Electroforesis de 1.149 muestras de sangre de cordén umbilical y evaluacién de Ia heterogeneidad de la relacién entre cadenas ¥* y ‘f' de la hemoglobina fetal J. Cabreta Llano, M. Castellanos Gonzalez, N. Lépez Hemandez, P.C. Hidalgo ‘Cabcera Lamo, 43 Castellanos Gone, Mi Lipee Heenan, ELECTROFORESIS DE 1 19 MUESTRAS DE SANGRE DE ENAS TY 7 cord-bood samples: An evalvation of the heterogeneity ofthe? St Yet of ft hemoglobin ‘Ntotalnumber af 9 specimens ofcort- Hood were subjected to cellulose nctteplcetropboress inorder to estimate the neldence ‘ hmoglabinapatin im metoraffnts (NBD, ts oud hat INTRODUCCION El empleo de la electoforesis en acetato de celulosa en medio alcalino y de la clectroforesis en goles de agar a pH fcido permite la identficacién de diferentes variantes de Ihemoglobina humana con movilidad electrofréticaaltera- a (I, 2) Tales métodos aplicados a muestras de sangre humana de cordén umbilical posibilitan adem fa ident acid femprana de nlgunas formas de talasemias (3) [El andlisis de laestructura de la hemoglobina fetal (HDF) presente en los erttocitos de los recign nacides (RN) ha ‘demosteado que en la posicién 136 de Ia eadena gamma, puede estar presente un esto deglicina o un resto dealanina indistintamente (4), En la mayorfa de los RIN se presenta ambos tipos de HF (0, of ce) en una selacin entre amas eadenas 7: 9° de 7: 3, lt cual es diferente a la ‘encontradaeneladulto(5) y muy variable en asa asfcomo en individuossanos (6,7), Sehaencont heterocigotos y homocigotospara ln HS tienen una relacion {Fs7 muy variable interindividuos, Dena vatiabilidad se ha asociadoa la presencia de haplotipasespeciicas, a delecior reso ala presencia ce tes genes ¥ (7,8) Enesle trabajo se determiné laineidenciade hemoglobi rnopatias en RN y la relaeida de cadens garmms. PACIENTES ¥ METODOS Paruesecstudios obtuvo sangredecordgnusbiicalde 1149 oxluctos ele parts so pcos eon msde 38 semanas de gesta ‘in, seleccionads por nuestro altri simp, La muestra se abonaeride aan, LSEMY.C ta otras ‘Conspondosa Cabos ahve de Getic Hagan tis Cate 37 W ol black Nand 54S white NBT wore AS ears Those ‘Samples with HS or HC were verted by means of agae-ctate ‘etropborers at pI 62 Hacmoiobin Bart was eommenest in Back {21 ) than in we (4 2) NB. Aso haematoin variant was found with aiphachain mutation, The concentration of wis ‘stated by sepa its plpaersamie fel ‘lectrphoresis and ranged between 5 and 94, whieh eould be ‘Mite othe act that test rom HE To HDA int stot ‘eo inal there popaation. SANGRE 95; 4016748 tom de etre los RN del Hospital Matern «Mariana Gras» de Senta Clara (VC. Cbs). Cada RN foe clasitieado como blanco nepride, teniendo en cuenta earacteves marfobgices exclusiva ‘ent; en la muesuael 27.9% (32) fueron eonsierados come repo. ‘Se enrajeron 10 mL-de singe del segmentoplacetaio del -ord6numbilicl entsborquecontentanheparina comoanicoag- lante(1O nodes porcadm-desangre) Las muestrascleciadas fron conservadasa4*C, procesindose anes de fs 48 horas de ‘etraceién pore rocedimicnorecomendado pr Sereantetl (@).A cada mesa le tealizg unaeleuoresis en cctato de ‘elulosa (Sertoriv),sigiendiadenie dscrita por Seeider et al. (1). La Hb Bart se cuanies de acuerdo To deserto por CChindavonig etl (10) Ba aquelas moesras en quest enon ‘unalibSouns HC, se confirms