ACP bi

Acid phosphatase. Two reagents

Hillmann. Kinetic-Colorimetric

Quantitative determination of acid phosphatase (ACP) Total ACP Non inhibitor by tartrate
IVD fraction

Store at 2-8ºC R 1A + R 1B (mL) 1.5 1.5

R 2A + R 2B (mL) 0.5 0.5
PRINCIPLE OF THE METHOD Tartrate sol. ( L) -- 20
Hillmann method: Acid Phosphatase hydrolyses at pH 5.0 the -
Sample ( L) 200 200
naftyl-phosphate or inorganic phosphate to -naphtol
ACP
-naftyl-phosphate + H 2O -naphtol + phosphate 4. Mix, incubate for 5 minute.
5. Measure the extintion increase per minute for 1-3 minutes.
-naphtol + Fast Red TR Azo Dye
CALCULATIONS
-naphtol reacts with a diazoted chromogen forming a coloured
Total acid phosphatase (U/L) = 750 x ∆E/min
compound with a maximum of absorbance at 405 nm.
Fraction prostatic acid phosphatase
CLINICAL SIGNIFICANCE
Acid phosphatase is an enzyme present in almost all weaves of (U/L)=750 x (∆E/min Total Ac. Ph.-∆E/min Non inhibitor by Tartrate)
the organism, being particularly high in prostate, stomach, liver, Units: One international unit (IU) is the amount of enzyme that
muscle, spleen, erythrocytes and platelets. transforms 1 mol of substrate per minute, in standard conditions. The
High levels of acid phosphatase are found in prostatic phatologies concentration is expressed in units per litre of sample (U/L).
as hypertrophy, prostatitis or carcinoma. In hematological
disorders, bones or liver diseases as well as in Paget’s or QUALITY CONTROL
Gaucher`s diseases. Control sera are recommended to monitor the performance of assay
Decreased serum acid phosphatase has no clinical procedures: SPINTROL H Normal and Pathologic (Ref. 1002120 and
significance1,4,5. 1002210).
Clinical diagnosis should not be made on a single test result; it If control values are found outside the defined range, check the
should integrate clinical and other laboratory data. instrument, reagents and technique for problems.
Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and
REAGENTS corrective actions if controls do not meet the acceptable tolerances.
R 1A
Citrate buffer pH 5.2 50 mmol/L
REFERENCE VALUES4,5
R 1B 30ºC 37ºC
Fast Red TR 6 mmol/L Total acid phosphatase:
Men : < 4.3 U/L < 5.4 U/L
R 2A Citrate buffer pH 5.2 50 mmol/L Women: < 3.1 U/L < 4.2 U/L
-Naftyl phosphate 10 mmol/L
R 2B Prostatic acid phosphatase < 1.5 U/L < 1.7 U/L

R3 These values are for orientation purpose; each laboratory should

Sodium tartrate 2 mmol/L
establish its own reference range.
R4 Acetic acid 0.5 mol/L
PERFORMANCE CHARACTERISTICS (Total ACP)
Linearity
PREPARATION AND STABILITY This method is linear up to 150 U/L.
Dissolve one vial R.1B with R.1A. Dissolve one vial R.2B with If the results obtained were greater than linearity limit, dilute the sample
R.2A. 1/10 with NaCl 9 g/L and multiply the result by 10.
The stability of these solutions are 1 month at 2-8ºC or 1 week at
room temperature. INTERFERENCES
Hemolysis interferes due the high concentration of acid phosphatase in
SAMPLES red cells1. A list of drugs and other interfering substances with acid
Acid phosphatase is extremely labile at room temperature; phosphatase determination has been reported by Young et. al2,3.
stabilize by adding 50 L of acetic acid (R.4) per mL of the sample.
Stability: 7 days at 2-8ºC. NOTES
SPINREACT has instruction sheets for several automatic
ADDITIONAL EQUIPMENT analyzers. Instructions for many of them are available on request.
- Spectrophotometer or colorimeter measuring at 405 nm.
- Thermostatic bath at 30ºC o 37ºC ( 0.1ºC) BIBLIOGRAPHY
- Matched cuvettes 1.0 cm light path. 1. Abbott L. et al. Acid phosphatase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V.
- General laboratory equipment. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1079-1083.
2. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press,
PROCEDURE 1995.
1. Assay conditions: 3. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
Wavelength: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 405 nm 4. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
5. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
Cuvette: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . 1 cm light path
Constant temperature . . . . . . . . . . . . . . . . .. . .30ºC / 37ºC
PACKAGING
2. Adjust the instrument to zero with distilled water or air.
3. Pipette into a cuvette: Ref:1001125 R1A: 5 x 21 mL, R1B: 5 21 mL
Cont.
R2A: 5 x 7 mL, R2B: 5 7 mL
R3: 1 x 1 mL, R4: 1 x 1 mL

BEIS23-I 26/02/13 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: spinreact@spinreact.com
 ACP bi

