa es inde pendiente, por ejemplo, la luz del sol o una kimpara, Los microscopios deben dis- poner de un diafragma iri ajustable y un condensador por debajo de la platina; ocu: lates X10 y objetivos x10, X40 y de inmersién. Centrifugadora, modelo de mesa 0 de suelo, con cabezal y cubetas para tubos de 15 ml, Es preferible que las cubetas queden cerradas, Centrifugadora de microhematécrito. Frigosifico, 4-5°C. Material Aceite de inmersiéa, viscosidad baja Aguia para aspiracién esplénica Aguia 25, 0,5 * 16 mm, para inyecciéa subeuténes. Aguia para puncisn venosa Bisturi o cuchillas de afeitar Bloque de madera con ranuras para coloca los postaobjetos Boligeafos o rotuladores, Celofin, que pueda mojarse, 40-50 jum de espesor, tiras de 25 * 30-35 men. Cinta adhesiva, transparente, 2 cm de ancho, para frotis anales Crondémetro (teloj) Cubreobjetos cuadrados, 20-22 mm de lado Depresor lingual (0 cuchaeas de plistico) Discos de tincién Embudo Etiquetas Fichas de registro Filtro, alambre de latén, malla de 40 (425 jum), 7,5 cm de didmetro Filto de membrana, 12 6 15 Hm y soporte para el filtro Frascos, 1000 ml Frascos cuentagotas para solucién salina, solucién youada, azul de metileno amor- tiguado y metanol (para tedir sangre) Feascos, de vidrio, con tapones de vidrio, 250 ml, 1000 ml Frascos, dosificadores o pulverizadores de plistico, 100 ml, 250 ml y 500 mi 96Ce Frascos, pequefios, 25 ml, 30 ml, 50 ml y 100 ml, con tapones de goma o cuenta- gotas y tapa de rosea Gasas, estérles, para limpiar los dedos Gradilla, de madera, pata secur frotis sanguineos Gradilla para tincién, vatillas de vidrio 0 frascos pequefios, Gradilla para tubes de centrifugadora Jeringa, plistico, 56 10 ml Lancetas, desechables, en envases individuales Matraces, cénicos, para la recogida de orina ‘Matraces, 108 ml, 250 ml, 1000 ml y 5000 ml Palillos aplicadores, de madera Pantalla, acero inoxidable, nailon 0 plistico, malla 60-105 Papel higiénico, servilletas de papel o papel especial para lentes Pinzas ipetas, capilares, de unos 14 em de largo, con perillas de goma (para el procedi- miento de concentracién y uso general) Pipetas Pasteur con perillas de goma Pipesas, Sabli Pipetas, serolégicas, 1 ml, 5 ml, 10 ml, con perillas de goma Placa caliente (place metélica con mechero de alcohol) Plantilla, acero ino: le, pléstico o cartén, tamafto 20-50 mim Postaobjetos para microscoy io: 25 «75 mm, 50 * 75 mm (facultative) Probetas graduadas, 10 ml, 25 ml, 50 ml, 100 ml y 1000 ml Tapones de goma, para tubos de centrifugadora de 15 ml (generalmente tamatio 0 61) Toallas de algodén sin pelusa ‘Toallas, papel o esponjas Torundas de algodén Tubos, capilares ‘Tubos de centrifugadora, cénicos, graduados, 15 ‘Tubos de ensayo, grandes, 150 13 mm, que puedan hervirse Tubos de ensayo, pequefios, 100 13 mm, con tapones de algodén 0 de rosca ‘Tubos de reactive Varilla de vidzio Vaselina Viales, 20 mi, con tapas de rosea Sustancias quimicas y soluciones para la Preparacion de reactivos (Su preparacién se describe en el anexo 2) Acetato sédico en polvo (CH,COONA) o existales (CH,COONa.3H,0) Acido acético glacial Acide clorhidrico, coneentrado (HCI) yodo (1), cristales Acido fosforiingstico (HPO (W030). 5H,0),crstales 7OS ‘Agua destilada Citeato sédico (e4H,0,Na,2H,0),cristales Cloruro mereirico (HgCl,), eristales Clonuro sédico (NaCl) Colorantes: — Azul de metileno amortiguado — Colorante A de Field — Colorante B de Field — Giemsa, solucién de reserva — Glicerol - verde malaquita;glicerol - azul de metileno — Hematosilina de Delafield, solucién de reserva — Safranina en soluciéa — Tincién tricromitica, solucién de reserva Etanol (etilalcohol), 70 %, 95 %, 100 9 (absoluto) ter, calidad anestésica o téenica, 0 acetato etilico Fenol (dcido earbélico),exstales Formalina (formaldehido) Fosfato disédico (Na,HPO) (para agua amortigueda) Fosfato potisico (KH,PO,) (para agua amortiguada) Glicerol Isopropanol (isopropilalcohol) Metanol (metilaleoho}) Polivinilalcohol (PVA) ‘Tintes en polvo (colorantes): — Azul de metileno — Amur 1 - para colorante A de Field — Cromotropo 2R - para tincién tricromética — Bosina - para colorante B de Field — Verde claso SF - para tineién tricromdtiea — Verde malaquita — Verde sélido FCF ~ pass tincién tricromitica Xileno Yoduro potisico (KD, eristales Si se prepara Ia hematoxilina de Delafield en el laboratorio, se necesitarin los si- guientes ingredientes: — sulfato aménico de aluminio para preparar una solucién saturada de sulfato aménico de aluminio = polvo o cristales de hematoxilina 98ANEXO 2 Reactivos y soluciones: preparacion Solucién decolorante de alcohol y acido acético (N° 1) Etanol, 95 Acido scético glacial (CH,COO! ) ‘Agua destilada ‘Viertase el etanol al 95% en una probeta graduada de 1000 ml, Asddase el agua destilada, con lo que se conseguiré una cantidad total de 950 ml. ‘Viertase una botella de 1000 ml. Agréguese el dcido acético glacial y mézclese, Rotilese la botella: DECOLORANTE ALCOHOL ¥ ACIDO y anétese la fecha. Guardese en una estanteria o dentro de un armarito. La solucién se conservard du- ante un ao o mis, Advertencia: EI Acido acético glacial es muy corrosivo. Solucién amortiguada de azul de metileno (N° 2) Solucién A (solucién de acido acético) Acido acético glacial (CH,COOH) ‘Agua destilada : ‘Midanse los 98,8 ml de agua destilada y viértanse en un frasco o botella limpios; agréguese 1,2 ml de acido acético glacial y mézclese bien, Consérvese en una bo- tella impia Advertencia: Bl icido acttico glacial es muy corzosivo, ‘Soluci6n B (solucién de acetato sédico) ‘Acetato séico (CH,COONA) (Seu acta sco eitlino (CHC COONa 3H HO) | Agua destilada : Midanse y viértanse 100 ml de agua destilada en un frasco pequefto. Pésense 1,6 de acetsto sédico (o 2,6 g de acetato sédico cristalino) y disuélvanse en agua; méz clese bien. Consérvese en una