Mal de Panamá: Situación actual de la raza 4

tropical, avances de investigación e iniciativas

globales ante su amenaza

Miguel Angel Dita Rodríguez

Bioversity International
m.dita@cgiar.org
I congreso LatinoAmericano y del Caribe de Plátanos y Bananos
Sullana, Perú 24/06/2011
 Mal de Panamá / Marchitez por Fusarium
Fusarium oxysporum f. sp. cubense - FOC

Devastation of a Cavendish plantation in Malaysia by Panama disease (Ploetz, 2001)

 Mal de Panamá / Marchitez por Fusarium
Fusarium oxysporum f. sp. cubense vs. Huracán

3
Mal de Panamá: Sintomas Externos
Mal de Panamá: Sintomas Internos
Mal de Panamá: Sintomas Externos
 Mal de Panamá : El Patógeno
Fusarium oxysporum f. sp. cubense

Race 1: Gross Michel (also Maçã (Silk), Pisang Awak)

Race 2: Bluggoe (and cooking bananas)
Race 3: Heliconia spp. (New species ? In progress)
Race 4: Cavendish (subtropical-ST4 and Tropical-TR4)

Variety R1 R2 R3 R4
Gross Michel S R R S
Bluggoe R S R S
Heliconia R R S ?
Cavendish R R R S

•Race 4 is most destructive since it affects R1 and R2

susceptible clones as well as Cavendish cultivars
• Most of varieties (~80 %) are susceptible!
Panama disease vs. Commercial banana
~ 60 years ago

Today
RT4?

454 - seq 8
 Mal de Panamá: Distribución mundial
RT4 diseminación

Rt4

Distribución Geográfica del Mal de

Zona de producción de Bananos
Panamá (Ploetz, 2001)

Método de Diagnóstico específico para RT4

 “La seria amenaza de la raza 4 tropical de Foc
(cortesía de Dr. Molina )
Exportación Taiwanesa para Japan
(M, 12-kg cartons)
400
-TR4 dañó la industria bananera (+US$5 350
bi) de Cavendish- en Taiwan 300
- ~ 67,000 has. en China; 250
- ~ 500 has. En Filipinas; 200
- Producción de Taiwan fue reducida 10x 150
- Amenaza para Millones de pequeños 100
productores en el mundo 50
- Renovó interes en Foc I&D 0
1999 200 2001 200 200 200 200 200 200 200
0 2 3 4 5 6 7 8
Adapted from Dr. C.P Chao, 2008 BAPNET meeting

Variedad Local afectada, China Photos: G. Molina Bioversity

 Bananos en China
•CHINA – 285 000 ha
•~ 65,000 ha affected by Foc TR4
• Serious Problem on Cavendish
Millions of banana plants have died and
unfortunately we have found No Cure for
the disease," said Liu Shaoqin, a researcher
with Guangzhou's Academy of Agric. Science.
The disease is the CANCER of the plant
community," he said..

http://english.cri.cn/3126/2007/04/05/272@212949.htm. 11
 Session 2: Integrated approaches to managing
Fusarium wilt and other emerging disease threats

Source: http://www.promusa.org/symposium_2009/home.html 12
 Control de enfermedades en plantas
vs. Mal de Panamá em bananos

• Biológico
• Químico • Cultural

• Uso de variedades resistentes

Manejo Integrado
 Manejo Integrado

Genético 
  
Cultural Químico 
• Químico

The disease can only be managed by using resistant cultivars and by

preventing its introduction into new fields!

Once infested with the pathogen, the only way of continuing banana production is
by means of planting cultivars with resistance to the disease (Deacon, 1984;
Ploetz and Pegg, 2000; Viljoen, 2002; Ploetz et al., 2003).

Benomyl; Copper oxychloride; Chloride;

Prochloraz Cyproconazole; Clean Green; Cupravit;
Propiconazole; Phosetyl-Al; Desogerm; Farmcleanse
Captab; Azoxystrobin; Jik Prazin agri
Kresoxim-methyl Omega; Sporekill
 inoculadas aos 45 dias após o transplantio. As plantas foram removidas
da à jasmonatos e etileno.
cuidadosamente do solo e suas raízes foram lavadas em água corrente, para
resentado Control Biológico - Aspectos generales
um
retirada do excesso de solo esquema
e em seguida resumido
cortadas a 7-10 cm da base. A inoculação da Resistência Sistê
foi realizada por imersão das raízes na suspensão conidial (2 x 10 6 conídio mL-1)
durante 2 horas, quando foram transferidas para bandejas onde foi montado um
sistema de inoculação (MOHAMED et al., 2000) (Figura 4). Plantas usadas como
testemunhas foram submetidas ao mesmo procedimento, porém utilizando-se água
destilada estéril.

