spectroscopia olecular 2: ransiciones electrdénicas Mp se pueden enuncia expresiones analiticas simples para desc los riveles de ener Las caracteristicas de las Mscrorica de las moiéculas; en consecuencia, este captulo se concentra en las caracteris transiciones electrénicas ualtatves dels trensiclones elctrénicas. Un tema comin af largo de tad ol cap: pesteroros especalatencén alos procesos esponténeos de desactivacion racatve, ene ee nan la fuores Hes que se cena y la fosto partante de a & Idee, veremos como se puede lograr y apicar es scencia, Un ejemplo esp sabe del funcionarniento de! moléculas poliatémicas ‘errision estimulada. alent im 142. Elespectro electronica de las ctivacion radiatva estimulada es la res 114.1 Impacto en la bioquimica: lavision Ja energia necesaria para cambiar la distribucién de los electrones de las moléculas es Gel orden dle varios electronvoltios (1 eV es equivalente a alrededor de 8 000 em! o Los destinos de los estados 100 KJ mol"), En consecuencia, los fotones emitidos o absorbidos cuando ocurren tales, electrénicamente excitados Kambios, se encuentran en las regiones visible o ultravioleta del espectro (Cuadro 14.1). {Una de las revoluciones que ha tenido lugar hace pocos aftos en la fisicoquimica es la 143 Fluorescencia y fosforescencia aplcacion del lisera la espectroscopia ya la cinética. Los iseres han proporcionado una ree linparte en le hieretaien Dprecisin sin antecedentes a la espectroscopia, han hecho de la espectroscopia Raman ‘microscopia de fluorescencia funa técnica ampliamente utilizada y han posibiltado el estudio de las reacciones quimi- fasen una escala de tiempo de femtosegundos. En este capitulo veremoslos principios de Suaccionar y alo largo del resto del libro estudiaremos sus aplicaciones. 444. Disociacién y predisociacién Liseres Las caracteristicas de las transiciones Se electrénicas pais 148. Aplicacion delos lseres en la Enelestado basal de una molécula los ncleos se encuentran en equilbrio en el sentido de quimica {ue noexperimentan ninguna fuerza neta delosclectronesy delos otros nicleosen lame Keula. Inmediatamente después de que ocurre una transicién electrénica, los miicleos se Listado de conceptos clave encuentran sujetos a di erentes fterzas y la molécula puede responder comenzando a vi Lecturas recemendadas Bra. La estructura vibraionalresuitantedelastransciones clectronicasse puede estudiar yormacién accional 1.1: emplos de léseres que so util Cuadro sinéptico 14.1* Color frecuencia yenergia dela radiacion Preguntas para el anal ‘Ain vicio" Ha) Ett) mot") Ejercicios Infaroo 1.0 30 Probiemas Rojo 700 3 Amaro 500 52 asl 470 6 Utrvilew 300 Pn482.14 ESPECTROSCOPIA MOLECULAR 2: TRANSICIONES ELECTRONICAS Absorbancia eel 400500600700 inn Fa. 141 Espectro de absorcién dela clorofilaenlaregidn visible. Notese que la clorofila absorb en las regiones del rojo y azul y que la luz verde no se absorb. Comentario 14.1 Es importante distinguir entre el termino espectral (recto, sin bastardilla)yel mimero cus (Gnclinado,en bastardilla). cen las muestras gaseosas, pero en un liquido o sido ls ineas usualmente, das juntas dando como resultado una banda ancha y sn forma particular (rp Superpuesto alas transiciones vibracionales que acompaan ala transicion e ‘una molécula en l fase gaseosa, se halla una estructura ramificada adicional py delastransicionesrotacionals, Porlo tanto, los espectroselectrnicos de sm scosas son muy complicados, pero proporcionan informacién valiosa, 141 Elespectro electronico de las moléculas diatémicas Analizaremos algunas de las caracteristicas generales de la transiciones utilizando como ejemplo a las moléculas diatémicas, Comenzaremos asign términos espectrales para los estados basal y excitado de los estados elec Lucgo, utilizaremos las designaciones de simetria para formular la reglas de cion, Finalmente, analizaremos el origen de la estructura vibracional en ls, electrénicos. (0) Términos espectralos Los términos