botella limpia, Soluci6n de trabajo (para la tincién) Soluciéa A (Soluciéa de fcido aeético) . Solucién B (solucidn de acetato s6dico) Tiote de azul de metileno ‘Agua destilada Viéranse los 50 ml de agua destilada en un frasco o un matraz de unos 150 6 200, ml. Anadanse las soluciones A y By mézclese bien. Agréguense unos 0,5 g de co. lorante de amul de metileno y agitese o remuévase hasta que se haya disuelto, Si no se disuelve todo el colorante en unos 15 minutos, conviene filtrar la solucién, Vier tase, a través de un filtro en caso necesario, en una botella limpia con tapén y 10- tilese: SOLUCION AMORTIGUADA DE AZUL DE METILENO. Anétese la fecha en Ia etiqueta, Bsta soluciéa se conserva indefinidamente, Si se sedimentan 99OO particulas de tinte en el fondo de Ia botella, conviene filtrar Ia solucién, Viértase luna pequefia cantidad (20 ml) en un fasco cuentagotas para el uso cotidiano, El cucntagotas debe llevar una pipeta con una perilla de goms. Nota: Las soluciones amortiguadoras de acetato con un pH de 3,6 son las que me jores resultados dan para este colorante. Soluciones amortiguadoras para Ia tincién en el Ppaludismo (N° 3) Para la tincién de Giemsa de los parisitos paliidicos es indispensable una solucién amortiguadora de fosfato equilibrada a pH 7,2. Preparacion de una solucién para el uso cotidiano 1, ‘Disuélvase 1,0 g de fosfato dissdico (Na,HPO,) anhideo y 0,7 g de fosfato mo- nopotisico (KH,PO,) en 1 litro de agua destilada 0 desionizada. Puede usarse agua de Iluvia 0 incluso agua del grifo filtradas ni no hay otra posibilidad, 2. Verifiquese el pH con el medidor de pH 0 un indicador basado en los colores, como el comparador de Lovibond, 3. Siel pH es inferior a 7,2, ageéguense pequefias cantidades de una solucién de Na,HPO, al 2.6; si es superior a 7,2, agréguense pequefias cantidades de una solucién de KH,PO, al 2%. 4. Una ver equilibrada a pH 7,2, consérvese la solucién en una botella bien ta- pada, da preferencia de cristal oscuro, en un lugar fresco y alejado de la Inz del sol Esta solucién se conserva durante algunas semanas, pero debe examinarse periédi- camente para cerciorarse de que no crecen levaduras 0 mohos. Agitese la soluciéns si esta turbia, tirese. Preparacion de una solucién concentrada de reserva (itil para trabajos de campo o envio a centros alejados) 1, Disuélvanse 3,0 g de NaHPO, anhidro y 2,1 g de KH,PO, en 25 ml de agua destilada 0 desionizada, Ajistese el pH 2 7,2 del modo descrito en el anterior punto 3. 3, Almacénese en una botella oscura alejada de la luz del sol; se conservari du- 4. Para preparar una solucién de trabajo, diliyase 1 ml del concentrado con 20 ‘ml de agua destilada o desionizada. Preparacion de paquetes Las dos sales de fosfato pueden pesarse previamente ¥ ponesse juntas en un tubo © una botella bien tapados, o en una bolsa de plistico herméticamente cerrada, con tuna etiqueta bien visible, y almacenarse en un tarro con tapa de rosca. Para pre- parar la solucién agréguese el contenido del paquete o del tarro a 1 litzo de agua Y ajstese el pH a 7,2. Solucién de carbol-fucsina (N° 4) Fucsina bisica : - = 10g Branol, absoluto, calidad técnica .........6+20++ severe es 100 ml Fenol (catbol) ... pooodo veeeeeeee 50g, Agua destilada . liar) 100Preparacion 1. Pésese el polvo de fucsina bisica y péngase en una botella de 1,5 litros. 21“ Anddanse 100 ml de etanol absoluto y disuélvase el colorante por completo. 3. Pésese el fenol en un mattaz y disuelvase en un pequefio volumen de agua desti- lada. 4. Agréguese la solucién acuoss de fenol a la solucién de colorante y mézclense bien. 5, Agréguese el resto del agua, mézclese bien y sotilese Ia botella. La solucién co- lorante se conservard indefinidamente. ‘Nota; Fl etanol es inflamable. El fenol es réxico y corrosive, Solucién de carbol-xileno (N° 5) Nota: Esta solucién debe prepararse en vn Iaboratorio de nivel intermedio debido 4 la peligrosidad del reactivo utilizado, Afljese la tapa de un tarro de cristales de enol! (écido carbélico) y coldquese el tarto en un baiio de agua. Caliéntese el agua para licuar los eristales. NO CALIENTE CRISTALES DE FENOL DIRECTA, MENTE SOBRE UNA LLAMA. COLOQUE SIEMPRE EL TARRO EN UN BANO DE AGUA. Fenol Hquido ....0.e0.+ oct 200 mi Xileno — — s+ 600 ml Midase el fenol liquide y viéetase en una botella de 1000 ml con tapén de cristal. ‘Agréguese el xileno. De ser posible, utilfcese una botella sin abrir de xileno. Mé2- clese agitando la botella “Anétese en la etiqueta CARBOL-XILENO y Ia fecha, Almacénese en un armario, en una estanteria alejada de la luz dizecta, La solucién se conserva durante un afio o més, siempre que la botella se mantenga bien cezrada. Puede ponerse cinta adhesiva alrededor del tapén para impedir que entre humedad y que se eche a per: der la solucion. Advertencia: El fenol es sumamente corrosive y venenoso. Colorante de hematoxilina de Delafield (N° 6) (Celstsles de hemnatoniline) eee eet ert a eee et elle) lesan sbeclonn ects eee th tee eet ail Solucién saturada de sulfato de amonio y aluminio (NH,AI(SO,), en agua destilada ceceteeeseteesees 100 ml Glicerol (C,H.(OH)) oo 2. 28 ml ‘Metanol absoluro : Decteseeeee 28 mn) Disudlvante los cristales de hematoxilina en el etanol absolute. Anddanse unas cuantas gotas cada ver a la soluciéa saturada de sulfato de amonio y aluminio. Dé- jese esta soluciéa destapada a plena lux del sol o en una ineubadora a 37° C da- rante 3-4 meses para que la hematoxilina se oxide dando hemateina. Tipese y rotilese la botella: HEMATOXILINA DE DELAFIELD y anétese la fe- cha. Cuando se abra de nuevo, filtrese la solucién y aftédanse el glicerol y el alco- hhol metilico, con lo que el colorante queda listo para usarlo, Manténgase tapado para impedir la evaporacién. El colorante se conservari durante al menos 18 meses. 