Platelet ADP receptor contribute

to the initiation of intravascular

coagulation

Receptores plaquetarios de ADP y su contribución a la

iniciación de la coagulación intravascular

Migue Ángel Figueroa Núñez

Hematología II 2010 - Revisiones Bibliografícas

Introducción La plaqueta

 Son pequeños fragmentos de

citoplasma derivados de los
megacariocitos.
 Son importantes en la
hemostasia corporal y en los
procesos trombóticos.

Hematología II 2010 - Revisiones Bibliografícas

Introducción

Daño •Alteración endotelial

Adhesión •Matriz endotelial
Reclutami
ento
•Amplificación
Trombo •Sellado provisional
Hematología II 2010 - Revisiones Bibliografícas
Introducción El ADP y sus receptores

ADP P2Y1
 ADP como molécula del
metabolismo.
 Activación y amplificación de
las plaquetas.
ADP P2Y12  Estimulación de la liberación
de Factor Tisular.

Hematología II 2010 - Revisiones Bibliografícas

Pacientes Preparación

 8 voluntarios sanos (4
hombres, 4 las mujeres,
con edades de 22 a 35
años).
 Fase de lavado con dosis
de clopidogrel:
 1er Día 300 mg.
 3 dosis diarias de 75 mg.
 Duración 3 semanas.

Hematología II 2010 - Revisiones Bibliografícas

Pacientes Preparación

 Complemento con 100 mg. de

Aspirina durante 4 días.
 Las muestras fueron extraídas
inmediatamente después del 5 día
de consumo de drogas.
 El estudio había sido aprobado por
el comité de ética de la Facultad de
Medicina de la Ludwig-Maximilians-
University. Munich, y los
experimentos se llevaron a cabo
y el consentimiento informado,
siempre de acuerdo con los
principios de la Declaración de
Helsinki.

Hematología II 2010 - Revisiones Bibliografícas

Preparación de las celulas
 Muestras citratadas al 0,38%
 Centrifugadas a 190 g por 15 minutos.
 Se complementó con Apyrase (0,2 U/ml).
 se centrifugó a 330 g durante 10 minutos.
 El precipitado fue resuspendido en un
tampón de 145 mM NaCl, 10 mM HEPES, 5
mM KCl, 1 mM MgCl y 5 mM de glucosa
(pH 7,4; tampón de resuspensión).
 Las suspensiones de las plaquetas aisladas
por lo tanto obtenidos contenían menos de
0.05% del total de leucocitos.
 Las suspensiones de las plaquetas aisladas
por lo tanto obtenidos contenían menos
de 0.05% del total de leucocitos.

Hematología II 2010 - Revisiones Bibliografícas

Pacientes Preparación

 Las suspensiones se aplicaron

posteriormente en la columna de la
selección positiva, y los neutrófilos
se eluyeron con el tampón de
anticuerpos (tampón fosfato salino
[PBS] así como con 0,13% de EDTA
[ácido etilendiaminotetracético] y
0,15% de suero bovino albúmina).
 La pureza de las suspensiones así
obtenido fue del 92%. Los
monocitos se aislaron por
centrifugación densidad de flotación
y posterior purificación con
anticuerpos anti-CD14.

Hematología II 2010 - Revisiones Bibliografícas

Muestras Preparación

 Citometría de Flujo.
 Western Blot.
 Inductor de FT para la Formación
de F Xa.
 Microscopía electronica.
 Estadisticas.

Hematología II 2010 - Revisiones Bibliografícas

 Resultados

 se analizó si el ADP participó en la

presentación de FT en la sangre
humana, que es promovido por el
colágeno.
 presentación del FT se redujo en un
56%.
 P2Y12 de ADP, la disminución de la
presentación de FT en un 64%.
 El efecto inhibidor del abciximab
redujo la exposición de FT.
Figure 1. ADP receptors and GPIIb/IIIa participate in collagen-induced TF presentation in whole blood. (A) Whole blood was
activated for 10 minutes at 37°C with collagen (coll; 10 g/mL). To the samples with collagen alone, vehicle was added corresponding to the
amount of buffer required to suspend the ADP receptor antagonists. In further samples, collagen plus either MRS-2179 (1 mM) or ARC69931MX
(10 M) was added. Thereafter, the number of TF-positive leukocytes was determined among the total fraction of CD45 cells. Co indicates
control. Means SDs; n 5 to 8. *P .05 (versus collagen alone). (B) Effect of abciximab (ab) (20 g/mL), MRS-2179 (1 mM), and AR-C69931MX
(10 M) on leukocyte TF exposure. Whole blood was stimulated for 10 minutes at 37°C with collagen (10 g/mL). Means
SDs; n 3. *P .05 (versus collagen alone); §P .05 (versus abciximab).
Hematología II 2010 - Revisiones Bibliografícas
Resultados

 El colágeno causo un aumento

sustancial en la exposición P-
selectina, que se redujo en un
48% y 90% bloqueando los
receptores de ADP P2Y1 y
P2Y12, respectivamente.

Hematología II 2010 - Revisiones Bibliografícas

Resultados
 El GT presentado en la superficie
de la plaqueta fue funcionalmente
silenciosa, ya que las plaquetas
activadas por colágeno apenas
apoyaron la formación del factor
Xa.
 En presencia de los neutrófilos, la
generación de factor Xa fue
estimulada notablemente en
comparación con solo las plaquetas
aisladas o neutrófilos aislados.
 En presencia de la
P2Y12 antagonista de AR-
C69931MX, la actividad del FT en
las suspensiones se redujo en un
46% y 65%.
Hematología II 2010 - Revisiones Bibliografícas
Discusión

 Estos hallazgos demuestran que la vía de ADP

contribuye a la función procoagulante del FT
intravascular, en parte por el apoyo la formación de
conjugados de neutrófilos en plaquetas.
 Contribución de los receptores de ADP a la activación in
vivo de coagulación

Hematología II 2010 - Revisiones Bibliografícas

 Discusión

 Importancia de la amplificación de la activación plaquetaria por ADP.

 Los primeros resultados sugieren que las plaquetas contienen FT.
 la exposición rápida de la TF intravascular en respuesta al colágeno
depende en parte de la activación de los receptores plaquetarios de
ADP.
 El GT expuestos en la superficie de las plaquetas activadas es
funcional débilmente.
 la inactivación proteolítica de TFPI por proteasas de neutrófilos
podría mejorar la capacidad de las plaquetas y FT para iniciar la
coagulación.

Hematología II 2010 - Revisiones Bibliografícas

Muchas Gracias!
Mas informaciones en mfigueroan@live.cl

Hematología II 2010 - Revisiones Bibliografícas