A.E.F.I. ASOCIACION ESPANOLA DE FARMACEUTICOS DE LA INDUSTRIA. VALIDACION DE METODOS ANALITICOS AUTORES Generalidades, materias primas y especialidades farmacéuticas Leticia Aguirre Ortega Maribel Martin Pomar F. Javier Garcia Garcia Begofa Mateos Pérez Tetesa Garcia Junca Cristina Ochoa de Echaguen Aguilar Mique! tilera Fontanet Miguel Angel Ortega Sanchez Marta Juncadella Roca Marti Pujol Forn Monica Lizondo Carbo Marisa Reig Serrat ‘Anna Maria Liuch Sanfeliu Marta Torres Gontaus Métodos en Microbiologia ‘Susana Antinez Moreno Cesca Niubé Prats ‘Ana Maria Carro Vinaras Maria Pilar Oliver Aguera Antonia Garcia Avila Métodos en Bioandlisis Me Cruz Caturla Perales Carlos Nieto Abad Carles Cetma Lezeano José Antonio Pérez Cuadrado Gregorio Encima Garcia Maria Rovira Guerin Josep M. Jansat Rufach Digna Tost Robusté Estadistica aplicada y tablas estadisticas Rogelio Cortés Loras COORDINADORES José Antonio Pérez Cuadrado, voca' ae 160 ae ls Seccin Caaiana de AEFI Marti Pujol For, vocal de Conte Caidad dels Secciin Coat de AEFILa Asociacion Espajiola de Farmacéuticos de la Industria-AEFI, agradece la inestimable colaboracién de las siguientes empre- sas que han facilitado la edicion de esta monografi Agilent Technologies Innovating the HP Way analitica MERCK AGILENT TECHNOLOGIES Carretera Nacional VI - Km 18,200 28230 Las Rozas (Madrid) Tel.: 91 631 30 42 MCC ANALITICA, S.A. C/. Ganduxer 129 08022 Barcelona Tel.: 93 212 00 33 MERCK EUROLAB Distribucion material para laboratorio Pol. Merck 08100 Mollet del Vallés (Barcelona) Tel.: 93 565 55 00 PERKIN ELMER, S.L. Av. Universitat Autonoma 3A 08290 Cerdanyola del Vallés (Barcelona) Tel.; 93 582 45 22 PH-C Laboratorio de analisis C/. Esmeragda 19-21 08950 Esplugues de Llobregat (Barcelona) Tel.: 93 473 96 62 SOCIEDAD DE VALIDACION DE SISTEMAS, S.L. C/. Fedanci 8-10 — Baixador de Sant Joan 08190 Sant Cugat del Vallés (Barcelona) Tel.: 93 675 25 24INTRODUCCION: OBJETO, AMBITO DE APLICACION Y CONTENIDO DE LA MONOGRAFIA En el afio 1989 un grupo de profesionales integrantes de la Seccion Catalana de AEFI (Asociacion Espanola de Farmacéuticos de Industria) preparé una. monografia sobre “Validacion de métodos analiticos”. Por aquel entonces era un tema de gran actualidad pero estaba lejos de su regulacion y habia muchas opiniones divergentes de su necesidad 0 de como llevarla a cabo. Estaba muy extendida la idea de que la validacién analitica era un {ramite burocratico, con poca 0 ninguna implicacién por parte del laboratorio y que bastaba incluiria en los dosiers de Registro Los objetivos primordiales de aquella publicacién fueron + Aportar una vision global y sistematizada de la validacion analitica. ‘ * Orientar a los técnicos de los laboratorios de control e 1D que se enfrentaban, en su trabajo diario, a la problematica de la validacién. EI ambito de aplicacién de a monografia’ se dirigié principalmente hacia los métodos analiticos de tipo quimico e instrumental de uso mas comun: control de materias primas. producto terminado y estudios de estabilidad y de desarrollo galénico, : Los métodos analiticos de tipo microbiolégico y los destinados a estudios de metabolismo. farmacocinética y bioequivalencia podian presentar particularidades que no se contemplaban en aquel trabajo. Desde entonces y hasta la actualidad la situacién ha cambiado radicalmente, de tal forma Que hoy en dia no se concibe la idea que un laboratorio pueda utilizar un método analitico que no haya sido objeto: previamente de algun tipo de validacion, transferencia o, simplemente, comprobacién. La bibliografia cientifica en este campo es tan abundante que se hace dificil seleccionar los trabajos mas interesantes. Actualmente el tema esta bien regulado, con monografias de caracter obligatorio como las publicadas en las Farmacopeas Europea y Americana o bien con textos de cumplimiento recomendable como son las Normas ICH (Intemational Conference Harmonisation) o las guias editadas por las agencias. teguladoras. A pesar de todo ello, de forma periédica_y desde diferentes sectores, se han venido fecibiendo peticiones de actualizacién de la Monografia AEFI. Las Vocalias de Control de Calidad e 1+D de AEFI Catalana decidieron finaimente acometer de forma conjunta ta confeccién de una nueva Monografia y crearon una comisién de trabajo con este fin A grandes rasgos el planteamiento de la Comisién se basé en que la Monografia debia ‘cumplimentar los puntos siguientes: 1) Ambito de aplicaci6n amplio, con inclusion de todos los campos analiticos de las areas quimica, galénica. microbiolégica y farmacolégica. 2) Explicacién y desarrollo de los principales conceptos tedricos. 