7 No debe usarse el fencl liquide dlsponit en el comercio. Por contener agua, es inadecua- dio para la tics, La nemateina no es lo mismo que el producto sanguineo hematina, 101anexo2 Etanol, 70 % (N° 7) Eranol, 95% So0co0000000c00e0000 cee =:726 mi ‘Agua destilada eee cee ttn (274 ial Viertase el etanol en una probeta de 1000 ml. Agréguese agua destilada hasta con- seguir un volumen total de 1000 ml. Viértase en una botella de 1000 ml con tapén de cristal Rotilese 1a botella: ETANOL 70 % y escrfbase la fecha. Esta solucién se conser- varé indefinidamente, pero hay que mantener la botella bien tapada. Consérvese fen una estanteria o en un armatio. Advertencia: El etanol es inflamable Fijador éter-alcohol (N° 8) Eter . eeoconncaccK 20 ml Branol, 95% = 20 ml Agréguese el éter al alcohol en una probeta y mézclese. Viértase en un taro con tapén de rosca o tapa con borde de cristal esmerilado. Advertencia: El éter es sumamente inflamable y potencialmente explosivo. Tinci6n de Field (N° 9) Colorante A de Field Elaboracin a partir de polo preparado: Polvo para colorante A de Field 598 ‘Agua destilada caliente 600 ml “Mézclese hasta que el polvo se disuelva. Filtrese cuando se haya enfriado, Elaboraiin a partir de clorantes y productos guimios originals: Azul de metileno (medicinal). 16g Amat T sseeeeeeee ‘i 10g Fosfato disédico (Na,HPO,), anhidro 10,0 g Fosfato monopotisico (KH,PO,) 12,5 g ‘Agua destilada 1000 mi Disuélvanse los dos fosfatos en el agua. Viértase aproximadamente la mitad de esta solucién en un frasco de 1 litro que contenga algunas cuentas de vidrio. Anidanse los polvos colorantes y mézclese bien. Agréguese el resto de la solucién de fosfato. Mézelese bien y flltese. Colorante B de Field Elaboraciin partir de poho preparado: Polvo para colorante B de Field .... 48g ‘Agua destilada caliente 600 mi Mézclese bien hasta que se disuelvan. Filtrese la mezcla cuando se haya enfriado. 102I Proparacn a parti de colorantesy prodactes quimices originale: Eosina (hidrosoluble, amarilla) ... 208 Fosfato disédico (Na,HPO,), anhidro 10,0 g Fosfato monopotisico (KH,PO,) ereo00004 ; 12,5 g Agua destilada...... eee + 1000 ml Disuélvanse ambos fosfatos en el agua. Viértase la mezcla en un frasco de 1 litro. Atédase la eosina y mézclese hasta que se disuelva. Filtrese. Soluciones de formalina (N° 10) Solucién de formalina al 10 % para la conservacion de heces Formalina (formaldehido neutro, al menos al 37%) Agua destilada 100 ml ++ 900 ml Midase la solucién acuosa de formalina en una probeta graduada y viéstase en una botella de 1000 ml con un tapén o tapa de rosea de vidrio. Agréguese el agua des tilada @ la botella y mézclese. Rotilese la botella: FORMALINA al 10 % y anétese la fecha, Gudrdese en una es tanteria o un armario. La solucién se conservari durante dos afios o més. Formalina al 2 % (método de concentracién para microfilarias) Formalina (formaldehido neutto, por lo menos al 37%) < 20 mi Agua destilada ..... ceeseeses cs 980 ml ‘Midase la solucién acuosa de formalina en una probeta graduada y viértase en una botella con capacidad para 1000 ml con un tapén o una tapa de rosea de vidsio. Agréguese el agua destilada a la botella y mézclese, Rotilese la botella: FORMALINA al 26 y anétese Ia fecha. Guirdese en una es- tanteria o un armario. La solucién se conservaré durante dos afios o mas. Aadvertencia: La formalina es corrosiva y téxica Colorante de Giemsa (solucién de reserva) (N° 11) El colorante de Giemsa se usa normalmente en a tincién ordinaria de extensiones sanguineas para cl diagnéstico del paludismo. Sin embargo, la calidad de este co- lorante, ya sea en solucién preparada o en forma de polvo, varia segin su fuente de suministro por lo que es aconsejable adquirirlo a un fabricante acreditado. In- cluso en ese caso, es necesatio determinar la calidad del colorante ensayando cada lote después de prepararlo y antes de proceder a la tincién ordinaria de cantidades importantes de extensiones sanguiness, Colorante de Giemsa en polvo 386 Metanol = 250 ml Glicerol se 250 rl Aunque es preferible usar uns botella oscura, puede utilizarse una botella de cristal © polietileno duro quimicamente limpia y seca, de color claro y de tamafio adecua- do, También se necesitarin alrededor de 50 cuentas de vidrio de unos $ mm de didmetro, 1031. Coléquense las cuentas de vidio en la botella; vigrtase la cantidad medida de metanol y agréguese el colorante en polvo. 2, Ciérrese bien la botella. El polvo descenderd lentamente por el metanol hasta sedimentarse en el fondo. Agitese Ia botella con un movimiento circular du- ante 2-3 minutos, 3. Agréguese la cantidad medida de glicerol y repitase el proceso de agitacién. Debe seguir agitindose durante 2-3 minutos cada media hora, al menos seis ve 4, Déjese reposar a botella durante 2-3 dias agiténdola 3-4 veces al dia hasta que el colorante quede completamente mezclado, Guérdese parte de esta solucién, de reserva en un frasco pequetio para el uso ordinario a fin de evitar la con: taminacién de la solucién de reserva. Cada lote de colorante recién preparado debe rotularse debidamente, con Ia fecha de preparacién, y debe ensayarse para determinar Ia dilucién y el tiempo de tin- cidn idéneos. Manténgase la botella siempre bien cerrada, en un lugar fresco, ale- jada de la luz solar directa. Las botellas de reserva de cristal claro pueden cubritse con una funda de papel oscuro grueso para protegerlas de la luz. Soluci6n de glicerol-verde de malaquita o glicerol-azul de metileno (N° 12) Glicerol ... Pane cetseteeee 100 mi Solucién acuosa de verde de malaquita al 3 %, o solucida acuosa de azul de metileno al 3% .. cecstteteee tml Agua destilada 22.00... eee 100 mi Trindrese un poco de polvo de verde de malaquita o de azul de metileno en un mor- ‘ero limpio y seco. Pésense 3 g de polvo, coléquense en una botella y aAdase agua estilada hasta obtener 100 ml. Ciérrese herméticamente y rotilese: SOLUCION ACUOSA DE VERDE DE MALAQUITA al 3% 0 SOLUCION ACUOSA DE AZUL DE METILENO al 3%, Gudrdese en un armario protegido de Ia luz ara preparar la solucién: viéetase 1 mi de la solucién acuosa al 3% en una botella de 250 ml. Afédanse 100 ml de glicerol y 100 ml de agua destilada y ciézrese la botella; mézclese cuidadosamente antes del uso. Solucion de acido clorhidrico-etanol (N° 13) Acido clorhidrico (concentrado) . votes 1 ml Branol, 95% 100 mi Viértanse 100 ml de etanol al 95 % en una botella limpia de 250 ml con tapén de cristal. Atédase 1 ml de cido clothidrico concentrado y mézclese. Advertencia: El écido clothidrico es muy corrosive. Bl etanol es inflamable. Soluci6n de acido clorhidrico-metanol (N° 14) Acido clorhidrico (concentrado) «+. 