Professional Documents
Culture Documents
Tema 3.1 I 3.2 Corresponent A Les Diapositives - Regulaci Hormonal Per Segon Missatger
Tema 3.1 I 3.2 Corresponent A Les Diapositives - Regulaci Hormonal Per Segon Missatger
La utilització de segons missatgers és una característica única dels receptors 7TM (cap altre
receptor utilitza segons missatgers per transduir el senyal!).
La teoria del segon missatger d’Earl s’ha mantingut però s’ha tornat més complexa. La cèl·lula fa
servir 3 famílies de segons missatgers (SURT SEMPRE A L’EXAMEN):
- Fosfolípids de membrana
- Calci → no el sintetitza la cèl·lula, s’ha d’agafar de la dieta.
EXEMPLE ADRENALINA:
Com es mostra a la taula següent, hi han molts sistemes que utilitzen l’cAMP com a segon missatger.
En els receptors 7TM hi han 4 loops citoplasmàtics els quals transmeten el moviment que ha
provocat el lligand. Quan el receptor 7TM reconeix el senyal, es despleguen els loops i poden ser
reconeguts per la proteïna G.
Les proteïnes G formen la família de gens més nombrosa en humans (1000 formes diferents de les
proteïnes → hi ha splicing).
- Un domini extracel·lular es qual pot ser molt gran i pot estar glucosilat. En aquest domini hi
ha el punt de reconeixement del lligand.
- Un domini transmembrana format per 7 hèlix (les hèlix formen un tub). Aquest domini
permet l’ancoratge a membrana i permet transduir el senyal. Les hormones petites es poden
col·locar dins d’aquest tub.
- Un domini citosòlic el qual recull el canvi conformacional i transmet el senyal a les proteïnes
G.
El receptor reconeix el senyal i l’envia dina (no fa entrar la molècula, sinó que transmet la informació
del senyal).
Hi han 800 receptors els quals deriven d’un únic gen (més de 1000 si contem l’splicing). Els receptors
7TM provenen de la bacterioredoxina.
Com que no interessa que el receptor es vagi movent, aquest està ancorat a membrana per un lípid
anchor. Si no estigués ancorat, el receptor podria fer la volta a la cèl·lula en 1 segon ja que la bicapa
és fluida.
El domini intern dels receptors 7TM (els loops) pot ser molt gran. Els loops, els quals estan numerats
de l’1 al 4 (imatge anterior), poden interaccionar amb la proteïna G la qual ja està allà al costat.
Aquests loops tenen que estar ancorats a membrana per poder rebre el senyal del primer domini.
Els aminoàcids de les hèlix que travessen la membrana són 18 dels 23 que la formen. Quan arriba el
lligand, provoca un canvi conformacional que permet que els loops interaccionin amb la proteïna G.
Els receptors 7TM dimeritzen (inclús oligimeritzen) i són endocitats. Alguns són enviats a eliminar
(lisozim) i alguns investigadors diuen que poden anar a nucli.
Arriba un senyal el qual no pot travessar la bicapa lipídica. Al interaccionar amb el receptor es
produeix un canvi confrmacional el qual permet fer interaccionar els loops amb la proteïna. La
proteïna G, la qual es troba ancorada a membrana, s’activa i va a buscar el següent efector. La
4
proteïna G no ha de viatjar gaire ja que l’efector següent no està gaire lluny. La proteïna G es mou
gràcies a la fluïdesa de la bicapa lipídica.
L’efector és un enzim ancorat a membrana el qual produirà una molècula que farà de segon
missatger → cAMP. cAMP activarà una quinasa (PKA) la qual entrarà a nucli i activarà una sèrie de
factors de transcripció: s’activarà la transcripció d’una sèrie de gens que respondran al senyal.
LES PROTEÏNES G:
Són un seguit de proteïnes que es caracteritzen per fixar GTP i trencar-lo a GDP. Són les
anomenades GTPases.
Les GTPases es classifiquen en 5 grans famílies en funció de la seva mida: Proteïnes G, Factors de
transcripció, Ras, Small G proteins i Tubulines. Totes les 5 famílies reconeixen i trenquen el GTP.
Les GTPases estan distribuïdes en moltes espècies, teixits, cèl·lules, etc. Presenten estructures molt
conservades. Estan involucrades en molts processos cel·lulars: Participen en el control de la síntesi
proteica (sobretot síntesi de ribosomes), participen en la transducció del senyal, translocació de
proteïnes (reticle endoplasmàtic), participen en el control de la diferenciació, participen en el control
del cicle cel·lular i participen en el control del transport de les vesícules dins la cèl·lula.
Com a sistema proteic, les GTPases, les quals deriven d’un gen, tenen un paper molt important.
Participen en un cicle com a “interruptor”. És un sensor el qual s’autoanul·la. Les GTPases són, com
ja hem comentat, uns enzims que trenquen el GTP en GDP. Al trencar el GTP salta un fosfat i el
GDP queda al centre actiu de l’enzim. Aquest GDP inhibeix la GTPasa → Quan l’enzim té el GDP al
centre actiu, es diu que està en estat de repòs.