3) Inclusion de ejemplos, 4) Explicacién de los éonceptos estadisticos necesarios para una buena comprensién de la parte teorica y de los ejemplos ’For motivos practicos, la Comision se dividié en cuatro Subcomisiones (Especialidades y La segunda parte trata de la Validacién de métodos analiticos de tipo quimico e instrumental para especialidades y materias primas. So desarrollan los parametros fundamentales de la validacion (selectividad, linealidad Precision, exactitud y limites de Geteccion y cuantificacion) y una serie de temas relacionados. idenenica de los sistemas, La cuarta parte trata de la Validacién de métodos analiticos para los estudios de Farmacologia, Farmacocinética y Bioequivalencia y se basa en of eetecio y comentario Critico del borrador de la FDA (Food and Drug Administration) sobre “ ioanalytical Methods Validation for Human Studies": Validacion durante la tase previa a un estan (selectividad, curva de calibracion, precision, exactitud, recuperacidn, estabilidad de las muestras), validacion durante la fase de realizacion del estudio y documentacion Finalmente la quinta parte sobre Estadistica aplicada incluye una exposicion de los desenige- stadisticos fundamentales (poblacion y muestra, indices estadisticcs fegresion y disefios factoriales, Finaliza con una resefia de k estadisticos disponibles en el mercado. La Comision agradece especialmente ta colaboracién de las empresas que han Maansorzado el proyecto, gracias a la cual se favorecera la difusién y distnibucion de 14 MonografiaINDICE GENERAL ABREVIATURAS_.......-. . i: GLOSARIO ... oe eed PARTE| — GENERALIDADES PARTE II: VALIDACION DE METODOS DE ANALISIS EN MATERIAS PRIMAS Y ESPECIALIDADES FARMACEUTICAS PARTE Ill: VALIDACION DE METODOS DE ANALISIS EN MICROBIOLOGIA PARTE IV: VALIDACION DE METODOS EN BIOANALISIS PARTE V: — ESTADISTICA APLICADA. APENDICE " 19 39 136. 209 249 315a (=a) b (=B) e e% gl (=v, DF) kK miz eS oe x N Abreviaturas y simbolos. 7 ABREVIATURAS Y SIMBOLOS Termino independiente en una recta de regresién o curva de calibracion Pendiente en una recta de regresién o curva de calibracion. Diferencia significativa en una prueba estadistica v)) Residual en la recta de regresion Error en porcentaje. { Factor de respuesta | \ Grados de libertad. Factor de‘tapacidad.” Relacién masa/carga en espectrometria de masas. Generalmente coincide con la masa de un ién (si la carga es la unidad), Tamaho de la muestra; numero de valores ‘de una serie; numero de réplicas de un tratamiento. Nanogramo, Nanémetro, Probabilidad de que un estadistico determinado sea mayor que el valor observado. Partes por millon (equivalente a pg/mL 0 g/g). Partes por billon anglosajén (1x10) (equivalente a ng/mL. 0 ng/g). Coeficiente de correlacién. Coeficiente de determinacion. Desviacion estandar de una muestra Variancia de una muestra, Desviacién estandar de la media Estadistico de Student. Tiempo de retencién de un analito. Tiempo muerto (tiempo en el que un compuesto no retenido pasa por el interior del sistema). Variable independiente (valor nominal), Media de una muestra. Valor estimado 0 calculado de la variable independiente. Variable dependiente (valor experimental). Valor estimado 0 calculado de la variable dependiente. Variable tipificada de la curva de Gauss 0 normal.8 Abreviaturas y simbolos ‘AAPS American Association of Pharmaceutical Scientists. AOAC Association of Official Analytical Chemists. ‘ANOVA Analisis de la variancia. BPL (=GLP) Buenas practicas de laboratorio. CCF (=TLC) Cromatografia en capa fina. cr lonizacién quimica (método de ionizacion en Espectrometria de Masas) CLE Concentracién limite de endotoxinas (método LAL), CSE Endotoxina estandar de control (método LAL). CV (=CV%) Coeficiente de variacién D Estadistica de la prueba de normalidad de Kolmogorov. DAD Detector de diodos. DF Grados de libertad DLs Dosis letal 50. eC Electroforesis capilar : EMEA Agencia Europea de Medicamento. EPA Environmental Protection Agency, eu Unidades de endotoxina (método LAL). EP(=Eur. Pharm.) Farmacopea Europea. ER% Error relativo porcentual. Se utiliza especialmente en Bioandlisis, F Valor de la distribucién de Snedecor-Fisher. FDA Food and Drug Administration. FTIR Espectrometria IR con transformada de Fourier. 6 Estadistico de la prueba de homogeneidad de variancias de Cochran GC(=CG) —_Cromatografia de gases. ‘ Gc-Ms Acoplamiento de cromatografia de gases con espectrometria de masas. om Media geométrica (método LAL) HPLC Cromatografia liquida de alta resolucién, He Hipotesis nula. Hy Hipotesis alternativa. IC(=LC) —_Intervaio de confianza. ICH International Conference of Harmonisation. tupac International Union of Pure and Applied Chemistry, kK Numero de grupos. LAL Lisado de amebocitos de Limulus. LC (-LOQ) Limite de cuantificacion. LD(=LOD) Limite de deteccién Lims Laboratory Information Management Systems,