mediante unaclectoforesisen ge) ‘de agar en tmp de etrsto.con pl de 6.2 2. Tis cadens 7* yf fueron sepatadas por medio de una clectroforesven geld polierilamida en disco (1), colreinose con aa de Coomse G & una concentcién de 005 dL. La ‘huntficcin sehigoempledndse ls dessitometfaaunalongitd de onda de 580 RESULTADOS Los resultados de Ia investigacidn de hemogtobinas anormales en los RN de ambos grupos raciales (cuado D, mostraron que la frecuencia porcentual de Hb Bart, Hh S y Cefve mayor en los negroides. Un individio tuv0 wnt variant eleetrforétiea con una migracin entre Ia HDS y la HbCen Halealino,Elestidiadekamismapennitiscondeer que la mutacin esti lncaizada en la cadena alfa, y su caracterzacidn est pendiente. No se encontraron otras variants clectrofortiens, Tne los negibides con hemoglobina Bat, 9 twvieron tuna concentracidn del 2 al 5.5 % y slo uno fue superior al 13 (euadko I), En los blancas nose encontraron indivi Aiuosconcncentrieidnde hemoglebina Bar superioral 6%,‘CUADRO t RESULTADOS DE LA ELECTROFORESIS EN MEMBRANAS DE ACETATO DE CELULOSA EN SANGRE DE CORDON Fenotpas egvodes ‘Blancos clectrfordicas Ne F FA Bat FAS FAC 09. FAvarantelenta 103 7 ‘Tout B32 02,1 %) + Sob 1.149 moe cUADRO HEMOGLOBINA BART EN RECIEN NACIDOS Porcentaje de Negroes Hb Bart * ° aI 969 B29 99.6 2-35 9 28 3 Oa 136 103 ee La elacin de eadenas 7:7 reforente al porcentaje de ccadenas en el grupo negroide mostré una distrbucién bimodal con valores msximosen 60 y 76 % respectivamente (igura 1). Nose observaron valores relaivas de eadenas inferioresal 52% y 10 individuos (8,6 %) tuvieron porcen: {ajes superiores al 82 % En Ja muestra de blancos la distribucién fue unimodal (figura 2), pero se enconteé un individuo (0,19 4%) con un poreentaje de lseadenas aPinferioral 52% y28(5,5 %)eon mas del 82 %, ‘Todos losindividuoscon Hb Bart uvieron un poreentaje de cadcnas en el incxvaly del 52 al 82 %, DISCUSION Lainvestigaci6n dehemogiobinas anormales cnlamues~ {rade RN, ha permite establecer la reeencin de fa IDS de Ia HOC en este grupo de edad para nuestra regién. Se cenconits que dihins Frsouencias estén en eorrespondencia ‘con las encontradas por Hidalgo (12) para otros grupos de ‘eda lo que permite excluir la eccibn de factores selectivos sobre los heterocigotos AS y AC. LLacuantificacin de Hb Bart en sangre de RN osibilita cl diagndstico de algunas Formas de alfa taverns, pero la {éenicaes poco sensible para a diferenciacig de indiviuos que tienen 3.6 4 genes 0 (13). En una muestra de RN de all lool a ie aye Figura -—Porentjsdeeadenasyen320 eelénnacdas agro, Ordena Frecnencladelnsivsvoscondierenteporennjede cade. tas Abscis: Porenaje de ena 7 l UU Manag, - Figura 2—Porcenajs de ces 829 cen nacido blanco ‘Ordenada: Freweniadeindividuorconferene percentajede cade: nat 7 Absa Poreentaje de cadens ‘Ciudad de La Habana se encontré una frecuencia de 0,024 para el gen a (-e) y de 0,0023 para a® (-) (14), en este estudio no se consideraron las diferencias entre los grupos racials, En nucstro estudio se hallé que la frecuencia de Hb Bart esmayoren los negroides. Ohene-Frempong etal. (13) han encontrado mediante andlisis del ADN quo los RN con 2~ 9,3 Sh de Hl Bart son portadores del rasgo alfa talasémico (= Hy quela freevonciadeéstees2,56%. Nuestros resultados coineiden, por