REPUBLIQUE DU CAMEROUN

Paix – Travail – Patrie REPUBLIC OF CAMEROON

Peace – Work – Fatherland
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UNIVERSITE DE DSCHANG MINISTERE DE LA SANTE
University of Dschang =======
======= DELEGATION REGIONALE DE LA SANTE
DEPARTEMENT DE BIOCHIMIE ========
Department of biochemistry CENTRE MEDICALE D’ARRONDISSEMENT DE
NKONG-NI

UV BCH 22  : STAGE ACADEMIQUE

METHODE DE DIAGNOSTIC DES INFECTIONS SEXUELLEMENT TRANSMISSIBLE UTILISER AU CENTRE

MEDICALE D’ARRONDISSEMENT DE NKONG-NI

Rapport de stage académique effectué au centre médicale d’arrondissement de nkong-ni du 01

août 03 septembre 2019 en vu de l’obtention du diplôme de licence en Biochimie,
option Biochimie Clinique,

Par  :

NONGNI MAFFOUO iranie

MATRICULE : CM-UDS-17SCI2317

Sous la direction de : Sous la supervision de :

M. Roméo ZEUGO Pr SIMO Gustave

Année académique 2018/2019

 DEDICACES

Je dédie ce rapport à :

A ma mère qui m’a beaucoup soutenue et encouragée durant ce stage ceci est ma
profonde gratitude pour ton amour que ce rapport soit le meilleur cadeau que je puisse
t’offrir.
A ma famille , mes frères et sœurs vous qui m’avez doté d’une éducation digne
 REMERCIEMENTS
Tous d’abord, je tiens à remercier mon encadreur professionnel Mr ZEUGO Roméo un
grand merci pour son accueil chaleureux au sein de son laboratoire ainsi que pour sa
patience et ses précieux conseils de m’avoir guidé dans la mission qui m’a été confiée au
cours de ce stage.
Je tiens également à remercier mon encadreur académique Pr SIMO Gustave il a
été toujours à mon écoute et a su m’ apporter un soutien sans faille.
LISTE DE FIGURE ET TABLEAUXS
 ABBREVIATION

CMA
VIH
HBV
PCV
PU
EDTA
 RESUME

Un diagnostic est la démarche utilisée à l’hôpital pour détecter la maladie donc souffre
le patient sperme salive ;ces liquides sont indispensable pour confirmer un diagnostic
suivre l’évolution d’une maladie et proposer un traitement .ces liquides sont utilisés
pour les examens tels que les examens immunologique ,parasitologie , biochimique
,bactériologique et moléculaire .ces analyses utilises des réactifs et matériels
(seringue ,lancette, tube , sang , plasma, sérum …) considéré comme dangereux pour la
santé des populations environnante ce pour cela qu’ils doivent être traités et éliminés
suivant un protocole précis.
 INTRODUCTION GENERALE

Un diagnostic regroupe l’ ensemble des examens pratiqués par un professionnel de santé

pour comprendre la pathologie donc souffre le patient , le diagnostic est basé sur les
examens clinique, biologique …le prélèvement et l’analyse des échantillons biologiques et
biochimiques sont les étapes très importantes dans le traitement d’une infection .Avant
toute analyse des différents spécimens e font dans un laboratoire médical .ces analyses
médicales consiste à déceler la présence ou l’absence des constituants anormaux d’ un
spécimen quelconque , les variations anormales de certains paramètres pour déceler la
présence d’une pathologie .
Objectif général : décrire les différents types d’analyses effectués en stage
Objectifs spécifiques
 Maitriser les instruments d’analyses médicales
 Etre capable de réaliser les différents types de prélèvement effectué en stage
 Etre capable d’effectuer toutes les analyses médicales
 etre capable d’interpréter les différents diagnostics biologiques et
biochimiques
 etre capable d’ assure la sécurité du technicien de laboratoire, d’éviter de
contaminer aussi bien le pratiquant que les échantillons afin de produire
un travail insécable toute sécurité.
 Entrer en contact avec le monde professionnel et s’imprégner de sa
déontologie.
  compléter les enseignements théoriques acquis au cours de l’année.

PREMIERE PARTIE
PRESENTATION DU CENTRE DE STAGE

Le CNTRE MEDICAL D’ARRONDISSEMENT DE NKONG-NI est situé

dans la région de l’ouest Cameroun , Arrondissement de Nkong-ni puis
précisément A BALEVENG (Dschang) situé à environ 70 km quittant de
BAFFOUSSAM et a environ 5 km quittant de DSCHANG.