3 mi Metanol absolute : tenes teseeees 100 ml Midanse 100 ml de metanol absoluto y viértanse en un botel limpia de 250 ml con tapén de cristal. Agréguense 3 ml de dcido clorhidrico concentrado y méaclese. Advertencia: El icido clorhidrico es muy corrosive, El metanol es inflamable. 104REACTIOS ¥ SOLUCIONES Solucién decolorante de dcido clorhidrico-agua (N° 15) Acido elothidrico (HCD, concentrado -.0,5 ml Agua destilada . ‘ e+ 100 ral Midase el agua destilada y viértase en una botella de 1000 ml con tapén de cristal Agréguese el cido clothidrico. Mézclese completamente. Rotiilese la botella: HCI al 0,5 9 y andtese Ia fecha, Advertencia: El écido clorhidrico es muy corfosivo, Solucién de alcohol yodado (N° 16) Feanol, 70% 2. sees eee Alm Cristales de yodo ..... econ "unos pocos ‘Viertase el alcohol al 70% en un frasco pequefio. Con ayuda de dos palillos apli cadores utilizados a modo de pinza, t6mense algunos cristales de yodo y agréguense al alcohol. Agitese o semuévase Ia mezcla y anddase més yodo en caso necesario hhasta que la solucién tenga el color del té fuerte. El color es importante. El alcohol yodado sirve para eliminar el eloruro mereirico que deja el fijador y por ello debe tener Ia potencia necesaria para conseguirlo. Si no es lo bastante fuerte, no eliminaré el residuo de cloruro mercirico de la preparacién, lo que dificultard cl examen, Si es demasiado fuerte, el yodo penetrari en los protozoos e impediré la tincién efeetuada con Ia solucién tricromitica Rotilese la botella: SOLUGION DE ALCOHOL YODADO y anétese Ia fecha. Tas soluciones de alcohol yodado deben prepararse de nuevo cada tres semanas. Yodo de Lugol (solucidn de reserva al 5 %) (N° 17) Yodo Fi Se Yoduro potisico (KT) vevttettretereeeeesees 10g. Agua destiada 2... cecceee : : hasta 100 ml Pésese el yodo en un disco de procelana un vidrio de reloj. Tritarense el yodo seco y el yoduro potésico en un mortero. Afédase agua, unos cuantos mililitros cada ver, ¥ tritirese minuciosamente después de cada adicién hasta que se disuel- vvan el yoduro y el yodo. Viertase ia solucién en una botella de cristal de color ém- bar con el resto del agua destilada, Otro mitede: Diswélvase el yoduro potisico en unos 30 ml de agua. Asédase el yodo y mézclese hasta que esté disuelto, Afédanse los 70 ml restantes de agua y mézcle- se bien. Consérvese en una botella de color marréa, Yodo de Lugol (solucién al 1% para preparaciones humedas) (N° 18) La solucién de reserva de yodo de Lugol es demasiado fuerte para las preparacio- nes de heces en himedo, Hace que el material fecal forme grumos en los que los ‘microorganismos pueden quedar atrapados y no verse. Asi pues, ¢s necesario diltuir la solucién de reserva de yoda de Lugol ‘Yodo de Lugol (solucién de reserva al 596) (N° 17) 5 ml Solucién salina, isot6nica (N° 24) 20 ml 105Midase la solucién salina isoténica y coléquese en un frasco dispensador o gotero. Afiddase la solucién de reserva de yodo de Lugol al 5 %. Mézclese minuciosamen: te, Con ello se obtendré una solucién de yodo al 1% que teAird satisfactoriamente los quistes. Rotilese Ia botella: YODO DE LUGOL al 19 y anétese la fecha, La solucién al 1% debe prepararse nuevamente cada 14 dias Solucién de azul de metileno-fosfato (N° 19) ‘Azul de metileno en polvo! Fosfato disédico (Na,HPO,) Fosfato monopotésico (KH,PO,) Agua destida....... ; Pésese el polvo de azul de metileno y coléquese en un mortero limpio y seco. Agré- ‘auense el fosfato disédico y el fosfato monopotisico, Con la mano del mortero, tri- tiirense a la vez los polvos de colorante y de fosfato, mezclindolos bien. Pésense porciones de 1 g de la mezcla y dispénganse en viales pequefios bien tapados. Rotilense los viales: AZUL DE METILENO-FOSFATO, anotando la fecha. La mezcla seca se conservari durante bastante tiempo si los viales quedan bien cerra- dos. Coléquese un trozo de cinta adhesiva alrededor de la tapa para sellar el vial € impedir la entrada de humedad. Preparacion de la solucién Coléquese 1 g de la mezela en un frasco de 500 ml. Agréguese el agua destilada y agitese el frasco o remuévase para disolver la mezcla de colorantes. Filtrese con un papel de filtro una botella limpia y seca de 500 ml con tapén de cristal Rotilese la botella: solucién de AZUL DE METILENO-FOSFATO, anotando la fecha. Guardese en un armatio, al abrigo de Ia luz, La solucién se conseevard du- ante dos afios 0 més, Soluci6n salina-azul de metileno (N° 20) ‘Azul de metileno Solucién salina isoténica 01g 100 mi Pésese el azul de metileno y transfiérase a una botella limpia, Anédase la solucién salina y mézclese hasta que los cristales de colorante queden completamente di- sueltes. Para utilizatla, filtrese una pequefia cantidad de la solucién colorante a un frasco gotero, Solucién de yoduro potasico, 10 % (N° 21) Yoduro potisico (KD) en 100 g Agua destilada ...0.00c20ccceeeeeeee 1000 ml Pésese el yoduro potisico. Midase el agua destilada y viértase en una botella limpia con tapén de vidrio. Disuélvase el yoduro potésico en el agua, 1 Es preterble utilizar polvo de azul de metleno de calidad médica, aunque puede usarse cualquier azul de metlono de buena calidad. 