Fosfatasa ácida birreactiva

Método Hillmann.Cinético-Colorimétrico

Determinación cuantitativa de fosfatasa ácida (FAC) ACP total No inhibida por tartrato
IVD R 1A + R 1B (mL) 1.5 1.5
Conservar a 2-8ºC R 2A + R 2B (mL) 0.5 0.5
PRINCIPIO DEL METODO Sol. Tartrato ( L) -- 20
Método Hillmann: La fosfatasa ácida a pH 5.0 hidroliza el - Muestra ( L) 200 200
naftilfosfato o fosfato inorgánico a naftol.
FAC 4. Mezclar, incubar 5 minutos.
-naftilfosfato + H2O -naftol + fosfato 5. Medir el incremento de extinción durante 1,2,3 minutos.
-naftol + Fast Red TR Azo Dye CÁLCULOS
Fosfatasa acida Total (U/L) = 750 x ∆E/min
El -naftol se hace reaccionar con un cromógeno diazotado
formando un compuesto coloreado con pico de absorción Fosfatasa acida Prostática (U/L)
a 405 nm. =750 x (∆E/min osf.acid.Total-∆E/min fosf.acid. No inhibida por
SIGNIFICADO CLINICO Tartrato)
Las fosfatasas ácidas son enzima que se encuentran presentes Unidades: La unidad internacional (UI) es la cantidad de enzima
en casi todos los tejidos del organismo, siendo particularmente que convierte 1 µmol de substrato por minuto, en condiciones
altas en próstata, estómago, hígado, músculo, bazo, eritrocitos y estándar. La concentración se expresa en unidades por litro (U/L).
plaquetas.
Niveles elevados de fosfatasas ácidas se encuentra en CONTROL DE CALIDAD
alteraciones prostáticas como hipertrofia, prostatitis o carcinoma, Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control
en enfermedades hematológicas, óseas (enfermedad de Paget) o valorados:
hepáticas. SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210).
Niveles bajos de fosfatasa ácida no tiene significado clínico1,4,5. Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia,
El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos se debe revisar el instrumento, los reactivos y la técnica.
los datos clínicos y de laboratorio. Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y
REACTIVOS establecer correcciones en el caso de que los controles no
R 1A cumplan con las tolerancias.
Tampón Citrato pH 5.2 50 mmol/L
VALORES DE REFERENCIA4,5
R 1B 30ºC 37ºC
Fast Red TR 6 mmol/L Fosf. ácida total:
Hombres < 4.3 U/L < 5.4 U/L
R 2A Tampón Citrato pH 5.2 50 mmol/L Mujeres < 3.1 U/L < 4.2 U/L
-Naftil fosfato 10 mmol/L Fosf. ácida Prostática. < 1.5 U/L < 1.7 U/L
R 2B
Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada
R3 laboratorio establezca sus propios valores de referencia.
Tartrato sódico 2 mmol/L
CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO
R4 Acido acetico 0.5 mol/L Linealidad
Hasta valores de 150 U/L.Si la concentración de la muestra es
PREPARACION Y ESTABILIDAD superior al límite de linealidad, diluir 1/10 con ClNa 9 g/L y
Disolver el contenido del R.1B con el contenido del R.1A. multiplicar el resultado final por 10.
Disolver el contenido del R.2B con el contenido del R.2A. Una INTERFERENCIAS
vez disuelto tiene una estabilidad de una semana a La hemólisis interfiere debido a la elevada concentración de
temperatura ambiente o de un mes a 2-8ºC. 1
fosfatasa ácida presente en los hematies . Se han descrito varias
MUESTRAS drogas y otras substancias que interfieren en la determinación de
La fosfatasa ácida es muy inestable a pH normal del suero. la fosfatasa ácida2,3.
La fosfatasa ácida en suero es muy inestable, estabilizar NOTAS
mediante la adición de 50 L de ácido acético (R4) por cada SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la
mL de muestra. Estabilidad: 7 días a 2-8ºC. aplicación de este reactivo en distintos analizadores.
MATERIAL ADICIONAL BIBLIOGRAFÍA
- Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 405 nm. 1. Abbott L. et al. Acid phosphatase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V.
- Baño termostatable a 30ºC ó 37ºC ( 0,1ºC) Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1079-1083.
2. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press,
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. 1995.
- Equipamiento habitual de laboratorio. 3. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
4. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
PROCEDIMIENTO 5. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
1. Condiciones del ensayo:
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .405 nm PRESENTACIÓN
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 cm paso de luz
Temperatura constante . . . . . . . . . . . . . . . .. . . 30ºC / 37ºC Ref:1001125 R1A: 5 x 21 mL, R1B: 5 21 mL
Cont.
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada R2A: 5 x 7 mL, R2B: 5 7 mL
o aire. R3: 1 x 1 mL, R4: 1 x 1 mL
3. Pipetear en una cubeta:

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