El RNA mensajero ESQUEMA DEL CAPITULO ERB Introduccion HEB EL RNAm se produce por transcripcién y se tratuce "= Sélo una de las dos catenas de DNA se transcribe en RNA, TERR ELRNA de transferencia forma una hoja de trébol ‘= Un RNA tne una Secuencia de 74 895 bases que se dobla aa formar una estructura secundaria de hoja de trébol ‘con cuatra brazos constates (y un brano adcional en los RNA mas fargo). '»ELRNAt se carga para formar un aminoacl-RMAty da lugar a unenlace éster del grupo OH 2' 3 del cide atentico fen ol extrema del brazo aceptor del grupo COOH del aminoseic, ‘La secuencia del anticodén mada mas es responsable de a expecificidad del eminoaci-RNAt EL tallo aceptor y el anticodén se encuentran en los extremos de la estructura terciaria © Lahaja de tbbol constitaye una estructura teciaria en forma de L con el brazoaceptor en un extemo y el brazo anticadén en el oto ELRNA mensajero es traducide por los ribosomas * Los ribosomas se caracterizan por su velocidad de sedimentacion (705 en los bacterianos y 0S en los ssucanticos) + Un rietoma estéformado por una unidad grande (de 505 19605 en bacteria y excariotas)y una subunided peauera (de 308 0 408). + EL1ibosoma proporciona et amente en el cat el aminoacil-NAt agrega aminodcidos a i cadena polpeptidcs ceciente en respuesta alas cadores “orrespondientes. © Un ribosoma se desplaza alo largo de una molécula de RNAM en ditecci6n 5a 3 A.una molécula de RNAm se unen numerosos ribosomas Ura molécula de RNAm es traducda simulténeamente por rumerosos ribosomas, Cada ribasoma se encuertre en Una etapa diferente de progresién a lo largo fl RNAD. EL ciclo vital del RNA mensajero de las bacterias, En as bacerias, la wanscripcion y la traduccion ocurren simultaneamente, pues los sizosomas empiezan a taducir tun RNAm antes de que su sitess este completa ‘+ ELRNAm bacterano es inestabley su vida media es de solo unas cuantos minutes, "Un RNAm bacteriano puede ser polcistrnico, con varias regiones codificadoras que representan a diferentes genes ELRNAm eucariético es modificado durante su transcripcian o después de ésta + Un transcrito de RNAM eucaritico es modificado en el ndcleo durante © paco después de su transcripeién. + {as medificacines inctuyen la adcin de un easquete metlaés en el extrema ¥ y una secuencie de pol) en el extrema 3 ‘+ ETRNAm no es expetate de nile al citoplasma hasta que todas las modificaciones esta completa. ELextremo 5” del RNAm eucariético posee un casquete ‘+ Un casquete 5 se forma al agregar una G ala base terminal, ‘el transrito a través de una lgadura 85 Ala base 0 ribose dela guanasna terminal nueva se agregan de uno a tees grupos met El extremo 3” esté poliadenilado Después de a transcrpein se agega un fragmento de poli) de ~200 rulestios aun vanserito mle + Erpli(A) ests undo «una prateinaespetfics (a8?) + Bola) estabiliza al RNAM conta la degradacon, La dearadacién det RNAm bacteriano involucra a miltiples enzimas + Ladirecei global de a degradacion del 8XAm bacteiano 502514 3, = La degradacion es esutado de la combinacin de divisiones endonuceolitica segudss de la degradacion texonvcleoitica del fragmento de 3-95: La estabilidad det RNAm depende de su estructura yy su secuencia * Las modifcacones de ambos exremos det KAM lo protegen conta la degradacion meciada por las exonuclease, + Las secuencis espctficas de un RNAm pueden produc efectos estabitzadores 0 desestabilzadores. "La esestaitizacion poe ser ativada por la péida de oii. La degradacién del RNAm implica miltiples actividades Para la degradacién del RNAm de las levaduras se require ea eliminacion del casquete 5 y cl pol) 3 Una uta de las levaduras implica la degradacion cexonueleotitics en aireccin 593. + ‘tra nuta dels evadurs utiliza un complejo de numerosas exonucleasas gue funcionan en dieceion 35: + La desacenilasa dels ciulas animales puede unirse directamente con el casquete 5: Continda en ta siguiente pagina 127Las mutaciones sin sentido activan un sistema de vigilancia + Las mutacones sin sentido provacan la degradacién del aN + Ens levadurasy los gusans shan encontrado genes que codiican al sistema de degracacin, Las moléculas de RNA eucariotico se transportan * ELRNA es transportado através de una membrana a manera de patiulassbonucleoprateinicas. + Tod as mieculas de RNA eucaitico que funconan en el citaplasma deben exporarse dese el nicl, “+ as moléculas de RNA ye cmporente de RNA de ura lbonucleasa se importa al interior de las mitocondfas. «Las moiéculas de RNAM pueden recone grandes distancas entre las eBula de as plantas. (GBT ELRNAm puede localizarse espectficamente + ELANAm del Asha de [a leva fora una ribonucleoproteina que se une a un motor de ising + Unmotor to transport alo lage dels flmentos de actina enol brote germinal # Seanclay se baduce en el brte, de manera que a proteinase encuentra solo en el bote (GRE Resumen 128 Introducci6n EI RNA es uno de los participantes principales de la expresi6n génica que en un principio se caracteriz6 como intermediario en la sintesis de proteinas, pero desde entonces se han descubierto muchas otras moléculas de RNA que desempefian un papel es- tructural o funcional en otras etapas de la expresién génica. La implicacién del RNA en muchas funcio- Meme APL, Fang de dmerslons de 50010 000 bases EIANAtes una molécula ‘pequetia de RNA con ‘estructura secundaria extensa: Fango de dimensiones de 72-95 bases FIGURA 7.1 Los tres tipas de RNA universalmente necesarios para la expresion génica son RNAm (que porta la secuencia codificadora), RNAt (que proporciona los aminoacidos corres- pondientes a cada codén) y RNAr (componente importante del ribosoma que proporciana el ambiente necesario para la sintesis proteinica).. CAPITULO 7 EL RNA mensajero nes relacionadas con la expresién génica respalds la perspectiva general de que todo el proceso pude haber evolucionado en un “mundo de RNA” en el cual éste fue originalmente el componente active responsable de conservar y expresar la informacién’ genética, Muchas de estas funciones fueron sub secuentemente asumidas por las proteinas, con el consiguiente incremento de la versatilidad y, pro- bablemente, la eficiencia. Gomo se resume en la FIGUNA 7.2, en la produc cién de las proteinas participan directamente tres clases principales de RNA: + EIRNA mensajero (RNAM, messenger RNA) constituye un intermediario que porta le copia de una secuencia de DNA que repre~ senta proteinas. ‘+ Los RNA de transferenda (RNA, transfer RNA) son moléculas pequefias de RNA uti- lizadas para suministrar los aminoacidos co- rrespondientes a cada codén especifico de! RNAm. + Los RNA ribosémicos (RNAr, ribosomal RNA) son componentes del ribosome, com- plejo ribonucteoproteinico de gran tamaiio que contiene numerosas protefnas y sus componentes de RNA, los cuales propor- cionan el mecanismo paca polimerizar a los aminoacidos en una cadena polipeptidica El tipo de funcién del RNA en cada caso es dis tinto, En ¢l RNA mensajero, su secuencia €s la ca~ racteristica importante: cada triplete de nucledtidos de la regién codificadora del RNAm representa @ un aminoécido en la proteina ecrrespondiente. Sin embargo, la estructura del RNAm, en particular las secuencias localizadas a ambos lados de la regién, codificadora, puede ser importante para el control de su actividad y, por lo tanto, de la cantidad de proteina producida a partir de é En el RNAt se observan dos de los temas co- munes que rigen el uso del RNA: su estructure: tridimensional es importante y tiene la capacidad de aparearse con otro RNA (RNAm). La estructura:sSmensional se reconoce primero por una enzima constituye una diana apropiada para el vincu con un aminodcido especifico que crea un ami- |-RNAL, identificado como la estructura que ‘utiliza para la sintesis proteinica. La especifici- dide uso de un aminoacil-RNAL se controla por sgareamiento de las bases, cuando una secuencia alete corta (anticodén) se aparea con el triplete de Ue6tidos que representa a su aminoacido. En el RNAr se observa otro tipo de actividad: de sus funciones es estructural, de manera que sporcionando un marco en el que se adhieren proteinas ribosémicas, ademas de que participa tamente en las actividades del ribosoma. Una las actividades principales de este tiltimo es su pacidad para catalizar la formacién de un enlace cpaidico mediante el cual se incorpora un amino- a una protefna, Esta actividad reside en uno se}os RNAr. Lo importante de este antecedente es que, al iemplar la funcién del RNA en la sintesis pro- nica, se debe analizar como un componente que jpefia una funci6n activa y que puede ser eto de regulacién tanto por proteinas como por #25 moléculas de RNA; no se debe olvidar, por otra que los RNA pueden haber sido las bases del ‘sperato original. El tema constante en todas las ac- jes del RNA, tanto en la sintesis de proteinas 0 en ottas partes, es que sus funciones depen- geo fundamentalmente del apareamiento de bases ‘sess formar su estructura secundaria y para interac- especificamente con otras moléculas de RNA. “is funcién codificadora del RNAm es tinica, si bien SERNA cl RNArson ejemplos de una clase mucho &3 amplia de moléculas de RNA no codificadoras ‘con diversas funciones en la expresién génica, | EL RNAm se produce por transcripci6n y se traduce "= Sélo una de las dos cadenas de DNA se transcribe en ANA. expresin génica tiene lugar mediante un pro- esa de dos etapas. + La transcripcién genera