espectrales de las moléculs lineal (los anlogos de los téem etc para los 4tomos) se construyen de manera similar alos de los toms, pera se debe tener en cuenta el componente del momento angular orbital total ele internuclear, Ah Elvalor de || se indica con los simbotos E11, , = 0, 1,2... respectivamente, Estas designaciones son los andlogos de §,P, paras étomos, El valor de es la suma de los valores de 2, el nimero cutie el componente Af del momento angular orbital de un electron individal al del ce internuclear. Un elecr6n tnico en un orbital tiene A=0: el orbital tien simetrla cilindrica, no tiene nodos angulares cuando se lo observa alo largo del ternuclear. Por lo tanto, i ese esl nico elected presente, A= 0. En consecuen término espectral para cl H5 es. igual queen los étomos,utilizamos un superindice con el valor 28+ 1 para carla multplicdad del término. El componente del momento angular del espn alrededor del je internuclear se indica como , donde £=5,$~1,5~2,...s-S% Hi, dado que existe un solo electrén, $=5=4(=+4) y el término espectral es término doblet. La paridad global del sérmino se agrega como un subiadlce al recha, Para Hf, a paridad del tinico orbital ocupado es g(Seccién 11.3), porlo el éemino en s{ mismo es gy la notacién completa es, Si exsten varios la paridad global se calcula aplicando sxe-8 Fstasreglas se crearon para interpretar a gcomo +1 ya w como, Eltérmino tral para el estado basal de cualquier molécula diatSmica homonuclear de capa rrada es ', porque el espin es cero (un término singulete en el cual todos electrones estin apareados), no existe un momento angular orbital a partir de capa cerrada, yl paridad global es g Unelectrén zen una moléculadiatmica tiene una unidad de momento angua' bital alrededor del ee internuclear (A= #1) y,sies el inieo electron fuera dea caps sada, origina un termino II. Si hay dos electrones (como en el estado basal del Os tuna configuracién tit) entonceseltérmino espectral puede ser (silos elector tienen trayectoras en drecciones opuestas, es decir, si ocupan diferentes orbitals uuno con A= +1 yelotrocon A=-1) 0A (sitienen trayectorasen la misma direcim decir, si ocupan el mismo orbital, por eemploambos A= +1) Para el losdoselee trones 7 ocupan diferentes orbitales con espines paralelos (un término triplete), port tanto, el término para el estado basal es". La paridal global dela molécula es uxg-u uxusg (capa cerrada) xgx Por lo tanto, el término espectral es 5E,,14.1 ELESPECTRO ELECTRONICO DE LAS MOLECULAS DIATOMICAS 483, 5 IGuaro 14.2 Propiedad el, en os estados electnicos mis bajo i ——_— k Festeon Término _—_Energineaivlenr! em Rulpm i %, 5 iso 12074 31209 3 268 33713 9 wn x 49393 700 Py J Para los términos E, un superindice + indica el comportamiento de la funcién de. q fonda molecular bajo reflexién en un plano que contiene a los niicleos (Fig, 14.2). Si, for conveniencia, consideramos que el O, tiene un electron. 17,,, que cambia de pre bao reflein en el plano y2 yelotro elecrén en 1, que no cambia de signo q Iujo reflexién en el mismo plano, la simetria de reflexién global es = q ’ S | Feltérminoespectral completo del estado cece snico basal del O, 8° = Los érminos espectales de los estados electrOnios excitados seconstruyen dema- | er similar. Por ejemplo, el érmino especral para el estado excitado del O,quese. | Bbrna ubicando dos electrones en un orbital Lf, ,(0-en 1m,.)es'4, porque|Al=2 | (dosdlectroncsenel mismo orbital x,elespinescero (todos oselectronesestinapa-—-B | reados) y la paridad global es (capa cerrada) x g x g = g. En el Cuadro 14.2 yen la 2 Figura 14.3 se resumenlas configuraciones, ls términosespetralesylasenergsdel tstado basal y de algunos estadas excitados del O;. 