La proteïna GEF fa que la GTPasa tingui una afinitat menor per el GDP. El GDP, doncs, s’allibera de
la GTPasa (queda buida) → Estat buit molt inestable. En aquest estat, la GTPasa té més afinitat pel
GTP. El GTP es posa al centre actiu → Estat actiu. Al agafar el GTP, la proteïna pateix un canvi
conformacional que li permet passar el senyal (transduir-lo a altres molècules) Seguidament l’enzim
trencarà el GTP, saltarà el fosfat i la GTPasa tornarà a tenir el GDP al centre actiu, s’inhibirà l’activitat
de l’enzim.
Aquest sistema és un sistema poc eficient ja que tarda uns 15-20 segons a fer-se el cicle. Com que
va tant lent, es pot transmetre el senyal durant més temps (és el que interessa).
Si el sistema creu que va massa lent, es poden activar les proteïnes GAP (el següent efector,
l’enzim) les quals faran que les GTPases trenquin el GTP més ràpidament.
GAP i GTPasa s’activen mútuament. GTPasa+GTP activa GAP i això fa que la GTPasa trenqui el
GTP → el mateix sistema decideix anar més o menys ràpid.
Amb aquesta GTPasa es demostra que no perquè sigui un enzim ha de dur a terme la reacció
ràpidament. Aquestes GTPases no són eficients, van lentes, perquè a la cèl·lula li interessa que sigui
així.
Les proteïnes G ven ser descobertes i descrites per primera vegada per Robdell i Gilmen fet que els
va permetre guanyar el premi Nobel al 1994.
Les tres subunitats es troben unides perquè la subunitat α té un GDP-anchor → la subunitat està
unida a membrana. γ i β sempre es troben unides fet que estabilitza la proteïna. γ també es troba
unida a membrana i la β no té ancoratge.
Aquestes subunitats són isoformes, s’han identificat 16 gens que codifiquen per α, 4 que codifiquen
per β i 7 que ho fan per γ.
Gs → Estimula l’adenilat-ciclasa
Golf → proteïna G per l’olfacte.
Gf → subunitat α estimuladora del següent efector (adenilat ciclasa).
Gi → subunitat α inhibidora de l’adenilat ciclasa.
Gq → subunitat α activadora de la fosfolipasa.
G12/13 → subunitat α activadora d’altres sistemes.
Depenent de la subunitat α que hi hagi a la proteïna G aquesta tindrà diferents funcions. Aquest fet
explica perquè hi han diferents respostes per un mateix senyal. β i γ no tenen tanta variabilitat.
Les subunitats α i β són capaces de provocar diferents coses. Aquest fet provoca una gran varietat
de respostes.
Gα Gβ
BOX 4: EL CÒLERA
Aquesta box està dedicada al còlera. És una
malaltia que provoca la mort en 48h per
deshidratació.
Vibrio cholerae viu en aigües estancades. Quan
s’ingereix Vibrio cholerae aquest ataca les parets
del budell. Secreta una proteïna de 87KDa la qual
travessa la membrana plasmàtica (és incorporada
per endocitosi). Un cop a dins la cèl·lula, és
activada per uns enzims que catalitzen la reacció
que s’explica a continuació. Vibrio cholerae
arrenca el complex ADP-ribose del NAD
intracel·lular i el transfereix al centre actiu de la
subunitat α de la proteïna G. Això fa que la
proteïna G no pugui trencar el GTP i, per tant, el
GTP queda sempre fixat al centre actiu de
l’enzim. Com a conseqüència, la proteïna es troba activa permanentment i, per tant, envia senyal
permanentment (activa la ruta). Això provoca l’obertura dels canals de sodi potassi. Aquesta obertura
fa que hi hagi un bescanvi d’ions amb l’exterior (surten ions de Na+ i Cl- i la cèl·lula, per compensar-
ho, deixa anar aigua → es deshidrata.
També hi ha una altre malaltia, la Toserina, la qual ataca els pulmons i provoca una tos humida. Té
una toxina semblant a la del colera. Ataca al centre actiu de la proteïna G que acaba provocant una
secressió massiva de moc.
PROTEÏNA G:
Si no es troba al costat del receptor 7TM, el senyal no passarà. Per aquest motiu, la proteïna està
ancorada a membrana. Es troba ancorada per dos punts: per la subunitat α i pel dímer γ-β. Si es
trenca l’ancoratge, l’eficiència de la proteïna baixa molt.
Hi ha una família d’isoprenoides que es poden unir a la proteïna G i fa que la proteïna pateixi una
modificació postraduccional. Aquesta proteïna s’anomena proteïna prenilada.
La subunitat α viatja per buscar el següent efector, l’adenilat ciclasa (no està gaire lluny).