un RNA de cadena Ainica con una secuencia idéntica a Ja de una de las cadenas del diiplex de DNA. + La traduccién convierte a la secuencia de nucledtidos del RNAm en una secuencia de aminodcidos que forman una protefna. No todo el RNAm se traduce, pero cada RNAm contiene por lo menos una regién codificadora relacionada con una secuencia protefnica a través del cédigo genético: cada triplete de nucledtidos (codén) de la regién codificadora representa a un aminodcido. Sélo una de las cadenas de un DNA dtiplex se transcribe en un RNA mensajero. Las dos cadenas de DNA se distinguen segéin se ilustra en la FGURA 7.2 + La cadena de DNA que ditige la sintesis de RNAm por el apareamiento complementa- rio de bases se denomina cadena molde o cadena anticodificadora. (Antisentido es el término general para describir una secuen: cia de DNA o de RNA complementaria al RNAm). * La otra cadena de DNA tiene la misma se- cuencia que el RNAm (excepto por T, en lugar de U) y se le denomina cadena codi- ficadora o cadena con sentido. En este capitulo se describe el RNAm y su fun- in de molde para la sintesis protefnica. En ] Ca- pitulo 8, Sintesis proteinica, se analizard el proceso por el cual se sintetiza una protein, en tanto que en €19, Utilizacién del e6digo genético, se describiré la forma en que se utiliza el codigo genético para inter pretar el significado de une secuencia de RNAm. En. el Capitulo 10, Localizaci6n de las proteinas, el en- foque esté en la interrogante sobre cémo encuentra una protefna su localizacién apropiada en la célula durante la sintesis 0 después de ser sintetizada. Emir enema Cadena codticadora = de sentido Cadena molde = de antisentide FIGURA 7.2 La transcripcién genera un RNA complementario a [a cadena molde del DNA y tiene la misma secuencia que la cadena codificadora del DNA. La traduccion interpreta cada triplete de bases y le asigna un aminoacido, Tres vueltas de tuna molécula de DNA dupiohelicoidal contienen 30 bp, que codifican a 10 aminoacidos. 7.2 ELRNAM se produce por transcripcién y se traduce 129EIRNAL es un adaptador ‘Aminodcido ligado al extremo 3 dol NAL Ebrazo esta foemade por ‘Tall de basos apaeadas ‘Lazo de cadena Individual Leeeng Apareamiento codénanticodén OSERUKKiggaaa ANAM TIGUNA 7.9 Un RNA tiene las propiedades duales de un adap- tador que reconoce al aminodcido y a anticod6n. La adenosina 3 esta ligada de forma covalente a un aminodcido. ELanticodén se aparea con el codén del RNA. Pec foeecun Brazo acoptor— Brazo D: ord | ” e *gieene Pi, esetesae 492051526. $ p Brazo extra acon | FIGURA 7.4 La hoja de trébol de RNAt tiene bases invariables, bases semiinvariables y un conjunto conservado de interaccio: res de apareamiento de bases. 130 CAPITULO 7 ELRNA mensajero [EBB EL RNA de transferencia forma una hoja de trébol ‘Un RNAt tiene una secuencia de 74 a 95 bases que se dobla para formar una estructura secundaria de hoja de trébol con cuatio brazos constantes (y un brazo adicional en los RNA: mas large). ‘= ELRNAt se carga para formar un aminoacil-RNAty da lugar a un enlace éster del gruro OH 2° 0 3 det Acido adentlica en el extrema del brazo aceptor del grupo COOK det aminodcido. ‘La secuencia del anticodén nada mas es responsable de la especificidad del aminoacil-RNA. E] RNA mensajero se distingue del mecanismo res- ponsable de su traduccién mediante sisternas sin cé- Iulas para sintetizar protefnas int vitro. Com un sistema de sintesis de protefnas a partir de wn tipo de clas se pue- de traducir ef RNAm de otro parademostrar que el cbdigo genético y el mecanismo de traduucién som universale. Cada triplete de nucledtidos del RNAm repre- senta un aminodcido. La incongruencia estructural entre un trinuclestido y un aminodcido conduce inmediatamente a preguntarse cmo se aparea cada codén con su aminoacido especifico. El “adaptador™ es el RNA de transferencia (RNAt), que tiene dos propiedades clave: + Representa a un solo eminodcido, al cual se une de forma covatente. + Contiene una secuencia de tres nuclestidos, el anticodén, que es complementaria det o- don que representa a su aminodcido. El antico- dén permite al RNAt reconocer el codén por €1 apareamiento de bases complementarias. Todas las moléculas de RNAt tienen estructuras secundarias y terciarias comunes. La estructura se- cunderia del RNAt puede describirse como una hoja de trébol, ilustrada en la F10URA 7.3, en la cual eb apareamiento de bases complementarias forma los tallos de los lazos de cadena tinica, Las estructuras tallo-lazo se denominan brazos de RNAY, y sus se- cuencias incluyen bases “inusuales” generadas por la modificaci6n de las cuatro bases esténdar después de la sintesis de la cadena polinucleotidica, La construccidn de la ho.a de trébol se ilusisa en mas detalle en la FiSUNA 7-6. Los cuatro brazos mayores reciben su nombre de acuerdo con su es» tructura 0 funcidn: + El brazo aceptor consta de un tallo for- mado por bases apareadas que termina en tuna secuencia no apareada cuyo grupo 2’-0 3-OH puede ligarse a un aminodcido. + El brazo TyC se lama asi por ese triplete. (y representa a la seudouridina, una base modificada)+ Enel brazo anticodén, el anticodén siem- pre esté en el centro del lazo. + El brazo D debe sui nombre a que contie- ne ia base dihidrouridina (otra de las bases modificadas del RNAt) * Bl brazo extra yace entre el TYC y el an- ticodén, y su extensin fluctia entre tres y 21 bases. EI sistema de numeracién del RNA‘ ilustra la “constancia de su estructura. Las posiciones se nu- sStran de 5’ a 3” de acuerdo con la estructura del “Sat mds comin, e cual tiene 76 residuos. El ran- total de longivud de sus moléculas es de 74 2 95 s, ¥ la variacidn se debe a diferencias estructu- ‘les en el brazo D y en el extra. El apareamiento de bases que mantiene la es- ura secundaria se muestra en la Figura 7.4. En RNA‘ dado, la mayorfa de los apareamientos de son asociaciones convencionales de A-U y =C, aunque también se encuentran pares ocasio- les de G-U, G-y 0 A-W. Los tipos adicionales de de bases son menos estables que los regulares, de cualquier forma permiten que se forme una jctura duplo-helicoidal en el RNA. Cuando se comparan las secuencias de las cife- es moléculas de RNAt, las bases que se encuen- en determinadas posiciones son invariables (0 ervadas}; casi siempre una base especifica se jentra en la misma posicién, Algunas posiciones -describen como semi-invariables (0 semi-con- adas) porque estén restringidas a un tipo de (purina frente a pirimidina), pero puede haber uier base del tipo correspondiente. Cuando un RNAt esté cargad con el amino- que corresponde a su anticod6a, se le lama joacil-RNAt y el aminodcido se liga mediante ‘enlace éster que va del grupo carboxilo al hi- lo 2’ 0 ¥ de la ribosa de la base terminal 3° del (que siempre es adenina). El proceso de carga ‘an RNAt es catalizado por una enzima especi- Ja aminoacil-RNAt sintetasa. Hay (cuendo 's) 20 de ellas, y cada una reconoce a un solo Snodcido y 2 todos los RNAC en los cuales puede colocado de manera legitima. ‘Hay cuando menos un RNAt (pero en general ‘més) para cada aminodcido. Un RNAt se nom- ‘tilizando como superindice la abreviatura de fetras de cada aminoScido, y si hay mas de un para el mismo aminodcido, se utilizan subin- numéricos para distinguirlos. Asi, dos RNAt Ja tirosina se deseriben como RNAt," y RNAt,™. RNAt que transporta un aminoécido, es decir, ‘sminoacil-RNAC se indica mediante un prefijo ntifica al aminoacido, de modo que Ala-RNAt Ie a RNAt*” que porta a su aminodcido. ccambia al aminodcido, Faconoaimente {6 codén sin cambios FIGURA 7.5 El significado del RNAt depende de su anticodén yrno de su aminoscido. ¢La secuencia anticodén por si misma permite al aminoacil-RNAL reconocer al cod6n correcto? En Ja FicuA 7-8 se iustra un experimento clésico para responder esta preguma, La desulfuracién reduc- tora convierte al aminodcido del cisteinil-RNAt en. alanina, generando alanil-RNAI®. ELRNAttene un anticodén que responde al codén UGU. La modifi cacién del aminodcido no indluye en la especificidad de la interaccién anticodén-codén, de manera que €l residuo de alanina es incorporado a la proteina en el lugar de la cistefna. Una vez gute un RNAt ha sido cargado, el aminedcido no desemperia ningiin papel en su especificidad, Ia cuales determinada exclusivamente por el anticodén. ZB EL tallo aceptor y el anticodén estan localizados en los extremos de la estructura terciaria © La hoja de trébol constituye una estructura tercaria en forma de L con el brazo aceptor en un extrem y el bazo anticodén en el aro. La structura secundaria de cada RNAt se dobla para formar una esttuctura terciaria compacta en forma de Len la cual el extrema 3° que se une al amino- cdo esta lejos del anticodén que se une al RNAm Todos los RNAt tienen la misma estructura terci ria general, aunque se distinguen por variaciones individuales. Los tallos duplo-helicoidales apareados por ba- ses de la estructura secundaria se mantienen en la estructura terciaria, pero su distribucién en tres di- mensiones crea, esencialmente, dos hélices dobles en Angulo recto una respecto de la otra, como se ilustra en la FIGUFA 7.6, El tallo aceptor y el tallo ‘TyC forman una hélice doble continua con una sola 7.4 EL tallo aceptr y el anticodén estan localizados en los extremos dela estructura terciaria132 ‘cuatro brazos 3 5 Brazo aceptor raz0D Dero Tye Brazo anticodén La prayeccion bicimensional