Antibiosis
directa/
1. 4.Inoculación
Figura patógeno
Esquema metodológico para inoculação das plantas com o fungo. competencia
2. Evaluación Tto. c/ Microorganismos por nutrientes
Antibiosis directa
Inducción de resistencia
s duas formas mais caracterizadas de resistência sistêmic
a respostas fenotípicas semelhantes. Resistência Sistê
 Algunas consideraciones sobre el
control biológico de Foc
• Biológico

• Muchos trabajos de identificación y aislamientos y estudios en

invernadero vs. casi nada en campo

• Mucho “potencial”, pero hasta el momento: “pocas Nueces”
• Es una tarea difícil que normalmente requiere intervención de la industria

Formulación (?) Registro de productos ($)

Microorg. que han mostrado potencial de Biocontrol de Foc

•Trichoderma spp.
•Bacterias (Pseudomonas, Serratia, otras)
• F. oxysporum no patógénico !!
 SUELOS SUPRESSIVOS
Biológico
Deciphering the Rhizosphere Microbiome for
Disease-Suppressive bacteria Science, Mayo, 2011

Rodrigo Mendes,1*† Marco Kruijt,1*‡ Irene de Bruijn,1§ Ester Dekkers,1 Menno van der Voort,1
Johannes H. M. Schneider,2 Yvette M. Piceno,3 Todd Z. DeSantis,3,4 Gary L. Andersen,3 Peter A. H. M.
Bakker,5 Jos M. Raaijmakers1¶

In excess of 33,000 bacterial and archaeal

species were detected, with Proteobacteria,
Firmicutes and Actinobacteria consistently
associated with disease suppression.
Members of the ϒ- Proteobacteria were
shown to have disease suppressive activity
governed by nonribosomal peptide
synthetases. Our data indicate that upon
attack by a fungal root pathogen, plants can
exploit microbial consortia from soil for
protection against infections.
Cebollitas Chinas (Allium tuberosum) inhibe Mal de
Panamá!! Cultural
Dr. Yi Ganjun in the 7th BAPNET SC Meeting, Hanoi, Vietnam
 Cebollitas chinas (Allium tuberosum) inhibe Mal de
Panamá
Algunas consideraciones para LAC:

Vs.

Photo by Yi Ganjun Photo by R. Ploetz

• Debe tenerse en cuenta, pero los DATOS mostrados hasta ahora no

son científicamente concluyentes
• Cual es la viabilidad práctica para grandes extensiones de monocultivo –
pequeñas parcelas?
• En caso de que sea efectivo, esta especie funcionaría en LAC?
 Marchitez de Fusarium: Informaciones generales,
pero NO triviales

Condiciones que favorecen el desarrollo de la enfermedad

•Material de siembra infectado
•Suelo infestado
•Ataque de nemátodos

Prevention and control:

•No existe UN método realmente efectivo de control que no sea el
uso de variedades resistentes

Medidas para reducir el impacto de la enfermedad

1. Use material resistente siempre que posible;
2. Implemente aestrategias de rotación adecuadas. Si el suelo está
severamente infectado esto es OBLIGATORIO
3. Siempre qu esea práctico, retire y destruya material de plantas infectadas,
pero no lo use para compost o otras emmiendas.
4. Utilize prácticas de fertilización y irrigación adecuadas – NO
INUNDACIÓN! – Ejemplo de China – Rio Pearl
 Objetivos de investigación – Foc
Basadas en :
1.Prevención de entrada - detección temprana
2.Material de siembra sano; e
3.Uso de variedades resistentes
4.Manejo de la enfermedad
a) Desarrollar métodos de diagnóstico y detección específicos para Foc TR4
y otras razas importantes de Foc;
b) Realizar estudios comparativos de las razas 1, 2, RS4 y RT4 utilizando EST
(Expressed Sequence Tag) obtenidos mediante secuenciamiento -454 con
el objetivo de entender mecanismos de especificidad y virulencia;
c) Desarrollar y Establecer bioensayos rápidos y eficientes para realizar
screening para la resistencia a Foc en invernadero;
d) Caracterizar genotipos de Musa considerados “relevantes” para la
resistencia a Foc TR4 ;
e) Entender las bases genéticas citológicas y moleculares de la resistencia a
Foc en Musa;
f) Desarrollar estudios epidemiológicos con el objetivo de diseñar y validar
estrategias de manejo integrado aplicables en larga y/o pequeña escala.
 Desarrollo de un método de diagnóstico
específico para RT4
Estructuras de F. o f. sp. cubense