106Rotilese 1a botella: YODURO POTASICO al 10%, anotando la fecha. (Péngase un trozo de papel o de hilo en el cuello de la botella para impedir que el tapén quede adherido.) Guirdese en un armario o en una estanteria alejada de la luz. Con cl tiempo la solucién puede amazillear wn poco, pero ello no altera sus propiedades, Preparacion fijadora de PVA (N° 22) Nota: Esta solucién debe prepararse en un laboratorio de nivel intermedio dado el peligro que representan algunos de los reactivos, Fijador de Schaudinn modificado Cistales de cloruro mereiirico (HgCl,) Ecanol, 95% fevers Acido acético glacial Disuélvase el cloruro mercitrico en el etanol en un fiasco tapado (50 6 125 ml) dén- dole vueltas de vez en cuando. Agréguese el dcido acético, tapese y mézclese dando vueltas a la botella Advertencia: El cloruro meresrico es muy téxico. El cido acético glacial es muy Mezcla de PVA Glicerot cetestttteesteseeseeeeeeseees 15 eal Polivinil-alcohol (PVA) en polvo (baja viscosidad) ......c0cccee. 5,08 Agua destilada Sgsaconeco0n + 62,5 mi En un vaso pequetto, agréguese el glicerol al polvo de PVA y mérzclese cuidado- samente con una vasillade cristal hasta que todas las particulas aparezcan recubier- tas de glicerol. Transfigrase la mezcla, rebaftando las paredes, a un matraz de 125 ml. Agréguese cl agua destilada, pongase el tapén y déjese a temperatura ambiente durante 3 horas 0 toda Ja noche. Agitese la botella con ua movimiento circular para mezclar bien el contenido. El polvo de PVA y las soluciones fijadoras de PVA pueden conseguirse en el co- mercio. El polvo de PVA puede encontrarse en el mercado en muchas calidades, ppero las més satisfactorias paca preparar fijadores de PVA para protozoos son las {que presentan elevada hidrélisis y viscosidad media o baja Soluci6n fijadora de PVA de trabajo 1, Caligntese un bafio de agua (0 un vaso grande de agua) a 70-75 °C. Ajistese el calor para mantener esta gama de temperatur. 2. Colquese el frasco con la mezela de PVA en el bafo durante unos 10 minu- tos, con el tapsn sin ajustar del todo y agitando frecuentemente, 3. Cuando casi todo el polvo de PVA parezca disuelto, viértase la solucién fija- dora de Schaudinn modificada, vuélvase a cerrar y agitese para mezclar, 4. Debe seguir revolviéndose la mezcla en el bafto durante 2-3 minutos a fin de disolver el resto del PVA, y permitir que escapen las burbujasy se aclare la so- luciéa, 5. Bxtrdigase el frasco del bano de agua y déjese enftias. Consérvese el fijador de PVA en una botella con tapén de rosca o de vidrio. Rotilese: FIJADOR DE PVA y anétese Ia fecha. Este fijador se conservaré durante 6-12 meses. Para mezclar resulta sumamente prictico un agitador de alta velocidad que produz- ca un remolino en la solucién Bjadora 107Solucion de safranina (N° 23) Solucién de reserva cin e 25g anol, 95 100 ml Pésese el polvo de colorant y dsuélvase en 100 ml de etano Gudrdese en una botella con etiqueta Solucién de trabajo Solucién de reserva «+ 10 ml ‘Agua desilada 90 ml Soluci6n salina, isoténica (N° 24) Cloruro sédico (NaCl)... a 858 ‘Acido acético glacial (CH,COOH) - Sml Pésese el cloruro sédico. Midase el agua destilada y viértase en una botella limpia con tapén de cristal. Disuélvase el cloruro sédico en el agua y méaclese por com- pleto. Coléquese un troz0 de hilo o una tira estrecha de papel entre el tapén de cristal y el cuello de la botella, para impedir que se adhieran. Rotilese la botella: SOLUCION SALINA ISOTONICA y anétese la fecha. Guée- dese en una estanteria o en un armario, Viértase una pequefia cantidad en un fras- co cuentagotas 0 dispensedor para el uso diario. Fserfbase Ia fecha en la etiqueta. El frasco dispensador debe tener una pipeta con una perilla de goma. Fijador de Schaudinn (N° 25) Nota: Este producto debe prepararse en un laboratorio de nivel intermedio, dado el peligro que representan los reactivos Solucién de reserva = 600 mi CGoraro mesic, strado, aevto gC! eae 300 mi Etanol, 95 % Midase Ia solucién acuosa saturada de cloruro mercrico y viértase en una botella de 1 litro con tapén de cristal. Afédase el etanol al 95% y mézclese agitando la botella, Rotilese la botella: FADOR DE SCHAUDINN-RESERVA y anétese la fecha. a solucién de reserva se conservari indefinidamente (un ao 0 més). Solucién de trabajo para la tincién Solucién fijadora de Schaudinn de reserva... ‘i 100 ml ‘Acido acético glacial (CH,COOH) ‘i 5 ml 1 Afédanse unos 80 g de crstales de cloruro mercirico @ 1000 mi de agua destiada y ca- léntese hasta que se disueivan io cristales. Déjese enti. Algunos cristae deben formar- '8@ on al fondo del asco sla solucion esta satura 108Midase la solucién de reserva de fjador de Schaudinn y viértase en una botella de 250 ml con tapdn de cristal. Agréguese el icido acético glacial y mézclese agitando Ia botella. Rotilese la botella: FIJADOR DE SHAUDINN CON ACIDO ACETICO, y ané- tese la fecha. La solucién se conservari durante 2-3 meses. Advertencia: El cloruro mercirico es sumamamente téxico. El dcido acético gia cial es muy cozzosivo, El alcohol exilico es inflamable. Soluci6n de citrato sddico, 2 % (N° 26) Cristales de citeato sédico (C,H,0,Na:2H,0) eer ees Agua destilada eer 1000 mi Midase el agua destilada y viértase en una botella limpia (con tapén de cristal 0 die rosea), Pésense los cristales de citrato sddico y agréguense al agua. Agitese hasta gue se disuelvan. Rotilese la botella: SOLUCION DE CITRATO SODICO al 2% y anétese Ia fe- cha, Guérdese en una estanteria o en un armario, La solucién se conservari du- rante un aflo o més, Solucién de colorante tricromatico (N° 27) Cromotzopo 28 Verde elazo SF. Verde sélido FCF Gristales de dcido fosfotingstico 14004050) SH 10) Aso aco gail (CHICOOH) « : ‘Agua destilada : ésese cada polvo colorante por separado ¢ introdiizcanse en un frasco de 1 lito. Pésense los cristales de dcido fosfotiingstico y anédanse al frasco que contiene los colorantes. Midase el cido acético glacial y viértase en el frasco, Agitese éste con un movimiento de rotacién para que el dcido acético humedezca los colorantes. Dé. jese reposar durante 30 minutos. Anédase el agua destilada y mézclese. Viértase el colorante en una botella de 1 lito limpia y con tapén de cristal, Rotilese la botella: COLORANTE TRICROMATICO y anétese Ia fecha. Guérdese cen una estanteria o en un armario para protegerlo de Ia luz. El colorante trierom4- tico bien preparado es de color morado oscuro o negro. Se conservard durante un aso 0 més, Advertencia: El écido acético glacial es muy corrosivo. 