tiene dos diplex perpenciculares: co Le estrctura principal adauiere la forma de una L R i wet Aminodcico —& Brazo Tye | erazo scope fraz0 Braz0 anlcoatn, Anticodén FIGURA 7.6 ELRNA de transferencia se dobla en una estructura terciara compacta en forma de L, con el aminadcido en un extremo y el anticodén en el otro, ‘aminoacilo Ftacion de 90° FIGURA 7.7 Un modelo espacial compacto de esferas solidas, muestra que la estructura terciara del RNAE™ es compacta Las dos perspectivas del RNAE giran 90°. Imagen cortesfa de Sung-Hou Kim, University of California, Berkeley. CAPITULO 7 EL RNA mensajero interrupcidn; el tallo D y el tallo anticodén forman, otra hélice continua doble, también con una inte- rrupcidn, En la regi6n localizada entre las hélices dobles, donde se forma el Angulo de la L, se encuen- tran el lazo TyC y el D, de modo que el aminoacide reside en la extremidad de un brazo de la estructurs en Ly el lazo anticodén forma el otro extremo. La estructura terciaria se crea mediante puentes de hidrégeno formados principalmente por bases ne apareadas en la estructura secundaria, Muchas de las bases invariables y semiinvariables estén impli- cadas en estos puentes de hidrégeno, lo cual explice que se conserven. No todas estas interacciones son universales, pero probablemente identifican e! pa- tr6n general para establecer la estructura del RNAt. En la FIGURA 7,7 se muestra un modelo mole~ cular de la estructura del RNAt™ y la imagen det lado izquierdo corresponde al esquema de la parte inferior de la figura 7.6. En otros RNAt se observan diferencias estructurales que responden al dilem= de que todos deben tener una forma similar, pero que permita reconocer diferencias entre ellos, Por ejemplo, en el RNAW®, el Angulo entre los dos eje= ¢s ligeramente mayor, de modo que la conforme- cidn de la molécula es ligeramente més abierta, La estructura sugiete una conclusion general respecto de la funcién del RNAt: os sitios de la mole cula que ejercen funciones parriculares estan separados at maximo. El aminodcido esté lo mas lejos posible det anticodén, lo cual coincide con sus funciones en lz sintesis protefnica, EL RNA mensajero es traducido por los ribosomas * Los ribosomas se caracterizan por su velocidad de sedimentacion (70S en los bacterianos y 80S en los 4 i eucariéticos), ‘Un ribosoma esta formado por una unidad grande (de 50 0 60S en bacteras y eucariotas) y una subunidad pequefa (de 30 0 405), * El ibosoma proporciona el ambiente en al cual el aminoacil-RNAt agrega aminodcidos a la cadena polipeptiica creciente en respuesta a los codones comrespondientes. * Un ribosoma se despaza a lo largo de una molécula de RNAm en direccién 5' a 3: i La taduccién de un RNAm en una cadena polipep- tidica ¢s catalizada por el ribosoma. Los ribosomes se describen tradicionalmente en funcién de su ve~ locidad (aproximada) de sedimentacién (medida ex Svedbergs, donde un valor mayor de $ indica uns_selocidad de sedimentacién mayor y mayor masa) ‘Los ribosomas bacterianos generalmente se sedi- =zentan a ~70S. Los ribosomas del citoplasma de “5 células eucaridticas superiores son més grandes ‘ysuelen sedimentarse a ~80S. El ribosoma es una particula ribonucleopro- teinica compacta formada por dos subunidades, ada una de las cuales tiene un componente de RNA, incluida una molécula muy larga de RNA y ‘sumerosas proteinas. La relacién entre un riboso- ma y sus subunidades se ilustra en la FIGURA 7.8. £25 dos subunidades se disocian in vitro cuando se seduce Ia concentracién de iones de Mg”. En cada ‘=o, la subunidad grande tiene una masa aproxi- ssadamente dos veces mayor que la subunidad Pequefia. Los ribosomas bacterianos (70S) tienen, subunidades que se sedimentan a 508 y a 30S. Las subunidades de tos ribosomas citoplésmicos euca- séticos (80S) se sedimentan a 60S y a 40S, Las 5s subunidades operan juntas como parte del ri- S0soma completo; sin embargo, cada una asume seacciones distintas en la sintesis proteinica Todos los ribosomas de un compartimiento ce- falar dado son idénticos y asumten la sintesis de di- “Gerentes protetnas asocidndose con diferentes RNAm que proporcionan las secuencias codificadoras en si. El ribosoma crea el ambiente que controla el re- ‘conocimiento entre un codén de RNAm y un antico- Son de RNAt. Al interpretar el cédigo genético como ‘gna serie de tripletes adyacentes, la sintesis protei- ica procede del inicio de une regi6n codificadora lfinal. Una proteina se ensambla por adicion secuencial 2 aminodcidos en direccién del terminal N al terminal C 2uforme el ribosoma se desplaza a lo largo det RNArn. Un ribosoma empieza la traduccién en el ex- sremo 5’ de una regién codificadora y traduce cada xin en un aminodcido conforme procede hacia elextremo 3’. En cada codén, el aminoacil-RNAt spropiado se relaciona con el ribosoma y dona su sminodcido a la cadena polipeptidica. En cualquier s=somento, el ribosoma puede albergar dos ami- ‘seacil-RNAt que cortesponden a codones sucesivos, pemnitiendo que se forme un enlace peptidico en- ‘=e los dos aminodcidos correspondientes, En cada la cadena polipeptfdica creciente se alarga un 1oacido més. Auna molécula de RNAm se unen numerosos ribosomas jna molécula de RNAm es traducida simultaneamente 30r numerosos ribosomas. Cada ribosoma se encuentra fn una etapa diferente de progresin a lo largo del ‘Am. Los ribosomas se disocian en subunidad Ribosoma bacteriano = 708 sxiniacion so Mots | fn dome Un ribosome esta formado por dos subunidades. FIGURA 7.1 ‘Cuando se afslan ribosomas activos en forma de frac- i6n asociada a proteinas recién sintetizadas, se en- cuentran como un complejo formado por un RNA, relacionado con numerosos ribosomas, eswuctura que se denomina polirribosoma o polisoma. La subunidad 30S de cada ribosoma se asocia con el RNAm y la subunidad 50S porta a la proiefna recién sintetizada; el RNAt abarca ambas unidades. Cada ribosoma del polisoma sintetiza indepen- dientemente a un polipéptido en particular duran- te su recorrido por la secuencia del mensajero, En esencia, cl RNAm es jalado a través del ribosoma y cada triplete de nucledtidos se traduce en un ami- noécido, de manera que el RNAMm tiene una serie de ribosomas que portan fragmentos crecientes del producto proteinico y que se desplazan del extremo 5° al 3’, como se ilustra en la FIGURA 7.8. Una cadena polipeptidica en proceso de sintesis suele llamarse proteina naciente, En general, los 30 a 35 aminodcidos reciente- mente agregados a una cadena polipeptfdica crecien- te estén protegidos del ambiente por la estructura del ribosoma. Probablemente toda la parte anterior del polipéptido sobresale y es libre de empezar a plegar- se en su conformacién apropiada, de modo que las proteinas pueden exhibir parte de la conformacién, maduta incluso antes de que concluya su sintesi En la micrografia electronica de la FIGURA 7.10 se muestra una caracterizacién clasica de polisomas. La globina es sintetiza por un conjunto de cinco ribosomas adheridos a cada RNAm (pentasomas) Los ribosomas aparecen como objetos esféricos de- formados de ~7 nm (70 A) de diémetro, conectados por una hebra de RNAm. Los ribosomas se locali- zan en vatias posiciones a to largo del mensajero. Los que se encuentran en un extremo apenas han empezado la sintesis protefnica, en tanto que los 7.6 Auna molécula de RNAM se une? numerosos ribosomasosoma tiene un polipeptidi-RNAt y un Terminal N FIGURA 7.2 Un politribosoma esta formado por un RNAm traducido simulténeamente por numero- 0s ribosomas que se desplazan en direcci6n 5'-3. Cada ribosoma tiene dos moléculas de RNAt, una que porta la proteina naciente y otra que porta al siguiente aminodcido que se agregaré. Pini FIGURA 7.10 La sintesis proteiniea tiene lugar en los poliso- mas. Imagen cortesta de Alexander Rich, Massachusetts Insti- tute of Technology. Pie ‘Los rbosomas traducen el RNAm y regresan al banco ININININ. EIANAM es degradado FLGURA 7.11 ELRNA mensajero se traduce por medio de ribo- somas que se reciclan en un banco. del otro, estén por terminar la produccién de un polipéptido. El tamaiio del polisoma depende de miiltiples variables; en las bacterias, por ejemplo, es muy gran- de, con decenas de ribosomas dedicados simulténea- mente a la traducci6n. Las dimensiones se deben en 134 CAPITULO 7 EL RNA mensajera Sens Plegamiento—! — parte a la longitud del RNA (que suele codificar humerosas protefnas) y en parte ala gran eficiencs con que se adhieren a éste los ribosomas. Los polisomas del citoplasma de una célula e caridtica tienden a ser mas pequefios que los de bacterias, y también en este caso, su tamafio es funcién de la longitud del RNAm (que usuaime representa sélo a una protefna en las eucariotas) de la frecuencia caracteristica con la que se adhie~ ren los ribosomas. Un RNAm eucaridtico prome: probablemente tenga ~8 ribosomas adheridos a ver. En la FIGURA 7.11 se ilustea el ciclo vital del bosoma. Los ribosomas son extraidos de un ban (formado de hecho por subunidades ribosémicas se utilizan para traducir un RNAm y posteriorme! se regresan para ciclos posteriores. Fl niimero de. ribosomas adheridos a cada molécula de RNAm q sintetiza a una protefna en particular no se ha dete minado de manera precisa ni en las bacterias ni e= las eucariotas, pero es tna cuestion de fluctuacié cestadistica determinada por las variables del tama. y la eficiencia del RNAM. La FIGURA 7.42 constituye una perspectiva glot de la atenci6n dedicada a la sintesis de proteinas una bacteria intacta, Los aproximadamente 20 000) ribosomas representan un cuarto de la masa de célula. Hay >3 000 copias de cada RNA, y todas les moléculas de RNAt, juntas, son casi 10 veces més numerosas que los ribosomas; la mayor parte este en forma de aminoacil-RNAt, listo para utilizarse de inmediato en la sintesis protefnica. Dada su ineste~ bilidad, es dificil calcular el mtimero de moléculas: de RNAm, pero un célculo razonable serfa ~1 500 en diferentes estados de sintesis y descomposicién. Hay ~600 tipos de RNAm en una bacteria, lo cual sugiere que, en general, hay sélo de dos a tres co= pias de cada RNAm por cada una de ellas que, e= promedio, codifican quizé a ~3 proteinas. Si hay. 1850 protefnas solubles diferentes, debe haber um promedio de >! 