L’hôpital est constitué de :

 Un bloc administratif
 Un bloc d’hospitalisation
 Un bloc en délabrement (sert de dortoir pour les stages)
 Un bloc d’abstrainte

Hiérarchie on a :
  Un médecin chef
 une surveillante générale
 Un Econome
 Les majors de service (laborantin, pharmacienne …
Le bloc d’hospitalisation est divisé en deux bâtiments :
 Le premier à gauche est constitué de :
 L’Accueil
 Une Salle de garde
 Une salle de réunion
 Une salle de médecine femme
 Une salle de médecine homme
 Le bureau de la surveillante générale
 Le deuxième à droite est constitué de :
 Une salle de soins
 Un Laboratoire
 Une pharmacie
 Un standing I
 Une pédiatrie
 Un standing II
 Une salle d’accouchement
 Un bloc opératoire
 DESCRIPTION DEROULEMENT DE STAGE
Pour clôturer nos trois années d’études en biochimie le campus décide de nous envoyer en
stage.
Ce stage d’une durée d’un mois s’est déroulé au niveau de différents service de
laboratoire de biologie médicale , le choix de stage se révélé très intéressant et
enrichissant pour mon expérience professionnelle .Ce rapport présente le travail que
j’ai effectué lors de mon stage qui a débuté du 01Aout au 03 septembre 2019 ;le but de
ce dernier n’est pas de faire uniquement une présentation exhaustive de tous les aspects
théorique que j’ai pu apprendre ou approfondir mais de manière synthétique et claire
de faire un tour d’horizon des aspects pratique et humains auxquels j’ ai été confronté .
Pouvons résumer ce stage en deux phases :

A) UNE PHASE D’OBSERVATION

Ici il était questions d’observer comment s’ effectuait le prélèvement  ;les différents

principes de préparation des échantillons biologiques et manipulations des différents
appareils du laboratoire cette phase à durée 10 jours

B) PHASE ACTIVE DU STAGE (PRATIQUE)

Elle a commencé à partir du 11ème jours et marque le début de ma participation au
fonctionnement du laboratoire .
1. Méthodologie des prélèvements des échantillons
Le laboratoire disposait de tous le matériel nécessaire
o Selles, urines, crachat
Les boites étaient étiquetées et remisent au patient qui se prélevait lui-même dans ses
toilette
o Le VIH, HBV, HCV, G -TEST
ILS se faisaient sur les bandelettes
o Le CHAMYDIA H-PYLORI

Se faisaient sur les casettes

o PCV, PU
Le PCV se faisait à l’aide d’un speculum on écartait le vagin et on introduisait
l’écouvillon dans le vagin jusqu’ au niveau du col de l’utérus ou on prélevait le liquide.
Le PU :on introduisait l’écouvillon par le méat urinaire jusqu’au niveau de l’urètre
pour prendre le liquide qui s’y trouve .

a. PRELEVEMENT DE SANG
Ils sont destinés à plusieurs examens il est effectué dans les tubes différents en
fonction de l’examen demandé ce tableau rappelle les principales caractéristiques en
fonction de la nature du tube de prélèvement

Anticoagulant bouchon champ d’application

Tube sec rouge biochimie, sérologie,

immunologie

Citrate de sodium bleu coagulation

Héparine de lithium vert ionogramme, bicarbonates

EDTA violet NFS, Groupe rhésus
parasites sanguins

Oxaloacetate de potassium marron glucose, lactate, alcool

Le sang est généralement prélevé au niveau du coudre et conservé comme sang

totale ou centrifugé on prélève aussi le sang capillaire par piqure au niveau du doigts
à l’aide d’une lancette tous les échantillons sont immédiatement envoyés en salle
d’analyse après leur prélèvement.

2. METHODES D’ANALYSES DES ECHANTILLONS

  EXAMENS BACTERIOLOGIQUES
a) Examen parasitologie des selles

Analyse
On effectuait une préparation à l’ état frais suivit d’une observation directe au
microscope 10X et 40X ce qui permettait de pouvoir distinguer les différents
microorganisme ou leurs œufs par leur forme leur mode de déplacement…

Résultats
Les résultats qu’on pouvait obtenir se présentait comme suit :
 présence des œufs d’ascaris de tænias
 Présence de Trichomonas intestinalis
 Présence des levures
 Présence des entérobactéries
 selle inoculé de sang