200300 ‘pm (b) Reglas de seleccion Ungr ‘in en lespectro electrnico de una molécula. Las reglas de seleccién concernientes a los ‘cambios en el momento angular son AA=0,21 10 de reglas de seleccidn tigen cuales seran las transiciones que se observ Fg. 143 Estados clectednicas del dioxigeno. donde Q= A+ ¥ esl niimera cusintico para el componente del momento angular total (orbital y de espin) alrededor del eje internuclear (Fig. 14.4). Al igual que en los ftomos (Seccién 10.9), el origen de estas reglas es la conservaci6n del momento angu: Jar durante una transicidn y el hecho de que el fot6n tiene un espin igual a Existen dos r nla simetria, Primero, para los términos , slo estin permitidas las transiciones E' ¢ E! y Ee E Seguncio, la regla de seleccién de Laporte para étomos y moléculas con simetria cen: 'sdeseleccidn que contemplan las cambios tral (con un centro de inversién) enuncia que: la “inicas transiciones permitidas son las transiciones que estén acompafiadas de bio de paridad. ra 144 Acoplamiento dele momento anglar dl ori Es deci, las transiciones w+ gy g—> u estin permitidas, pero las transiciones gg moléeulalinea: solamente ¥4—>weestin prohibidas componente alo larg dele internuclear484 14 ESPECTROSCOPIA MOLECULAR 2: TRANSICIONES ELECTRONICAS. Fi. 145 Una transicion d-d es prohibida segin a paridad porque corresponde a una transicion g-g Sin embargo, una wipracion dela molécula puede destruir la simeteia de inversiin dela moléculay, polo tanto, la clasiicacin uu no puede ser, apicada, La climinacion del centro desimetria da origen ana tansicién vibrionica permitida efidm® mot" em") 2 | y 0 200 240 280 320 ion Fg. 148 Elespectro electronice de algunas ‘moléculas muestra una signficativa estructura vibracional. Aqui se observe especttoultravioleta del SO, gaseoso a 298K, Como se explica ene texto as lineas agudas en este espectro sedeben alas transiciones desde un estado eletrénico Inferior a diferente niveles vibra dde un estado electronica superior. Justifica 6n 14.1 Regia de selecoiin de Laporte Las dos iltimas reglas de scleccidn surgen a partir del hecho de que el mos polar eléctrico de transicion. se anula& menos que el integrand no varie bajo todas las operaciones de sme, ‘molécula. Los tres componentes del operador del momento dipolar sc tan como sy 2, son todos u. En consecuenca, para una transicibn 8 gla pa bal del momento dipolar de transicion es g> ux g= u, porlo que, debe ser cero, De nera similar para unatranscin uu laparidad totals uuu ~Uy por comign «lmomento dipolar de tanscin también se anula, Por lo tanto las transiciones presentan un cambio en la paridad estin peohibidas. El componente z dl op momento dipolar, el nico componente de responsable de lastransiciones Ee simetia #),Porconsiguient, para una tansiion (+) > (-), la simetria global dl mento dipolar de transicion es +) x (4) x (-) =), porlo tanto debe se cero As dos términos, as ransciones, 2” + Eno estan permitdes. Una transicin g — g probibida puede convertirse en permitida si el centro de ‘metrias elimina por medio de una vibracién asimeética, como la que se observa Figura 14.5. Cuando se pierde el centro de simetria, las transiciones g > g y w dejan de estar prohibidas con respecto a su paridad y se convierten en débilmente ‘itidas. Una transicin cuya intensidad deriva de la vibracién asimétrica de una lecula se denominatransicion vibronic. Autoevaluacién 14,1 ;Cudles de as transiciones electronicas que se enunciana: tinuacion estan permitdas en el 0,28, © ay, 98, ©, 593A FO ely, Pe o-a) (c) Estructura vibracional Para explicar la estructura vibracional en el espectro electe6nico de las molécuas 14.6), aplicamos el principio de Franck-Condon: Dado que la masa del nucleo es mucho mayor que Ia del electrén, una t «lectrénica ocurre mucho més répido de lo que los nécleos pueden responder. Como resultado de la tansicion, la densidad electronica se acumla répidamente nuevas regiones de la molécula y desaparece de otras. Los nticleos inicialmente et BY + Blas lineas comienzan a aparecer a ntimeros de onda suce- sivamente decrecientes. Es decir, la rama R presenta una cabeza de banda (Fig, [4.1 la) Cuando el enlace es més corto en el estado excitado que en el estado basal, B’ > By B* as lineas dela rama P comienzan a converger y pasan a tra BY—B) J> B+ B (Fig 14.118). Bes positiva, En este caso ‘una cabeza cuando J es tal que 142 El espectro electrénico de las moléculas poliatomicas a deciertos Laabsorcién de un fotén habitualmente puede relacionarse con la excitacis tipos especificos de electrones 0 electrones que pertenecen a.un pequeito grupo de ato- rn una molécula poliatomica, Por ejemplo, cuando se encuentra presente un grttpo 290 nm, aunque su localiza: earbonilo (>C=0), normalmente se observa absoreion ign precisa depende del resto de la molécula. Los grupos con absorciones dpticas carac~ igriego “que proporciona color”), y st dro 14.3 teristcas se denominan eroméforos (derivado di presencia a menudo esa responsable del color de las sustancias (C (a) Transicionos d-d de una capa determinada son todos d Enun dtomo libre, los cincos orbitals os, En un complejo metilico d, donde el entorno inmediato del étomo deja de ser este istics de absorcin de algunos grupos y moléculas Cuadro sinéptico 14.3" C Grp vem Ayla eld? mol ex 57300 a 15 500 Hoe en eo 16 7000 14.2 FL ESPECTRO ELECTRONICO DE LAS MOLECULAS POLIATOMICAS 487 ( B' 8 Fe. 1411 Cuando lasconstantes rotacionales de una moléculacatmica diferensignificativamenteen losestados nil y final de una tansicion electronica, las ramas Py Remestran una cabeza enlarama R «cuando 8” « By (b) formacin de una lo B>B,488 14 ESPECTROSCOPIA MOLECULAR 2: TRANSICIONES ELECTRONICAS Ho,© “Js. aif eat TITHOH) J” Absorcién 10000 20000 30000 ier" Fg. 412 El spectro de absorcion. lectrdnica del [T(OH,),|* en solucion G4. Fig. 14:12 Laclasificaciin de los orbitales den un entorne octaédric. rico, los orbitals d no son todos degenerados,y los electrones pueden absorber ene realizando transiciones entre ellos. En a Justficacion 14.3 demostramos que en wn plejo octaédrico, como por ejemplo, (TOH,),]* (1); los cinco orbitales d del ‘como iy, un grupo doblemente degeneradbo identifcado como e,- Los tres orbitals encuentran por debajo de los dos orbitales la diferencia de energia e indica como Ay se denomina pardmetro de particiénligando-campo (la indica la simetria octaédea Justificacién 14.3 Divsiin de los orbitales d en un compeio metaico d octaética En un complejo metiico d octaédrico, eis iones 0 moléculasidénticas os lignda seencuentran en los vtices de un octaedro regula, con ein metalio en scent Los ligandos pueden considerarse como carges negaivas puntuales que som repel por los electrones ddel in central. En la Figura 14.12 se muestra la consecueiia este ordenamiento: ls cinco orbitals d se reparten en dos grupos, con dy Vd apuntando directamente hacia as posiciones de ls ligandos ¥ dys dd punt dose entreellos. Un electron que ocupa un orbital del primer grupo tene una en ppotencial menos favorable que cuando ocupa cualquiera de os tres orbitales dela grupo y, en consecuencia, los orbitalesdse desdoblan en ls dos grupos que sem tran en (2) con una diferencia de energia Ao: un grupo triplemente degenerado qi comprende los orbitals dy.d,-y dy se ident degenerado que comprende los orgitales dy. sy se identifica como ey Los orbitals d también se desdoblan en dos grupos en un complejo tetrabrico en este caso ls orbitals se encuentran por debajo de los orbitals f, y su separacion indica como ay. Ag ¥ Ay no son grandes, por consiguiente las transiciones entre los grupos de orbitals usualmente ocurren enlaregién visible del espectro. Las transicione son las responsables de muchos de los colores tan caracteristicos de los complejos metal: cos d. Por ejemplo, en la Figura 14.13 se muestra el espectro del [Ti(OH,)¢]** sete de 20 000 cm" (500 nm), y puede atribuirse ala promocién desu tnico elettén d Ln orbital f aun orbital g, El niimero de onda del maximo de absorcién sugiere qvE ‘Ag= 20000 cm" para este complejo, que correspond a aproximadamente 2,5eV. ‘De acuerdo con la regla de Laporte (Seccién 14. 