000 copias de cada proteina en une: bacteria,EL ciclo vital del RNA mensajero de las bacterias En las bactoras, la transcripcion y la traduecién ‘acurten simulténeamente, pues tos ribosomes empiezan a traducir un RNAm antes de que su sintesis esté completa ELRNAm bacteriano es inestable su vida media es de sélo unos cuantos minutos, {Un RNAm bacteriana puede ser policistrénico, con ‘arias regiones codificadoras que representan @ ‘diferentes genes. RNA mensajero tiene la misma funcién en torles élulas, pero con diferencias imporiantes en los les de la sintesis y la estructura del RNAm eu- “ético y del procatitico. Una diferencia importante en la produccién del "Am depende de dénde ocurran la transcripcién, & traduccién: + En las bacterias, e] RNAm se transcribe y se traduce en el compartimiento celular inico; los dos procesos estén tan fntima- mente relacionados que son simulténeos, Los ribosomas se adhieren al RNAm bacte~ riano incluso antes de que haya terminado su transcripcién, de modo que el polisoma tiende a adherirse al DNA. El RNAm bacte~ iano suele ser inestable, y por Jo tanto se traduce en proteinas durante sélo algunos minutos. En una célula eucaridtica, Ja sintesis y la maduraci6n del RNAm tienen higar exchi- sivamente en el nticleo, y s6lo después de rerminados dichos eventos, el RNAM es ex- portado al citoplasma, donde es traducido por los ribosomas. El RNAm eucariético es relativamente estable y sigue traducéndose durante muchas horas. Enla FIGUAA 7.13 se muestra que en las bacterias, sanscripcién y la traduccién estén intimamente jonadas. La primera empieza cuando la enzima polimerasa se une al DNA y posteriormente se laza formando una copia de una cadena. Tan 10 se inicia la transcripcidn, los ribosomas se al extremo 5’ del RNAm y comienza la tra- (6n, incluso antes de que el resto del mensaje se sintetizado, Un grupo de ribosomas se mueve largo del RNAm mientras éste es sintetizado. emo 3’ de] RNAm se genera cuando termina scripci6n, en tanto que los ribosomas siguen ciendo el mRNA mientras sobrevive, pero se la en la direccion general 5'~3" con bastante ar ices iene asa cole eshidrarada Tipos Moléeulasiosiua _iieren Pred 10 1 1 7 embrana 10 2 2 1 ona 18 1 1 1 NAm 1 1500 600 23 NA 3 20000 = 603 3.000 NAT 6 38000 218000 Preinas ° so 8219000 Proteinas soles “6 20x10 850 >1000 Moléulas pequenas 3 75x10 800 FIGURA 7.12 Andlisis de €. coli en funcién de sus componentes ma- cromoleculares. es eee Empiezm'a wensripién LIN vo El extemo 5 et titostatad) 0.8 min Les abosomas rica a tadiceén dD 4.5 min’ La degradacion enipleza eh ei extra 8? D INIONG “Ne 2.0 LANA polimorasa termina en ef xtremo 3 INININSILININISILININ. “ ye Se 8.0>in Le degradacién contin, los rbosomas ‘erminan la raduccién, PR IRA x po FIGURA 7.19 Sinopsis: el RNAm se transcribe, se traduce y se degrada simultaneamente en las bacteras, 1.7 Bl ciclo vital del RNA mensajero de las bacterias 135‘Los RINAm bacterianos se traducen miertras son transcritos FIGUNA 7.14 En las bacerias pueden observase ls unigades de transcrpcion. Imagen cortesia de Oscar Mille. rapidez. El RNAm es sintetizado, traducido por los ribosomas y se degrada, todo en rapida sucesién. Una molécula individual de RNAm sobrevive si aca- 50, unos mintitos. La transcripei6n y la traduceién bacteriana tie- nen lugar a velocidades similares. A una temperatu- ra de 37°C la transcripciGn del RNAm ocurre a ~40 nucledtidos/segundo, velocidad muy cercana a la de la sintesis proteinica, que es aproximadamente de 15 aminodcidos por segundo, de modo que se necesitan ~2 minutos para transcribir y traducir a un RNAm completo de 5000 bp, que corresponden a 180 kD de proteina, Cuando se inicia la expresin de un nuevo gen, su RNAm suele aparecer en la c lula en ~2.5 minutos. La proteina correspondiente apareceré quizds en medio minuto més. La traducci6n bacteriana es muy eficiente, y la mayotia de las moléculas de RNAm son traducidas por muchos ribosomas empacados de forma com- pacta. En un caso (irp RNAm), se inician aproxi- madamente 15 transcripciones por minuto y cada una de las 15 moléculas de RNAm probablemente sea ttaducida por ~30 ribosomas en el intervalo que media entre su transcripcién y su degradacién. La inestabilidad de la mayor parte del RNAm bacteriano cs sorprendente. La degradacién del RNAm sigue de cerca a su traduccién y quizd em- pieza en un lapso de un minuto desde el inicio de la transcripcién. El extremo 5’ del RNAm comienza a degradarse antes de que el 3° haya sido sintetizado 0 traducido. La degtadacién parece seguir al dltimo bosoma del convoy del RNAm, pero la degradacién procede con mayor lentitud, tal vez aproximada- mente a Ja mitad de la velocidad de la transcripeién o la traduccisn. La estabilidad del RNAm influye de manera im- portante en la cantidad de protefna que se produce; 136 CAPITULO 7 ELRNA mensajero suele expresarse en funcién de la vida media, RNAm que representa a un gen espectfico tiene vida media caracteristica, pero el promedio es de ~ minutos en las bacterias, ‘Obviamente, esta serie de eventos slo es sible porque la transcripcién, la traduccién y la gtadaci6n ocurren en la misma direcci6n. En la crogralfa de electrones de la FIGURA 7.14 se descu la dindmica de la expresién génica ent delito flagra En estas unidades de transcripcién (desconocida varias moléculas de RNAm estén en proceso sintesis simulténeamente y cada una porta nui rosos ribosomas implicados en la traduccién. (1 corresponde a la etapa que se muestra en el segur panel de la Figura 7.13.) Un RNA cuya sfntesis a no ha conchuido con frecuencia se denomina naciente. Las moléculas de RNAm bacteriano vari enormemente en cuanto al ntimero de protefnas: Jas cuales codifican. Algunos RNAm representan| un sélo gea, son monocistrénicos, en tanto 4) otros (la mayerfa) portan secuencias que codific a numerosas proteinas y son policistrénicos. estos casos, una sola molécula de RNAm se trans be a partir de un grupode genes adyacentes. (Di agrupamiento de genes constituye un operén co trolado como una unidad genética tinica; véase Capitulo 12, BL operén.) Todos los RNAm constan de dos tipos de giones; la codificadora esta formada por una se de codones que representa a la secuencia de a nodcidos de una proteina, empieza (normatment con AUG y termina con un codén de terminaciém | No obstante, el RNAm siempre es més largo que’ la regi6n codificadora por Ja presencia de region’ adicionales localizadas en ambos extremos. Una se cuencia adicional en él extremo 5’ que precede inicio de la regién codificadora se describe come lider o region 5” UTR (regién no traducida). La se- cuencia adicional que sigue a la sefial de terminacié= que forma el extremo 3° se denomina remolque © regién 3 UTR y aunque son parte de la unidad de transcripcién, estas secuencias no se utilizan pare) codificar proteinas. Un RNAm policistrénico también contiene re giones intercistrénicas, como se ilustra en la Fl RA7.A5. Su tamafio varia mucho, ya que puede tenes una longitud de hasta 30 nucledtidos en los RNAm= bacterianos (e incluso pueden ser mas largos en los RNA de los fagos) 0 ser muy cottos, en cuyo caso. sélo uno 0 dos nuclestidos separan al codén de ter ‘minacién de una protefna del codén de inicio de le siguiente, En un caso extremo, dos genes de heche se superponen, de manera que la tiltima base de une regi6n codificadora también es la primera base de le siguiente regién codificadora.El mtimero de ribosomas comprometidos en la saducci6n de un cistr6n en particular depende de ‘eficiencia de su sitio de inicio, que para el primer sr6n esid disponible siempre y cuando se sintetice “Sextremo 5’ del RNAm, ¢Cémo se traducen os cis ones subsiguientes? Las numerosas tegiones codi- “Scadoras de un RNAm policistrénico se traducen de na independiente o su expresiGn esta conectada? mecanismo de iniciacién es el mismo para todos cistrones o es diferente para el primer cistron y 2 los cistrones internos? La traduccién de un RNAm bacteriano proce- de manera secuencial a través de sus cistrones. \do los ribosomas se adhieren a la primera re- on codificadora, las subsiguientes atin no han sido Snscritas. Para cuando el segundo sitio ribosémice disponible, la traducci6n esté muy avanzada a =2vés del primer cistron. En general, los ribosomas ssminan la traduccion al final det primer cistr6n (y isocian en subunidades), y un ribosoma nuevo ensambla de manera independiente al principio la siguiente regi6n codificadora. (El proceso de cin se describe en el Capitulo 8, Sfntesis pro- ica.) EL RNAm eucaridtico es modificado durante su transcripcién o después de ésta PTE ‘ranscrito de RNAm eucarética es modificado en el scleo durante 0 poco después de su transcrincién. s modifcaciones incluyen la adicién de un casquete lado en el extrema 5 y una secuencta de poli) ‘el extremo 3. =. RNAM no es exportado del nicleo al citoplasma ta que todas las modificaciones estan completas ‘produccién del RNAm eucariético involucra a etapas posteriores a la transcripci6n. La trans- mn ocurre de Ja forma usual, iniciando un crito con un extremo 5’ trifosfato, pero el extre- 3/ se genera por divisién del transcrito. y no por determi- 9. Las moléculas de RNA que derivan de genes impidos requieren de corte y empalme para ar los intrones, generdndose una molécula de Am mas pequefia que contiene una secuencia adora intacta. En la FIGURA 7.16 se muestra que ambos extre- © del transcrito son modificados por adiciones eriores de nuclestidos (lo cual implica a siste- enrimas adicionales). El extremo 5’ del RNA adificado por la adicién de un “casquete” vir- 7.