1. Prélèvement cervico-vaginal(PCV)

Analyse
On procède à une préparation à l’état frais suivit d’une observation rapide et à une
préparation à l’état coloré (Coloration de Gram) permettant de confirmer les résultats à
l’état frais et de caractériser les bactéries trouvées dans l’échantillon

Résultats Patient
Examen demandé PCV

Etat frais éléments cellule épithéliale , éléments levuriforme :Candida albicans

Coloration des Gram cellule épithéliale , bactérie Gram négatif

Interprétation
D’après les résultats obtenus on pouvait dire que le patient est victime d’une
Candidose provoqué par l’espèce du genre albicans et la présence des bactéries Gram-
pouvait s’expliqué par le fait que la présence de Candida albicans a favorisé le
développement des bactéries pathogènes dans le vagin ,

EXAMENS BIOCHIMIQUES
 Utilisation du sang
A l’exception de la glycémie effectué sur le sang totale les autres paramètres sont dosés
dans le sérum ; obtenu par centrifugation à partir du sang prélevé généralement au
niveau du coude les tests se font à l’aide d’un spectrophotomètre qui détermine la
concentration des substance

a) Glycémie
les bandelettes utilisées pour mesurer la glycémie chez les patients est une
méthode enzymatique la plus simple d’emploi .
Mode d’emploi de la bandelette :
-Insérer la bandelette d’analyse dans la cellule d’analyse en contact avec la goute de
sang ;un signal sonore fait entendre lorsque le sang a été abordé le résultat apparait à
l’écran ‘d’affichage juste après quelques secondes

b) Examens par dosage spectrophotométrie

On utilisait les réactifs déjà préparés pour doser les paramètres suivants selon un
protocole bien défini :
b-1) Le sodium : substance minérale jouant un rôle important dans l’état d’hydratation de
l’organisme
Norme : 137 à 142 mmol/L
La natrémie reflète l’état d’hydratation des cellules
Hyper natrémie est l’augmentation du taux de sodium dans le plasma à une valeur
supérieur à145mmol/L ce qui traduit la déshydratation elle-même du à apport insuffisant
ou une perte rénale et cutanée
Hyponatrémie : diminution du taux de sodium à une valeur inférieure à 135mmol/L ceci
traduit :
- Une hyperhydratation : due à une rétention d’eau, une insuffisance rénale et
cardiaque , hypersécrétion d’hormone antidiurétique
-Hyperhydratation peut etre due à une de de sodium causée par le vomissement ,
diarrhées ,et brulures

b-2) Magnésium : oligo élément indispensable à l’organisme ,il intervient dans de

nombreuses réactions physiologiques métabolisme des glucides ,proteines , lipides,
coagulation de sang …
le corps d’un adulte contient 25g de magnésium une carance peut s’observée en car de :
- Alimentation trop pauvre en magnésium
-Augmentation des besions : Grossesse ,allaitement
b-3) chlore : élément chimique très répandu dans la nature
Norme :100 à 110mmol/L cette concentration dans le sang peut augmenté en cas
des infe ctions rénales et diminué en cas de vomissement répeté .
b-4) urée : substance azotée provenant de la destruction des protéines d’origine
alimentaire
norme : 4,2 à 7,5 mmol/l
Urémie taux d’urée dans le sang est élevé en cas d’insuffisance Rénale
chronique
Ou aigue et basse en cas de défaillance fonctionnelle du foie .
b-5) Créatinine : substance azotée provenant de la dégradation de la créatine
,constituant du tissu musculaire est à la base de l’évaluation du fonctionnement
rénale.
Norme dans le sang : 62 à 115 micro mol/l
L’augmentation du taux de créatinine dans le sang permet de diagnostiquer une
éventuelle insuffisance rénale.

EXAMENS SEROLOGIQUES
Tous les examens sérologiques étaient qualifiés et s’effectuaient sur sérum
obtenue par centrifugation de l’échantillon sanguin on utilisait soit les bandelettes
(VIH, hépatite B re et C …)soit des réactions d’agglutinations ( test de widal … )
ou encore les réactions d’ immunocomb ( VIH1 et VIH 2, toxoplasmose, chamydia ,
Rubéole …) tous ces examens reposent sur le principe de la réaction antigène-
anticorps ( ag-ac) .
Ces bandelettes permettent de mettre en profil une réaction immuno
chromatographique pour détection qualitative des anticorps spécifiques dans un
échantillon de sérum , plasma ou sang total humain .
Le principe de cette méthode est basé sur la migration
chromatographique de l’échantillon .L’échantillon est déposé sur une zone de
dépôt quand l’échantillon migre jusqu’à la zone de dépôt du conjugué , il se
mélange le conjugué colloide de sélénium -antigène .ce mélange continu à migré
sur la phase solide jusqu’aux antigènes recombinants immobilisés et aux peptides
synthétique au niveau de la fenetre du patient .
 Si les anticorps spécifiques sont présents dans l’échantillon ,il se lient a
l’antigène de la fenetre patient en formant une ligne rouge au niveau de la fenetre
patient (TEST POSITF )
Si les anticorps spécifiques sont absents le conjugué antigène –colloide de
sélénium traverse la fenetre patient sans former la ligne rouge ( TEST NEGATIF )