1b), las transiciones d-d estén probia bidas por laparidad en los complejos octaédricos, porque son transiciones g— (mis cespecificamente transiciones ¢, « fh). Sin embargo, las transiciones d-d se vuelveJimente permitidas como transiciones vibrénicas, como resultado de su acopla~ Troneicones de transforencia de carga Pesca queel moment dipolar detransicionpucdeer grande ya abeorcén i Ea fora de actividad dels comOfooese observa Br crmanganto, M07, ela responsable de ou inenso color vce (el cul pot lo fuerte absorcidn en el intervalo 420-700 am), En este oxoanin, el electrn Hjesde un orbital que se encuentra en gran medida confinado a los ligandos del ode O hacia un orbital quese encuentra en gran medida confinado al stomo de Min. fptanto, es un ejemplo de una transicién de transferencia de carga de un ligando a metal (LMCT). También puede ocurrirla migracion inverse la transicin de transfe- jade carga de un metal aun ligando (MLCT). Un ejemplo es latransferencia de un rén da los orbitales antienlazantes de un ligando aromitico, Elestado excitado te- fnte puede tencr un tiempo de vida muy largo si el electron se encuentra extensa- pente desiocalizado entre varios anillos aromsticos, esas especies pueden participar en Meacciones de oxidorreducci6n inducidas foroguimicamente (véase Seccién 23.7) Is inensidades de las transiciones de transferencia de carga son proporcionales uidrado de los momentos dipolares de transicion, Podemos considerar al momento de frnsicion como una medida de la distancia que recorre un electt6n cuando se mueve ese el metal hacia el ligando o viceversa, donde una gran distancia de migracién co- respondea un gran momento dipolar de ransicin y, en consecuencia, una ata inten- Iidad de absorcion, Sin embargo, debido a que el integrando en el dipolo de transiidn es Iproporcional al producto delas funciones de onda fisdos funciones de onda tengan valores diferentes de cero en la misma region del espa- Io. Por lo tanto, a pesar de que las gr fetsidades, el menor solapamiento entre las funciones de onda inicaly final para las grandes separaciones entre los metaes y los ligandos favorecen las bajas intensidades {béase problema 14.17). Encontramos consideraciones similares cuando examinamoslas feaccioncs de transferencia de electrones (Capitulo 24, las cuales pueden considerarse Komo una clase especial de transiciones de transferencia de carga. ial y fn tees ceroa menos que des distancias de migracion favorecen lasaltas in- {@) Transiciones x* « ay x* on Laabsorcin por un dobleenlace C=C da como resultado laexcitaién de un electron fa un orbital = antienlazante (Fig. 14.14) Por lo tanto, la actividad de cromeéforo se debe una transicibn x* — x (que normalmente se lee como “transicion ma raste iso”). Su energia es alrededor de 7 eV respond Partede una cadena conjugada, las ener muy cercanasy la transicign w* — ase desplaza hacia una mayor longitud de onda, inclusive puede encontrarse en la regidn visible si el sistema conjugado es lo suficien- Femente largo, El mecanismo fatoquimico de la vision proporciona un ejemplo im. Portante de una transicion 1 — x (Impacto 114). Latransicion responsable de la absorcién en los compuestos carbonilos puede rela~ clonarse com los pares de electrones slitaris sobre eldtomo de O. Elconcepto de Lewis Aelos pares slitarios” de electrones se encuentra representado en la teoria del orbital Tnolecular por medio de un par de cletroncs en un arbital confinado principalmente tun étomo y no apreciablemente involucrado en laformacion del enlace. Uno de estos elecrones puede estar excitado en un orbital x vacio del grupo carbonilo (Fig. 14.15) lo cual da origen a una teansicign x* «(una “transicign wa asterisco”). Las ener as de absorcidn usuales son de alrededor de 4 eV (290 nm). Dado que las transicio Bes 2* & seencuentran prohibias por la simetria, la absorcisin es bil para un doble enlace no conjugado, que co- el ultravioleta), Cuando el doble enlace es s delos orb una absorcién a 180 am ales mo ulares se