& ELRNAm eucaridtico es modificads durante su transcripcion o después de ésta ET RNAm bacteriano es polic Ellicer precede a Elremolue sigue adn de riecén ion codon de eiacio vaiedect a vd0 base 2 Jeoacicen—e | Inicio Ato Inicio Ato [eeaticocisn me | FIGURA 7.25 EL RNAm bacteriano incluye regiones traducidas y no traducidas, Cada region cadificadara tiene sus propias sefales de ini- ciacion y terminacién, Un RNAm tipico puede tener numerosas regiones codificadoras. EIANAm eucariotico es modificado iraiornes FIGURA 7.16 ELRNAM eucaritico es modificade por la adicion de un casquete en el extremg 5’ y un poli(a) en el 3: tualmente tan pronto como aparece. ste remplaza al trifosfato del transcrito inicial con un nuclesti- do en orientacién inversa (3°-95'), “sellando”, por lo tanto, el extremo. El extremo 3° es modificado por la adicin de una serie de nucledtidos de dci- do adenilico [écido poliadenitico 0 poli(A)] inme- diatamente después de su division. $6lo una vez concluidos todos los eventos de modificacién y de procesamiento, el RNAm puede ser exportado del niicleo al citoplasma. La demora promedio para salir del citoplasma es de -20 minutos. Una vez que el RNAm ha entrado al citoplasma, es reconocido por los ribosomas y traducido. En la FIGURA 7.17 se muestra que el ciclo vital del RNAm eucariético es més prolongado que el bacteriano. La transcripcién en las células animales ocurre més o menos ala misma velocidad que en las bacterias, a ~40 nucledtidos por segundo, Mu- chos genes eucaristicos son grandes, y un gen de 10 000 bp necesita ~5 minutos para transcribirse. La transcripcién del RNAm no termina con la li- beracién de enzima del DNA, més bien, la enzima sigue més alla del final del gen. Una serie coordi- nada de eventos genera el extremo 3’ del RNA. por divisién y adhiere un fragmento de poli(A) al extremo 3° recién generado. El RNAm cucariético constituye s6lo una pe- quefia porcién del RNA celular total (-3% de la masa). La vida media es relativamente corta en las 137Een | 240min Los ribosomas traducen al ANA SARA wn FIGUIRA 7.17. Sinapsis: La expresion del RNAM en las células animales requiere de transcripcién, modificaci6n, procesamien- to, transporte nicleo-citoplasmico y traduccién, ERE Presente en todos los casquetes SES Puede ser metilado —NHs fen el casquete C68 3% ee Presente en el- a. sata oy fos 2 Cty tf Prasente en el ‘casquete 2 FIGURA 7.18 EL casquete bloquea el extremo 5° del RNAm y puede ser matilado en varias posiciones. Jevaduras, en las cuales oscila entre 1 y 60 minu- 10s. En las eucariotas superiores, hay un incremento 138 CAPITULO 7 EL RNA mensajero sustancial en la estabilidad: el RNAm de las eéh animales ¢s relativamente estable, con una vida dia de entre 4 y 24 horas, Los polisomas eucaristicos son razonableme estables. Las modificaciones de ambos extremos, RNAm contribuyen a su estabilidad. El extremo 5’ del RNAm eucariGtico posee un casquel * Un casquete 5’ se forma al agregar una G a la base ‘terminal del transcrito a través de una ligacura 5'-5¢ Uno a tres grupos metilo se agregan a la base o ribose de la guanosina terminal nueva, La tanscripcién empieza con un nucledsido tx fatado (casi siempre una purina, A 0 G). El pri nucledtido retiene a su grupo fostato 5° y f el enlace fosfodiéster usual de su posicién a 5’ del siguiente nuclestido. La secuencia inicial transcrito puede representarse como: S’ppp*/ PNPNPNp Sin embargo, cuando el RNAm maduro es tado in vitro con enzimas que deben degradario nucleétidos individuales, el extremo 5” no ori el nucledsido trifosfatado esperado, en cambio, « tiene dos nucledtidos conectados por una ligads 5’-5' trifosfato, ¢ incluso ostenta grupos metilo. base terminal siempre es una guanina que se agi a la molécula de RNA original después de la tra cripcidn, La adicién de la G 5” terminal es catalizada una enzima nuclear, la guanilil transferasa. La reac cidn tan poco después de iniciada la transcripdi que es imposible detectar mas que rastros del ex tremo 5' trifosfato en el RNA muclear. La reaccié global puede representarse como una condensaci entre el GIP y el trifosfato terminal 5’ del RNA. Jo tamto yo Grep + PPPAPNPNp - ss GpppApNpNp . ..+pp +P El residuo de G nuevo adherido al extremo det RNA se encuentra en orientacién inversa respects de los otros nuclestidos. ‘A esta estructura s¢ le denomina casquete, que. es un sustrato de muchos eventos de metilaci6n. E> la FIGURA 7.18 se observa la estructura completa de un casquete después de que se han agregado todos!grupos metilo posibles. Los tipos de casquetes se “inguen por el niimero de metilaciones de este ocurtidas: + La primera metilaci6n ocurre en todas las eucariotas y consiste en la adicién de un grupo metilo en la posicién 7 de la guanina ferminal. Un casquete que posee este gru- po metilo Ginico se conoce como casquete 0. La reaccién procede hasta este punto en las eucariotas unicelulares, y la enzima res ponsable de esta modificacidn se denomina guanina-7-metiltransferasa El siguiente paso es agregar otro grupo me- tilo en la posicién 2-0 de la pentiltima base (que de hecho era la primera base original del transcrito antes de que se hicieran mo- dificaciones), reaccién catalizada por otra ‘enzima, la 2’-O-mettl-transferasa. A un cas- quete con dos grupos metilos se le denomi- na casquete 1, que ¢s €! tipo predominante en as eucariotas, excepto en los organismos unicelulares. En una pequefia minorfa de eucariotas su- periores, ala segunda base se agrega otto grupo metilo, pero s6lo cuando la posicién €s ocupada por adenina; Ia reaccién implica la adicién de un grupo merilo en la posicion N¢, La enzima responsable actiia s6lo en un sustrato de adenosina que ya tiene el grupo metilo en la posicién 2'-0. En algunas especies se agrega un grupo me- tilo a la tercera base del RNAm que cuente con casquete. El sustrato de esta reacci6n es el RNAm con casquete 1 que ya tiene dos grupos metito, La modificacién de ia tercera base siempre es una metilacién de una 1i- bosa en la posicién 2’-O, lo cual da lugar al casquete 2. En general, este caso represen- ta menos del 10% al 15% de la poblacién total con casquete. En una poblacién de RNAm eucari6ticos, todas moléculas poseen casquete, y la propotcién co- “Sespondiente a cada tipo es caracteristica de cada inismo, No se sabe si la estructura de una mo- especifica de RNAm es invariable o si puede + més de un tipo de casquete. Ademas de la metilacién implicada en el proceso, ta adicién de! easquete, sélo en el RNAm de las siotas superiores ocurre una metilacién interna hbaja frecuencia merced a la generacion de resi- de N¢ metiladenina a una frecuencia de aproxi- jente una Modificacién por cada 000 bases. ‘una o dos metiladeninas en un RNAm cucari6- tipico, aunque su presencia no es obligatoria: 10s RNAm No tienen ninguna de estas molé- El extremo 3’ esta poliadenilado 7m + Después de la transcripcién se agrega un fragmento de poli(A) de ~200 nuclestidos a un transcrito nucleer. ‘ El poli(a) esta unido a una proteina especifica (PAB?). © EL poli(A) estabilizn al RNAM contra La degradacién, Bl fragmento 3° terminal de tesiduos de A con fre- cuencia se describe como cola de poli(A); al RNAm. con esta caracteristica se le denomina poli(A)’. La secuencia de poli(A) no se codifica en el DNA, més bien se adhiere al RNA del niicleo des- pués de la transeripci6n. La adicién de poli(A) es catalizada por la enzima poli(A) polimerasa, que agrega ~200 residuos de A al extremo 3'-OH libre del RNAm. #} twacto poli(A) del RNA nuclear y del RNAm se relaciona con una proteina, la proteima de unién al poli(A) (PABP, poly(A)-binding pro- tein). En muchas eucariotas se encuentran formas relacionadas de esta proteina. Un monémero de la PABP de ~70 KD se une cada 10 a 20 bases de la cola de poli(A), asf que une caracterfstica comtin en muchas, 0 la mayoria, de las eucariotas es que el extrema 3” del RNAm esté formado por un frag- mento de poli{A) unido a una gran masa protefnica a adicisn del poli(A) es parte de una reaccién en la que el extremo 3’ del RNAm es gentetado y modifi- cado por un complejo de enzimas (véase la seccién, 26.19, Los extremos 3” de los RNAm se generan por divisién y poliadenilacién) La unién del PABP con el factor de iniciacién e1E4G genera un lazo cerrado en el cual los extre- mos 5’ y 3’ del RNAm se encuentran sujetos al mis- mo complejo protefnico (véase le Fig. 8.20 de la seccién 8.9, Las eucariotas utilizan un