EXAMEN MOLECULAIRE
ELECTROPORESE
Drépanocytose : anomalie héréditaire de la structure de l’hémoglobine (Hb ) dans
laquelle le 6ème acide aminé de la chaine beta l’acide glutamique est remplacé par
la valine , l’hémoglobine normale ( HbA ) est remplacé par l’hémoglobine anormale
( HbS )

PRINCIPE DU TEST
Le test est basé sur la différence de solubilité entre les différents types
d’hémoglobine l’ HbA se dissous dans une solution réactive alors que l’hémoglobine
HbS ne se dissous par .

MATERIEL
- Centrifugeuse
- Pipette de 2ml
- Micropipette de 100 microlitre
- tube avec anticoagulant ( EDTA, Héparine, Citrate…)
- porte tube
- minuterie

PROCEDURE
- Pipeter 2ml de la solution réactive ,l’introduire dans le tube du test prévu
dans le coffret
- Pipeter 100 micro litre de l’échantillon et ajouter dans le meme tube
- Homogénéiser le mélange pendant 10 à 15 seconde ; placer le sur le porte
tube et attendre 10 min
- centrifuger à 1200g (3000tr/min ) pendant 5 min
- retirer les tubes avec précaution sans remuer et procéder à la lecture
 INTERPRETATION DES RESULTATS
A l’ issu du test 2 couches se forment dans le tube , la couche
supérieure et la couche inférieure :
Type couche supérieure couche
inférieure
Hb – AA (normal) coloration gris coloration
rouge
Hb – AS (porteur saint) coloration rouge coloration rouge
claire ou rose
Hb – SS (drépanocytaire) coloration rouge incolore
,limpide

NB : si après centrifugation les 2 couches ne sont pas formées ,centrifuger de

nouveau pour 5min .
Le réactif doit etre conservé entre 2° et 8° C ne pas le congeler
L’échantillon ne doit pas dépasser 24h

METHODE
DANS Un tube on met le Dithionite de sodium et le phosphate concentré puis on
met le sang puis on conserve la solution à l’obscurité pendant 10 min en suite on
met le tube dans une centrifugeuse on attend 20 min on retire s’il y’a par formation
de 2 couches on remet dans la centrifugeuse pendant 5 min en fin on observe les
types de Hb (Hb-AA , Hb-AS , Hb-SS ).

Conclusion partielle
Au terme de cette partie portant sur le déroulement du stage on constate que la
majorité de tests portant sur l’analyse biomédicale sont effectués au laboratoire de
CMA DE NKONG-NI certains analyses n’ ont par été effectuées car n’ayant par été
préinscrit au patient durant notre séjour au laboratoire .
DEUXIEME PARTIE
THEME : METHODES DE DIAGNOSTIUE DES INFECTIONS
SEXUELLEMENT TRANSMISSIBLE

INTRODUCTION : Motivation du choix du thème

Les Infections sexuellement transmissibles sont

Chaque jour des millions de personnes contractent l’une des infections

sexuellement transmissible ( syphilis , chlamydiose , gonorhée , VIH, hépatite B …)
des millions de personnes vivent avec ces infections ; que ces maladies soient
transmis par les virus ou les bactéries la plupart sont contractés par voies sexuelle . la
plupart des IST peuvent etre traitées avec efficacité mais il est indispensable
d’intervenir tot et de soigner aussi le partenaire ce pour cette raison que j’ ai choisir ce
thème .
REVUE DE LA LITTERATURE
 METHODOLOGIE /RESULTATS ET DISCUSSIONS

TECHNIQUE D’IMMUNOCOMB

Le test immunocomb est un test rapide et semi quantitatif basé sur le principe
d’ELISA sandwich capable de détecter les anticorps dans le sérum et le plasma
humain cette technique est utilisée pour confirmer les résultats obtenus sur des
bandelettes .