encuentran 14.2 EL ESPECTRO ELECTRONICO DE LAS MOLECULAS POLIATOMICAS 489 Fp. 14.14 Un doble enlace C ‘como cromeforo. Aqui se ilustea una de promovide desde un orbital xal orbital Fig 1416 Un grupo carbonilo (C=O) actia como croméforo, debido principalmente in de n par de electeones solitarios no enlazantes del Oa un orbital antienlazante del CO.49214. ESPECTROSCOPIA MOLECULAR 2: TRANSICIONES ELECTRONICAS Fg. 1418 La estructura de la molecu! de rodopsina consisteen una proteina ‘opsina sla cual selene una molécula de L-cie-tetinal embebida enc espacio rodeado por regiones helicoidales, He cHi0 l 5 Todo-trans-retinal sidad de emisién Tiempo Fp. 1420 La diferencia empirica (basada e I observacién) entre flvorescencia y fosforescencia es que, al retira a fuente de ‘excitacin la Muorescencia se extingue muy ripidamente, mientras que la fosfo disminacién relativamente lenta dela sar un dectrn ge qu uno dele claer (2 ques inden eos gane movilidad, su rigidez torsional a lane sickens que capa nar cyac queda cone 11 a tu, mechs pein sebelah dea moll de opsina ac mee Fsfodiestrsa qu hdres guanosine monofosato cilco(¢GMP) « CM ag dukdo un cambio cuanieabe ene ptencil transmembrane (ras pall sobre ands de os potencies trarsmembrar) Hl puso de poten el sefial e incorporado a la red de eventos que denominamos “visién” cata de repono dela rodopsina se rectblee mediante una Sere de aulmics no radnctivos dependiente de ATP. El proceo involaca a ang Sido educdo + CH,OH) dela mléele de opsina, mediante un proceso cll pierde y una parte de la moléula gira Los destinos de los estados electrénicamente excitados Un proceso de decaimiento radiativo es aquel en el cual una molécula pierde swenet= de excitacién bajo la forma de un fotén. Un destino mas usual es el decaimiento no radiativo, en la cual el exceso de energia se transfierea las moléculas vecinas bajola forma de vibracién, rotacién y traslacion. Fsta degradacién térmica convierte, & forma completa, a la energla de excitacién en movimiento térmico del entorno (es decir, en “calor”). Una molécula excitada también puede participar en una reaccién {quimica, como analizaremos en el Capitulo 23. 143 Fluorescencia y fosforescencia En la fluorescencia, la emision espontinea de la radiacién ocurre dentro de unos pocos nanosegundos la fosforescencia, la emision espontinea puede persistr durante largos periodos (in- clusive horas, pero usualmente lo hace durante segundos o fracciones de segundos) sta diferencia sugiere que la fluorescencia es una conversion répida de la radiacion absorbida en energia que se emite nuevamente, y que la fosforescencia involucra ela ‘macenamiento de energia en un reservorio del cual se pierde lentamente. o de que se extinguid la radiaci6n excitante (Fig. 14.20). Ea (2) Fluorescenci En la Figura 14.21 se observa la secuencia de pasos involucrados en la fluorescencta Laabsorcién inicial lleva la molécula aun estado electrOnico excitado y si se obserr8 clespectro de absorcisn, este sera similar al que se muestra en la Figura 14.228, La moAbsorcién |, Fluordscencia | | Decaimiento o || ol no radactivo Caracteristice | 5) sige Ty) Nh a) 7 : Ny ei, | \ i 7 afi) (oo BS [Pa 8 | cordcttistcs & |absarcion|_fradiacion | {elestato, titan ee coca “Separacién internuclear Longitud de onda—> Fe. 1422 Espectto de absorcin (a) muestra tuna estructura vibracional caracterstica del Tosestados ibracionales superiores estado superior. Elespectro de fuorescencia dio (b) muestra una estructura caracteristica del > también se desplaza hacia ps 1421 Secuencia de pasos que conducen ha flvorescenca. Luego de la absorcién deca en foxrna no radiactiva por Gels entres alentorno, Entonces se produce una transicion raciativa desde el estado basal vibracional {estado electronico superior. estado inferior frecuencias menores (pero las transiciones (0.0 son coincidente: imagen especulae de a absorcin. Jecula excitada colisiona con las moléculas del entorno y, a medida que libera