complejo de numerosos factores de iniciacién). La formacién de este complejo puede ser la causa de algunos de los efectos del poli(A) en las propiedades de! RNAm, que suele ser estabilizado por aquél. La capacidad del poli(A) de proteger al RNAm contra la degrada- i6n implica la uniém con le PABP. La eliminacién del poli() inhibe el inicio de la traduccién in vitro, en tanto que el agotamiento de la PABP en las levaduras it vivo tiene el mis- mo efecto, desenlaces que podrian depender de la unién de la PABP con el complejo de iniciacion en el extremo 5’ del RNAm, En el desarrollo embrionario temprano hay muchos ejemplos de ello, en los cua- les 1a poliadenilacién de un RNAm especifico esta correlacionada con su traducci6n, En algunos casos, los RNAm se almacenan en forma de no poliadeni- lada y se agrega un poli(A) cuando es necesaria su 7.20 El extremo 3’ esté poliadenilado 139140 Era {La mayor parte oi 'ELANAM con pot? poneenseRihes iar tamemnarootate Raewreseraen Saran wanes =e 1 so ome err ea ' EIANA polit)” ss pega ala columna ELANAT tayo a raves dea columaa FIGURA 7.19 ELRNA poli(A)* puede separase de otros RNA por fraccionamiento en sefarosa-otigo(d). traduccién; en otros, los RNAm poli(A)* son des- adenilados y se reduce su traduccién, La presencia del poli(A) tiene una splicacién préctica importante. La regién poli‘) del RNAm puede aparearse con un oligo(U) 9 con un oligo(dT), reaccién que puede servir para aislar el RNAM poli(A)*. La técnica mas conveniente es inmovilizar el oligo (U 0 dT) en un soporte sélido y posterior- mente, cuando se aplica una poblacién de RNA a Ja columna, como se ilustra en la FIGURA 7.49, s6lo se retiene el RNA poli(A}*. El RNA puede liberarse tratando a la columna con una solucién que rompa fos enlaces, El tinico inconveniente de este procedimiento es que aisla todo el RNA que contiene poli(A). Por ejemplo, si se utiliza el RNA de toda la célula, los RNA poli(A)° nuclear y citoplasmico seran reteni- dos, pero si se utilizan preparaciones de polisomas (un procedimiento comtin), la mayorfa de los RNA. poli(A)* seran RNAm activos. Sin embargo, ademas del RNAm en los polisomas, en el citosol que contie- ne RNAm poli(A}* también hay particulas ribonu- cleoproteinicas que no se traducen. Este RNA puede ser ‘almacenado” para usarse en otra ocasién, de modo que el aislamiento del RNAm polifa)* total no cortesponde exactamente a la poblacin del RNAm activo, El método de “clonacién” para purificar el RNAm consiste en copiarlo para formar una cadena de DNA complemeniario (conocido como DNAG complementary DNA que posteriormente podré uti- lizarse como molde para sintetizar una cadena de DNA idéntica a la secuencia del RNAm original. El producto de estas reacciones es un DNA de doble CAPHTULO 7 EL RNA mensajero cadena que corresponde a la secuencia del RNAm que puede reproducirse en grandes cantidades. La disponibilidad de un DNA clonado facil él aislamiento del RNAm correspondiente por 1 dio de técnicas de hibridacién, incluso las molec Jas de RNAm cuyas copias por célula se present en cantidades reducidas pueden aislarse mediant este método. De hecho, s6lo los RNAm presentes cantidades relativamente grandes pueden aisla directamente, sin necesidad de la clonacién, Casi todos los RNAm celulares poseen poli(). pero una excepcién que debe tomarse en cuent son los RNAm que codifican a las proteinas de I histonas (componente estructoral importante di material cromosémico). Estos RNAm comprend ala mayoria, si no es que a toda, de la fraccion poli(A)”. El significado de la ausencia de poli(Ay en el RNAm de las histonas no ha sido definido. y no hay un aspecto particular de su funcién que justifique dicha ausencia La degradacién del RNAm bacteriano involucra a miltiples enzimas © La direccién global de la degradacién del RNAM bacteriano es de 5°93. La degradacion es resultado de la combinacién de divisiones endonucleotiticas sequidas de la dearadacion ‘exonucleolitica del fragmento de 3'-»5: EIRNAm bacteriano es constantemente degradade por una combinacién de endonucleasas y exonu- cleasas. Las endonucleasas dividen a un RNA en un sitio interno, en tanto que las exonucleasas estén implicadas en reacciones de recorte en las cuales los residuos adicionales son retirados, base por base. desde el extremo. Las exonucleasas bacterianas que actiian en moléculas de RNA de cadena individual praceden a lo largo de la cadena de écido nucleico a partir del extremo 3” La manera en que dos tipos de enzimas trabajan_ en conjunto para degradar al RNAm se muestra en la FIGURA 7.20. La degradacién de un RNAm bacte- tiano se inicia con un ataque endonucleolitico, por el que pueden generarse numerosos extremos 3” mediante divisiones endonucleoliticas del RNAm, La direccién global de la degradacién (medida por la pérdida de la capacidad de sintetizar prote‘nas) 5 5°33", lo cual quiz se deriva de una sucesién de divisiones endonucleoliticas que siguen al tl- timo ribosoma, Mas adelante, la degradacién de Jos fragmentos liberados de RNAm a nucledtidosdebe al ataque exonucteolitico del extremo libre “S-OH hacia el extremio 5’ (en direccion opuesta a wrenscripcién). El ataque endonucleolitico libera igmentos con diferente susceptibilidad a las exo- cleasas. Una region de la estructura secundaria el RNAm puede ser un obstaculo para la exonu- 2, de manera que se protegen las regiones lo- lizadas en su lado 5’. Por lo tanto, la estabilidad cada RNAm depende de la susceptibilidad de su iencia especifica @ las divisiones tanto endonu- Scoliticas como exonucleoliticas. En £. coli se kan encontrado ~12 ribonuclea- s. Los mutantes carentes de endortibonucleasas excepto la ribonucleasa I, cuya carencia no tiene Sagiin efecto) acumulan precursores no procesados RNAr y RNAL, pero son viables. En el caso de mutantes que carecen de exonucleasas, con fre- shia sus fenotipos aparentemente no han sufrido setaciones, lo cual sugiere que una enzima puede Dlir la ausencia de otra. Los mutantes que carecen Yarias enzimas en ocasiones no son viables 1a RNAasa E es fa enzima clave para iniciar la ion del RNAm, y podrfa ser la que hace la pri- a divisi6n de numerosos RNAm. En los mutan- bacterianos cuya ribonucleasa 5 est defectuosa, estabilidad del RNAm es mayor (de dos a tres =), pero ma es éa su tinica funcién. La RNAasa se descubri6 originalmente como la enzima cau- del procesamiento 5’ del RNAr del transcrito ario por un evento espectfico de procesamiento adonucleolitico. El proceso de degradaciGn puede ser cataliza- por un complejo multienzimatico (en ocasiones ido degradosoma) que incluye ribonucleasa PNPasa (polinucledtide fosforilasa) y helicasa. La ‘Aasa F tiene funciones duales. Su dominio termi- 21 N proporciona una actividad de endonucleasa, tanto que el terminal C constituye un andamio mantiene unidos a los otros componentes. La slicasa desenrolla el sustrato de RNA para que esté sponible para la PNPasa. De acuerdo con este mo- elo, la RNAasa E realiza ef corte inicial y posterior te pasa los fragmentos a Jos otros componentes m’GDP + pX. 2 enrima requiere del grupo 7-metilo. Cada extremo del RNAm influye en los eventos ‘curren en el oiro extremo, lo cual se explica gue ambos extremos del RNAm se mantienen Pore Peo) Casquete Poli(ayPABP FIGURA 7.26 La desadenilacién permite la eliminacién det casquete, o cual provaca la division endonucleolitica 2 partir. el extreio 5: tunidos por los factores implicados en la sintesis pro- teinica (véase la seccién 8.9, Las eucariotas utilizan un complejo formado por numerosos factores de iniciacién). El efecto de la PABP en la eliminacién del casquete permite que el extremo 3" incida en la estabilizacién del extremo 5’. Asimismo, hay una conexién entre la estructura del extremo 5° y la de- gradacién del extremo 3’. La desadenilasa se une directamente al casquete 5’, interaccién necesaria para su ataque exonucleolitico contra el poli(A). eCuél es el fundamento de la conexién entre los eventos que ocurren en ambos extremos de una molécula de RNAm? Quizé sea necesario asegurarse de que €] RNAm no permanezca en un estado (te- nniendo la estructura de un extremo, pero no la del otro) que pueda competir con el RNAm activo por las proteinas que se unen a los extremos. La eliminacién del casquete activa la ruta de degradacién 5’-3', en la cual el RNAm es degradado rapidamente a partir del extremo 5’ mediante la exonucleasa 5’-3’ XRNI. La enzima responsable de la eliminacién del casquete se concentra en loci cito- plasmicos discretos, los cuales pueden ser “cuerpos de procesamiento” en que el RNAm és desadenilado y posteriormente degradado, después de eliminarse el casquete. En la segunda ruta, las moléculas de RNAm de- sadeniladas de las levaduras pueden ser degradadas por la actividad 3-5’ de la exonucleasa del exosoma, tun complejo de >9 exonucleasas. El exosoma tam- bién participa en el procesamiento de precursores de moléculas de RNAr. La adicién de las exonuclea- sas individuales al complejo del exosoma puede des- 7.43 La degradacion del RNAm implica méltiples actividades 143144 Desadeniacién TULL =) Degradacion endonuceoltica Sen oe Degradacion exonucleoitica —_._ FIGURA 7.25 La desadenitacion puede provocardirectamente la division endonucleolitica y la division exonucleatitica desde los extremos 3. EIRNAm de tipo sidestre tiene una estabiiad nownat ‘Una mutacién sin sentido activa la degradacién rasuin —s, BD @ Prd Terminacion prematu