PRINCIPE
C’est un test immuno enzymatique indirect en phase solide ; la phase solide étant un
peigne de 12 dents ,chaque dent étant sensibilisée à la surface en 2 points ou spots de
réaction .
- Spot supérieur ;immuno globilines humains ( contrôle interne )
- Spot inférieur antigènes spécifique inactives
Les réactifs sont contenus dans un bac de développement , chaque compartiment
contient un réactif ,le test consiste à transférer le peigne d’un compartiment à l’autre .
Les anticorps spécifiques éventuellement présents dans les échantillons testés se
lient de façon spécifique aux antigènes immobilisés à la surface des dents du peigne .

RESULTAT
Une fois le test réalisé :
 si 2 spots Gris-Bleu sont visibles sur la dent le TEST est dite POSITIF 
 Si seul un spot supérieur de contrôle interne est visible le test est NEGATIF

PCV (Prélèvement cervico-vaginal)

 DIAGNOSTIC DE LA SYPHILIS : TPHA

Le TPHA correspond à l acrosyme de trépanema palidium hemagglutination ASSAY .

un test biologique quantitatif utilisé pour diagnostiquer la syphilis .
Cette maladie sexuellement transmissible est ocassionnée par la bactérie trépanema
pale pour détecter ,le test TPHA étudie la réaction hemagglutination passive en
utilisant des trepanèmes fixer sur des globules rouge de mouton . il existe 3 stades de
syphilis pendant lesquels les symtomes apparaissent . cependant tous les individus
atteints de syphilis ne passe par nécessairement par les 3 stades . il y’a la période
asymptomatique ou la syphilis se présente comme une maladie infectueuse aigue qui
semble se résorber spontanément . elle peut récidiver peu de temps après disparaitre
de la meme façon . elle peut aussi réapparaitre sous forme de trouble chronique non
contagieux cela signifie qu’il y’a 2 personnes atteintes de syphilis celles qui
guérissent sans traitement et celles qui ne guérissent pas sans traitement . dans un
groupe comme dans l’autre les analyses de sang pour rechercher la syphilis donnent
des résultats positifs .

PRINCIPE
Ce test est basé sur l’hémagglytination passive des hématies sensibles avec un
antigène extrait de Trépanema palidium .
REACTIF
 Cellule test : hematies de poules sensibilisé avec l’antigène trépanémique 1 flacon
de 8,5 ml - Cellules de contrôle : hématies de poules non sensibilisé 1 flacon de 8,5
ml
- tampon : pour diluer le sérum UN flacon de 20ml
- Sérum positif : pré dilué au 1/20 un flacon de 1ml
- sérum négatif : pré dilué au 1/20 un flacon de 1ml
-microplaque en polystyrène 3 plaques fournies
°sérum : sérum frais peut etre conserver à 2-8°C pendant 5 jours pour des périodes
plus longues il doit etre congelé à moins 20°C

METHODOLOGIE
- Cupule n°1 : ajouter 10 microlitre de sérum à tester à 190 microlitre de tampon on
obtient une dilution de 1/20
- mélanger soigneusement :distribuer 25 microlitre de cette dilution dans les cupules 2
et 3
- cupule n°2 : ajouter 75microlitre de cellule
- mélanger couvrir la plaque attendre 45 min à température ambiante , à l’ abri de
tous
- procéder à la lecture des résultats après 45 min

RESULTATS ET INTERPRETATION

- 4+ Voile homogène de cellule courant la totalité des puits quelques fois avec des
bords repliés
- 3+ voile homogène de cellule courant partiellement le font de puits
2+ voile de cellule entourer par un cercle de cellule
1+ voile entourer par un cercle de cellule plus épais de cellule
+ ou - bouton de cellule avec une petite ouverture centrale
_ moins bouton de cellule avec ou sans un pétit ouverture centrale
TEST POSITIF : de 4+ à1+
DOUTEUX : + ou -
TEST NEGATIF : -

CONCLUSION GENERALE

Ce stage au CMA DE NKONG NI m’a permis d’approfondir mes connaissances dans

le milieu de la biologie médicale et sur la technologie biomédicale qui sont mises au
services du patient .Il m’a également permis de mieux assimiler la théorie qui m’a été
enseignée pendant mes 3 années en biochimie .Tous ces acquis vont me permettre
d’aborder avec plus de sérénité les taches qui mes seront attribués lors du prochain
stage (dans mes nouvelles fonctions).
REFERENCE
REFERENCE BIBIOGRAPHIQUES

ANNEXES