• Microconidios: 5 - 16 x 2.4 • Macroconidios: 27 - 55 x • Clamidiosporas:7 - 11

- 3.5 µm, 1 o 2 células, 3.3 - 5.5 µm, 4- 8 formato µm diámetro, usualmente
ovales forma de riñón de de Hoz, con células globosas formadas
basales en forma de pié. idividuales o en cadenas

• Fox: ~ 100 formae speciales que causan marchitez en plantas

- agrupa especies de patógeno y saprófitos que no pueden ser distiguidos
morfológicamente

Fotos: MA. Dita

Fuente: Ploetz (2000)
 Diagnóstico molecular para TR4 (GVC01213)
Lin et al. (2008)- Foc-1/ Foc-2 VCG 01213

M 0 1 2 3 4 5 6 8 9 10 11 12 13 14 15 18 19 20 22 24 M

242 bp

Primers - FocTR4-F/ FocTR4-F (Dita et al. 2010)

Foc1/Foc2: Positivo aislados de Honduras, Brasil, Costa Rica!

Australia, Indonesia, Taiwan
Detección de Foc RT4 in planta

Inoculada con TR4 control

Foto: MA. Dita
Embrapa
 Detección de Foc RT4 in planta
EF +FocTR4 // Actin2 + FocTR4

PCRs Duplex

Cormo- control
TR4 ST4

EF-1

TR4s

Actin2

M. balbisiana M. acuminata Cormos infectados

(BB) (AA) RT4

13 diploides, IITA
 Detección de Foc TR4 en Suelo
Sample Host Country Plant stage
TS1 Cavendish Taiwan Healthy plant
TS2 Cavendish Taiwan Healthy plant
TS3 Cavendish Taiwan Infected plant
TS4 Cavendish Taiwan Healthy plant
TS5 Cavendish Taiwan Healthy plant
TS6 Cavendish Taiwan Healthy plant
TS7 Cavendish Taiwan Infected plant
TS8 Cavendish Taiwan Healthy plant DNA extraction
TWS9 Cavendish Taiwan Infected plant
AuD1 Cavendish Austrália Infected plant
AuD2 Cavendish Austrália Infected plant
AuD3 Cavendish Austrália Infected plant
AuH1 Cavendish Austrália Healthy plant
AuH2 Cavendish Austrália Healthy plant
AuD3 Cavendish Austrália Healthy plant
SEcu01 Cavendish Equador Healthy plant
SEcu02 Cavendish Equador Healthy plant
SCR01 Gros Michel Costa Rica Healthy plant
SCR02 Gros Michel Costa Rica Healthy plant
 Detección de Foc RT4 in planta
1 cm

Fotos: M.A. Dita

Cormo
5 10 15 20 25 30
cm

1 cm

Surface sterilization

Medio de Komada Extracción de ADN,

(1975) PCR con FocTR4 primers
 Aplicaciones!

1.Servicios cuarentenários- Inmediato

2.Soporte para medidadas de erradicación– Inmediato
3.Certificación de material de propagación – Y lo están
solicitando
4.Análisis de riesgo!
Geografic distribution (GS +)
Foc
K.meters

Kmeters Dita et al (unpublished)

 Mal de Panamá en bananos: Control
Uso de variedades resistentes!
Control químico (en general no funcional!)
Control biológico (prometedor, pero aún es visto como una tarea difícil)!
Cultural control (difícil de implementar y solo no es suficiente!)
Control Integrado (Ideal: variedades resistentes actor principal)