ener tno radiativa, desciende en la escala de niveles vibracionales hasta alcanzar el nivel vi bracional mas bajo del estado molecular electrénicamente excitado, Sin embargo, ahora las moléculas del entorno podrian ser incapaces de aceptar la mayor diferencia de energia que se necesita para retornaral estado electronico basal. Por lo tanto, podia sobrevivir un tiempo suficientemente largo como para experimentar una emision es- pontinea, yemitir el exceso de energia ren ‘on. La transicién elec [iGnica hacia abajo es vertical (de acuerdo con el principio de Franck-Condon) y el spectro de fluorescencia tiene na estructura vibracional que es caracteristica del es: janente como radi tado electeénico més bajo (Fig. 14.22b). Suponiendo que se pudieran ver, se podria esperar que la absor «ia debidas. las transiciones 0-0 coincidan. Elespectro de absorciGn surge de las tran. Siciones 1-0, 2-0, ... que tienen Tugar a ntimeros de onda cada ver mayores y cuyas intensidades obedecen al principio de Franck-Condon. Fl espectro de Muorescencia que, en consecuencia, tienen lugar sorcién y Muorescen- jin y la fluorescen: surge de las transiciones hacia abajo 0-D, 0-1, con niimeros de onda decrecientes. Sin embargo, los picos d ci 0-0 no son siempre exactamente coincidentes, debido a que el solvente puede in- teractuar de manei con el soluto en los estados basal y excitado (p. ¢}. patron de puentes de hidrégeno puede ser diferente). Dado que las moléculas del sol vente no tienen tiempo de reordenarse durante la transicibn, la absorcién ocurre en tun entorno caracteristico del estado basal solvatado, mientras que la fluorescencia ‘ocurre en un entorno caracteristico del estado excitado solvatado (Fig. 14.23) La fluorescencia se produce a frecuencias menores (mayores longitudes de onda) que las dela radiacién incidente, debido a que la transicin emisora tiene lugar luego de que parte de a energia vibracional ha sido disipada hacia elentorno. El color naranjay verde de los colorantes fluorescentes son una manifestacién comiin de este efecto: absorben enelespectro ultravioleta y azul y fluorescen en el visible. Elmecanismo también sugiere ue la intensidad de la fluorescencia deberia depender de la capacidad de las mokéculas del solvente de aceptar cuantos electrOnicos y vibracionales. De hecho, se observé que distin 14.3 FLUORESCENCIA Y FOSFORESCENCIA 493, Rolajacion soe. abe OZ Absorcién Fluoreseencia elajacién Fis, 1422 Fl solvente puede desplaza spectro de fluorescencia en relacion con el expectro deabsorcion. Aa iquierda dbservamos que a absorcion se produce com el solvete (las elipses) en el ordenamiento caracteristico del estado clectrnico basal de la molécula (la ester) sine go, antes de que la uorescencia se produzca as moléculas dl solvente se relajan en un nucvo ordenamie mantiene durante la subsiguiente transicion radiata,49414 ESPECTROSCOPIA MOLECULAR 2: TRANSICIONES ELECTRONICAS Cruzafniento ‘entre fistemas Triplete Singulete Energia potencial molecular Radiacion (fosforescencial ‘Separacion internuclear ig. 1424 La secuencia de pasos que conducen aa fosforescencis, El paso importanteesel ‘ruzamiento entre sistemas, el cambio desde tun estado singuletea un estado t ‘ausado por el acoplamiento esp ‘estado trplete acts como un reservoro de radiacidn lenta debido a que e etorno al «estado basal esti prohibido por el espn, 35 30 8 20 C0" ens’) 18 0 5 ° i 425 Exams de blo anu fart nfleo) nun exes sinpliicado elas poscone eats delos nes de ener cletronca dv moet, Los tive vbraconaes eos xaos deun estado electronico dado se sittian uno ton trims de oto, pros bacon rats Ce larcohimnasborizontales no enn acon con lsepuacon nicer eno estado Los xaos viracinde bul: decade ketone ncentancorecamente ubicadosen poi vertical pero los tos ‘indo bracionaessemstan solamente ‘vorma aque, 1 conven terns IScscrmamento ent sca) WA IMPACTO EN LA BIOQUIMICA un solvente constituido por moléculas con niveles vibracionales muy espaciados