Io que considerames que Ta frecuencia del ago alfa talasémico en la regin central de Cuba es similar ‘ala desiegros nosteamericanos, Estos datosestin pendientes de confirmar mediante andlisis del ADN. La heterogencidad de la hemoglobina fetal humana fue escrita por primera vez. en 1968 (4). En el grupo de negroides estudiadas (figura 1) encontramos wna distribu- cign bimodal. Una distibucién andloga ha sido encontrads aneviormente en la bei alasemia de negros, en i falcemia Yn la Pf persisteneia hereditaria de hemoglobina fetal (PHHE), pero no en individuos «nocmaless (6, 7, 15). Mediante andlisis dol ADN, Hattori et al. (16) encontraron nuchos haplotipos diferentes en negro, lo cual indiea na ‘considerable heterogcncidad genética. En nuestra poblacién hay gran meczcla rial, pro que es probable que haya ung gran diversidad de haplatipos que al interactuar con ef medio, ocasionen vatiaciones en los necanismos de ativacin de los genes de cadenas yf yresultenen a distibueign bimodal encontrada. Seencontra ron valores de ¥ superioves al 82 % en el 8.6 5 do los negroes. Este aumento es frecuenteen negros (15) y se ha. asociado a Ja presencia de haplotipas especificos (16), Uriplicacvnde los genes ¥ (7) yalapresencia oausceciadel garde oscisisn de la enzima de estriceidn Xmnl-158,5'en cl geny® (17). Ealostlancos no se observ una dstibucién bbimoxlil y se encentré un individuo con concentracién de ccadenas inferior al 52%, El porceaaje de individuos eon valores deP mayores al §2 % fue de 5,5 y es menor que el, encontrado en negroides, Tales diferencias entre ambos ‘grupos indican que los entrecruzamientos cromosomales ‘Que oiginan esta heterogeneidad son frecuentes. No se encontrsrelacidn entre la presencia de Hb Barty J coneentracién decadenas Pl cual parece indicarque no existe relacién entre la alfa talasemia y los cambios en la rolacisn 7. Nagel (8) en un estudio realizado en inivie duos con anemia de célulss faleiformes portadoras del Cans y 7 de a HDF en sangre de eortin « ‘haplotipo Bani, no encontes relacin entre eadenas fy a prosencia de alfa talasemin, RESUMEN Se esudaron 1.149 musts de sangre de condén mediante leciofresit en aetato de elulosa ata deterinar a incidenci ‘dchemoglobinopatnscn reign nacklos (RN) ys encores quest 1437 de lw RN nero y €1 0.54 % entre los blancs, evan portaones AS. Las murs que comtenfan HBS o HBC fueron ‘eriicadas por medio de elecuoforesis en age citatocon pt 62 La Bar fe ms reeueme en os RN nests 3,1 8) queen os [RNblancos (041%) Seenconesunavariantedehemopleina lets conlamiacisncn lacadenaslfa,Laconcenracionde se evalus radiant a seperscn de las ademas por eletoforess en eles de plicrilsmida y flctué ente $2 y 94 ¥, lo que puede febersea que el cambio de fa HBF ea HA noes silneo pare toda a pobacién de eritraitos REFERENCIAS Snir RG, Haggan ME, Gustva00 LP, Brito, Jace ‘Gents hao bers in aboot 9000 back md 7000 ite mtn: engin Dickinson Ry 97H = Arp) =e are) Herm 1994 2; 515528 12 Went DI Te thalasein Methods of Hematology VG New York: Chachi 983, 4 Colon, Bases eels slr, Rev Cabana Heme ‘ollamnno! Hemet (997; 373 4, Schiele WA Hata TE, Sesion 3, Sete 38, Klelauer fay AN. et Evidence or iil sects ges fr the ‘hina fel omg ro al Aca Se US 1968; 60 su3t, 5. 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