ot ! Se inicia la degradacién FIGURA 7.26 Las mutaciones sin sentido pueden provocar la degradacion del RKAM. encadenar las actividades exonucleoliticas 3°-5' para que sean controladas coordinadamente. De igual forma, el exosoma puede degradar a fragmentos de RNAm liberados por divisién endonucleolitica. En Ja FIGURA 7.25 se muestra que la ruta de degrada- cién 3'-5’ puede de hecho implicar combinaciones de actividad endonucleolitica y exonucteolitica. El ‘exosoma también se encuentra en el micleo, donde degrada a precursores de RNAm no empalmados. Los mutantes de levaduras que carecen de cual- quiera de las rutas exonucleoliticas degradan a su RNAm més lentamente, pero la pérdida de ambas rutas es letal CAPETULO 7 EL RNA mensajero Las mutaciones sin sentido activan un sistema de vigilancia EL = Las mutaciones sin sentido provocan la degradacién del RNAm. + En las levaduras y los gusanos se han encontfado genes _ que codifican al sistema de degradacién Otra ruta de degradacién se identifica por la de- gradacién del RNAm mediada por mutacto- nes sin sentido. En la FIGUNA 7.28 se observa que la introduceién de una mutacién sin sentido com frecuencia incrementa la degradacién del RNAM Como puede esperarse de la dependencia de un codén de terminacién, la degradacién ocurre en el citoplasma, y podria representar un control de calidad 0 un sistema de vigilaneia para climinar moléculas de RNAm no funcionales. El sistema de vigilancia ha sido mejor estudiado en las levaduras y en C. elegans, pero también puede ser importante en las células animales. Por ejem- plo, durame la formaci6n de inmunoglobulinas y de receptores de célutas T en las células del sistema inmunolégico, los genes son madificados por re- combinacién somatica y mutacin (véase el Cap. 23, La diversidad inmunitaria), suceso que genera un rntimero significativo de genes no funcionales cuyos productos de RNA son eliminados por un sistema de vigilancia, En las levaduras, la degradacién requiere de elementos de secuencia (denominados DSF) de flujo descendente a partir de ia mutacién sin sentido. La posibilidad més sencilla serfa que se trata de ele- mentos desestabilizadores y que la traduccién su- prime su uso. Sin embargo, cuando se bloquea la traduccién, €] RNAm se estabiliza, lo cual sugiere que el proceso de degradacién esta vinculado de alguna forma directa con la traduccién del RNAm con el evento de terminacién. Los genes necesarios para el proceso han sido identificados en S. cerevisiae (loci upf) y en C. ele _gans (loci smg) mediante la deteccién de supresores de degradacién mediada por mutaciones sin sen- tido. Las mutaciones de estos genes estabilizan 2 las moléculas aberrantes de RNAm, pero no afec- tan la estabilidad de la mayoria de Ios ixanscritos de tipo silvestre. Uno de estos genes se conserva en las cucariotas (upfl/smg2) y codifica a una helicasa dependiente de ATP (enzima que desentolla los éci- dos nucleicos de doble cadena para formar cadenas individuales). Esto implica que el reconocimiento del RNAm como objetivo apropiado para la degra- daci6n requiere de un cambio de esttuctura.El gen Upfl interactiia con los factores de libe- én (eRF y €RF3) que catalizan la terminacin, €s probablemente la forma en que reconoce el ento de terminacién, Posteriormente puede “es- 1” al RNAm desplazéndose hacia el extrerno ‘para buscar los elementos de secuencia de flujo scendemte, En las células de los mamiferos, el sistema de Seilancia parece operar sélo en mutaciones locali- das antes del tiltimo exén, es decir, debe haber intrén después del sitio de la mutacién, lo cual Jere que el sistema requiere de un evento en el leo antes de que los intrones scan climinados corte y empalme, Una posibilidad es que las oteinas se adhieren al RNAm en el nticleo, en la atera ex6n-ex6n cuando ocurre un evento de ie y empalme, En la FIGURA 7.27 se muestra un. odelo general de la operaci6n de dicho sistema mecanismo es similar a la forma en que un Am puede ser marcado para exportarlo desde el cleo (véase la secci6n 26.10, El corte y empalme -4 conectado con la exportacién del RNAm). La mitocondhia Muchas edlulas RNA Célula nodtiza > ovecito Génesis embrionaria ae ela mosca scons nr FIGURA 7.28 Las moléculas de RNA se transportan a través de membrans fen diversos sistemas, NAM RNA Célula c6iula tituye un problema termodinémico que se solucio- na transporténdola empaquetada en protefnas. En las células eucaristicas, los RNA se trans- criben en el micleo, pero la traduccién ocurre en el citoplasma. Los diferentes tipos de RNA deben transportarse en el citoplasma para ensam- blar el mecanismo necesario para la traduccién. Ast, 1 RNAr se ensambla con las protefnas ribosémicas para formar subunidades ribosémicas inmaduras que constituyen los sustratos para el sistema de 7.5 Las moléculas de RNA eucariotico se transportan 145146 transporte; el RNAt es transportado por un sistema de proteinas especifico; e] RNAm es transportado como una ribonucleoproteina, la cual se forma en ¢l transcrito de RNA en el micleo (véase el Cap. 26, Corte, empalme y procesamiento del RNA). Estos procesos son comunes en todas las células eucarid- ticas. Muchos RNAm se traducen en el citosol, si bien algunos se localizan en el interior de la célula porque se adhieren a un elemento del citoesqueleto. En situaciones en que hay localizacién, es impor- tante que el producto protesnico sea producido cer- a del sitio de su incorporacién a alguna estructura macromolecular. Algunas moléculas de RNA se forman en él m cleo, se exportan al citosol y posteriormente se ixn- portan al interior de las mitocondrias, que en algunos organismos no codifican a todos los RNA necesarios para la sintesis de proteinas (véase la seccién 4.10, Los genomas de los organelos son moléculas circu- lares de DNA que codifican a protefnas de los orga~ nelos). En. estos casos, los RNAt adicionales deben importarse desde el citosol. La enzima ribonuceasa P, que contiene RNA y subunidades proteinicas, es codificada por genes nucleares, no obstante que s¢ encuentra tanto en las mitocondrias como en el nt cleo, lo cual significa que e! RNA debe ser importado al interior de la mitocondria. Se sabe de algunas situaciones en que el RNAM ¢s transportado incluso entre células, Durante el de- sarrollo del ovocito en Drosophila, ciertas moléculas de RNAm son transportadas al interior del dvuio desde las céhulas nodrizas que lo rodean, dado que estas titimas tienen uniones especializadas con el ovocito que permiten el paso del material necesario para el desarrollo inicial. Este material incluye cier- tos RNAm, que una vez dentro del évulo, asumen localizaciones especificas. Algunos sencillamente se difunden en el extremo anteriot por el que entran, pero otros recorren todo el 6vulo, hasta el extremo posterior, mediante un motor adherido a microti bulos. El caso més asombroso de transporte del RNAm el de las plantas, El movimiento de dcidos nuclei- cos especificos por distancias laxgas se descubri6 por primera vez en las plantas, en las cuales, las pro- teinas de movimiento virico propagan la infeccién virica transportando el genoma de un virus de RNA a través de los plasmodesmos (conexiones entre las células). Por otra parte, las plantas tienen un siste- ma de defensa que hace que las células silencien a un virus infeccioso, el cual, de igual manera, puede implicar la dispersi6n de componentes, incluido al RNA, agrandes distancias entre las células. Ahora se hha descubierto que las moléculas de RNAm pueden ser transportadas por sistemas similares entre las cé- lulas de las plantas, Aunque la existencia del sistema CAPITULO 7 ELRNA mensaiero se canoce desde hace tiempo, sélo recientemen: se demostré su importancia funcional al inje plantas de tomate de tipo silvestre en plantas la mutacién dominante Me (que provoca cambii en la forma de la hoja). £1 RNAm de la reserva, mutantes se transporté al interior de las hojas Injerto de tipo silvestre, donde cambi6 su forma, EL RNAm puede localizarse especificamente © ELRNAm del Ashi de la levadura forma una ‘bonucleoproteina que se une a un motor de miosina, © Un motor lo transporta 2 lo largo de los filamentos de actina en el brote germinal. = Se anciay se traduce en el brote, de manera que la protefna se encuentra sélo en el brote En una célula eucariética, un RNAm se sintetiza el miicleo pero se traduce en el citoplasma; enn en el citoplasma como una particula ribonucleopr teinica que se transporta a través de un poro ni clear. Una vez en el citosol, el RNAm puede as ciarse con los ribosomas y ser traducido. Bl cit esté atestado, lo ocupa una alta concentracién protefnas. No se sabe bien qué tan libremente puc difundirse un polisoma en el citosol, y la mayor par te de las moléculas de RNAm se traducen probable mente en locaciones aleatorias, determinadas su punto de entrada al citosol y por la distancia que han recorrido hasta alejarse de él, aunque algu se traducer. en sitios espectficos mediante divers mecanismos: ‘+ Un RNAm puede ser transportado especifi- camente a un sitio en el cual se traduce. + Puede estar distribuido wniversalmente pete se degrada en todos lo sitios, excepto en & de traduccién. + Puede difundirse libremente, pero queds atrapado en el sitio de traduccién. Uno de los casos mejor caracterizados de locs- lizaci6n dentro de una célula es el del AshI de las levaduras, que reprime la expresi6n de la endone- cleasa