109ANEXO 3 Preparacion de medios de cultivo Medio enriquecido de Schneider para el cultivo in vitro de Leishmania Material Medio de Schneider para Drosphile! 80 mi Suero de feto ovino' . cee 20 mi Solucién antibiética-antimicétical ...... ec. 1,2 mi La solucidn antibiética ~ antimicética contiene penicilina, estreptomicina y anfote- Preparacion 1, Inactivese el suero de feto ovino durante 30 minutos a 56°C y déjese enfriar. 2, Mézclense 20 ml del suero de feto ovino inaetivado con 80 mi de medio de Schneider. 3, Afidanse 1,2 ml de la solucién antibiética - antimicética, mézclese, viértase cen condiciones asépticas en porciones de 3 ml en tubos estériles de 16 x 100 mm y tépese. 4, Rotdlese y congélese a -20 °C. El medio puede conservarse durante 1 afto a =20 °C y hasta 6 semanas a 46 °C. Nota: El medio debe prepararse en condiciones de asepsiz. Uso 1, Caliéntense 2 tubos de medio de cultivo a temperatura ambiente. 2. Inoedilese cada tubo con 0,1 ml de la muestea, 3, Inciibense los cultivos a 24 °C (+2 °C) a oscuras durante 14 dias como maximo. La temperatura suele ser suficiente. 4, Examinese todos los dias en busca de promastigotes. Con ayuda de un asa de siembra, coldquese una gota del cultivo sobre un portaobjetos para examinatla Tapese con un cubreobjetos y bisquense promastigotes méviles y flagelados. ‘Nota: Los cultivos negativos deben subcultivarse al cabo de 4 dias en medio fresco yy examinarse diaciamente durante. 10 dias més. Medio de cultivo de Novy Nicolle-McNeal (NNN) para el cultivo in vitro de Leishmania Material Base de agar sangre de Difco? .. ; ee ‘Agua destiada = cs 200 ml Sangre de conejo desfibrinada ++.0,6 ml por cada 5 ml de medio + Todos los lngredientes pueden pedirse al insttuto Pasteur, 9 boulevard Raymond Poinca- 14, BP'3, F:92430 Marnes-la-Coquette, Francia. 2 Este producto puede podise a Laboratorios Difco, PO Box 10587, Detroit, Michigan, 48233, EEUU, 110MEDS EL Preparacién de sangre de conejo desfibrinada Reedjanse 20 ml de sangre de conejo en un matriz estéril que contenga unas 100 cuentas de cristal de 4mm de didmetro. La sangre se desfibrina haciendo girar el matraz con un movimiento de rotacién durante 5 minutos. Anddanse 200 UI de penicilina, 200 mg de gentamicina y 2 mg de estreptomicina por ml de sangre desfi- brinada, Preparacion 1, Vigrtanse 200 ml de agua en un matraz, agréguese el agar al agua, mézclese y caligntese el mateaz en agua hirviendo hasta que el agar se haya disuelto por completo, Repartase e] medio en porciones de 5 ml en frascos con tapén de rosca (capa cidad pata 20 ml), Bsterilicese en el autoclave (con los tapones flojos) a 121 °C durante 155 minutos y déjese enfriar el agar hasta 45-50 °C), “Anddanse 0,6 ml de sangre de conejo destibrinada estéril en cada botella y méz clese ovidadorament, El medio debe solidificarse con los frascos inclinados. 4, Déjense los frascos en posicida vertical a temperatura ambiente durante 24 ho- ras para que se forme Iiquido de condensacién, Almacénense después a 4-6 °C. hasta que se necesiten, Nota: El medio debe prepararse en condiciones de trabajo asépticas. Uso Inocilese aproximadamente 0,1 ml de muestea en condiciones asépticas en el guido de condewacin de los 2 frascos a temperatura ambiente. 2. Incabense los cultivos a 24 °C (42.°C) a oscuras 3. Examinense cada 4 dias. Transfiézase una gota del cultivo mediante un asa de siembra estéril a un portaobjetos para examinala en busca de promastigotes. Nota: Los cultivos negatives deben subcultivarse al cabo de 8 dias en un medio fresco y examinarse cada 4 dias durante 20 dias ms. m1ANEXO 4 Limpieza y conservacién de portaobjetos Limpieza Debe insistirse en la necesidad de disponer de portaobjetos limpios y de cristal de bbuena calidad para la preparacién de muestras de sangre destinadas al examen mi- croseépico. Todos los portaobjetos deben estar escrupulosamente limpios y exentos de grasa o humedad, Ello evitard In mayorla de los artefactos que obstaculizan el diagndstico del paludismo e impedisa que las preparaciones de sangre en gota grue- sa se desprendan o sean atrastradas por el agua durante el proceso de tineién. Re- chace el material defectuoso como: — portaobjeros con reflejs iridiscentes © aspecto esmerilado; — portaobjeros mal limpiados, ya sean nuevos o usados; — portaobjetos usados con la superficie rayada 0 los bordes mellados. Portaobjetos nuevos Conviene limpiar todos los portacbjetos nuevos (inclusive los que vienen ya lim- pos de fibrica) sumergiéndolos en agua con un detergente de confianza’ y acla- rindolos a continuacién en agua corriente del grifo, o en varias aguas claras, du- ante varias horas, Cada portaobjetos debe secarse y abrillantarse con un trapo seco, limpio y sin pelusa, Sujétense siempre los portaobjetos limpios pot los bordes a fin de no dejar huellas dactilares Portaobjetos usados Los portaobjetos usados deben sumergirse durante al menos 60 minutos en solu- cidn de hipoctorito antes de lavarlos. Deben lavarse en agua jabonosa caliente y fro- tar ambas caras con un cepillo, Lavense