Desarrollar una metodologia de screeening para la identificación

temprana de genotipos resistentes (invernadero)

• Elucidar mecanismos de defensa / resistencia (RT4 , R1, R2, RS4);

• Entender los mecanismos de patogénesis en aislados (RT4 , R1, R2, RS4;
• Realizar análises de biologia comparativa (‘fitness’) entre aislados (VCGs)
representativos de diversas áreas de producción de bananos
Mal de Panamá en bananos: Control

Control Inoculated
Sis. Aeropónico - Severn-Ellis et al. (1997) Container plástico - Subramaniam et al. (2006)

Sist. Bandejas dobles

Test Plantlets

Support Substrate
Inner tray
Outer tray
Drain Holes
Nutrient & water excess

Mohamed et al. (2001) Sist. cerrado - Smith et al. 2008

35 ddi

Fotos: M.A. Dita

Control Inoculada
 MANZANO
Susceptible

TROPICAL
Resistencia
Moderada

GRANDE NAINE
Resistente
Desarrollo de un bioensayo para la interacción
Cavendish-TR4
Plantas inoculadas con RT4
21ddi
Aislado BPS3.4
Fotos: M.A. Dita
Desarrollo de un bioensayo para la interacción
Cavendish-TR4

R1 vs. RT4 Interacción compatible vs. incompatible

Fotos: M.A. Dita

 Screening de genótipos para la resistencia a
Foc RT4

09 Genotipos vs. Foc TR4

1. Grande Naine (AAA)

2. Maçã (Silk) – AAB
3. Prata (AAB)
4. Pahang (AA)
5. CIRAD 930 (AA) M. a.
malaccensis
6. Pahang (AA)
7. Matavia (Bluggoe) – ABB
8. Banksii (AA)
9. Tuu Gia (AA)
 Estudios comparativos de las razas 1, 2, RS4 y RT4
utilizando EST (Expressed Sequence Tag) obtenidos
mediante secuenciamiento -454.
Micelio Conidios Con. germinados

R1, R2, ST4, TR4 R1, R2, ST4, TR4

Extracción de ARN

ARN ‘pooling’ (Micelio + Conidios + Conidios germinados)

ARN m

bibliotecas de cDNA de R1, R2, RS4, RT4

•Análisis comparativos de EST
•Desarrolo de métodos de diagnóstico
 Mal de Panamá: iniciativas y proyectos
actuales y desafíos para LAC
Fusarium wilt of banana: an integrated approach to reduce
the vulnerability of banana-dependent smallholders facing the
threat of tropical race 4 (TR4)
Líder: Bioversity International
 Mal de Panamá: iniciativas y proyectos
actuales y desafíos para LAC

Panama Disease in Banana: Multi-level solutions for a global problem

Líder: Plant Research International - Holanda
Mal de Panamá: iniciativas y proyectos
actuales y desafíos para LAC

RECOMENDACIONES PARA PREVENIR

LA ENTRADA DE ENFERMEDADES
CUARENTENARIAS DE ALTA
IMPORTANCIA ECONÓMICA PARA
BANANO Y PIÑA.

Dirigidas a: Empleados de las compañías

fruteras, representantes de compañías de
agroquímicos, inspectores de Compañías
Certificadoras, representantes de ONG’s,
y cualquier otro visitante a plantaciones
de banano en el Sur Este Asiático, y
plantaciones de piña en Sur América.
 Mal de Panamá: iniciativas y proyectos
actuales y desafíos para LAC
Capacitación sobre prevención, diagnóstico y
manejo del Mal de Panamá en bananos

Una iniciativa de Demás países?

Bioversity Internacional
y MUSALAC para la
reducción del impacto de
la enfermedad en LAC y
prevención de la entrada
de la raza 4 Tropical a
las Américas
?
Mal de Panamá: iniciativas y proyectos
actuales y desafíos para LAC

$ +?
Perú - Carlos Román
Maestría – CATIE
Epidemiología de Foc
 Promusa’ 2011
Salvador, Bahia, Brasil
Embrapa Programa de mejoramiento de Musa – 30 Años

~ 400
Accesses

15
Cultivars released
Embrapa Cassava & Tropical Fruits
• Cruz das Almas, Bahia Brazil; International Meetings Banana, Pineapple
Salvador, Bahia Brazil
Gracias!