10
Convé que l’enzim no sigui gaire eficient, és a dir, no trenqui el GTP abans de trobar l’adenilat
ciclasa.
L’adenilat ciclasa farà de GAP i l’enzim trencarà el GTP (es quedarà amb el GDP al centre actius →
s’inactiva). D‘aquesta manera, l’enzim ja no
activarà més l’adenilat, ja que només ho fa
quan té GTP al centre actiu.
La subunitat α amb el GDP podrà tornar a
unir-se a γ-β i tornar a interaccionar amb el
receptor 7TM.
11
Depenent del receptor i la cèl·lula, un mateix senyal pot provocar diferents respostes: L’adrenalina,
quan impacta sobre els receptors β-adrenèrgics, activa l’adenilat ciclasa. Si s’uneix amb els α-
adrenèrgics, però, inhibeix l’adenilat ciclasa.
Els sistemes no són lineals. Normalment s’activa una ruta i s’inhibeix una altra → es formen un
conjunt de rutes per tal d’obtenir la resposta desitjada. Aquest mecanisme té el nom de PORTA. Hi
ha la but not (una activa/desactiva) i la and (Es tenen que activar dos rutes).
Són un grup d’enzims. Hi han 9 isoformes de l’enzim distribuïdes en funció del teixit.
L’adenilat ciclasa agafa l’ATP i el cicla donant lloc a cAMP. Per fer-ho, doncs, es gasta ATP. És un
enzim ancorat a membrana. Té 2 centres actius fet que li permet ser molt eficient. Fabrica molt cAMP
de cop (augment ràpid i local del cAMP). Existeixen força toxines inhibidores d’aquest enzim.
L’adenilat ciclasa està sota control de: hormones, primers missatgers i neurotransmissors. També pot
estar regulat per la concentració de calci.
L’enzim presenta una baixa afinitat per l’ATP. La subunitat α activada, millora l’activitat de l’adenilat
ciclasa (la subunitat α activada activa l’adenilat ciclasa).
La concentració de cAMP al voltant de la membrana és molt baixa i hi ha molt d’ATP. De cop i volta,
quan la subunitat α activa l’enzim, la concentració de cAMP augmenta molt (de 4 a 10 vegades).
La fosfodiesterasa elimina el cAMP i provoca que s’acabi el senyal. D’aquesta manera, hi ha un curt
període de temps perquè el senyal passi al següent efector: la quinasa α.
L’activitat de l’adenilat ciclasa es pot aturar de dues maneres: parant el senyal o eliminar el segon
missatger. El segon missatger és el cAMP que s’havia creat.
12
Quan s’acaba el senyal, la subunitat α trenca el GTP, canvia conformacionalment i deixa d’activar
l’adenilat ciclasa.
Hi han tres punts de regulació: acabar el senyal, desunió de la subunitat α amb l’adenilat ciclasa i
l’activitat fosfodiesterasa.
La PKA és una quinasa la qual és activada per cAMP. Forma part de la família de les quinases
(enzims que estan codificats per més gens en el nostre genoma). La PKA va ser la primera quinasa
en ser descoberta per refracció de raigs X.
Quan arriba un estímul, l’adenilat ciclasa fabrica molt cAMP (2n missatger) i aquest es fixa a la
subunitat reguladora de PKA (cada subunitat reguladora té 2 llocs d’unió del cAMP). Quan més
cAMP s’uneixi, més es separarà la subunitat reguladora de la catalítica (↑ llocs ocupats per cAMP →
↑ resposta i més afinitat).
13
Quan la subunitat catalítica està unida a la reguladora, es troba inhibida. Al unir-se cAMP a la
reguladora, aquesta es separa i la catalítica s’activa.
- Concentració de cAMP (aquesta depèn del senyal extern). La unió de la primera molècula de
cAMP provoca un canvi conformacional que fa que el segon lloc d’unió sigui més eficient.
Petites variacions de cAMP provoquen un gran augment de l’activitat catalítica → amplificació
del senyal.
- Fosforilacions. En ratolins, la subunitat està fosforilada a la Thr-197 i això fa que sempre
sigui actiu (permanentment).
- Regulació intra-estèrica: la seqüència reguladora porta un pèptid molt semblant a la
seqüència que fosforila PKA (Arg-Arg-X-Ala). El fet de portar aquesta seqüència, fa que PKA
la reconegui però no la fosforili. És un inhibidor. Com que el propi enzim porta un anàleg del
substrat, un inhibidor, i aquest tapa el centre actiu,
s’anomena intra-estèric. Aquest centre intra-
estèric s’ha trobat en altres enzims.
14
L’adrenalina fa augmentar els nivells de glucosa en sang per tal que el cor es posi en marxa. Per
aconseguir aquesta resposta, ha de passar tot lo de la imatge següent (o l’anterior) (7TM, Proteïna G,
Adenilat ciclasa, PKA, CREB).
15