sélo unos cuantos cada ver para impedir ue se rayen 0 se mellen, Los portaobjetos deben a continuacién limpiarse de uno fen uno con una gisa o una torunda de algodén. A continuacién dehen pasarse a tuna solucién de detergente y después ponerse al chorto de agua, o en varios cam- bios de agua limpia, antes de secarlos con un patio de algodén limpio. Los por- taobjetos ligeramente rayados, inservibles para las extensiones sanguineas, pueden aprovecharse en el departamento de entomologia para el uso ordinario en el labora- Cémo conservar los portaobjetos En la humedad de los trépicos, los portaobjetos de cristal no deben dejarse al aire durante més de unas pocas semanas, De otzo modo, se adherirén unos a otros a cau sa de la humedad intersticial y se perder transparencia por este fenémeno. Des- pués de limpiarlos, lo mejor es almacenarlos en un lugar seco o en un armario de aire caliente. Se recomienda almacenar los portaobjetos limpios en paquetes de 10 unidades, en- vyueltos en papel fino sujeto con cinta adhesiva 0 gomas, de modo que estén listos para usazlos, Los paquetes de portaobjetos pueden volver a colocarse en los carto- nes de origen en cualquier otra caja adecuada de correos 0 transporte, pero deben, protegerse con cartén ondulado, poliestireno expandido o algodén, 1 Se desaconseja ol uso de dcido-bieromato como solucién limpiadora 112Indice alfabético Acwthamass sop 78 ‘Acetat sedio,solueisa, preparacin 9 ‘Acido actin, slucisn 99 Acido clorhdseo, solucones de, 10s Alcohol yodado,slucibe de, preparacién 105 ‘Almacenamiento| poreaabjetas 112 feactvon ve edema ANA se Aza de metileno amorigeado Amebiagos, quits (rir ambitn cade ast) 3, 15.18 ‘caniteriticas on ditintas tciones 73 cen metas feales, 9,10, 4-17 ‘enticacion 75-78 problemas 81 Amebianos, toforits (wir también cae ec) 7378 caractrisias con distin tnciones 73 Segenericion 31 cen mucstasferales 9, 10, 14.17 deatiieaciin 73-15, 76 problemas 81 soma 18, 73-74 Aguilestomes| ‘nuevos, identieacin 69. larvae, entiicacin 72 Ansari, huevos 27, 9,71 ‘Am de metileno smortiguada (AMA) preparain 99-100 Dreparsciones himedas 11, 12543, 15, 78, 74 Aza de metileno-fosfat,solcién de, preparacion 106 Azul de metileno-slucia salina, prepacicion 106 reparecdn 104, alee ‘gine 76, 79.80, ‘totais 79, 80 Baro, apisacién, para deveccién de Lesmais ast Blac bominie 25, 78 Brae aly ‘aractrisies 93, 94 horas de toma de sangre 59 Carbo using, slucién de, preparaién 100-101 Carbalsileno, sluciéa de, prepuracién 101 CCeguera de Tos tos ne Oncaea Céluls famigess 37 Centifigaién con aia-intercarnbio aniéaicn, tenien de $5-55, Choma, quien, dentiacién 77 Ghibmaic mel roforastor,identicacén 78, 79 CGinetoplasto de Trpansoma spp 50, 92 CGineaadhesiva, metas 25.26 Gitte sédieo, soluciéa, preparaide 109 Gover snes, eves 11, Cloroguins resistencia as 49-50, CColagenasy, digestion de muestas de piel 63 CColoantes 98 preparicisn y utp wine ade crate CConcentraisn, téeica de, en mucstss fecales 16.17 contol de fa calidad 32 CConservantes para mucsras feces 29-30, 105 Control de Is ealidad en-el examen de muesesFecales 32-33, en In preparscln de extensones sanguineas 4748 cn la toma de mucaea feces 31 romaine en Examehs 15, 78, 76 en pafsitospalicos 46, 47 Cromstoides,éepanos 15, 24 75 Decolorintes,rolciones, preparcisn 98, 108, Delafel, hematonlina de, tneisn ‘entificscin de microiain 46, 92 preparcicn 101 feactives necestrios 98 Desechoe vests 2,3 prepurciones 3 Desifecants,impieea de supedicies de teabap 2 Dinternbe ti efonoton 76 iphoto tm, seven 71 ndlnax e ines 37 totes 76 ama es het contin oie 24 Srgenor erm ‘Menticncion 1677, 78 wrote 74 etifenis 76 atm hr ne 778 toto 76 Exum bite * identificacién 75-77 Segre cromtaes 75 crf denuencd 73-75, 76 Eni sie rss 25 teen enna 71 arm ye ‘Cowes 7 Epis, cll, em mics fel gui en prog de diagno 96 Faqtrona a nao) ten en cre de onan 3437 Secon en mcf 16, 2528 tnt relives de or heron 7 aqutomcrinin dgatto 16,2528 34 Fan, 16 prepunion 102 rer, preeauions 16 Excealcobol, dor de, pepactn 102 Estemionstnganes 4108, 3032, once ke nd #748 cramer $7,532 Prepencin 4-4, 51 eld 48 Green Sematulie de Delta 46 Ewcttionrenpuines himedes Tn dcr de mrt 60 are detecn de tpansomas 5152 113Fass Apai, boewos 7 asia bss, huevos 71 Fenol nat Carbol-ieno,slucin de, preperacion Field, colorente A de, peeparacisn 102 Feld, colorante B de, preparacign 102-103, Feld, método de tncion de 40 fertensionesfinas 48 reparaciones en caps grocs 45 jacion de extensionessangalneas 48, 48 FFteacda con jringulla, mécodo pars el examen de la orian 3537 Flteos, para el examen de orina 38, Flagladon, qultes (a tomb cde ee) ‘ericterisieas en dissintan peparsciones 73 ‘eatifictcia 77, 78,79, Flagelados, rofomios (oe tem cade ope) ‘arcteristias en dstiatas preparaiones 73 fn mbestaswettales y vaginles 39 ‘entieacén 78,79 smoslidad 14,78 Formalina, slucions de, pepacicin 103 Formalina-éer, meta de concentrcion 16 rots aoales, pura deteccién de oxiurot 28.28 rots fecal grueso con eelofin,teniea de (Kato. Kat) 2829 Ganglios lntticns, muestas appends de ats detecisn de Laman 61 pura detecion de eipanosomas 5557 Giri queer 77 Giana inet 78, 79 Garis aba 79) Giemsa, tincion de 40, 44,48 pH a8, 62 Dreparaion 41, 48, 103-104 Giicero-azl de mesien,solscén de 106 Glicetolyende de malaguts, ovién de 104 Gieblos ros, en frots tetas 23, 74 Gtocepene 24,73, Heces, estat de eae Mueseas feales Helmintos,inestinales ideteecién por frotis gracro on eclfin (emi tle Kato-Kat) 28-30 buevee en prepaaciones con slucia sling 13 fases del desarrollo 69 Mlemificacin 69-71 larvae ‘cactsitias 72 fn preparaciones con slucin salina 13 ienifencia 72 Hemaraia 34 Herpes berpige huevos 71 “yma asa eves 71 Hywncii dni, vevo8 Th name aces ‘uistes,dentificacion 77 twofortos, identiieacion 76 apr by ones 80 Kato A, tcnien de nae Fei eal gracso