fey Pci; e] agua), puede en algunos casos aceptar el gran cuanto de energia elected consecuencia,extinguir 0 "desactivar” la fluorescenci. En el Capitulo 23 estudiar el mecanisma de desactivacion (quenching) dela fluorescencia, (0) Fosforescencia En la Figura 14.24 se observa la secuencia de eventos que conducen a l fosforese «ia de una molécula con estado basal singulete. Los primeros pasos son iguales pg, Ia luorescencia, pero la presencia de un estado excitado triplte tiene un papel ecg Las curvas de energia potencial de los estados excitados singuletey triplet tienen _geometria comiin en el punto donde se intersecan. En consecuencia, si nismo para desaparear los espines de dos electrones(y lograr la conversion de Ta a molécula puede experimentar un cruce entre sistemas, una transicién no tad entre estados de diferente multiplicided, y convertirse en un estado trplete. analizamos los espectros atomicos en la Seccién 10.94, observamos que, tanto para 4tomos como para las moléculas, las transiciones singulete-triplete pueden ocur presencia de un acoplamiento espin-drbita, Podemos esperar que el cruce entre sis sea importante cuando una molécula contiene un étomo moderadamente pesad {como pj.) porque el acoplamiento espin-érbitaes grande. Siuna moléculaexcitada cruza aun estado triplet, continia entregando energiahag el entorno, Sin embargo, ahora se encuentra descendiendo la escala vibracional del plete y queda atrapada en el nivel més bajo de energia porque cl estado triplete se enc tra auna energia menor quela correspondiente al estado singulete(recuérdese la ead Hund, Seccién 13.7). EL solvente no puede absorber el gran cuanto de energia de ex cin electronica final, yla molécula no puede irradiar su energia porque el resreo asus tado basal esté prohibido por suespin (Seccién 14.1). No obstante, la transcin radia no se encuentra prohibida por completo porque el acoplamiento espin-6rbit, que fue responsable del cruce ente sistemas, también infringe laregla de seleccin, Por lo tan Jas moléculas tienen la capacidad de emitir debilmente, yla emision puede continuar die rante mucho tiempo despus de que se haya formado el estado excitado original Este mecanismo explica la observacién de que la energia de excitacién parece qed atrapadaen un reservorio del cual se pierde lentamente. También sugiere (comose firms en forma experimental) quel fosforescencia debe ser masintensa en las mut solidas:latransferencia de energia es, entonces, menos eficente y el cruce entre sistem tiene tiempo de ocurrie cuando el estado de singulete excitado pasa lentamente por punto de interseccién. EI mecanismo también sugiere que la efciencia dela fos cencia debe depender de la presencia de un étomo moderadamente pesado (con! acoplamiento espin-Grbita), lo cual de hecho ocurre. La confirmacién del mecenismo: la observacin experimental (utilizando las sensibles téenicas de resonancia magn ‘que se describirdn en el Capitulo 15) de que la muestra es paramagnética mientrasel e tado de reservorio, con sus espines electronicos desapareados, esté poblado, Los diversos tipos de transiciones radiativas y no radiativas que se pueden producit ¢n las moléculas se representan a menudo en un esquema denominado diagrama de Jablonski, similar al que se observa en la Figura 14.25. 114.2 Microscopia de fluorescencia ‘Miésalli de un pequeno numero de cofactores, como las clorofilas yas lavinas, a mayo> ria de las unidades consttutivas de las proteinas y de los écidos nucleicos no fluoreseat ‘muy fuertemente, Se pueden destacar cuatro excepciones: losaminoacidos triptofan® (Aga 280 nm y Agin, 348 rim en agua, tirosina (Ayg,= 274 1M y Ag = 303 80 agua) yfenilalanina (,,, 257 nm y Agger 282:nm en agua) y la forma oxidada delt secuencia serina-tirosina-glicina (6) que se encuentra en la proteina fluorescemfe verde (GFP) de ciertas medusas. La forma nativa de la GFP de Aequora victoria ab- sorbe fuertemente a 395 nm y tiene su maximo de emisin a 509 nm,