HO en la célula hija que brota, asf que ¢] HO se exptesa s6lo en la oélula madre. La consecuencia €: que el tipo de apareamiento cambia sdlo en la céluls madre (véase la secci6n 19.24, La regulaci6n de le expresién de HO controla el cambio). La causa de le restriccidn en la célula hija es que el RNAm del Ashi es transportado a partir de la célula madre, donde se. produce, al interior de la célula hija que brota. Las mutaciones en cualquiera de 10s cinco ge- nes conocidos como SHEI-5 impiden la localizaciénLa She2 eo une a ‘estrusturastalo-laze fen el ANAM La Sho conecta ala ‘Sne2 con la miesina La Shet se une al fllamento de actina Fllamento de actina 1.29 ELRNAm del Ash1 forma una ribonucleoproteina contiene un motor de miosina que se desplaza por un to de actina, ‘fica y hacen que el RNAm del Ash1 se distri- simétricamente en los compartimientos tanto Ja madre como de la hija. Las protefnas Shel, ‘= 3:¢ unen al RNAm del Ashl en una particu- onucleoproteinica que transporta al RNAm al or de la célula hija. En la Fi0URA 7.29 se mues- Jas funciones de las proteinas. Shelp es una a (identificada previamente como Myod), en o que She3 y She2 son proteinas que conectan fosina con el RNAm. La miosina es un motor ‘mueve al RNAm a lo largo de los filamentos En la FIGURA 7.30 se resume el proceso complete. ‘Am del Ash1 es exportado del nifcleo en for- de ribonucleoproteina y en el citoplasma se une ro a la She2, que detecta algunas estructuras Sendarias tallo-lazo en el RNAm. Posteriormente, 3 se une ala She2, después de lo cual se les Ja miosina Shel. A continuacidn, la particula se cha a un filamento de actina y se transporta el brote, Cuando el RNAm de! Ash! llega al se ancla ahi, quizé por medio de proteinas se unen especificamente al RNAm. ‘Otr0s casos en los cuales e] RNAM se transporta especificos son regidos por principios simi- EIRNAm es reconocido mediante secuencias iacin en cis, las cuales suelen ser regiones ctura secundaria de la region no traducida =] RNAm del Ash es poco comiin en el sen- de que las regiones de actuacién en cis estén ei marco codificador.) El RNAm se empaca en. particula ribonucleoprotefnica, y en ocasiones verse en particulas muy grandes denomina- erénulos de RNAm, los cuales son los suficien- grandes (muchas veces el tamafio de un ) como para contener numerosas protefnas iples componentes de RNA. Bre Cpe FIGURA 7.30 ELRNAm del Asht se exporta del nicleo al cito olasma, donde es ensamblado a un complejo con las proteinas She. El complejo lo transporta a lo largo de los filamentos de actina, hasta el brote ‘Una RNPm transportada debe conectarse a un motor que la mueve a lo largo de un sistema de vias, que pueden ser filamentos de actina 0 micro- sibulos. Mientras que el Ash| utiliza un motor de miosina en las vias de actina, el RNAm de la protef na oscar del huevo de Drosophila utiliza un motor de cinesina para moverse alo largo de microtiibulos. Una vez que el RNAm llega a su destino, necesita ser anclado para evitar que se difunda. Poco se sabe al respecto, pero el proceso parece ser independiente del transporte, Un RNAm transportada por micro- bulos puede anclerse a filamentos de actina loca~ lizados en su destino. Resumen La informacién genética que porta el DNA se expre- saen dos etapas, la transcripcién del DNA en RNAm y la traduccién del RNAm en una proteina, El RNA mensajero se transcribe de una cadena de DNA complementaria de esta cadena (no codificadora) déntica a la otra cadena (codificadora}. La secuencia del RNAm, en codones triples 5'-3, est4 relacionada con la secuencia de aminodcidos de la proteina, del grupo terminal N al grupo terminal C. El adaptador que interpreta el significado de un codén es el RNA de transferencia, que tiene una estructura terciaria compacta en forma de L; un ex- tremo de] RNAt tiene un anticodén complementa~ rio del codén, y el otto extremo puede estar unido de forma covelente al aminodcido especifico que corresponde al codén diana. Un RNAt que porta un aminoacido se denomina aminoacil-RNAt. Elribosoma proporciona el mecanismo que per- mite que los aminoacil-RNAt se unan a sus codo- nes en el RNAm; la subunidad grande transporta al polipéptido naciente. Un ribosoma se desplaza a lo Jargo de un RNAm a partir de un sitio de iniciacién, Jocalizado en la regién 5’ hasta un sitio de termina- ci6n ubicado en 1a regi6n 3, y los aminoacil-RNAL 1.47 Resumen 147148, apropiados responden a sus codones, descargando a su aminoécido, de te! manera que la cadena po- lipeptidica creciente aumenta un residuo por cada codén recorrido. El mecanismo de traduccién no es especifico de cada tejido u cada organismo; un RNAm provenien- te de una fuente puede ser traducido por los riboso- mas y por las moléculas de RNAt de otta fuente. El miimero de veces que un RNAm se traduce depende de la afinidad de su(s) sitio(s) de iniciacién por los ribosomas y de su estabilidad. En algunos casos s¢ impide especificamente la traduccién de grupos de RNAm 0 de moléculas de RNAm, evento conocido como control de la traduccién Una molécula tipica de RNAm contiene un If der 5’ y un remolque 3° no traducidos y regiones codificadoras. EI RNAm bacteriano suele ser poli- cistr6nico, con regiones no traducidas localizadas entre los cistrones. Cada cistron esta representado por una regin codificadora que empieza con un sitio de iniciacién especifico y concluye en un si- tio de terminacién, Las subunidades ribosémicas se asocian en el sitio de iniciacién y se disocian en el de terminacién de cada regién codificadora. Una bacteria E. coli en cultivo tiene ~20 000 ribosomas y ~200 000 moléculas de RNAt, princi palmente en forma de aminoacil-RNAt. Hay ~1500 molécuias de RNAm, que representan a dos o tres, copias de cada uno de los 600 mensajeros. Un solo RNAm puede ser traducido por nume- 080s ribosomas de manera simulténea y formar un, polirribosoma (o polisoma). Los polisomas bacteria~ nos son grandes y en general estén formados por decenas de ribosomas unidos a un solo RNAm. Los polisomas eucariéticos son rads pequefios, tipica- mente de menos de 10 ribosomas: cada RNAm porta sélo una secuencia codificadora EI RNAm bacteriano tiene una vida media ex- tremadamente corta, de s6lo unos minutos; incluso, el extremo 5” empieza a ser traducido mientras las secuencias en cascada estan siendo transcritas. La degradaci6n es iniciada por las endonucleasas que realizan cortes en sitios discretos, siguiendo a los ribosomas en direccién 5’-3’, Después, las exonu- cleasas reducen los fragmentos a nuclestidos, de- gradéndolos a partir del extremo 3” liberado hacia ¢] extremo 5’, Cada secuencia puede promover 0 retardar la degradacién en los RNAm bacterianos. EI RNAm eucariético debe ser procesado en el mticleo antes de ser transportado al citoplasma para su traduccidn. Al extremo 5° se agrega un casquete metilado constituido por un nuclestido que se agte- ga al extremo original por un enlace 9'-5', después del cual se agregan grupos metilo. La mayor parte de las moléculas bacterianas de RNAm tienen una secuencia de ~200 bases de poli(A) adheridas a su CAPITULO 7 ELRNA mensajero extremo 3’, en el miicleo, después de la transeri cin, sin embargo, los RNAm poli(A)- parecen traducidos y degradados con la misma cinética q los poli(A]*. El RNAm cucariético existe como u particula ribonucleoprotefnica; en algunos ca RNPm estan almacenados, por lo que no se trad: cen. Los RNAm eucaridticos suelen ser estables & rante muchas horas y tener varias secuencias inician la degradacién; hay ejemplos en los cu el proceso es regulado. EI RNAm de las levaduras es degradado « do menos por dos rutas que empiezan con la el minacién del poli(A) del extremo 3’, provocando pérdida de la proteina de unidn al poli(A), lo cual su vez conduce a la eliminaci6n del casquete me lado del extremo 5’. Una ruta degtada al RNAm partir del extemo 5” por medio de una exonucle: y la otra degradaal RNAm desde el extremo 3, att -vés del exosoma, complejo que contiene numero: exonucleasas. La degradacién mediada por mutaciones sis sentido provoca la destruccién de las moléculas RNAm que tienen un codén de terminacién (si sentido) antes del dltimo exén; para el proceso necesitan los loci upf de las levaduras y los loci s de los gusanos, sitios que incluyen la actividad la helicasa para desenrollar el RNAm y una prote= na que interactia con los factores que terminan sintesis protefnica. Las caracteristicas del proceso las células de los mamiferos sugieren que algui de las proteinas se adhieren al RNAm en el nticl al momento del corte y empalme del RNA para minar a los intrones. Los RNAm pueden ser transportados a locé zaciones especificas dentro de una célula (especial mente en el desarrollo embrionario). En el siste AshI de las levaduras, el RNAm es transporta de la célula madre al interior de la célula hija por medio de un motor de miosina que se desplaza so bre filamentos de actina. En las plantas, los RNAT pueden ser transportados grandes distancias ent las eélulas. Referencias ELA de tansferecin forma una ho de tt Libros de revision, Soll, D, and RajBhandary, U. L. (1995). ‘RNA Siruetre, Biosynthess, and Fuostion, Washington, DC: American Society for Microbiology. Jrtcules de investigacién Chapeville, F. et al. (1962). On the sole of soluble RNA in coding for amino acids. Proc. Natl. Acad, Sc. USA 43, 1086-1092.\é, MB. etal, (1958). 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