con ceotin Kato-Kate cewuche pare tenica de 26 Lares, helmints ne Helmitos intesinles Leishmania smusigotes 60, 62 “erect en el bso 60-62 eadacin 63 sedio de culivo paca 11 promastigoes 61, 63 prochesinmunogicas pare 63 Limpiess ‘reparscones microsepicas 112 superiies de tabao 2 “Lguido eefaloraquideo (LCR), deteccin de ipa ‘posomas en el 5759 Las hr Thora de toma de sangre $9 lenifiescien 93, 98 ‘Lago, yodo de, preparcion 105-106 a acéfagor en muesra fecses 81 Masse cards tora de toma de sangre 59 Idenificacin 93, 98 Manone psn: horas de toma de sangre 59 Hlesifieacin 93, 94 Maro sepores, dentifencion 93, 94 Material en. parsitologin de dignéstico 96-97 Maurer, puncos de 47,49 Medios de cultvo, prepuracion 110-111 ‘Medaleécea,aspincion,detecion de Lemania Memirana oadulante, tipanosomas 51, 92 Metgenina opens oe¥o8 T1 Meranol, icion de extensoncssanguiness 44,45 Metileno, aml de wae Azul de metleno amor. tiguado Meroe etecisn 40 fen eatensiones sanuinens 45.46, 59 cn sare eal 6 fen sangre venowa 60 sdeniicacion 92.98 toma de sangre 59 Microhematderto, metodo $2.53, Micrémetro ocular 8 Miesosopio ste 8 ‘mo preveis Is aparicién de tongs 7 cuidado 7 Miracidios en huevos de 5 aout 37 Muesteas, maniplacion de 2-3 Muestas de sange 2, 40-63 ‘control del ela 47-48 tanipulaign sin reago 2 toma 40, 41-44, 31, 32, 60 Macstasfecaes| ‘condiciones de conservacién 10, 30 conscrvacién 29-30, 105, ‘oosiencia 10, 12 ‘iminaioa 30 fenvase para el transpore 50 examen 10-15, 32 acroncpco 10 tmierneopicn 10-13, fasespaasitarias en 9 manipulecion sia vesgo 2 ‘cosidedes 10,12 rotulcisn 9,31 ‘éeniea de concentacibn 16-17, 32 toma 9, 10,31 Muses reese ‘examen 38-39 toma 38 Muestas vaginales centifigacionsedenentacisn 38 ‘examen 34-39 toma 38 114OE Nagi 9 7 [Nodulos subeutineos en Ia oncocercois 6& ‘Nowy Nicoll-MeNeal (NNN), medio de cali, prepartide 110-171 Ona mbs Setecidn en moesrascotiness 54.65 identifcacién 93, 94 Cocistor Cpa sp 17-18, 80 erery Opis fas, huevos 7. ‘Oring, como eomtminante de mvestasfesles 9 (Oring, ouestas de samen 3437 preseasciones en la manipacin 3 roma 38 ‘Oniatos te Erba mina Paludismo, prdsitos sd Plasmodios y ends pct Parana sectrman; oe¥08 TL arssite vate amb a pc) Teale 69-82 saagulneos 8-94 ‘enamerscin 84, 91 Parksitos sangulneos (ae tami cads pa) 83-94 pH de colocate de Giemsa 48,62, 90,98 Piel, moctran de 4.65, ‘eamen 65 rome 6465 Plusmodias (ue ambi cade pent) ‘arsterisies morfalgiens 84, 85,86 componente 48-49 Seteccion en extensones sanguiness 4, 48:50, B84 ‘enumeracdn 84, 91 faves anaazes 83, 86 ieniieaion 48-49, 8.91 Plural parce Caceres mafic 84, 85, 86 fares anaazer 83 parstemia 83 fesitencia la elocoguina 49.50 Pade maria carscterisicas moroligcas 84, a Pamdium inal, carcteistias mestolieas 84,59 Plasmas craceristess morfolipieas 84, 87 Polivinaleabol, fiador, preparacicn 107 Polivini-aleohol (PVA), muestas fecles fides con 19, 22.23, 29 Ponactictos smacenamiento 112 climinacion 3 lmpier 112 Pecparscién himeda con soluiéneiling 10, 13-12 ‘amen 13 ‘Sennifcacén de pardstos en 15-45 peepiscign If ‘quite ametiaos en 73, ‘pofomiton amebianos ea 73-74 rofozotos Sagelads en 73,78 Prepuracion himeda eon yodo 10, 11-12 farcteritias de prooeoor 71 indieacones 11 quires amebiance ea 15, 3-74, 76 squire flagelador en 15, 75,76 Prepatsciones meses (ee embir Aral de meth Teno amontiguado, prepuacién hieneda; Pre pueaide meds con vo ¥ Prepanicién bic ‘meds con sluci sla) comol de Is calidad 52 climinaeisn de porsbjeton wados 30 ramen 13 enicecén de prtoanos en 4-15 preparcisn 10-13 Protonoos,identifiecion (wat tambin eas eect) 73.82 ce preparacioneshirmedas 14-15 problemas 81 Henle de tinlén tesomitica 19-26 Praha de inmanosoccn ensimitiea (ELISA), pars Leiden 63 Pruebas inminologess pues Lehman 63 pass Trplime goad 81 Puneiéa venoms #7 Ponnin comecelrstico 64 Pus, eluls en muetanfecales 81 VA site Poiviil-sleobol Qulstes wie Amebianos, guises; Plagelals,qut- tet 9 ade ce Reactivos 97.98 ‘onto! de Is alga 31-52 preparaisn 31-32, 99-109 Retrtaneas inna (qete,dentifieneisn 77 tofecios, dentifincion 79 Safina, colin de, prepetacln 108 Sefsrine ama de metileno, eenica 18 Sangre de coneio cesfibrinala, peepatacion 111 Schavcinn, fedor de rmodiieado 107 peepacacién 108-109 Sienna Samarium, huevos deteecién en muctae de ocina 3-37 enuicacén 37, 7" feteasidad de ia infeceiba 36, 37 Shiga nara huevos 27 “Sizanme japon hsevor 27, 71 ‘Shans mars eves 27, 71 Schacides, media ensigueido de, prepaniidn 110 ‘Sehfiner, puntos de 44,49, 83 Sedimentacén, método de, para In orina 34-35, Seguridad en ef nboratorio 2-3 Solucion decolornte de deide acto alcool, pre pried 99 Selucii sina inonics,prepariciga 108 Sraplatr rors laren ee fen preparciones con Souci sling 13 ‘sencieseién 72 Tarmato de paisitor, determinacin del 8 Tame sep “ererin en mucseas fecales 16 huevos 7 ‘Tincidn,procedimlestor ‘control de i ald 32-53, 48 ‘extesionessangulneas 40-48 moestnsfealee 17-28 Tossplame goed, dlagnéstico ene) Iborstorio 081 “Texoplasmesis 81 Trident bonis foro tos dentfencign 79| cn prepusicin himeda con saluclin Tries spt 38,39 lins 78 115Tridarangig acwo8 1 Tris haeeor ‘en Fotis eclesgrusos con eelfin 27 tamato 71 ‘Teiertia, ined 19-24, 74.75 ‘caracteriieas de los protonooe en 73 preparacion 105| “Tapanosomes detecion en el guido eefslorraguiden (LCR) 35-59 etecién ene! material aspitido de los gangs linfcoe 83-57 detecion en la sangre 40, 50:55 ‘enuifeacion 92 “Trofosoto wae Amebianos, trofosntosy lagelados, onfotas 116 Trypensoma br caracteriticas morflogicas 30-51, 92 Trppancins og caacteriicas morflégicat 30-51, 92 Trpanvme rg 92 Valoracn indieeta de anticucspos fuorscentes Wachee oni Doras de roma de sangre $9 entfenion 93, 94 Yoo, soluiones de, preparacién 105-106 ‘Yoducopotsico, solucia de, prepuescién 106-107 Zichl-Neelen,eenica modiiends de 17,18